UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS APLICADAS
CARRERA DE INGENIERÍA CIVIL
QUÍMICA SANITARIA
Análisis Microbiológico de Aguas,
Tema: mediante la técnica de conteo normal Práctica N°. 05
en placa.
Grupo No.: Participantes:
1. Malquin Paguay Grace Alexandra
4 2. Ramos Llivisupa Karina Skarleth
3. Soria Soria Adrián Alexander
4. Tipanquiza Cuchipe Dayana Mishelle
Semestre: Octavo Paralelo: Primero
Docente: Ing. Susana Guzmán Rodríguez MSc. Fecha de Entrega: 23/02/2024
RESUMEN
El análisis microbiológico del agua mediante la técnica de conteo en placa
es un procedimiento utilizado para determinar la calidad del agua al
identificar y cuantificar los microorganismos presentes en una muestra.
Este análisis se basa en contar el número de colonias desarrolladas en una
placa de medio de cultivo sólido, en la que se ha sembrado un volumen
conocido de agua muestra. Las técnicas más utilizadas para este fin son la
siembra en superficie o incorporación en placas, donde se busca
determinar diferentes parámetros microbiológicos como E. coli, coliformes,
salmonella, entre otros.
El objetivo principal de este análisis es identificar y omitir los
microorganismos dañinos para la salud, garantizando la salubridad del
agua y previniendo enfermedades asociadas a la presencia de bacterias. El
recuento de colonias se realiza una vez transcurrido un tiempo de
incubación y a una temperatura específica, y el número total de colonias
típicas y atípicas debe estar dentro de un rango específico para obtener
resultados válidos
DESCRIPTORES
pH/ALCALINIDAD/ACIDEZ/OXÍGENO/NORMATIVA/DISUELTO/CALCIO/
COMPOSICIÓN/DUREZA
1
1. Introducción Teórica
El análisis microbiológico de diferenciadores, que proporcionan
aguas es una herramienta las condiciones óptimas para el
fundamental en la evaluación de crecimiento de los
la calidad del agua, tanto para uso microorganismos de interés y
potable como para otros fines permiten distinguir entre
como la recreación, la agricultura diferentes tipos de
o la industria. Dentro de las microorganismos según sus
técnicas empleadas en este tipo características metabólicas y
de análisis, el conteo normal en morfológicas. [3]
placa es una de las más utilizadas
Tras un período de
y confiables. [1]
incubación adecuado, las colonias
Este método se basa en la que se han desarrollado en las
dilución de muestras de agua y su placas son contadas y registradas,
posterior siembra en medios de lo que proporciona una estimación
cultivo sólidos, donde los del número de unidades
microorganismos presentes en la formadoras de colonias (UFC) por
muestra pueden desarrollarse y unidad de volumen de muestra.
formar colonias visibles a simple Este recuento se puede utilizar
vista o mediante el uso de para evaluar la calidad
técnicas de detección específicas. microbiológica del agua y tomar
[2] medidas correctivas si es
necesario. [3]
El procedimiento típico
comienza con la toma de Este análisis microbiológico
muestras de agua en diferentes del agua es una técnica
puntos de interés, seguido de su para conocer la calidad del
transporte al laboratorio en agua determinando cuáles son los
condiciones adecuadas para microorganismos que hay
preservar la viabilidad de los presentes en la misma.
microorganismos presentes. Dependiendo del uso que le
Luego, se realizan diluciones demos a esa agua, hay que
seriadas de la muestra original determinar las bacterias que
para obtener concentraciones que afectan a la salud. Así evitaremos
permitan contar con precisión el enfermedades e infecciones
número de microorganismos bacterianas que repercuten en
presentes. [2] nuestro intestino. [1]
Estas diluciones se siembran
en placas de Petri conteniendo
medios de cultivo selectivos y
2
2. Objetivos
Hacer el control de la calidad sanitaria de muestras de agua, mediante un
conteo normal en placa como técnica de análisis microbiológico.
Identificar y cuantificar la presencia de colonias de bacterias en muestras
de agua cruda.
Cuantificar la presencia de mohos y levaduras que se desarrollen durante
el análisis microbiológico.
