Universidad Nacional Autónoma De Huanta

Facultad de Ingeniería y Gestión

Escuela Profesional de Ingeniería y Gestión Ambiental

PRÁCTICA N°2
MICROSCOPÍA Y MICROMETRÍA
Docente: Blga. Rosario Melisa Curo Ayala

Asignatura: Microbiología Ambiental

Integrantes:

Chocce Gavilán, Víctor Deiser

Ñaupa Curo, Roner

Quispe López, Mariluz

Urbano Yulgo, Malena

Vásquez Huamancayo, Adriana

Huanta – Perú
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Índice
I. Introducción .............................................................................................................. 3
II. objetivos ................................................................................................................... 3
III. Marco Teórico .......................................................................................................... 3
3.1. Microscopía ...................................................................................................... 3
3.2. Tipos De Microscopios ..................................................................................... 4
3.2.1. Microscopio compuesto ............................................................................ 4
3.2.2. Microscopio simple .................................................................................. 6
3.2.3. Microscopio estéreo .................................................................................. 7
3.2.4. Microscopio de contraste de fases ............................................................ 8
3.2.5. Microscopio de campo oscuro ................................................................ 10
3.2.6. Microscopio de polarización .................................................................. 11
3.2.7. Microscopio de Interferencia .................................................................. 12
3.2.8. Microscopio de fluorescencia ................................................................. 14
3.2.9. Microscopio electrónico ......................................................................... 15
3.3. Medición a Través del Microscopio ............................................................... 20
3.3.1. Procedimiento ......................................................................................... 21
3.4. ¿Cómo funciona el método de los micrómetros? ........................................... 21
3.4.1. Calibración ............................................................................................. 21
3.4.2. Comparación ........................................................................................... 21
3.5. Factores a considerar al medir ........................................................................ 22
IV. Muestras Biológicas ............................................................................................... 22
V. Materiales ............................................................................................................... 23
5.1. Materiales ....................................................................................................... 23
5.2. Muestras biológicas ........................................................................................ 23
VI. Procedimiento ......................................................................................................... 23
VII. Metodología ............................................................................................................ 24
VIII. Análisis Y Resultados............................................................................................. 24
IX. Conclusión .............................................................................................................. 27
X. Recomendación ...................................................................................................... 27
XI. Bibliografía ............................................................................................................. 28

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PRÁCTICA N°2
MICROSCOPÍA Y MICROMETRÍA

I. Introducción

Definición de microscopía

La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los

objetos de estudio que por tamaño están fuera del rango de resolución del ojo normal.
El microscopio es un instrumento formado por un sistema de lentes con los que se
consiguen imágenes aumentadas de microorganismos o pequeños objetos.

II. objetivos

✓ Comprender algunos conceptos básicos de microscopio tales como poder de

resolución, poder de aumento, campo visual con relación a los lentes utilizados.
✓ Realizar cálculos o mediciones aproximadas de células y otras estructuras, a través
de estrategias microscópicas.
✓ Adquirir destreza manual y matemática para calcular el diámetro óptico en varias
unidades microscópicas.

III. Marco Teórico

3.1.Microscopía
Los comienzos de la microscopía óptica se le atribuyen al holandés Zacharias Janssen en
el siglo XVI, cuando crea un simple microscopio formado por un tubo al que le acopla
varias lentes. A este ingenioso inventor se le sumarían, con posterioridad, el magno
Galileo, el naturalista Swammerdam, el botánico Grew y los anatomistas Graaf y
Malpighi. No obstante, no fue hasta la noble publicación de Robert Hooke (1665),
Micrographia, cuando se apreciaron las bondades de este instrumental para el estudio de
la constitución interna de la materia, el entendimiento de una nueva visión mecanicista
de la naturaleza y para remarcar la importancia de la observación y experimentación en
el ámbito natural (Ordónez et al., 2008). Se había desarrollado como tal el microscopio
compuesto.
Las primeras observaciones de material constituido por seres unicelulares llegarán de la
mano de un coetáneo de Hooke, el comerciante holandés Antony van Leeuwenhoek. Su
diseño, elaborado a partir de las reflexiones que Hooke introduce en su obra, a base de

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una doble pletina que embutía un cristal de roca pulido que actuaba como lente, permitió
la observación de pequeños organismos invisibles al ojo humano, los llamados
animálculos (Robertson, 2015; Stong, 1996; Cyrulies y Schamne, 2014; Garrido y Barcia,
2011). Los primeros exámenes, llevados a cabo en gotas de agua procedente de una
charca, permitieron la observación de lo que siglos después pasarían a definirse como
protozoos y rotíferos. Las mejoras que llevaría posteriormente el microscopio
desarrollado por Hooke revelarían a los ojos de todos los estudiosos un universo
infinitamente pequeño, que abriría una nueva puerta a la ciencia y con ello el avance de
otras disciplinas, la microbiología y la citología.
3.2.Tipos De Microscopios

