UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA CON MENCIÓN EN BIOTECNOLOGÍA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA

OBTENCIÓN DE INVERTASA POR SACCHAROMYCES CERVISIAE

Rocha, M., Rodriguez, C., Roque, M., Salazar, J., Sandoval, C.

CURSO : Fundamentos de la biotecnología

DOCENTE : Blgo. Huayan Dueñas, Luis Alberto
CICLO : VI
HUACHO - PERÚ- 2024
INTRODUCCIÓN

Saccharomyces cerevisiae es una fuente fundamental de proteina

unicelular de forma esferica de 5- 10 micrometros que se reproducen de
forma asexual a traves de la gemacion, utilizando ampliamente por el
hombre en el transcurso del tiempo para la elaboracion de cerveza, pan y
vino .
El desarrollo tecnológico logrado ha permitido la producción de levadura
de panificación a finales del siglo XIX y principios del siglo XX, permitiendo
comprender en profundidad los mecanismos biológicos de multiplicación
de esta levadura y contar con el equipo necesario para su producción.
OBJETIVOS
O. GENERAL
- Analizar el proceso de la invertasa por Saccharomyces cerevisiae

O. ESPECÍFICOS
- Explicar la composición molecular y el mecanismo de acción de la
invertasa.

- Evaluar la Hidrólisis de sacarosa por invertasa de Saccharomyces

cerevisiae inmovilizada sobre nanopartículas magnéticas de ferrita de
cobalto
 saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae es una levadura unicelular perteneciente al filo Ascomycota.

Características
● Estructura celular: Es un organismo eucariota con un núcleo definido. Se reproduce principalmente por gemación,
aunque puede formar esporas en condiciones adversas.
● Tamaño: Las células miden entre 5 y 10 micrómetros de diámetro.
● Metabolismo: Es un organismo aeróbico facultativo, capaz de realizar fermentación alcohólica en ausencia de
oxígeno.
Morfología
● Forma: Las células son esféricas o elipsoidales y pueden formar colonias que se agrupan en racimos o cadenas.
● Pared celular: Compuesta de quitina y glucanos, que proporciona resistencia y protección.
Fisiología
● Fermentación: Utiliza la glucólisis para metabolizar azúcares, produciendo etanol y dióxido de carbono. Este proceso
es esencial en la industria de panadería y vinificación.
● Sustratos: Puede fermentar diversos azúcares, como glucosa, fructosa y maltosa, adaptándose a diferentes condiciones
ambientales.
Usos
La levadura es ampliamente empleada por el ser humano en diversos procesos
industriales y biotecnológicos. Por ejemplo:

● en la elaboración del pan

● en la preparación de bebidas alcohólicas ; la cerveza y el vino
● en la producción de azúcar de abedul.
Nombre Sistemático β-fructofuranosidasa

N. de la comisión de [Link]
enzimas

Función Principal Es una enzima que cataliza la hidrólisis de la sacarosa en glucosa y fructosa, actúa rompiendo los enlaces glucosídicos de la sacarosa,
un disacárido formado por una molécula de glucosa y una de fructosa. La reacción que cataliza la invertasa es:
Invertasa
Sacarosa + Agua —-----------> Glucosa + Fructosa

Sustrato Su sustrato principal es la sacarosa, un disacárido compuesto por una molécula de glucosa y una de fructosa, unidas por un enlace
glucosídico

cofactor La invertasa no necesita ningún cofactor para hidrolizar la sacarosa, ya que utiliza dos residuos de aminoácidos (un aspartato y un
glutamato) como centro activo. Sin embargo, algunos iones metálicos, como el calcio, el magnesio y el manganeso, pueden aumentar la
estabilidad y la actividad.