Plantear posibles procesos de tratamiento a las muestras analizadas, en
base a la calidad sanitaria identificada.
3. Datos de la Muestra
Tabla 1.
Datos de la Muestra-Parámetros físicos
Lugar de muestreo Chorrera
Tipo de fuente: Chorrera de San Juan
Temperatura del agua al realizar el
17ºC
muestreo
Temperatura del ambiente: 18ºC
Fecha y hora del muestreo: 07/02/2024-9h40
Recipiente plástico con tapa
Condiciones del transporte de la
roscable. Cubierto con funda de
muestra:
plástico negro.
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
4. Equipos y Materiales
4.1. Equipos
Tabla 2.
Equipos
N° Equipos Capacidad Apreciación
1 Estufa 300 °C ± 1 °C
2 Incubadora 35°C ± 1 °C
3 Autoclave 121 °C ± 1 °C
Contador de colonia con
4 --- ---
lente de aumento
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
3
4.2. Materiales
Tabla 3:
Materiales de vidrio
N° Materiales Cantidad Capacidad Apreciación
1 Tubos de ensayo 3 --- ---
2 Cajas Petri 3 --- ---
± 0.01 ml
1ml
3 Pipetas con émbolo 2 ± 0.1 ml
5 ml
± 10 ml
4 Vaso de precipitación 1 400ml
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
Tabla 4:
Materiales de plástico
Cantida Apreciació
N° Materiales Capacidad
d n
Vaso de recolección de
1 1 125 ml ---
orina
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
Tabla 5:
Materiales de metal
Cantida Apreciació
N° Materiales Capacidad
d n
1 Mecheros de alcohol 3 --- ---
2 Canastilla metálica 1 --- ---
3 Caja Porta Petri 1 --- ---
Cilindros para esterilizar
4 2 --- ---
las pipetas
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
Tabla 6:
Otros materiales
Cantida Apreciació
N° Materiales Capacidad
d n
1 Algodón 1 --- ---
2 Guantes de cuero 1 --- ---
3 Guantes de látex 1 --- ---
4 Papel absorbente 1 --- ---
5 Lápiz de cera 1 --- ---
6 Caja de fósforos 1 --- ---
*: Realizado por: Grupo N°04, febrero 2024
4
5. Reactivos
Tabla 7:
Reactivos
No Nombre del Fórmula
Concentración Cantidad
. reactivo química
Agar granulado
con triptona,
extracto de
1 C14H24O9 1.0-1.5% 10ml/tubo
carne, glucosa y
extracto de
levadura.
*: Realizado por: Grupo N°04, enero 2024
6. Procedimiento
Tabla : 10
Procedimiento para esterilización de la zona antes de la
colocación de la muestra
Figura 1:Limpiar la Figura 2: Colocar Figura 3: Encender
zona de trabajo con toallas blancas sobre el los mecheros y
alcohol antiséptico y escritorio (sobre las colocarlos alrededor
toallas de papel. mismas se pondrá la de las toallas blancas
muestra) del escritorio.
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
Tabla :11
Colocación de la muestra
5
Figura 4:Identificar las Figura 5: Colocación Figura 6: Colocación
cajas Petri con un lapiz de la muestra con la de la muestra con la
de cera (0.1, 1, 10). pipeta en la caja Petri pipeta en la caja
(0.1). Petri (1).
Figura 7: Colocación de
la muestra con la pipeta
en la caja Petri (10).
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
Tabla :12
Colocación de la muestra
Figura 8: Eliminar Figura 9: Verter agar Figura 10: Agitar la
residuos de algodón sobre la muestra en muestra.
del agar. cada una de las cajas
Petri.
6
Figura 11: Mover las Figura 1213: Girar las Figura 14: Colocar
muestras de su lugar muestras y colocarlas las muestras en la
para que se una sobre otra. incubadora.
solidifiquen.
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
Tabla :13
Conteo de colonias a las 24 horas.
Figura 15:Limpiar la Figura 16: Limpiar la Figura 17: Sacar las
zona de trabajo con incubadora con muestras de la
alcohol y toallas alcohol y toallas incubadora.
blancas. blancas.