3.2.1. Microscopio compuesto

Este microscopio llamado también de luz simple es el más utilizado en el laboratorio de

microbiología y análisis clínico, es un microscopio que produce una imagen ampliada de
una muestra de algo mediante dos sistemas ópticos que actúan sucesivamente. Y
consta básicamente de cuatro sistemas:
1. Sistema mecánico
➢ Base o pie: es una pieza metálica bastante compacta cuya función es de dar sostén
y estabilidad al aparato.
➢ Columna, agarradera o brazo: es la parte más resistente y se extiende desde el
tubo principal hasta la base, sirve para sujetar y movilizar el aparato.
➢ Tubo óptico: es el tubo que une los oculares con el revólver.
➢ Revólver: es un cabezal giratorio donde se hallan engranados los lentes objetivos.
➢ Platina: es una superficie plana con una abertura central sobre el cual se coloca
el porta objetos con la muestra para su examen, esta lámina se puede movilizar en
forma horizontal y vertical mediante un sistema de engranajes.
2. Sistema óptico
➢ Lentes objetivos: son lentes plano convexos colocados cerca del objeto motivo de
estudio, generalmente tienen las siguientes amplificaciones: 4X, 10X, 40X y
100X; sus funciones son:
Reunir los rayos luminosos de cualquier punto del objeto.
Concentrar la luz en un punto de la imagen.
Amplificar la imagen.

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➢ Lentes oculares: Están formados por lentes plano convexos y se encuentran en el

extremo superior del instrumento que es el lugar por donde se observa, puede ser
único (monocular) o doble (binocular), usualmente tienen las amplificaciones de
5X, 10X y 15X; sus funciones son:
Ampliar la imagen proporcionada por los lentes objetivos.
Corregir algún defecto de la imagen emitida por los lentes objetivos.
Reflejar retículos u otros objetos colocados en el ocular.
➢ Tubo del ocular: es el soporte del ocular. Lleva el ocular justo encima de la lente
del objetivo. En algunos microscopios, como en los binoculares, el tubo del ocular
es flexible y se puede girar para una visualización máxima, para la variación de la
distancia.
➢ Pieza de la nariz: también conocida como torreta giratoria. Sostiene las lentes del
objetivo. Es móvil, por lo tanto, puede girar las lentes del objetivo según el poder
de aumento de la lente.
➢ Apertura: este es un orificio en la platina del microscopio, a través del cual la luz
transmitida desde la fuente llega a la platina.
3. Sistema de iluminación
➢ Fuente de luz: puede ser un bulbo o una lámpara eléctrica incorporada en la base
del microscopio para que los rayos luminosos se dirijan hacia la abertura central
de la platina.
➢ Diafragma y condensador: es un sistema que regula la intensidad de luz que llega
sobre la lámina que contiene la muestra.
4. Sistema de enfoque
➢ Tornillo macrométrico: es una cremallera que permite el movimiento para
acercar o alejar la platina que contiene la lámina portaobjetos con la muestra. Sirve
para situar el punto de aproximación.
➢ Tornillo micrométrico: es una cremallera que permite movimientos pequeños y
permite situar el punto definitivo de la imagen.
5. Manejo Del Microscopio
➢ Colocar la lámina portaobjetos sobre la platina, enfocar con el objetivo de menor
aumento utilizando los tornillos macro y micrométrico, además de cuidar que el
condensador proporcione la iluminación adecuada.

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➢ Cambiar a los objetivos de mayor aumento según sea la necesidad. Si se desea

utilizar el objetivo de 100X o de inmersión, colocar una gota de aceite de cedro
sobre el área de observación.
➢ Después de observar las muestras y concluir el trabajo, limpiar con papel la lente
de los oculares y objetivos, en caso del objetivo de 100X limpiar con alcohol
isopropílico al 30% y alcohol al 70%.

3.2.2. Microscopio simple

Un microscopio simple, en su forma más básica, es un instrumento óptico que utiliza una
sola lente para ampliar la imagen de un objeto pequeño. Aunque parezca sencillo, este
dispositivo ha sido fundamental en numerosos descubrimientos científicos a lo largo de
la historia.
1. Sistema Mecánico
➢ Soporte: La estructura que sostiene la lente y permite su manipulación. Puede ser
tan simple como un soporte de madera o metal, o más complejo, como en los
microscopios modernos.
➢ Lente: La pieza clave del microscopio. Es una lente convexa que concentra los
rayos de luz y produce una imagen aumentada del objeto.
➢ Platina: Una pequeña plataforma donde se coloca la muestra que se desea
observar.
➢ Tornillo de enfoque: Permite ajustar la distancia entre la lente y la muestra para
obtener una imagen clara y nítida.
2. Sistema Óptico
➢ Lente convexa: La mayoría de los microscopios simples utilizan lentes convexas,
ya que estas lentes tienen la capacidad de hacer que los rayos de luz converjan en
un punto focal, produciendo así una imagen ampliada.
3. Sistema de Iluminación
El sistema de iluminación en un microscopio simple es bastante básico. Generalmente se
utiliza luz natural o una fuente de luz artificial, como una lámpara, para iluminar la
muestra. La luz incide directamente sobre la muestra y pasa a través de la lente para
formar la imagen.
4. Sistema de Enfoque

