FRUCTOSAMINA Ref.
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para la determinación de la fructosamina por Metodologia . Reducción del NBT.
(
método cinético de tiempo fijo en muestras de suero.
Reactivos
Uso profesional.
1. - Reactivo 1 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
)
Contiene tampón 83 mmol/L pH 7,3; azul de nitrotetrazolio (NBT)
967 mmol/L; uricasa ³5000U/L; azida sódica 14,6 mmol/L; tensioactivos
Principio . La glucosa se une a los grupos amino de las proteínas y estabilizantes.
formando una base de Schiff (aldimina), que después de un
reordenamiento molecular, se transforma en una cetoamina estable 2. - Reactivo 2 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
<
denominada genéricamente fructosamina1. Después de su uso, almacenarlo bien cerrado. Contiene tampón
625 mmol/L pH 10,4 y azida sódica 14,6 mmol/L.
A pH alcalino la fructosamina se convierte a la forma enólica, que reduce
el azul de nitrotetrazolio a un ‘‘formazán púrpura’’. La medición de la
diferencia de la absorbancia, después de la incubación a los 10 y 15
3. - Calibrador - Concentración en el rótulo del frasco.
minutos, es proporcional a la concentración de fructosamina en la Conservar entre 2 - 8 ºC.
muestra2. La calibración del sistema se realiza con un calibrador de matriz Reactivo liofilizado. Contiene albúmina bovina glicosilada, tampón
bovina, calibrado con polisina glicosilada. Los resultados se expresan en 50 mmol/L pH 7,4 y azida sódica 14,6 mmol/L.
micromoles/litro (mmol/L).
Estabilidad . Los reactivos no abiertos, almacenados en las
Características del sistema . La determinación de la condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa
en el rótulo. Durante su manipulación, los reactivos están sujetos a
fructosamina, formada por la unión de la glucosa con las proteínas
contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden
plasmáticas, se basa en su capacidad reductora en medio alcalino. Otros
provocar reducción en su estabilidad.
agentes reductores pueden habitualmente estar presentes en las
muestras de suero causando interferencias en el ensayo. En el sistema
Fructosamina, Labtest incorporó al Reactivo 1, uricasa y un agente Precauciones y cuidados especiales
clarificante a base de detergentes, con el objetivo de minimizar las
interferencias del ácido úrico y de la lipemia. El control de la temperatura y del tiempo de incubación durante la
realización del ensayo debe ser riguroso. La diferencia de 1 ºC en la
La calibración del ensayo con calibrador de albúmina glicosilada in vitro, temperatura introduce un error del 5%, en tanto que 1 minuto de diferencia
calibrado con polisina conteniendo glucosa marcada con 14C, posibilita durante la medición del DA provoca un error del 20%.
que pequeñas variaciones de las condiciones del test no produzcan
interferencias importantes2. Los beneficios de este sistema son Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la
resultados más consistentes, con mayor reproducibilidad y exactitud. manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la
boca.
El sistema utiliza un Reactivo de Trabajo estable por 30 días, si es Los reactivos contienen azida sódica, que es tóxica. Se debe tener
almacenado entre 2 y 8 ºC, permitiendo también preparar el volumen de cuidado para evitar su ingestión, y en caso de contacto con los ojos, se
Reactivo de Trabajo necesario para una única medición de la deben lavar inmediatamente con abundante cantidad de agua y procurar
concentración de fructosamina. auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos
con las cañerías de plomo y de cobre. Por ello, utilizar grandes volúmenes
El método es fácilmente aplicable a analizadores automáticos capaces de de agua para descartar el reactivo.
5
medir, en el modo cinético, diferencias de absorbancias a 530 nm .
Material necesario y no provisto
1. Baño-maría mantenido a temperatura constante (37 ºC).
2. Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias entre 510 y
550 nm.