Figura 18:Colocar las Figura 19: Colocar Figura 20: Realizar el
muestras sobre las cada uno de las cajas conteo de colonias de
toallas de papel. de Petri sobre el bacterias, mohos y
contador de colonias. levaduras.
7
Figura 21: Volver a colocar las muestras en la
incubadora.
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
Tabla :14
Conteo de colonias a las 48 horas.
Figura 22:Limpiar la Figura 23: Limpiar la Figura 24: Sacar las
zona de trabajo con incubadora con muestras de la
alcohol y toallas alcohol y toallas incubadora.
blancas. blancas.
Figura 25:Colocar las Figura 26: Colocar Figura 27: Realizar el
muestras sobre las cada uno de las cajas conteo de colonias de
toallas de papel. de Petri sobre el bacterias, mohos y
contador de colonias. levaduras.
8
Figura 28: Volver a colocar las muestras en la
incubadora.
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
Tabla :15
Conteo de colonias a las 72 horas.
Figura 29:Limpiar la Figura 30: Limpiar la Figura 31: Sacar las
zona de trabajo con incubadora con muestras de la
alcohol y toallas alcohol y toallas incubadora.
blancas. blancas.
Figura 32:Colocar las Figura 33: Colocar Figura 34: Realizar el
muestras sobre las cada uno de las cajas conteo de colonias de
toallas de papel. de Petri sobre el bacterias, mohos y
contador de colonias. levaduras.
*: Realizado por: Grupo N°4, febrero 2024
7. Resultados
7.1. Valores de la muestra del grupo 4.
9
Tabla 16.
Muestra a las 24 horas (Rio La Chorrera)
Cantidad
Numero de
Colonias Mohos Levaduras Promedio
de muestra UFC/ml
(UFC) (UFC) (UFC) UFC/ml
cuadros sembrada
(ml)
- 0.1 2 - 1 20
- 1 4 2 1 4 18.40
13 10 24 2 1 31.20
Promedio
*: Realizado por: Grupo N°04, enero 2024
Tabla 17.
Muestra a las 48 horas (Rio La Chorrera).
Cantidad
Numero de
Colonias Mohos Levaduras Promedio
de muestra UFC/ml
(UFC) (UFC) (UFC) UFC/ml
cuadros sembrada
(ml)
- 0.1 33 2 3 330
- 1 52 2 3 52 632.93
64 10 237 3 3 1516.80
Promedio
*: Realizado por: Grupo N°04, enero 2024
7.2. Valores de la muestra del Laboratorio.
Tabla 18.
Muestra a las 24 horas.
Numero Cantidad Colonias Mohos Levaduras UFC/ml Promedio
10
de
de muestra
(UFC) (UFC) (UFC) UFC/ml
cuadros sembrada
(ml)
- 0.1 14 - - 140
- 1 49 - 1 49 64.13
- 10 34 4 5 3.4
Promedio
*: Realizado por: Grupo N°04, enero 2024
Tabla 19.
Muestra a las 48 horas.
Cantidad
Numero de
Colonias Mohos Levaduras Promedio
de muestra UFC/ml
(UFC) (UFC) (UFC) UFC/ml
cuadros sembrada
(ml)
