Colegio de Estudios Científicos y Tecnológicos del Estado

de México (CECYTEM)

Práctica 5: Tinciones
Sub. 1: Identifica microorganismos con base en técnicas
bacteriológicas

Docente: Jesús Emanuel Pérez Alfaro

Integrantes del equipo:

- Camila Yael Rojas Tapia

- América Alessandra Miralrio Bertiz
- Eduardo Hernández Téllez
- Liliana Tlatempa Miranda
- Karen Ramírez Morales

Grupo: 306 Fecha de entrega: 09/10/2024

Introducción.

La práctica de “tinciones” surge al querer aprender y hacer tinción simple y tinción

de gram, son técnicas esenciales en el campo de la microbiología, empleadas
para poder identificar y facilitar la visión y clasificación de los microorganismos
(especialmente bacterias). Ambas tinciones permiten distinguir características
morfológicas importantes que a otro modo serían difíciles de ver e identificar en el
microscopio debido a la transparencia de las células.

La tinción simple utiliza solamente un colorante para mejorar el contraste entre

celular y el fondo, permitiéndonos ver la forma, tamaño y disposición de los
microorganismos.

Por otro lado tenemos la tinción de gram, es una técnica diferencial que clasifica
las bacterias en dos grupos principales: Gram positivas y Gram negativas,
tomando en cuenta las características de la pared celular, también sirve para guiar
decisiones clínicas.

Objetivos.

- Objetivos Generales:

• Aprender y realizar tinciones

• Observar y analizar la morfología bacteriana
• Diferenciar bacterias según su tipo de pared celular

- Objetivos Específicos

• Facilitar la observación celular

• Clasificar la morfología bacteriana
• Distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas

Hipótesis.

La tinción simple proporcionará suficiente contraste entre el fondo y las bacterias,

facilitando la visualización de la forma y disposición celular, entonces las células
se teñirán de un color uniforme debido a la afinidad del colorante por las
estructuras celulares cargadas positivamente o negativamente, lo que permitirá
observar su morfología básica bajo el microscopio. Si se aplica la técnica de
tinción de Gram a una muestra de bacterias, entonces las bacterias Gram
positivas se teñirán de color violeta debido a su pared celular gruesa de
peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram negativas no se tornarán de
violeta, sino se teñirán de rosa debido a su pared celular delgada y la presencia de
una membrana externa, lo que facilitará la clasificación y análisis de los
microorganismos observados bajo el microscopio.

Marco teórico.

Técnicas de tinción de microbiología: La microbiología se enfoca en el estudio

de organismos microscópicos, como bacterias, virus, hongos y protozoos. Para
facilitar su observación al microscopio, teñir estos microorganismos son
importantes ya que en su estado natural, son transparentes. Las técnicas de
tinción permiten visualizar no solo la morfología de las bacterias, sino también
ciertas características estructurales y diferenciales que son clave para su
identificación. Las dos técnicas más empleadas en microbiología son la tinción
simple y la tinción de Gram, cada una con un objetivo específico dentro del
diagnóstico bacteriológico.

Tinción simple: La tinción simple es la técnica más básica en microbiología,

utilizada para colorear los microorganismos mediante un único colorante,
permitiendo la observación de la morfología. Este método es sencillo y rápido, y es
útil principalmente para obtener una idea preliminar sobre la forma y estructura de
las bacterias.

Proceso: Procedimiento de la tinción simple.

1. Preparación de un extendido bacteriano en un portaobjetos.

2. Fijación de la muestra, generalmente se hace mediante calor, para evitar que
las células se laven durante el proceso.
3. Aplicación de un colorante básico como el cristal violeta, azul de metileno o
safranina.
4. Lavado suave con agua y secado naturalmente.
5. Observación bajo el microscopio óptico.

Colorantes utilizados: Los colorantes tienen carga positiva y se adhieren a la

pared celular de las bacterias. Algunos de los colorantes más comunes en la
tinción simple son:

• Cristal violeta: Se usa comúnmente por su buena capacidad para teñir la

mayoría de las bacterias.
• Azul de metileno: Otro colorante de uso frecuente para una tinción rápida y
efectiva.
• Safranina: Un colorante rojo que tiñe todas las bacterias, independientemente de
sus diferencias estructurales.

Aplicaciones: La tinción simple se utiliza comúnmente para:

• Visualizar la morfología general de las bacterias (cocos, bacilos, espirilos, etc.).

• Observar el agrupamiento de las células (en cadenas, racimos, pares).
• Obtener una vista rápida de la muestra sin diferenciar entre tipos de bacterias.

Tinción de Gram: La tinción de Gram es una técnica diferencial fundamental en

microbiología. Permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram
positivas y Gram negativas, basándose en las diferencias en la composición de
sus paredes celulares.

