Colegio de Estudios Científicos y Tecnológicos del Estado
de México (CECYTEM)
Práctica: Pruebas Bioquímicas
Sub. 1: Identifica microorganismos con base en técnicas
bacteriológicas
Docente: Jesús Emanuel Pérez Alfaro
Integrantes del equipo:
- Camila Yael Rojas Tapia
- América Alessandra Miralrio Bertiz
- Eduardo Hernández Téllez
- Liliana Tlatempa Miranda
- Karen Ramírez Morales
Grupo: 306 Fecha de entrega: 19/11/2024
Introducción.
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las capacidades metabólicas
específicas de los microorganismos, esenciales para su identificación y
caracterización. Estas pruebas utilizan medios de cultivo especializados que
contienen indicadores visuales que revelan actividades metabólicas, como la
utilización de sustratos, producción de gases o formación de enzimas específicas.
Objetivos.
- Objetivo General:
• Preparar agares y analizar las capacidades metabólicas de diferentes
microorganismos mediante el uso de agares y caldos específicos: Simmons
citrato, Lisina hierro, Kligler hierro, MIO (Motilidad, Indol, Ornitina), Caldo rojo de
fenol y Caldo urea.
- Objetivos Específicos
• Realizar los cálculos correspondientes para agregar la cantidad adecuada de
agar para la preparación de cultivos en las horas de laboratorio.
• Determinar la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono
dependiendo de los resultados en las clases de laboratorio.
• Caracterizar los perfiles metabólicos de diferentes bacterias a partir de los
resultados obtenidos en los diferentes medios en base a las características que
tengan en las horas de módulo en laboratorio.
Hipótesis.
Si los microorganismos poseen enzimas específicas para metabolizar los
compuestos presentes en los medios Simmons Citrato, Lisina Hierro, Kligler
Hierro, MIO, caldo rojo de fenol y caldo urea, entonces generarán reacciones
visibles que permitirán su identificación y diferenciación.
Marco teórico.
Las pruebas bioquímicas son técnicas esenciales en microbiología para la
identificación y diferenciación de microorganismos. Estas pruebas se basan en la
capacidad metabólica de las bacterias para utilizar sustratos específicos y producir
compuestos que generan cambios visibles en el medio de cultivo, como modificaciones
de color, formación de gas o precipitados.
El uso de medios como el agar Simmons Citrato, Lisina Hierro, Kligler Hierro, MIO,
caldo rojo de fenol y caldo urea permite analizar diversas características metabólicas,
como la fermentación de azúcares, la producción de enzimas específicas y la
utilización de compuestos inusuales como fuente de carbono o nitrógeno.
1. Agar Simmons Citrato
El agar Simmons Citrato evalúa si un microorganismo puede usar citrato como
única fuente de carbono y energía.
• Fundamento: Contiene citrato de sodio como única fuente de carbono, sales
de amonio como fuente de nitrógeno y azul de bromotimol como indicador de
pH.
• Reacción metabólica: Las bacterias que metabolizan citrato producen
compuestos alcalinos, lo que eleva el pH y cambia el color del medio de verde a
azul.
• Importancia: Diferencia bacterias de la familia Enterobacteriaceae, como
Escherichia coli (negativo) y Klebsiella pneumoniae (positivo).
2. Agar Lisina Hierro (LIA)
El agar Lisina Hierro determina la capacidad de descarboxilar lisina y producir
sulfuro de hidrógeno (H₂S).
• Fundamento: Contiene lisina, glucosa, tiosulfato de sodio, sales de hierro y
púrpura de bromocresol como indicador de pH.
• Reacciones metabólicas:
• La descarboxilación de lisina produce alcalinidad, cambiando el color del
medio a púrpura.
• La fermentación de glucosa genera ácidos, tornando el medio amarillo.
• La producción de H₂S forma precipitados negros al reaccionar con las sales
de hierro.
• Importancia: Se utiliza principalmente para identificar enterobacterias, como
Salmonella typhimurium y Shigella.
3. Agar Kligler Hierro (KIA)
Este medio evalúa la fermentación de glucosa y lactosa, la producción de gas y
H₂S.
• Fundamento: Contiene glucosa, lactosa, tiosulfato de sodio, sales de hierro
y rojo fenol como indicador de pH.
• Reacciones metabólicas:
• La fermentación de glucosa produce ácido, cambiando el fondo a amarillo.
• La fermentación de lactosa acidifica la inclinación del medio.
• La producción de H₂S genera precipitados negros.
• La formación de gas se manifiesta como burbujas o desplazamiento del
medio.
• Importancia: Diferencia bacterias gramnegativas como Escherichia coli,
Proteus y Salmonella.
4. Medio MIO (Motilidad, Indol, Ornitina)
Es un medio polivalente que evalúa la motilidad, producción de indol y
descarboxilación de ornitina.
• Fundamento: Contiene triptófano, ornitina y púrpura de bromocresol como
indicador de pH.
• Reacciones metabólicas:
• Motilidad: Las bacterias móviles generan turbidez.