- 0.1 17 2 2 170
5 1 18 3 5 90 269.6
- 10 96 8 11 9.6
Promedio
*: Realizado por: Grupo N°04, enero 2024
8. Cálculos típicos.
8.1. Colonias de bacterias
Colonias de bacterias =No. de cuadros de colonia∗No . de bacterias por cuadro
No . de cuadros de colonias=13
No . de bacterias por cuadrito=24
Colonias de bacterias =13∗24
Colonias de bacterias =312 [ UFC ]
11
8.2. Unidades formadoras de colonias de bacterias
N
[ ]
UFC
ml
=
No .de colonias contadas
Cantidad de muestra sembrada
No . de colonias contadas=312 [ UFC ]
Cantidad de muestras sembradas=10 [ ml ]
312 [ UFC ]
N=
10 [ ml ]
N=31.2
[ ]
UFC
ml
8.3. Promedio UFC/ml
Promrdio
[ ]
UFC 20+ 4+ 31.20
ml
=
3
Promedio=18.40
[ ]
UFC
ml
9. Análisis de Resultados
De acuerdo a la norma NTE INEN 1108 sobre los requisitos
microbiológicos de agua para consumo humano en el Ecuador se
estable un límite permitido para presencia de coliformes fecales,
siendo este límite de: 1/100
UFC
ml[ ] [ ]
o lo que es lo mismo 0.01
UFC
ml
, por lo que al realizar los cálculos respectivos para obtener el
promedio de la presencia de coliformes fecales a las 48 horas
para la siembra de 0.1,1 y 10 ml se obtiene un resultado
promedio de 632.93 [ ]
UFC
ml
para la muestra de proveniente de Río la
chorrera, mientras que para la muestra ensayada por la docente
proveniente del Chaco se tiene para la siembra de 0.1,1 y 10 ml
un resultado promedio a las 48 horas de coliformes fecales de:
[ ]
269.6
UFC
ml
. Con estos resultados se puede decir que según la
normativa NTE INEN 1108 estas muestras superan el límite
permitido de 1UFC/100mL, indicándonos que el agua no es
12
aceptable para consumo humano. (Malquin Paguay Grace
Alexandra)
La presencia de microorganismos fue aumentando conforme el
tiempo pasaba de tal forma a las 24 horas para la muestra 0.1 se
obtuvo 2 colonias y 1 levadura, para la muestra 1 se obtuvo 4
colonias, 2 moho y 1 levadura, y para la muestra 10 se obtuvo
312 colonias, 2 mohos y 1 levadura, mientras que para las 48
horas para la muestra 0.1 se obtuvo 33 colonias, 2 mohos y 3
levadura, para la muestra 1 se obtuvo 52 colonias, 2 moho y 3
levadura, y para la muestra 10 se obtuvo 15168 colonias, 3 moho
y 3 levaduras, se puede identificar que con el paso del tiempo la
cantidad de microorganismos aumenta considerablemente, de
igual forma al hacer una comparación con la norma INEN 1108 se
determina que la cantidad de microorganismos superan los
límites establecidos para el consumo humano, lo que significa que
se deben tomar acciones correctivas para su potabilización
(Ramos LLivisupa Karina Skarleth).
La Resolución número 2115 del Ministerio de Ambiente, Vivienda
y Desarrollo Territorial de Colombia establece que para las
propiedades químicas que afectan significativamente la salud
humana, como el contenido de calcio, el límite aceptable es de 60
mg/L. Según los resultados de la práctica, la muestra presenta un
valor de 11.834 mg/L, el valor está dentro del rango permitido
según la normativa mencionada la que nos serviría como
referencia para aceptar el valor mensionado. (Soria Soria Adrián
Alexander)
Dentro del análisis microbiológico se obtuvo que para las placas
de 0.1, 1 y 10 ml a las 24 horas de incubación tenemos un valor
de 20, 4 y 31.20 UFC/ml respectivamente, indicando que hubo
crecimiento de bacterias tanto de colonias, mohos y levaduras en
el cual dio como resultado un promedio de 18.40 UFC/ ml, este
valor ya es indicador de la calidad de agua que se tiene, en
cuanto a las 48 horas de incubación de obtuvo para 0.1, 1 y 10 ml
los siguientes valores de 330, 52 y 1516.80 UFC/ml con un
promedio de 632.93 UFC/ml, al hacer una comparación con la
normativa INEN 1108 nos indica que esto valores se encuentran
fuera de los rangos admisibles ya que son mayores a 1 UFC/ml,
dándonos a entender que esta agua debe ser tratada con
cualquier método de desinfección con el fin de que sea apta para
el consumo humano.(Tipanquiza Cuchipe Dayana Mishelle)
13
10. Conclusiones
Con base al análisis microbiológico de la muestra de agua
proveniente de Río la chorrera, se puede determinar que existe
cantidad considerable de microorganismos presentes para todas
las cantidades de muestras sembradas, entre ellas se registra un
elevado número de colonias de bacterias, mohos y levaduras,
catalogando así a esta muestra de agua proveniente de Río la
chorrera como una fuente bastante contaminada, sobre todo en la
cantidad de colonias, esto puede ser un indicativo de que el agua
en análisis no es apta para el consumo humano. (Malquin Paguay
Grace Alexandra)
Se concluye que el ensayo de análisis microbiológico de agua
mediante la técnica de conteo normal en placa nos proporciona
una medida directa de la cantidad de bacterias presentes en el
agua, de tal forma, se dice que cuan mayor sea el número de
bacterias, mayor será la contaminación microbiológica y la
calidad del agua será peor; cabe mencionar que para hablar de
calidad de agua se debe tomar en cuenta que existen parámetros
que nos ayudaran a determinar si cumple con los requisitos
establecidos, mismos que variaran según el uso previsto de ésta
(Ramos Llivisupa Karina Skarleth).
