LABORATORIO #7 PROTEINAS
A) ANFOTERISMO DE LOS AMINOACIDOS
El experimento de anfoterismo de los aminoácidos demuestra cómo los aminoácidos pueden comportarse tanto como ácidos como bases, dependiendo del
entorno. Debido al presencia de por lo menos un grupo ácido (proveniente del grupo carboxilo) y otro básico (proveniente del grupo amino), los aminoácidos
pueden presentar Anfoterismo (reaccionar como ácidos o como bases) en disolución acuosa.
TUBO 1 En el primer tubo (con ácido acético y anaranjado de metilo):
1. Al agregar ácido acético y anaranjado de metilo, el color debería ser rojo o naranja, indicand
o un pH ácido.
2. Al agregar la glicina (aminoácido), deberías observar que el color empieza a cambiar. La glici
na actuará como una base, Neutralizando el ácido acético hasta alcanzar un pH más neutro
, lo que cambia el color del indicador.
TUBO 2 En el segundo tubo (con amoníaco y fenolftaleína):
1. Con amoníaco y fenolftaleína, la solución debería ser rosa, indicando un pH básico.
2. Al añadir la glicina gota a gota, observarás que el color de la solución empieza a cambiar. La
glicina actuará como un ácido, neutralizando el amoníaco hasta alcanzar un pH más neutro,
haciendo que la fenolftaleína se vuelva incolora.
Al Ácido acético se le adicionará anaranjado de metilo; el cual, es un indicador que se torna rojo- anaranjado en disoluciones con pH ácido (como en el caso
de estar en el Ácido acético) y en pH ligeramente neutros, se vuelve amarillo-naranja. A medida se adicione la Glicina, esta consumirá el Ácido acético y, por
ende, el pH comenzará a aumentar (hacia la neutralidad).
Al Amoníaco se le adicionara fenolftaleína, el cual es un indicador que se torna violeta en disoluciones con pH básico (como en el caso de estar en el Amoniaco)
y en pH ligeramente neutros, se vuelve transparente A medida se adicione la Glicina, esta consumirá el Amoniaco y, por ende, el pH comenzará a disminuir
(hacia la neutralidad).
B) PRUEBA DE NINHIDRINA
La Prueba de Ninhidrina consiste en un test para identificar a-aminoácidos mediante la reacción de este con Ninhidrina para la formación de un complejo de
color azul-violeta. Esta prueba es muy útil va que también sirve para diferenciar a-aminoácidos de ẞ-aminoácidos, ya que, estos últimos no reaccionan con
este reactivo.
ALBUMINA La albúmina es una proteína que contiene aminoácidos libres en su estructura, así que deberías ver un
cambio a azul violeta, indicando una prueba positiva.
LECHE La leche contiene proteínas como la caseína, que también tiene aminoácidos libres. Este tubo debería v
olverse azul violeta.
GELATINA La gelatina es rica en colágeno, una proteína. Por tanto, se esperaría también un cambio a azul violeta.
GLICINA Dado que la glicina es un aminoácido libre, este tubo debería volverse azul violeta rápidamente.
Durante la Práctica de Laboratorio se realizará la Prueba de Ninhidrina a & muestras (Albúmina, Leche. Gelatina y Glicina) para determinar cuál de ellas posee
o-aminoácidos. La prueba se considerará positiva si la disolución se torna de color azul o violeta
C) PRUEBA DE BIURET
La Prueba de Biuret es una prueba que consiste en la adición de Sulfato de Cobre al 1% en medio básico (generado por la adición previa de NaOH al 20%) a
una muestra para identificar si esta posee enlaces peptídicos mediante su coloración azul. Esto es posible gracia a la formación de un complejo coloreado
entre los lones Cu+2 y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. El Cu se acompleja con cuatro grupos NH dando lugar a una solución de color
violeta.
ALBUMINA La albúmina es una proteína, así que deberías ver la solución volverse violeta, indicando una prueba po
sitiva.
LECHE La leche contiene proteínas como la caseína, así que también deberías observar un color violeta.
GELATINA La gelatina está hecha de colágeno, que tiene enlaces peptídicos. Este tubo también debería volverse
violeta.
GLICINA La glicina es un aminoácido simple, no una proteína, por lo tanto, no tiene enlaces peptídicos. Deberías
observar que la solución se mantiene azul o cambia muy poco, indicando una prueba negativa.
Durante la Práctica de Laboratorio se realizará la Prueba de Biuret a 4 muestras (Albúmina, Leche, Gelatina y Glicina) para identificar cuál de ellas posee
enlaces peptídicos. La prueba se considera positiva si la solución se torna de color violeta al aplicarle la prueba.