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El sistema de enfoque en un microscopio simple es muy sencillo. Consiste en un tornillo

que permite ajustar la distancia entre la lente y la muestra. Al girar el tornillo, se modifica
la distancia focal y se obtiene una imagen clara y nítida.
5. Manejo del Microscopio Simple
➢ Coloca la muestra: Coloca la muestra sobre la platina.
➢ Enfoca: Utiliza el tornillo de enfoque para ajustar la distancia entre la lente y la
muestra hasta obtener una imagen clara.
➢ Observa: Observa la muestra a través de la lente.
6. Precauciones
➢ Cuidado con la lente: Evita tocar la superficie de la lente con los dedos, ya que
las huellas dactilares pueden afectar la calidad de la imagen.
➢ Iluminación adecuada: Asegúrate de que la muestra esté bien iluminada para
obtener una imagen clara.
➢ Ajuste del enfoque: Realiza ajustes finos del enfoque para obtener la mejor
imagen posible.

3.2.3. Microscopio estéreo

Un microscopio estereoscópico, también conocido como microscopio de disección o

lupa binocular, es un instrumento óptico diseñado para proporcionar una imagen
tridimensional de objetos relativamente grandes. A diferencia de los microscopios
compuestos, que utilizan una sola lente para formar una imagen, los estereomicroscopios
emplean dos caminos ópticos separados, uno para cada ojo, lo que permite una visión en
profundidad.
1. Sistema Mecánico
➢ Base: La base sólida que sostiene todo el microscopio.
➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio, permitiendo ajustar la altura
y ángulo de visión.
➢ Platina: Plataforma donde se coloca la muestra. A menudo es móvil para permitir
un posicionamiento preciso de la muestra.
➢ Soporte de los oculares: Estructura que sostiene los oculares y permite ajustar la
distancia Inter pupilar.
2. Sistema Óptico
➢ Oculares: Dos lentes, una para cada ojo, que amplifican la imagen formada por
los objetivos.

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➢ Objetivos: Lentes que producen la primera imagen aumentada de la muestra. A

diferencia de los microscopios compuestos, los objetivos de los
estereomicroscopios suelen tener un aumento menor y una distancia de trabajo
mayor.
➢ Prismas: Desvían la luz de los objetivos hacia los oculares, separando los dos
caminos ópticos.
3. Sistema de Iluminación
➢ Incidente: La luz se dirige hacia la muestra desde arriba, lo que es ideal para
observar superficies.
➢ Transmitida: La luz pasa a través de la muestra, lo que es útil para observar
objetos transparentes o translúcidos.
➢ Combinada: Una combinación de ambas, lo que permite una mayor flexibilidad.
4. Sistema de Enfoque
El sistema de enfoque permite ajustar la distancia entre los objetivos y la muestra para
obtener una imagen clara y nítida. Generalmente, se utiliza un mecanismo de enfoque
coaxial que permite ajustar ambos objetivos simultáneamente.
5. Manejo
➢ Preparación de la muestra: Coloca la muestra sobre la platina.
➢ Ajuste de la iluminación: Selecciona el tipo de iluminación adecuado y ajusta su
intensidad.
➢ Ajuste de los oculares: Ajusta la distancia interpupilar para que coincida con la
distancia entre tus ojos.
➢ Enfoque: Utiliza el mecanismo de enfoque para obtener una imagen clara y nítida.
➢ Observación: Observa la muestra a través de los oculares, moviendo la platina o
el microscopio para explorar diferentes áreas.
6. Precauciones
➢ Cuidado con los objetivos: Evita tocar las lentes de los objetivos con los dedos.
➢ Ajuste correcto de la iluminación: Una iluminación adecuada es esencial para
obtener una buena imagen.
➢ Limpieza: Mantén el microscopio limpio y libre de polvo.

3.2.4. Microscopio de contraste de fases

El microscopio de contraste de fases es un tipo especializado de microscopio óptico

diseñado para observar muestras transparentes y sin tinción, como células vivas. A

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diferencia de los microscopios ópticos convencionales, que dependen de la absorción de

la luz por la muestra para generar contraste, los microscopios de contraste de fases
convierten las pequeñas diferencias en el índice de refracción de la muestra en variaciones
de intensidad de la luz, lo que permite visualizar estructuras celulares que de otro modo
serían invisibles.
1. Sistema Mecánico
➢ Base: Proporciona la estabilidad al microscopio.
➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio.
➢ Platina: Plataforma donde se coloca la muestra.
➢ Condensador: Contiene un anillo de fase que modifica la luz antes de que llegue
a la muestra.
➢ Tubo: Contiene los oculares y los objetivos.
➢ Enfoque: Mecanismo que permite ajustar la distancia entre la muestra y los
objetivos.
2. Sistema Óptico
➢ Anillo de fase: Un anillo opaco en el condensador que produce una onda de luz
difractada.
➢ Objetivo de fase: Un objetivo con un anillo de fase complementario al del
condensador, que combina la onda de luz difractada con la onda de luz no
difractada.
➢ Oculares: Amplían la imagen formada por los objetivos.
3. Sistema de Iluminación
El sistema de iluminación de un microscopio de contraste de fases es esencial para
producir el efecto de contraste. La luz pasa a través del condensador y el anillo de fase
antes de llegar a la muestra.
4. Sistema de Enfoque

El sistema de enfoque es similar al de un microscopio óptico convencional y permite

ajustar la distancia entre la muestra y los objetivos para obtener una imagen clara y
nítida.