Según los resultados obtenidos, se concluyó que la muestra de
agua superficial carece de alcalinidad, lo que la caracteriza como
agua ácida. Se procedió a examinar la presencia de acidez debido
al dióxido de carbono, observando un cambio de color del agua a
azul, indicando la existencia de acidez por CO2. En resumen, la
cantidad de CO2 presente en el agua influye directamente en su
pH, ya que el CO2 disuelto en el agua se convierte en ácido
carbónico, lo que provoca una disminución del pH a medida que
aumenta la concentración de CO2 en el agua. (Soria Soria Adrián
Alexander)
En conclusión, el realizar un análisis microbiológico en muestras
de agua, mediante la técnica de conteo normal en placa, la
misma es esencial para evaluar la calidad microbiológica del agua
y determinar si es apta para el consumo humano, uso industrial o
recreativo. Este método, también conocido como recuento de
colonias viables, permite detectar la presencia de
microorganismos indicadores de contaminación fecal, como
14
coliformes totales y Escherichia coli, así como otros
microorganismos patógenos que pueden causar enfermedades.
(Tipanquiza Cuchipe Dayana Mishelle)
11. Recomendaciones
Al momento de recolectar las muestras considerar el lugar, las
condiciones donde se va a recolectar la misma, así como las
distintas superficies con las que pueda tener contacto en el
laboratorio, ya que la inadecuada manipulación de la misma, así
como de materiales de protección como mascarilla y guantes o no
desinfectar y esterilizar los materiales podría alterar la muestra
adicionando patógenos que podrían provocar reacciones
negativas e impediría el cultivo esperado de las bacterias.
(Malquin Paguay Grace Alexandra)
Se recomienda limpiar las cajas Pretri de residuos de cera de lápiz
que posiblemente haya quedado por la interacción entre ellas,
esta limpieza se lo realiza con alcohol y una toalla blanca, el
objetivo de este proceso es eliminar restos que dificulten la
lectura de la cantidad de microorganismos presentes en la
muestra (Ramos Llivisupa Karina Skarleth).
Se recomienda, considerar el uso de equipo de protección, como
guantes y mascarilla, al analizar muestras de agua en el
laboratorio. Esto se debe a que al manipular el agua,
desconocemos la cantidad de contaminantes presentes, además
del nivel de calidad del agua, lo que podría representar un riesgo
para la salud de las personas que realizan el análisis. (Soria Soria
Adrián Alexander)
Se recomienda hacer movimientos circulares de manera lenta
para que la muestra de agua más el agar se mezclen de una
manera uniforme y de la misma forma evitando que esta se
derrame. (Tipanquiza Cuchipe Dayana Mishelle)
12. Bibliografía
13.
[1]
Alazor. (2022). Qué es un análisis microbiológico del agua. Obtenido de
https://www.laboratorioalazor.com/que-es-analisis-microbiologico-del-agua/
15
[2] Castro, J. M. (2023). Análisis microbiológico del agua. Obtenido
de
https://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.p
df
[3] Diaz. (2018). Análisis microbiológico del agua. . Obtenido de
https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35550/analisi
s_de_aguas.pdf
14. Anexos
16
