Colegio de Estudios Científicos y Tecnológicos del Estado

de México Valle de Chalco Solidaridad Plantel 1

Reporte de práctica 3 -Esterilización y preparación de

medios de cultivo.

Bacteriología

Vázquez Ventura Angel David

Miranda Granados Fernanda Mishel
Mendoza Alejandro Jessica
Melo Espinoza Ailyn Daniela
Mejía Guzmán Santiago
Castillo Alvarado Alejandro Joel

306

Q.F.B. Pérez Alfaro Jesús Emmanuel

Miércoles 02 de Octubre 2024

 INTRODUCCIÓN
La esterilización es una parte fundamental que se debe emplear en
la mayoría de procesos en el laboratorio clínico puesto que ayuda a
eliminar microorganismos en los materiales utilizados en éstos
procesos.
Los medios de cultivo son una mezcla de agua y sustancias
orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los
requerimientos nutricionales para el desarrollo de los
Microorganismos.
En esta práctica se utilizará la esterilización para eliminar los
microorganismos de nuestros materiales y medios de cultivo.

OBJETIVOS
Aprender los distintos pasos que se requieren para una esterilización
correcta con ayuda del la explicación del docente y un vídeo para que
se pueda llevar a cabo el desarrollo de la práctica dentro del
laboratorio escolar.
Aprender a preparar distintos medios de cultivo para la siembra y
crecimiento de bacterias.
Envolver el material requerido con el papel y medidas anteriormente
mencionadas.
Preparar una cantidad adecuada de agar para verter en cajas Petri y
así poder crear un medio de cultivo.

HIPÓTESIS
El método de esterilización que estaremos ocupando será eficaz para
la eliminación de todos los microorganismos viables de los medios de
cultivo y el material de laboratorio que estaremos ocupando.
Los medios de cultivo influirán en el crecimiento y desarrollo de los
microorganismos.
 MARCO TEÓRICO
El proceso de esterilización de material de laboratorio tiene como fin
eliminar cualquier carga microbiana, ya sea patógena o no, de los
productos que por su uso lo requieran. El objetivo de la esterilización
no es otro que el de evitar la contaminación cruzada de muestras o
el crecimiento de microorganismos no deseados (labbox, 2021)
Esterilización por calor húmedo: La esterilización se logra al hacer
entrar en ebullición un volumen de agua y mantener el vapor
generado a una presión constante durante un tiempo determinado.
Las autoclaves son los instrumentos que se utilizan para este
método. El calor húmedo destruye a los microorganismos por
desnaturalización de las proteínas debido a las altas temperaturas
que se obtienen. Las condiciones de temperatura y presión de un
proceso de esterilización por vapor de agua en un autoclave son
121°C, 15 PSI (libra por pulgada cuadrada) y 15 minutos (labbox,
2021).
Un autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas y cierre
hermético que utiliza vapor de agua a alta presión para esterilizar
materiales. Su funcionamiento es similar al de una olla a presión
(Equipos y Laboratorio de Colombia, 2022).
Los medios de cultivo son herramientas fundamentales para el
crecimiento y la identificación de microorganismos. Estos
proporcionan los nutrientes necesarios para el crecimiento, la
diferenciación y la identificación de bacterias, hongos y virus, lo que
los convierte en una pieza fundamental para la microbiología
(Solmeglas, 2022).
El agar sangre es un medio de cultivo que se utiliza para aislar,
cultivar y detectar las reacciones hemolíticas de microorganismos.
El agar sangre es un medio nutritivo y selectivo para aislar bacterias
Gram positivas, especialmente Staphylococcus y Streptococcus. Es
adecuado para aislar y cultivar microorganismos con características
de crecimiento difíciles (wikipedia, 2022).
La placa de Petri, también conocida como caja de cultivo, es un
recipiente de vidrio o plástico en forma de disco poco profundo, con
una tapa que lo cubre. Se utiliza para estudiar microorganismos como
bacterias y virus bajo gran observación, es importante mantenerlos
aislados de otras especies o elementos. En otras palabras, las placas
de Petri se utilizan para apoyar el crecimiento de microorganismos.
Una de las formas más efectivas de hacerlo es con la ayuda del
medio de cultivo en un recipiente apropiado. La placa de Petri es la
mejor opción para una placa de medio de cultivo (onelab, 2023).