5. Manejo

➢ Preparación de la muestra: Las muestras para microscopía de contraste de fases

suelen ser preparaciones húmedas sin teñir.

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➢ Ajuste del condensador: El condensador debe estar centrado y ajustado

correctamente para obtener el máximo contraste.
➢ Selección del objetivo de fase: El objetivo de fase debe coincidir con el anillo de
fase del condensador.
➢ Enfoque: Ajusta el enfoque para obtener una imagen clara y nítida.
➢ Observación: Observa la muestra a través de los oculares.
6. Precauciones
➢ Limpieza: Mantén el microscopio limpio y libre de polvo.
➢ Ajuste del condensador: Un ajuste incorrecto del condensador puede reducir el
contraste.
➢ Objetivos de fase: Utiliza únicamente objetivos de fase diseñados para
microscopía de contraste de fases.

3.2.5. Microscopio de campo oscuro

El microscopio de campo oscuro es una herramienta invaluable en la microscopía óptica,

especialmente cuando se trata de observar muestras transparentes y sin teñir. A diferencia
del microscopio de campo claro convencional, que ilumina directamente la muestra, el
microscopio de campo oscuro utiliza un haz de luz enfocado de forma oblicua, lo que
resulta en un fondo oscuro y objetos brillantes.
1. Sistema Mecánico
➢ Base: Proporciona estabilidad al microscopio.
➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio.
➢ Platina: Plataforma donde se coloca la muestra.
➢ Condensador de campo oscuro: Un condensador especializado con un disco
opaco en el centro que bloquea la luz directa, permitiendo solo el paso de los rayos
de luz difractados por la muestra.
➢ Tubo: Contiene los oculares y los objetivos.
➢ Enfoque: Mecanismo que permite ajustar la distancia entre la muestra y los
objetivos.
2. Sistema Óptico
➢ Condensador de campo oscuro: Este condensador concentra la luz en un cono
hueco que ilumina la muestra desde un ángulo oblicuo. Solo la luz que es
difractada por la muestra entra en el objetivo, lo que hace que los objetos
aparezcan brillantes sobre un fondo oscuro.

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3. Sistema de Iluminación
La iluminación en un microscopio de campo oscuro es crucial. El condensador de campo
oscuro enfoca un haz de luz intenso en un ángulo oblicuo sobre la muestra. Solo la luz
que es dispersada por la muestra entra en el objetivo, creando así una imagen brillante
sobre un fondo oscuro.
4. Sistema de Enfoque
El sistema de enfoque es similar al de un microscopio óptico convencional y permite
ajustar la distancia entre la muestra y los objetivos para obtener una imagen clara y nítida.
5. Manejo del Microscopio de Campo Oscuro
➢ Preparación de la muestra: Las muestras para microscopía de campo oscuro
suelen ser preparaciones húmedas sin teñir.
➢ Ajuste del condensador: El condensador de campo oscuro debe estar
correctamente centrado y ajustado para obtener el máximo contraste.
➢ Enfoque: Ajusta el enfoque para obtener una imagen clara y nítida.
➢ Observación: Observa la muestra a través de los oculares.

3.2.6. Microscopio de polarización

Un microscopio de polarización es un instrumento óptico especializado que utiliza la luz

polarizada para analizar las propiedades ópticas de muestras birrefringentes, es decir,
aquellas que tienen la capacidad de descomponer la luz en dos rayos polarizados
perpendicularmente entre sí.
¿Qué es la luz polarizada?
La luz polarizada es una onda electromagnética en la que las vibraciones del campo
eléctrico se producen en un solo plano. Los microscopios de polarización emplean
polarizadores, que son filtros que permiten el paso únicamente de la luz que vibra en un
plano específico.
1. Sistema Mecánico

El sistema mecánico de un microscopio de polarización es similar al de un microscopio

óptico convencional, pero con algunas adiciones:

➢ Base: Proporciona estabilidad al microscopio.

➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio.
➢ Platina: Plataforma giratoria que permite orientar la muestra en diferentes
ángulos.

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➢ Tubo: Contiene los oculares y los objetivos.