pH y temperatura 4.5 - 5.5 y 40 ºC - 60 ºC

óptima

inhibición Algunos compuestos pueden inhibir su actividad, como ciertos metales pesados y reactivos específicos pueden afectar el
funcionamiento de la invertasa.
Metodología
Producción de Invertasa
│
├── 1. Selección del Organismo
│ └── Saccharomyces cerevisiae
│
├── 2. Medio de Cultivo
│ └── Caldo de Sacarosa de Levadura (YSB)
│
├── 3. Inoculación y Fermentación
│ │ Condiciones
│ ├── Inoculación en medio estéril
│ ├── Temperatura: 28 °C
│ ├── Duración: 72 horas
│ └── Resultado: Producción de invertasa
│
└── 4. Extracción de Invertasa
├── Cosecha de células
├── Lisis celular
└── Liberación de invertasa al medio
Purificación de Invertasa
│ │
├── 1. Método Cromatográfico ├── 3. Análisis de Pureza y Actividad
│ ├── Cromatografía en columna │ ├── Determinación de Pureza
│ │ ├── Columna: 1×20 cm │ │ └── Condiciones: Diferentes pH
│ │ ├── Resina: CM Sephadex C50 y temperatura
│ │ └── Principio: Separación según carga y tamaño │ └── Estimación del Peso Molecular
│ └── Equilibrio de la Columna │ ├── Método: Filtración en gel
│ ├── Tampón: Fosfato de sodio 0,01 M │ └── Peso Molecular: 118 kDa
│ ├── Glicerol: 5% │
│ └── pH: 7 └── 4. Evaluación de Parámetros
│ Enzimáticos
├── 2. Elución de la Enzima ├── Cálculo de Constantes de
│ ├── Medición de Actividad Michaelis-Menten
│ │ ├── Incubación: Con sacarosa a 28 °C durante 10 minutos │ ├── Km: Afinidad por el sustrato
│ │ ├── Método: Nelson-Somogyi │ └── Vmax: Capacidad catalítica
│ │ └── Unidad Enzimática: 1 micromol de glucosa/min
 APLICACIONES

- Biocombustibles: Fermenta
- Agricultura: Para mejorar la salud del directamente los azúcares
suelo, aumentando el rendimiento de simples para obtener etanol
los cultivos, reduciendo la necesidad de
fertilizantes sintéticos

- Medicina y química: La
producción de las vacunas
- Fermentación de alimentos: Dicho contra la hepatitis A y B,
proceso donde se destruye las anticoagulante y la insulina
moléculas para convertirlas en
moléculas más simples
ARTÍCULO: N°1

Hidrólisis de sacarosa por invertasa de

Saccharomyces cerevisiae inmovilizada
sobre nanopartículas magnéticas de
ferrita de cobalto

(Gissell Romero Vargas, 2019)

 INTRODUCCIÓN

Este estudio presenta una nueva metodología

para la hidrólisis de sacarosa utilizando la
enzima β-D-fructofuranosidasa (invertasa)
inmovilizada sobre nanopartículas magnéticas
de ferrita de cobalto (NPM-CoFe₂O₄).
● El objetivo principal es desarrollar un
proceso eficiente y sostenible para la
producción de jarabes de glucosa y
fructosa, ingredientes clave en la industria
alimentaria.
La inmovilización de la enzima permite su
reutilización en múltiples ciclos, lo que reduce
los costos y mejora la eficiencia operativa.
metodología
- Se describe la síntesis de las nanopartículas de ferrita de
cobalto (NPM-CoFe2O4) por el método de reducción poliol.
- Se explica el proceso de recubrimiento de las
nanopartículas con quitosano y activación con
glutaraldehído.
- Se detalla el procedimiento de inmovilización de la
β-D-fructofuranosidasa sobre las nanopartículas activadas.
- Se describen los métodos utilizados para la caracterización
de las nanopartículas y la enzima inmovilizada, incluyendo
DRX, y espectroscopia de Bradford.
- Se explica el diseño experimental para la determinación del
pH y la temperatura óptimos de la enzima libre e
inmovilizada.
- Se describe el método utilizado para la determinación de la
actividad enzimática y los parámetros cinéticos.
- Se detalla el procedimiento para la evaluación de la
reutilización de la enzima inmovilizada.
 Beneficios de la
Inmovilización
La inmovilización de la
invertasa proporciona Reutilización: La enzima se puede
varias ventajas: recuperar fácilmente del medio de
reacción y reutilizar en múltiples
ciclos, lo que reduce los costos de
producción.
Mayor estabilidad: La
enzima inmovilizada es
más resistente a la
desnaturalización por
factores como la
temperatura y el pH.
- Control de la
reacción: La
inmovilización
permite un mejor
control sobre la
actividad enzimática y
la cinética de la
reacción.
 Nanopartículas Magnéticas:
Un Soporte Ideal
- Las nanopartículas magnéticas de ferrita de cobalto
(NPM-CoFe₂O₄) ofrecen un soporte ideal para la
inmovilización de la invertasa:
Alta superficie reactiva: Las nanopartículas tienen
una gran superficie, lo que permite la unión de una
mayor cantidad de enzima.
Estabilidad química: Las NPM-CoFe₂O₄ son
químicamente estables y resistentes a la
degradación. Separación magnética: La naturaleza
magnética de las nanopartículas facilita la
recuperación de la enzima inmovilizada mediante un
campo magnético externo. (Gissell Romero Vargas, 2019)
Comparación con Otras Técnicas de Inmovilización

La inmovilización Unión más fuerte: La unión Mayor estabilidad: La

covalente es más estable que la
covalente utilizada en unión covalente
adsorción física o la
este estudio ofrece protege a la enzima
encapsulación, lo que garantiza
ventajas sobre otras una mayor retención de la de la
técnicas: actividad enzimática.. desnaturalización y la
degradación.
Esta tabla compara la actividad enzimática de la
β-D-fructofuranosidasa en su forma libre (sin inmovilizar) y en su
forma inmovilizada sobre las nanopartículas magnéticas.