LABORATORIO #7 PROTEINAS
D) REACCION XANTOPROTEICA (AMNOACIDOS AROMATICOS)
Durante la Práctica de Laboratorio se realizará la Reacción Xantoprotéica a 4 muestras (Albúmina. Leche, Gelatina y Glicina) para identificar
cuál de ellas posee aminoácidos aromáticos. La prueba se considera positiva si en la solución se forma una coloración amarilla o naranja
al aplicarle el reactivo
ALBUMINA La albúmina contiene aminoácidos aromáticos, así que deberías ver un cambio a color amarillo o naranj
a, indicando una prueba positiva.
LECHE Similar a la albúmina, la leche contiene proteínas con aminoácidos aromáticos y debería tornarse amari
lla o naranja.
GELATINA La gelatina tiene aminoácidos aromáticos debido a su contenido de colágeno. Este tubo también deber
ía volverse amarillo o naranja.
GLICINA La glicina no es un aminoácido aromático, por lo tanto, no deberías observar un cambio significativo en
el color.
TRIPTÓFAN El triptófano es un aminoácido aromático, así que este tubo debería tornarse amarillo o naranja.
E) DETERMINACION DE LA PRECENCIA DE PUENTES DE DISULFURO (S-S) EN COMPUESTOS ORGANICOS
La prueba se considera positiva si se forma un precipitado color negro
ALBUMINA La albúmina contiene enlaces disulfuro, por lo que deberías ver un precipitado negro, indicando una pr
ueba positiva.
LECHE La leche contiene proteínas con enlaces disulfuro, así que deberías observar un precipitado negro.
GELATINA La gelatina, derivada del colágeno, también contiene puentes de disulfuro. Este tubo debería presentar
un precipitado negro.
GLICINA La glicina no contiene enlaces disulfuro, por lo que no deberías ver un precipitado negro en este caso.
Durante la Práctica de Laboratorio se analizará la presencia del puente disulfuro en albumina y Glicina mediante la prueba de acetato de plomo. Un resultado
positivo, evidenciado por la formación de un precipitado negro, comprobará la existencia del enlace disulfuro dentro de la albumina.
F) HIDROLISIS DE PROTEINAS
1. Gelatina + H₂SO₄ (baño maría): El ácido sulfúrico concentrado hidrolizará la gelatina, rompiendo los enlaces peptídicos y
convirtiéndola en péptidos más pequeños y aminoácidos.
2. Adición de NaOH + CuSO₄ (Prueba de Biuret): Ahora estamos aplicando la prueba de Biuret a esta mezcla hidrolizada.
Si los enlaces peptídicos han sido descompuestos efectivamente, la solución puede no volverse violeta o puede volverse solo ligeram
ente violeta, indicando una menor presencia de enlaces peptídicos.
Comparación con la prueba de Biuret original:
• En la prueba original de Biuret con gelatina sin hidrólisis, la solución se tornaría violeta, confirmando la presencia de enlac
es peptídicos.
• En este experimento de hidrólisis, dependiendo de la extensión de la descomposición, podrías observar una coloración vi
oleta menos intensa o nula, indicando una reducción en la cantidad de enlaces peptídicos.
Durante la Práctica de Laboratorio se llevará a cabo la hidrolisis de las proteínas presentes en la gelatina utilizando Acido Sulfúrico (HSO4) concentrado con
calentamiento. Para corroborar que la hidrolisis se ha llevado a cabo se le realizará la Prueba de Biuret al producto de la hidrolisis para evidenciar que ya no
quedan proteínas libres después de llevarse a cabo la hidrolisis
G) ACCION CATALITICA Y DESNATURALIZACION DE ENZIMAS
Este experimento te permitirá observar la acción catalítica de la enzima catalasa y cómo se ve afectada por la desnaturalización.
HIGADO Cuando agregas H₂O₂ al hígado crudo, observarás una rápida producción de burbujas. Esto ocurr
CRUDO e porque la catalasa en el hígado crudo descompone el H₂O₂ en agua y oxígeno.
HIGADO Al agregar H₂O₂ al hígado cocido, verás poca o ninguna producción de burbujas. La cocción desna
COCIDO turaliza la catalasa, impidiéndole descomponer el H₂O₂.
PAPA Similar al hígado crudo, la papa cruda contiene catalasa. Al agregar H₂O₂, verás una producción d
CRUDA e burbujas debido a la descomposición del H₂O₂.
PAPA Al agregar H₂O₂ a la papa cocida, no observarás una producción significativa de burbujas, ya que l
COCIDA a enzima catalasa ha sido desnaturalizada por la cocción.
Durante la Práctica de Laboratorio se observará en el efecto de la desnaturalización por calentamiento en la acción enzimática de la Catalasa (enzima
oxidorreductasa capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno en Agua y oxigeno). Para ello, se analizará la catalasa presente en el higado y en la papa. Se
observará su capacidad para descomponer al peróxido de hidrógeno cuando están crudos y se comparará su actividad enzimática al estar cocidos.