3. Pipetas para medir muestras y reactivos.
4. Cronómetro.
01 Español - Ref.: 97
El Reactivo de Trabajo es una solución alcalina (pH=10,3) y, como tal, es
Muestra
instable cuando expuesto a atmósfera ambiente. Por lo tanto este reactivo
Utilizar suero o plasma (heparina o EDTA) sin hemólisis. El analito es puede tener su desempeño comprometido, de modo imprevisible, si
estable 7 días entre 2 - 8 ºC y 3 meses a -20 ºC (20 ºC bajo cero). mantenido abierto sea no analizador automático, sea en la bancada. Para
preservar su desempeño, el reactivo de trabajo solamente debe
Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que permanecer abierto el tiempo necesario para se obtener el volumen a ser
establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y utilizado. Almacenar bien cerrado.
almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el Opcionalmente se puede preparar menor volumen de Reactivo de Trabajo
procedimiento analítico. utilizando la proporción de 3 (tres) volúmenes del Reactivo 1 y 2 (dos)
volúmenes del Reactivo 2. Ejemplo: para preparar 10 mL de Reactivo de
Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre Trabajo se deben mezclar 6 mL de Reactivo 1 y 4 mL de Reactivo 2.
no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir El Reactivo de Trabajo contiene tampón fosfato 50 mmol/L; tampón
las normas establecidas para bioseguridad. carbonato 250 mmol/L; azul de nitrotetrazolio 580 mmol/L; uricasa
³3000 U/L; detergentes y estabilizantes a pH 10,3.
Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las
normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Calibrador . Disolver el contenido del frasco de Calibrador (Nº. 3) en
2,0 mL de agua destilada o desionizada. Esperar 30 minutos. Mezclar por
inversión. Homogeneizar antes de usar. Estable 60 días entre 2 - 8 ºC y 6
Interferencias
meses a -10 ºC negativos.
Concentraciones de hemoglobina por encima de 100 mg/dL producen
interferencia negativa significativa. Procedimiento
Concentraciones de bilirrubina hasta 8,0 mg/dL y glucosa hasta Este procedimiento no es aplicable a los analizadores semi-automáticos
1000 mg/dL no producen interferencias significativas. Concentraciones que utilizan únicamente cubetas de flujo. Están disponibles aplicaciones
de ácido ascórbico por encima de 3,0 mg/dL producen interferencia para sistemas automáticos y semi-automáticos.
negativa significativa.
Ver Observaciones 1, 2 y 3.
Concentraciones de triglicéridos hasta 1000 mg/dL y de ácido úrico hasta
14,0 mg/dL no interfieren significativamente. Rotular 2 cubetas del fotómetro como ‘‘Test’’ (o Muestra) y ‘‘Calibrador’’
y proceder como sigue:
Para evaluar la concentración aproximada de hemoglobina en una
muestra hemolisada, se puede proceder del siguiente modo: diluir Test Calibrador
0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y medir la Reactivo de Trabajo 1,0 mL 1,0 mL
absorbancia a 405 ó 415 nm, ajustando el cero con agua desionizada o
destilada. Incubar a 37ºC durante 2 minutos.
Muestra 0,050 mL ------
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia405 x 601 Calibrador ------ 0,050 mL
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia415 x 467
Mezclar bien e incubar a 37 ºC. Después de exactamente 10 minutos
Preparación de los reactivos (cronometrados) determinar las absorbancias (A1) del Test y del
Calibrador a 530 nm (510 - 550), ajustando a cero con agua destilada o
Reactivo de Trabajo . El conjunto de un frasco de Reactivo 1 y un desionizada. Continuar la incubación a 37 ºC por exactamente otros 5
frasco de Reactivo 2 permite preparar el Reactivo de Trabajo. minutos (cronometrados) y determinar las absorbancias (A2) del Test y
del Calibrador a 530 nm (510 - 550), ajustando a cero con agua destilada.
Transferir el contenido de un frasco de Reactivo 2 a un frasco de Reactivo
1 y homogeneizar por inversión. Identificar el frasco del Reactivo de El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
Trabajo para evitar confusión con otros frascos de Reactivo 1 y anotar la cuyo volumen mínimo de solución de lectura es igual o menor a 1 mL. Se
fecha de expiración. debe verificar la necesidad de ajuste del volumen en el fotómetro utilizado.
Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados
El Reactivo de Trabajo puede ser utilizado por 30 días se almacenado proporcionalmente sin perjuicio en el desempeño del ensayo,
entre 2 - 8 ºC, si no hubiera contaminación química o microbiana (vea manteniéndose inalterado el procedimiento de cálculos. En caso de
Calibración). reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volúmen
mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmes de muestra
menores a 0,01 mL son críticos en aplicaciones manuales y deben ser
usados con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición.
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Cálculos . Ver Linealidad. Linealidad - intervalo operacional
Calcular las diferencias de absorbancias para el Test y el Calibrador: El resultado de la medición es lineal entre 20 mmol/L y 800 mmol/L. Para
DA = A2 - A1
valores mayores a 800 mmol/L, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L
(0,85%), realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenido
Fructosamina (mmol/L) = (DA Teste / DA Calibrador) x Conc. del
por el factor de dilución.
Calibrador
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
Ejemplo
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
Absorbancia del Test reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
A1= 0,299 A2= 0,382 DA Test = 0,382 - 0,299 = 0,083 especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
Absorbancia del Calibrador para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
A1= 0,394 A2= 0,505 DA Calibrador = 0,505 - 0,394 = 0,111 las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB)7,8,9.
Concentración del Calibrador en uso = 359 mmol/L
Intervalo de referencia . Estos valores deben ser usados sólo
Fructosamina (mmol/L) = (0,083 / 0,111) x 359 = 268 mmol/L como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en la
población atendida, su propio rango de valores de referencia.
Debido a la gran reproducibilidad que puede obtenerse con esta
metodología, se puede utilizar el método del factor. Para individuos no diabéticos (todas las edades): 205 a 285 mmol/L3.
Factor de Calibración = Conc. del Calibrador / DA Calibrador Características de desempeño10
Fructosamina (mmol/L) = DA Test x Factor
Exactitud . A dos muestras con concentraciones de fructosamina
Ejemplo iguales a 175 y 253 mmol/l se le adicionó una cantidad conocida del
analito, obteniéndose una recuperación media del 102%. El error
Concentración del Calibrador en uso = 359 mmol/L
sistemático proporcional medio obtenido fue igual a 3,5 mmol/L ó 2,0%.
Factor = 359 / 0,111= 3234
Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método
Fructosamina (mmol/L) = 0,083 x 3234 = 268 mmol/L similar utilizando 40 muestras con valores situados entre 33 y
775 mmol/L. La comparación dio como resultado la ecuación de
Calibración regresión: y = 1,029x -1,346 y un coeficiente de correlación (r) igual a
0,998. Es evidente una correlación extremadamente positiva entre los
Trazabilidad del Sistema . La concentración del calibrador é trazable a un dos métodos, obteniéndose un error sistemático del 2,19%, 2,43% y
patrón proteico calibrado con muestra de polilisina glicada con glucosa 2,53%, en los niveles de decisión iguales a 184 mmol/L, 272 mmol/L e
marcada con 14C6. 347 mmol/L, respectivamente. Como las muestras fueron seleccionadas
aleatoriamente en pacientes ambulatorios y pacientes hospitalizados, se
Calibraciones manuales puede inferir que el método tiene una especificidad metodológica
Calibración de 2 puntos. adecuada.
Calibrador incluido (Ref.: 97.3).
Intervalo de calibraciones Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
Se debe calibrar el sistema semanalmente y en las siguientes situaciones: N Media DP CV (%)
Cuando el control interno de la calidad indicar;
Muestra 1 20 302 2,51 0,83
Cuando utilizar nuevo lote de reactivos;
Muestra 2 20 388 3,24 0,84
Cuando utilizar nuevo Reactivo de Trabajo.
Sistemas automáticos
Calibración de 2 puntos;
Reproducibilidad - imprecisión total
Blanco de reactivos: agua desionizada o NaCl 150 mmol/L; N Media DP CV (%)
Calibrador incluido (Ref.: 97.3). Muestra 1 20 302 7,58 2,50
Muestra 2 20 388 8,21 2,12
Intervalo de calibraciones
Se debe calibrar el sistema semanalmente y en las siguientes situaciones:
Cuando el control interno de la calidad indicar;
Cuando utilizar nuevo lote de reactivos;
Cuando utilizar nuevo Reactivo de Trabajo.