Proceso: Procedimiento de la tinción de Gram

1. Fijación: Fija la muestra bacteriana en un portaobjetos (generalmente con

calor).
2. Cristal violeta: Aplica el colorante durante 1 minuto, luego enjuaga con agua.
3. Lugol (yodo): Aplica durante 30 minuto como mordiente, luego enjuaga.
4. Decoloración: Aplica alcohol o acetona durante 30 segundos, luego enjuaga con
agua.
5. Safranina o fucsina: Aplica como colorante de contraste durante 25 – 30
segundos, luego enjuaga.
6. Secado y observación: Deja secar y observa bajo el microscopio.

Resultados

• Gram positivas: Color violeta.

• Gram negativas: Color rosado/rojo.

Colorantes utilizados: Los colorantes comúnmente usados en la tinción de Gram

son:
1. Cristal violeta: Colorante primario que tiñe todas las bacterias de violeta.
2. Lugol (solución de yodo): Mordiente que fija el cristal violeta en las bacterias
Gram positivas.
3. Alcohol o acetona: Agente decolorante que elimina el cristal violeta de las
bacterias Gram negativas.
4. Safranina o fucsina: Colorante de contraste que tiñe las bacterias Gram
negativas de rosado/rojo.

Aplicaciones: La tinción de gram se utiliza comúnmente en:

1. Clasificación de bacterias: Distingue entre bacterias Gram positivas y Gram

negativas.
2. Orientación en el tratamiento: Ayuda a elegir el tratamiento adecuado según el
tipo de bacteria.
3. Diagnóstico clínico: Utilizada en laboratorios para diagnosticar infecciones
bacterianas.
4. Estudios de resistencia: Proporciona información sobre la resistencia a
antibióticos.
5. Investigación microbiológica: Ayuda a estudiar la morfología y características de
las bacterias.
6. Control de calidad: Detecta contaminantes en alimentos y productos
farmacéuticos.
7. Educación: Fundamental en la enseñanza de microbiología y técnicas de
identificación bacteriana.

Materiales y métodos.
• Portaobjetos
• Asa bacteriológica
• 2 Mecheros bunsen
• Microscopio
• Puente de tinción
• Solución Salina (0.9%)
• Azul de metileno de Loeffler
• Aceite de inmersión
• Metanol
• Cristal violeta
• Luegol de Gram
• Alcohol – acetona
• Safranina

Resultados y análisis de resultados.

Tinción Simple.
• Coloración: Las bacterias se tiñen de un solo color (dependiendo del colorante
utilizado, como azul de metileno, cristal violeta o safranina).
I• Visualización: Permite observar la morfología (forma y tamaño) y la disposición
de las bacterias (coccos, bacilos, espirilos, etc.).
• Limitaciones: No permite diferenciar entre tipos de bacterias; todas se ven del
mismo color. Es útil para una identificación preliminar y para observar
características generales, pero no proporciona información sobre la estructura
de la pared celular.
• Aplicaciones: Se utiliza para la observación de muestras, como en el caso de
bacterias, hongos y protozoos, donde se requiere un análisis básico.
Tinción de Gram.
• Gram Positivas: Tiñen de color violeta o púrpura, indicando una pared celular
gruesa de peptidoglicano que retiene el cristal violeta.
• Gram Negativas: Tiñen de color rosado o rojo, indicando una pared celular más
delgada y una membrana externa que no retiene el cristal violeta durante el
proceso de decoloración.
• Diferenciación: La tinción de Gram permite clasificar las bacterias en dos grupos,
proporcionando información crítica para el diagnóstico y tratamiento de
infecciones.
• Importancia en la identificación: Además de la clasificación, la tinción de Gram
puede ayudar a identificar géneros y morfología bacteriana, facilitando en el
diagnóstico microbiológico.
Conclusiones.

La combinación de la tinción simple y la tinción de Gram en esta práctica demostró

ser esencial para la comprensión de las características de la morfología bacteriana
y su aplicación en el diagnóstico microbiológico. Estas técnicas proporcionan una
base sólida para la identificación y tratamiento de infecciones bacteriana. La
tinción simple proporciona información básica sobre la morfología y disposición de
las bacterias, útil para observaciones iniciales. La tinción de Gram es fundamental
para la clasificación y diagnóstico bacteriano, es una técnica esencial en
microbiología que permite una comprensión más profunda de la naturaleza de las
bacterias.

Referencias.

• .DCFine Chemicals. (n.d.). Tinciones básicas de laboratorio. Recuperado de

[Link]
• Medigraphic. (2014). Técnicas de tinción en microbiología. Recuperado de
[Link]
• Algor Education. (n.d.). Técnicas de tinción en microbiología. Recuperado de
[Link]
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• Universidad Tecnológica Nacional. (n.d.). Práctico 4: Tinciones en microbiología.
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• Algor Education. (n.d.). Tinción de Gram en microbiología. Recuperado de
[Link]
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