• Indol: El indol, producido por la degradación del triptófano, reacciona con el
reactivo de Kovac formando una capa rosa.
• Ornitina: La descarboxilación alcalina de la ornitina cambia el color del
medio a púrpura.
• Importancia: Diferencia bacterias móviles como Proteus vulgaris y
productoras de indol como Escherichia coli.
5. Caldo Rojo de Fenol
Se emplea para detectar la capacidad de las bacterias para fermentar
carbohidratos específicos.
• Fundamento: Contiene un azúcar (glucosa, lactosa o sacarosa), peptona y
rojo fenol como indicador de pH.
• Reacción metabólica:
• La fermentación produce ácidos que disminuyen el pH y cambian el color
del medio de rojo a amarillo.
• La producción de gas puede observarse en un tubo Durham invertido.
• Importancia: Diferencia bacterias fermentadoras como E. coli de no
fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa.
6. Caldo Urea
Evalúa la capacidad de las bacterias para producir ureasa, una enzima que
descompone la urea en amoníaco y dióxido de carbono.
• Fundamento: Contiene urea y rojo fenol como indicador de pH.
• Reacción metabólica: La descomposición de urea eleva el pH, cambiando el
color del medio de amarillo a rosa intenso.
• Importancia: Identifica bacterias como Proteus vulgaris y Helicobacter pylori.
Resultados y análisis de resultados.
• Nuestro primer resultado fue cuando realizamos el medio de cultivo, realizamos
una regla de 3 para poder obtener los cálculos necesarios de tal manera que
quedó as:
1000ml ————- 20g
200ml ————- 4g
• Ya hechos los cálculos realizados la mezcla y hervimos la mezcla para servirla
en un tubo para realizar este medio de cultivo.
• Realizamos 6 tubos con el Agar Caldo Rojo de Fenol y lo metimos a la estufa por
24hrs/aprox. E intercambiamos los 6 tubos entre las 6 mesas que hay en
laboratorio, así logramos obtener 6 diferentes agares
• De los agares que teníamos en caja petri elegimos dos los cuales pensamos que
podían funcionar, usamos el Agar Sangre y el Agar SM
• Usamos diferentes colonias y las sembramos en los nuevos agares para realizar
las pruebas bioquímicas de tal manera que quedaron así:
Tabla no. 1
Número de Agar para Prueba Agar de donde se Técnica de
Agar Bioquímica: sacó la colonia: sembrado que se
usó:
Agar 1 Agar LIA Agar SM Piquete y estría
Agar 2 Agar Caldo Urea Agar SM Disolución
Agar 3 Agar KIA Agar Sangre Piquete y estría
Agar 4 Agar CRF Agar Sangre Disolución
Agar 5 Agar MIO Agar Sangre Piquete recto
Agar 6 Agar CS Agar SM Estría
• Después metimos los tubos con el medio de cultivo a la estufa y se dejaron de
nuevo 24hrs/aprox.
• Al día siguiente volvimos a laboratorio y pudimos notar algunos cambios y
crecimiento en los medios de cultivo.
• Algunos medios de cultivo se hicieron líquidos y en el lapso del día se cayó uno y
perdimos ese medio de cultivo, pero pudimos conservar en los que observamos
crecimiento que fue en el Agar CS
• Con este resultado podemos saber que la colonia sembrada del Agar SM que fue
pasada al agar CS fueron bacterias que ocupan citrato que es su fuente de
carbono y energía
Conclusiones.
• Con base a esta práctica y a los resultados que obtuvimos podemos
concluir gracias a nuestros anteriores medio de cultivo pudimos saber
más información sobre sus bacterias cultivada. Como que las
bacterias del agar SM plantadas en los nuevos agares como en el
Agar LIA que podemos decir que no contiene glucosa, en el Agar
Caldo Urea que nos informa que no contiene ureasa, pero mas sin en
cambio en el Agar CS nos informó que esta bacteria tiene citrato y es
su única fuente de carbono y energía.
Mientas que las bacterias del Agar Sangre replantadas en los nuevos
agares nos informa que en el Agar KIA no fermenta glucosa, y en el
Agar CRF no pudimos llegar a saber ya que perdimos el medio de
cultivo, pero gracias al Agar MIO pudimos saber que evaluó la
motilidad y que produce indol.
Podemos concluir que al realizar esta práctica aprendimos y supimos
más información sobre algunas bacterias y pudimos saber que
contienen y que van desarrollando en el transcurso de su crecimiento.
Para cerrar con nuestra hipótesis podemos ver que se cumplió en
algunos puntos, pero también agregamos que no se cumplió del todo
ya que algunos microorganismos no cumplen con los compuestos de
los agares.
Referencias.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiol
ogia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_607092758cfa8.p
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https://www.microkit.es/fichas/SIMMONS-CITRATE-AGAR.pdf
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6054e85d48c47.p
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https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60706c3393e51.p
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https://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/9876/mod_folder/content/0/Caldo%
20Rojo%20Fenol.pdf?forcedownload=1
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6054e95043249.p
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