MATERIALES Y MÉTODOS
•Autoclave
•Balanza granataria o analítica sí es necesaria
•1 Espátula
•Indicador biológico de esterilización
•Agua destilada
•1 Tripié
•1 Malla metálica para tripié
•1 Matraz Erlenmeyer de 100 mL
•1 Probeta de 100 o 50 mL
•1 Varilla de vidrio
•1 Gradilla
•1 Pipeta de 10 mL
•2 Pipetas de 5 mL
•2 Pipetas Pasteur
•2 Tubos de ensayo de 22x175
•15 Hisopos
•6 Cajas Petri de vidrio por equipo
•2 Mecheros
•1 Piseta
•Papel kraft o de estraza
•Maskin-tape
•Plumones indelebles de punto grueso
•Guantes de carnaza o guantes de cocina
REACTIVOS
Medios de cultivo y soluciones:
•Agar McConkey
•Agar Sal manitol
•Agar Sangre (5% de sangre)
•Agar Nutritivo
•Agar SS
•Agar EMB
•Solución de NaOH 1.0 N
•Solución de HCI al 10%
MÉTODOS
Envoltura:
Limpiar correctamente el área de trabajo
Cortar el papel estraza a las medidas necesarias
Lavar el material necesario (cajas Petri de vidrio y pipetas) para la
esterilización y dejar secar correctamente
Posteriormente envolver las cajas Petri (Envoltura de tortilla)
En la Pipetas colocar un filtro de algodón en la boquilla y rotular el
volumen de la misma
Esterilización en Autoclave:
Precalentar el Autoclave
Una vez listo, colocar los materiales permitiendo el flujo del vapor
Preparar las condiciones necesaria para la esterilización
(temperatura, Tiempo, espacio, nivel del agua)
Iniciar el ciclo de esterilización
Una vez terminado el ciclo esperar a que se enfríen el ambiente del
Autoclave
Sacar los materiales con cuidado para evitar accidentes con guantes
de carnaza
Colocarlos en un espacio limpio
Preparación del agar:
Agar de sangre (5% de sangre)
Leer cuidadosamente las instrucciones del fabricante del medio de
cultivo deshidratado.
Calcular la cantidad necesaria para preparar las 6 cajas petri
Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado
Disolver el medio en una pequeña cantidad de agua destilada
Una vez disuelto el polvo calentar con ayuda del mechero y soporte
universal, hasta que empiece a hacer ebullición inclinando el matraz
para evitar derramaron
Seguir agitando con la varilla de vidrio por 30 segundos o un minuto
Esterilizar el medio de cultivo en el Autoclave, colocándole un tapón
de algodón en la boquilla
Agregarle la sangre necesaria de un tubo azul o morado para evitar
la coagulación
Revolver el medio para así se mezcle la sangre
Depositar el medio de cultivo en las cajas Petri
Dejar que el agar se enfrié.
Rotular con el nombre del agar y repartir a las demás mesas
Apilar las cajas Petri y voltearlas posteriormente enrolladas con
Maskin-Tape y rotular con número de mesa
Meterlos a la estufa de cultivos

Siembra:
Sacar los medios de cultivo
Dividir las cajas Petri en dos
Con las muestras obtenidas sembrar la muestra que gustes y con la
Técnica que mejor se acomode
Anotar en la bitácora lo elegido

RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

ESTERILIZACIÓN
SI NO
Lavado del material ✓
Secado adecuado del ✓
material
Cortar el papel
estraza con las ✓
medidas indicadas
Poner torunda de
algodón en la boquilla ✓
de las pipetas
Envolver las cajas y
las pipetas ✓
Rotular las 6 cajas y 2 ✓
pipetas
Precalentar el Le tocó al equipo 1 y 4
autoclave
Colocar los materiales Lo hizo el equipo 1 y 4

Preparar y revisar las Las revisaron el

condiciones equipo 1 y 4
Iniciar el ciclo de Dieron inicio el equipo
esterilización 1y4
Una vez terminado, Los repartieron el
sacar el material con equipo 1 y 4
cuidado
Colocarlos en un
espacio limpio ✓

PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

SI NO
Calcular la cantidad ✓
necesaria de agar
Pesar la cantidad ✓
según los resultados
Disolver en agua ✓
destilada
Calentar hasta punto ✓
de ebullición
Inclinar el matraz ✓
para evitar derrames
Agitar con la varilla ✓
de 30 – 60 minutos
Colocar un tapón y
un gorro de papel ✓
estraza
Esterilizar el agar en Lo hizo el equipo
autoclave encargado del
autoclave
Obtener la cantidad
de sangre ya
calculada en tubo
morado o azul para
✓
evitar la coagulación
Verter y mezclar la ✓
sangre en el agar
Depositar el agar en
las caja Petri ✓
previamente
esterilizadas
Una vez frío rotular
con el nombre del ✓
agar y repartir a las
demás mesas
Apilar las cajas Petri
y voltearlas
posteriormente
enrolladas con
Maskin-tape y rotular ✓
con número de mesa
para poder meterlas
a la estufa de cultivo

Los cálculos utilizados fueron los siguientes.