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Sensibilidad metodológica . Una muestra de NaCl 150 mmol/L 2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
(0,85%) fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
encontrándose un valor igual a 5,0 mmol/L, equivalente a la media de 20 potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
ensayos más 2 desviaciones estándar. Se verificó que el límite de en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
detección fotométrica (cubeta con 1,0 cm de camino óptico) es de para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
3,2 mmol/L, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
Efectos de la dilución de la matriz . Una muestra con valor <0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
igual a 658 mmol/L fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema a las saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando diversos silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
factores de dilución se determinó una recuperación media del 101%. deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
Significado clinico . Fructosamina es el nombre genérico dado a un programa de control de la calidad del agua.
todas las proteínas glicosiladas, de las cuales la mayor proporción es
debida a la albúmina, por lo que se constituye en la mayor masa proteica 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
plasmática después de la hemoglobina. de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere
consultar: www.fxol.org
Así como la formación de la hemoglobina glicosilada es consecuencia de
una modificación no enzimática pos-translacional, dependiente de lis Referencias
valores de la glucemia, lo mismo ocurre con la glicosilación de otras
proteínas plasmáticas. 1. Baker JR, Metcalf PA, Johnson RN, Newman D, Rietz P.: Clin
Chem985;31:1550-1554.
La vida média de las proteínas varia entre 1 y 3 semanas, al revés de la
hemoglobina cuya vida média es 120 días. Es de esperar, por lo tanto que, 2. Johnson RN, Metcalf PA, Baker JR.: Clin Chim Acta 1983; 127:87-95.
mientras el valor de la hemoglobina glicosilada refleja el control de la
glucemia de los 2 meses anteriores al ensayo, la proteína glicosilada 3. Kruse-Jarres JD, Jarausch J, Lehmann P, Vogt BW, Rietz P.: Lab Med
refleja las concentraciones de la glucosa plasmática de los 20 días 1989; 13:245-253.
anteriores.
4. Lim YS, Staley MJ.: Clin Chem 1986;32:403-404.
Así, la fructosamina está elevada en todos los casos de diabetes bajo
control metabólicos inadecuados. 5. Lloyd D, Marples J.: Clin Chem 1984;30:1686-1688.
Cuando se observa la perdida del control glucemico, la respuesta de la 6. Schleicher ED, Vogt BW.: Clin Chem 1990; 36:136-139.
fructosamina, con elevación de valores, se da prácticamente
concomitante con la hiperglucemia, retornando mientras tanto a los 7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T.: Clin Chem 1981;27:493-
valores de referencia 3 semanas después de la respuesta al tratamiento. 501.
La prueba no sufre interferencias de medicamentos, alimentación, 8. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
glucemia del momento y no se observa diferencia significativa entre Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível
hombres y mujeres. em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170> (acesso
em 04/2006).
Los valores disminuidos se han observado en pacientes con altas
pérdidas de albúmina o en enfermedades que aumentan el catabolismo 9. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
proteico. Diagnóstica 2005.
La prueba no debe usarse para rastrear tolerancia perjudicial a la glucosa, 10. Labtest: Datos de Archivo.
debido a su pequeña sensibilidad respecto a la prueba oral de tolerancia a
la glucosa.
Presentación
Observaciones Producto Referencia Contenido
1 6 X 9 mL
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores Fructosamina 97-6/15 2 6 X 6 mL
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de 1 X 2 mL
resultados correctos. 1 4 X 9 mL
Fructosamina
97-4/15 2 4 X 6 mL
Labmax 560/400
1 X 2 mL
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Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos y semi-
automáticos.
Labtest Diagnóstica S.A.
El número de tests en aplicaciones automáticas depende de los
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
parámetros de la programación.
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Informaciones al consumidor
Customer Service e-mail: [email protected]
[Términos y Condiciones de Garantía]
Edición: Mayo, 1995
Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de Revisión: Julio, 2017 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, Ref.: 290519 Reproducción bajo previa autorización
siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.
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