➢ Enfoque: Mecanismo que permite ajustar la distancia entre la muestra y los
objetivos.
2. Sistema Óptico
➢ Polarizador: Un filtro colocado debajo del condensador que convierte la luz
blanca en luz polarizada plana.
➢ Analizador: Otro polarizador colocado entre el objetivo y el ocular. Al rotar el
analizador, se puede controlar la cantidad de luz polarizada que llega al ojo del
observador.
➢ Lámina de cuarto de onda: Una lámina de material birrefringente que se
introduce en el camino óptico para producir colores de interferencia.
3. Sistema de Iluminación
La iluminación en un microscopio de polarización es esencialmente la misma que en un
microscopio óptico convencional, pero con la adición del polarizador.
4. Sistema de Enfoque
El sistema de enfoque es similar al de un microscopio óptico convencional y permite
ajustar la distancia entre la muestra y los objetivos para obtener una imagen clara y nítida.
5. Manejo del Microscopio de Polarización
➢ Preparación de la muestra: Las muestras deben ser lo suficientemente delgadas
para permitir el paso de la luz.
➢ Ajuste del polarizador y analizador: Los polarizadores deben estar cruzados
(perpendiculares entre sí) para obtener un campo oscuro.
➢ Rotación de la platina: Al rotar la platina, se pueden observar los cambios en la
orientación de los cristales en la muestra.
➢ Inserción de la lámina de cuarto de onda: La lámina de cuarto de onda se utiliza
para producir colores de interferencia y mejorar el contraste.
➢ Enfoque: Ajusta el enfoque para obtener una imagen clara y nítida.

3.2.7. Microscopio de Interferencia

El microscopio de interferencia es una herramienta de gran precisión que permite

visualizar detalles extremadamente finos en muestras transparentes, aprovechando el
fenómeno de la interferencia de la luz. Esta técnica ofrece un contraste y una resolución

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superiores a los microscopios convencionales, lo que la convierte en una herramienta

invaluable en diversos campos científicos.
1. Sistema Mecánico
➢ Base: Proporciona una base sólida y estable para el microscopio.
➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio, permitiendo ajustar la altura
y ángulo de visión.
➢ Platina: Plataforma donde se coloca la muestra. Suele ser mecánica para permitir
movimientos precisos.
➢ Tubo: Contiene los oculares y los objetivos.
➢ Enfoque: Mecanismo de enfoque coaxial o independiente para ajustar la distancia
entre la muestra y los objetivos.
2. Sistema Óptico
➢ Divisor de haz: Un prisma o un espejo semitransparente que divide el haz de luz
incidente en dos rayos.
➢ Caminos ópticos: Cada rayo sigue un camino óptico diferente, uno a través de la
muestra y otro como referencia.
➢ Recombinador de haz: Un componente óptico que vuelve a unir los dos rayos
para producir interferencia.
➢ Objetivos y oculares: Lentes de alta calidad que amplifican la imagen y la
proyectan al ojo del observador.
3. Sistema de Iluminación
➢ Fuente de luz: Una lámpara halógena o LED de alta intensidad.
➢ Condensador: Concentra la luz sobre la muestra.
➢ Diafragma de apertura: Controla la cantidad de luz que llega a la muestra.
4. Sistema de Enfoque
El sistema de enfoque permite ajustar la posición de la muestra en relación con los
objetivos para obtener una imagen clara y nítida. Los microscopios de interferencia suelen
tener mecanismos de enfoque coaxial o independiente, lo que permite un ajuste preciso
de ambos objetivos.
5. Manejo del Microscopio de Interferencia
➢ Preparación de la muestra: Las muestras deben ser lo suficientemente delgadas
para permitir el paso de la luz y tener un índice de refracción homogéneo.
➢ Ajuste del divisor de haz: El divisor de haz debe estar correctamente alineado
para asegurar una interferencia óptima.

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➢ Enfoque: Ajusta el enfoque de forma precisa para obtener una imagen clara.
➢ Interpretación de la imagen: Los patrones de interferencia proporcionan
información sobre las diferencias de espesor y el índice de refracción de la
muestra.

3.2.8. Microscopio de fluorescencia

El microscopio de fluorescencia es una herramienta esencial en la biología moderna,

capaz de revelar detalles intrincados y dinámicos de las células y tejidos. A continuación,
se presenta un desglose detallado de sus componentes y funcionamiento:
1. Sistema Mecánico
El sistema mecánico de un microscopio de fluorescencia es similar al de un microscopio
óptico convencional, pero con algunas adaptaciones para acomodar los componentes
específicos de la fluorescencia.
➢ Base: Proporciona una base sólida y estable para el microscopio.
➢ Brazo: Conecta la base a la cabeza del microscopio, permitiendo ajustar la altura
y ángulo de visión.
➢ Platina: Plataforma donde se coloca la muestra. Suele ser motorizada para
movimientos precisos en las tres dimensiones.
➢ Tubo: Contiene los oculares y los objetivos.
➢ Enfoque: Mecanismo de enfoque coaxial o independiente para ajustar la distancia
entre la muestra y los objetivos.
2. Sistema Óptico
➢ Fuente de excitación: Generalmente una lámpara de arco de xenón o un láser,
que emite luz de alta energía a una longitud de onda específica.
➢ Filtros de excitación: Seleccionan la longitud de onda de excitación adecuada
para el fluoróforo utilizado.
➢ Dicroico: Un espejo que refleja la luz de excitación hacia la muestra y transmite
la luz emitida hacia el objetivo.
➢ Filtros de emisión: Seleccionan la longitud de onda de emisión del fluoróforo,
bloqueando la luz de excitación y la luz dispersa.
➢ Objetivos: Lentes de alta calidad, a menudo con corrección de aberraciones
cromáticas, para recoger la luz emitida.
➢ Detectores: Cámaras CCD o CMOS altamente sensibles para capturar la imagen.
3. Sistema de Iluminación