40/1000= 0.04
(0.04) (130)= 5.2g.
Peso del vidrio de reloj= 28g 5.2g + 28g= 33.2g cantidad pesada.
Entonces para realizar el bien preparado se ocupó 123.5ml de agua,
6.5ml de sangre y 5.2g de agar sangre (polvo).
SIEMBRA
SI NO
Sacar los medios de Nos ayudó el equipo
cultivo encargado de la
estufa
Dividir las cajas Petri ✓
en dos
Con las muestras
obtenidas sembrar la
muestra que gustes ✓
y con la técnica que
mejor se acomode
Anotar en la bitácora ✓
lo elegido
 ANÁLISIS
Cómo resultado obtuvimos una esterilización buena pues mis
compañeros que utilizaron las autoclave lo hicieron de manera
responsable, cuidadosa y de forma correcta tanto para las cajas Petri
y la pipetas, como para los agares, para que estos fueran vertidos en
las cajas Petri y así poder crear nuestros medios de cultivo para
poder colocar dentro de la estufa de cultivo. También podemos decir
que nuestra esterilización fue correcta porque al sacar nuestros
medios de cultivo de la estufa no se vio algún crecimiento es decir
alguna contaminación cruzada y ese es uno de los propósitos de la
esterilización según nuestra investigación en la página labbox -la
esterilización en material de laboratorio.
Cómo esquipo se llevó a cabo una buena preparación de nuestro
medio de cultivo, aunque al momento de verter el agar en las caja
nos falto un poco porque se nos evaporó un poco pues se calentó
dos veces, pero aun así se repartieron correctamente nuestro medio
de cultivo con las demás mesas.
En tanto a la siembre se pudo realizar de manera adecuada con las
distintas muestras que se recolectaron en el equipo y aplicando las
técnicas anteriormente investigadas esto se llevó a cabo dentro de
un área estéril (en medio de dos mecheros encendidos).

CONCLUSIONES
En conclusión los datos obtenidos durante la práctica demuestran
que el método de esterilización por autoclave fue efectivo para
eliminar todos los microorganismos de los medios de cultivo y el
material de laboratorio utilizados en este caso 6 cajas Petri y 2
pipetas. La ausencia de crecimiento microbiano en los medios
preparados después de la esterilización por autoclave indica que el
proceso fue exitoso en eliminar cualquier contaminación inicial.
Durante la práctica, se llevó a cabo la esterilización por autoclave de
diversos medios de cultivo y materiales de laboratorio. Se siguió un
protocolo específico que incluía la carga adecuada del autoclave, la
configuración de la temperatura y la presión correctas, y el tiempo de
exposición necesario. El equipo de la mesa 1 y 4 junto con el profesor
que fueron los encargados de verificar el funcionamiento correcto del
autoclave observaron que se lograron alcanzar las condiciones
requeridas para la esterilización, lo que indica que el proceso se llevó
a cabo correctamente.
La práctica proporcionó una comprensión del método de
esterilización por autoclave, incluyendo la importancia de eliminar
todos los microorganismos viables para evitar la contaminación de
los medios de cultivo y los materiales de laboratorio, lo cual es crucial
para obtener resultados confiables. Se aprendieron los pasos
específicos para realizar una esterilización por autoclave efectiva. Se
comprendió la importancia de verificar la eficacia de la esterilización
mediante la observación del crecimiento microbiano en los medios
preparados por cada mesa.
La práctica de esterilización por autoclave fue un éxito, demostrando
la eficacia del método para eliminar microorganismos. Se adquirieron
conocimientos prácticos sobre el proceso de esterilización y la
importancia de mantener condiciones asépticas en el laboratorio.
Estos conocimientos serán fundamentales para realizar
experimentos microbiológicos futuros con precisión y seguridad.

BIBLIOGRAFÍAS
➢ [Link]
laboratorio/
➢ [Link]
material-de-laboratorio/
➢ [Link]
ampliado/que-es-un-autoclave
➢ [Link]
funcionalidades-calidad/
➢ [Link]
➢ [Link]
laboratorio-usos-y-recomendaciones