Resultados clave:
● Actividad enzimática promedio:
○ Enzima libre: 0.137 μmol/min
○ Enzima inmovilizada: 0.103
μmol/min

● Esto significa que la enzima libre tiene una

mayor capacidad para catalizar la reacción de
hidrólisis de la sacarosa en comparación con la
enzima inmovilizada. La actividad enzimática se
mide en micromoles de sacarosa hidrolizada
por minuto.
● Desviación estándar: Se proporciona para
aunque la inmovilización permite la reutilización de la
ambas muestras, lo que indica la variabilidad de
enzima, también reduce su actividad enzimática. Esto es
los resultados. Una desviación estándar más
un hallazgo importante, ya que sugiere que, aunque la
baja sugiere que los resultados son más
inmovilización tiene beneficios, también puede afectar
consistentes la eficiencia de la enzima.
1. máx (Velocidad máxima):
○ Enzima libre: 1.2273 UI/mg
○ Enzima inmovilizada: 1.1910 UI/mg
2. Interpretación: Vmax representa la máxima
velocidad a la que la enzima puede catalizar la
reacción cuando está saturada con sustrato. En
este caso, la enzima libre tiene una velocidad
máxima ligeramente mayor que la inmovilizada, lo
que indica que la inmovilización puede haber
reducido la capacidad de la enzima para catalizar
la reacción a su máxima eficiencia.
3. Km (Constante de Michaelis):
○ Enzima libre: 0.2811 mM/mL La Tabla 3: muestra que la inmovilización de la
○ Enzima inmovilizada: 0.4597 mM/mL β-D-fructofuranosidasa afecta tanto la velocidad máxima de la
reacción como la afinidad de la enzima por el sustrato. Aunque la
enzima inmovilizada puede ser reutilizada, su eficiencia y afinidad
se ven comprometidas en comparación con la forma libre. Esto
interpretacion: este caso, el Km de la enzima
es importante para aplicaciones industriales, ya que se debe
inmovilizada es más alto, lo que sugiere que la
considerar el equilibrio entre la reutilización de la enzima y su
enzima inmovilizada tiene una menor afinidad
actividad catalítica.
por la sacarosa en comparación con la enzima
libre.
Aplicaciones Prácticas

● La metodología desarrollada tiene

aplicaciones prácticas en la industria
alimentaria y biotecnológica:
● Producción de jarabes de glucosa y
fructosa: La hidrólisis de sacarosa
mediante invertasa inmovilizada
permite la producción eficiente de estos
jarabes, utilizados en una amplia gama
de productos alimenticios.
● Amplia aplicabilidad: El enfoque puede
ser adaptado para otras enzimas y
sustratos, ampliando su aplicabilidad en
diferentes procesos biotecnológicos.
 RESULTADO

- Se presentan los resultados de la caracterización de las

nanopartículas de ferrita de cobalto, incluyendo la
composición, la estructura, el tamaño del cristalito y las
propiedades magnéticas.
- Se analizan los resultados de la inmovilización de la enzima,
incluyendo la cantidad de enzima inmovilizada, el
rendimiento de la inmovilización, el pH y la temperatura
óptimos, la actividad enzimática, los parámetros cinéticos y la
capacidad de reutilización.

(Gissell Romero Vargas, 2019)

 CONCLUSIÓN

La inmovilización de la invertasa sobre NPM-CoFe₂O₄ es

una estrategia prometedora para la hidrólisis de sacarosa,
ofreciendo ventajas en términos de eficiencia,
sostenibilidad y reutilización. Este estudio abre nuevas
posibilidades para la optimización de procesos enzimáticos
en la industria alimentaria y biotecnológica. Investigaciones
futuras se centrarán en la escalabilidad del proceso y la
evaluación de su impacto ambiental.
 BIBLIOGRAFÍA
Gissell Romero Vargas, J. C. R. C. et al. (2019). Hidrólisis de sacarosa por invertasa de

Saccharomyces cerevisiae inmovilizada sobre nanopartículas magnéticas de ferrita de

cobalto. [Link].

[Link]

20(3).pdf