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El sistema de iluminación en un microscopio de fluorescencia es fundamental. La luz de

excitación se enfoca en la muestra a través de una serie de lentes y filtros. La intensidad
y el patrón de iluminación se pueden ajustar para optimizar la señal y minimizar el daño
a la muestra.
4. Sistema de Enfoque
El sistema de enfoque permite ajustar la posición de la muestra en relación con los
objetivos para obtener una imagen clara y nítida. Los microscopios de fluorescencia
suelen tener mecanismos de enfoque coaxial o independiente, lo que permite un ajuste
preciso de ambos objetivos.
5. Manejo del Microscopio de Fluorescencia
➢ Preparación de la muestra: Las muestras deben ser fijadas y permeabilizadas
para permitir la entrada de los fluorocromos.
➢ Incubación con fluorocromos: La muestra se incuba con los fluorocromos
específicos para las moléculas de interés.
➢ Montaje de la muestra: La muestra se monta en un portaobjetos y se cubre con
un cubreobjetos.
➢ Ajuste de los filtros: Los filtros de excitación y emisión se ajustan a las
características de los fluorocromos utilizados.
➢ Adquisición de imágenes: La imagen se captura utilizando una cámara digital y
se procesa con software especializado.

3.2.9. Microscopio electrónico

El microscopio electrónico es una herramienta indispensable en la ciencia moderna, capaz

de revelar detalles estructurales a escala atómica que están fuera del alcance de los
microscopios ópticos. A diferencia de los microscopios ópticos que utilizan fotones, los
microscopios electrónicos emplean un haz de electrones para formar imágenes.
1. Sistema Mecánico
El sistema mecánico de un microscopio electrónico es considerablemente más complejo
que el de un microscopio óptico debido a la necesidad de generar y controlar un haz de
electrones en un alto vacío.
➢ Columna: Es la estructura principal que alberga todos los componentes del
microscopio.
➢ Cañón de electrones: Genera el haz de electrones, que es la fuente de iluminación
en este tipo de microscopio.

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➢ Lentes electromagnéticas: Actúan como lentes ópticas, pero en lugar de vidrio,

utilizan campos magnéticos para enfocar y dirigir el haz de electrones.
➢ Cámara de muestra: La muestra se coloca en una cámara de vacío para evitar la
dispersión de los electrones por las moléculas de aire.
➢ Sistema de bombeo: Mantiene un alto vacío dentro de la columna para garantizar
el funcionamiento correcto del microscopio.
2. Sistema Óptico
➢ Haz de electrones: Reemplaza a la luz visible como fuente de iluminación.
➢ Lentes electromagnéticas: Enfocan el haz de electrones y forman la imagen.
➢ Detectores: Convierten la señal electrónica en una imagen visible, ya sea en una
pantalla fluorescente, una cámara CCD o un detector de fotomultiplicadores.
3. Sistema de Iluminación
La "iluminación" en un microscopio electrónico es proporcionada por un haz de
electrones generado por un cañón de electrones. Este haz de electrones se acelera a altas
velocidades mediante una diferencia de potencial eléctrico.
4. Sistema de Enfoque
El enfoque en un microscopio electrónico se logra ajustando la intensidad de los campos
magnéticos de las lentes electromagnéticas. Al variar la intensidad de estos campos, se
puede controlar la trayectoria del haz de electrones y, por lo tanto, el enfoque de la
imagen.
5. Manejo del Microscopio
El manejo de un microscopio electrónico requiere un alto nivel de especialización debido
a su complejidad y la necesidad de mantener un alto vacío.
➢ Preparación de la muestra: Las muestras deben ser extremadamente delgadas
(a menudo solo unos pocos nanómetros) y fijadas en un soporte especial.
➢ Introducción de la muestra: La muestra se introduce en la cámara de vacío a
través de una esclusa de aire.
➢ Alineación del haz: El haz de electrones debe estar perfectamente alineado para
obtener una imagen de alta calidad.
➢ Adquisición de imágenes: Las imágenes se capturan utilizando detectores
especializados y se procesan mediante software.
Describa los usos de cada tipo de microscopio y poner una imagen referencial
1. Microscopio simple

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Uso: Principalmente como una lupa de alta potencia. Se utiliza para observar objetos
pequeños y transparentes, como insectos pequeños, plantas o fibras textiles.

2. Microscopio compuesto
Uso: Es el microscopio más común en laboratorios. Se utiliza para observar muestras
biológicas, como células, tejidos y microorganismos, así como para examinar muestras
no biológicas, como minerales y metales.

3. Microscopio estéreo
Uso: Permite una visión tridimensional de objetos opacos y relativamente grandes. Se
utiliza en biología para disecciones, en entomología para estudiar insectos, y en
mineralogía para examinar minerales.

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4. Microscopio de contraste de fases

Uso: Permite visualizar muestras transparentes y sin teñir, como células vivas. Es ideal
para observar detalles internos de células, como el núcleo y las organelas.

5. Microscopio de campo oscuro.

Uso: Ideal para observar muestras muy pequeñas y transparentes que no se tiñen
fácilmente. Se utiliza para estudiar bacterias, células vivas y partículas muy pequeñas.

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6. Microscopio de polarización.
Uso: Se utiliza para estudiar materiales que tienen propiedades ópticas anisótropas, como
cristales y fibras. También se emplea en geología, petrología y mineralogía.

7. Microscopio de Interferencia.
Uso: Permite visualizar detalles finos de muestras transparentes sin la necesidad de
tinción. Se utiliza en biología celular para estudiar células vivas y en metalurgia para
examinar la estructura de los metales.

8. Microscopio de fluorescencia.
Uso: Permite visualizar moléculas fluorescentes en muestras biológicas. Se utiliza para
estudiar procesos celulares, como la división celular, y para detectar marcadores
específicos en tejidos.

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9. Microscopio electrónico.
Uso: Ofrece la mayor resolución de todos los microscopios, permitiendo visualizar
estructuras a nivel atómico. Se utiliza en una amplia gama de campos, incluyendo
biología, materiales y nanotecnología.

3.3.Medición a Través del Microscopio

En muchas ocasiones el observador está interesado en conocer el tamaño real de los
microorganismos u objetos que está observando, para ello se utilizan varios métodos.
Método de los micrómetros
Para esto se utiliza un micrómetro de platina o de objetivo, que consiste en un
portaobjetos que el centro presenta una escala graduada (2mm de longitud), con
separaciones, en cada división de una centésima de milímetro.

Micrómetro ocular

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Lámina micrométrica

3.3.1. Procedimiento

o Se coloca la lámina micrométrica sobre la platina y se enfoca hasta que las

líneas de la escala graduada aparezcan nítidas.
o Cambiar el ocular del microscopio con el ocular micrométrico, observar a
través del ocular hasta visualizar ambas escalas.
o Superponer la escala ocular y tomar como referencia las primeras
divisiones en que una línea del micrómetro objetivo coincida con la línea
del micrómetro ocular.
o Luego por regla de tres simple, se calcula el valor en micrómetros de cada
división ocular.
3.4. ¿Cómo funciona el método de los micrómetros?

3.4.1. Calibración

➢ Micrómetro de platina: Se coloca directamente sobre la platina del microscopio

y se enfoca. Las divisiones de la escala se utilizan para calibrar el campo visual
del microscopio bajo diferentes aumentos.
➢ Micrómetro de objetivo: Se coloca en el portaobjetos y se enfoca como cualquier
otra muestra. La escala graduada está integrada en el objetivo y proporciona una
medida más precisa.

3.4.2. Comparación

➢ Una vez calibrado el microscopio, se coloca la muestra en la platina y se enfoca.

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➢ Se comparan las dimensiones de las estructuras de la muestra con las divisiones

de la escala del micrómetro.
➢ Se realiza un cálculo simple para determinar el tamaño real de las estructuras.
3.5.Factores a considerar al medir
➢ Aumento: El tamaño de la imagen observada depende del aumento del objetivo
y del ocular utilizados.
➢ Poder de resolución: La capacidad de distinguir dos puntos cercanos como
separados.
➢ Profundidad de campo: La distancia a lo largo del eje óptico dentro de la cual
las estructuras aparecen enfocadas

En esta práctica se realizó una investigación y reconocimiento de conceptos básicos de

microscopio tales como poder de resolución, poder de aumento, campo visual con
relación a los lentes utilizados, y también las medidas reducidas usadas para
microorganismos y estructuras tan pequeñas que no observamos a simple vista sino con
ayuda del microscopio, tales como: Armstrong (A°), milimicra (mu), micra (u), milímetro
(mm). haciendo uso de diferentes muestras como, hojas, flores e insectos pequeños, para
medir el tamaño de sus células. (1cm²) para así tener la medida del diámetro del lente del
microscopio en mm y poder usarlo como medida de referencia para luego convertirlo a
las unidades más pequeñas.

IV. Muestras Biológicas

El estudio de las siguientes muestras biológicas se realizó mediante microscopía óptica:

a. Polilla (Ephestia kuehniella): Insecto perteneciente al orden Lepidoptera.
Sus alas están cubiertas de escamas microscópicas que son clave para su
estudio anatómico.
b. Flor de Geranio (Pelargonium zonale): Planta ornamental de la familia
Geraniaceae. Sus flores presentan estructuras reproductivas que pueden
ser observadas con mayor detalle bajo el microscopio.
c. Mariquita (Coccinella septempunctata): Insecto de la familia
Coccinellidae, caracterizado por sus élitros con manchas negras.
d. Araña (Araneus diadematus): Arácnido común, perteneciente a la familia
Araneidae. Sus quelíceros y patas son especialmente interesantes para el
análisis microscópico.

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e. Hormiga (Formica rufa): Insecto social de la familia Formicidae, conocido

por su organización jerárquica y comportamiento social.

V. Materiales

5.1.Materiales
✓ Microscopio óptico compuesto.
✓ Objetivos de diferentes aumentos: 10x, 40x y 100x.
✓ Portaobjetos y cubreobjetos.
5.2.Muestras biológicas
✓ Polilla (Ephestia kuehniella).
✓ Flor de Geranio (Pelargonium zonale).
✓ Mariquita (Coccinella septempunctata).
✓ Araña (Araneus diadematus).
✓ Hormiga (Formica rufa).

VI. Procedimiento

1. Preparación de las muestras:

Se colocó a los microorganismos en orden secuente, para observar fragmentos
importantes como son de las alas de la polilla, élitros de la mariquita, pétalos de
la flor de geranio, patas y quelíceros de la araña y antenas de la hormiga.

2. Calibración del microscopio:

El microscopio fue calibrado utilizando un micrómetro ocular y de etapa para
obtener mediciones precisas de las estructuras observadas.
3. Observación microscópica:
Se comenzó con el objetivo de 10x para localizar las muestras y luego se aumentó
progresivamente hasta 40x para observar los detalles más finos.
4. Registro de observaciones y mediciones:
Se tomaron notas detalladas de las características morfológicas y las mediciones
de las estructuras observadas.

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VII. Metodología

El estudio se llevó a cabo en un laboratorio de microbiología con las siguientes etapas:

1. Recolección de muestras: Las muestras fueron seleccionadas de acuerdo con su
interés científico y relevancia biológica.
2. Preparación: Las muestras se montaron cuidadosamente en portaobjetos para
evitar daños y mejorar la claridad de las observaciones.
3. Observación: Se utilizó el microscopio óptico en varios niveles de aumento para
estudiar las características microscópicas de cada muestra.

VIII. Análisis Y Resultados

Objeto Aumento Imagen (Muestra) Análisis y

estudiado (x) Resultados
Polilla Las escamas
presentes en las
Nombre
alas fueron
científico:
visibles bajo un
Ephestia aumento de 40x,
kuehniella mostrando
40x patrones
Familia: iridiscentes. Las
Pyralidae patas mostraron
pelos
Especie: microscópicos que
(Gynnidomorpha ayudan al insecto
Alisman) en su
desplazamiento.

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Objeto Aumento Imagen (Muestra) Análisis y

estudiado (x) Resultados
Petalo de Flor A 10x, se observó
de geranio la estructura de
los pétalos,
Nombre
mientras que a
científico:
40x se
Pelargonium diferenciaron los
zonale 40x estambres y el
polen. Las células
Familia: de los pétalos
Geraniaceae mostraban
pigmentación y
Especie: pared celular bien
Pelargonium definida.
grandiflorum

Objeto Aumento Imagen (Muestra) Análisis y

estudiado (x) Resultados
Mariquita Los élitros de la
mariquita, a 40x,
Nombre
mostraban una
científico:
superficie rugosa
Coccinellidae con manchas
40x negras
Familia: distribuidas de
Coccinella forma simétrica.
septempunctata Las patas
mostraron
Especie: segmentos
Coccinellidae definidos y garras
microscópicas.

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Objeto Aumento Imagen (Muestra) Análisis y

estudiado (x) Resultados

Araña Los quelíceros

de la araña,
Nombre
utilizados para
científico:
inyectar veneno,
Araneus medían cerca de
40x 250 μm en
diadematus
longitud y
Familia: presentaban
Araneidae pequeños pelos
sensoriales,
Especie: visibles a 40x.
Loxosceles
laeta

Objeto Aumento Imagen (Muestra) Análisis y

estudiado (x) Resultados

Hormiga Las antenas y

patas de la
Nombre
hormiga
científico:
mostraron
Formica rufa segmentaciones
40x muy definidas.
Familia: Los pelos
Formicidae sensoriales en
las antenas
Especie: tenían un
Dorymyrmex tamaño
promedio de 30-
40 μm.

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IX. Conclusión

El uso del microscopio permitió una observación detallada de estructuras biológicas que
serían imperceptibles a simple vista. Las escamas de la polilla, las células del pétalo de
geranio, los élitros de la mariquita, los quelíceros de la araña y las antenas de la hormiga
revelaron características importantes para su identificación y estudio morfológico. La
aplicación de la micrometría fue esencial para obtener mediciones precisas, lo que añade
un valor cuantitativo a las observaciones cualitativas realizadas.

X. Recomendación

Uso de diferentes aumentos: Al analizar diferentes estructuras biológicas, es

recomendable utilizar distintos niveles de magnificación para obtener una visión más
completa de las características morfológicas. El uso de objetivos de mayor aumento
puede revelar detalles invisibles a menor amplificación.

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XI. Bibliografía

1. Rivas, R. (2021). "Microscopía". FES Iztacala, UNAM. Recuperado de

iztacala.unam.mx.

2. Centro Nacional de Metrología. (2010). "Micrometría en microbiología".

Simposio de Metrología 2010. Recuperado de cenam.mx.

3. Carrascosa, C. (2011). "Importancia del uso del microscopio". En Educación

Secundaria, publicado por el Ministerio de Educación.

4. Zeiss. (2021). "Microscopios para microbiología". Recuperado de zeiss.com.

5. Rivas, R. (2021). "Microscopía y microbiología". FES Iztacala, UNAM.

6. Wikipedia. (2021). "Microbiología". Wikipedia.

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