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La centrifugación se puede llevar a cabo a escala preparativa o escala analítica. La primera se utiliza para
aislar partículas para su aprovechamiento posterior y la segunda permite determinar propiedades físicas
como la velocidad de sedimentación o el peso molecular.
La centrifugación preparativa se utiliza para separar partículas según la velocidad de sedimentación
(centrifugación diferencial), la masa (centrifugación zonal) o la densidad (centrifugación isopícnica). En el
primer caso se obtiene un líquido sobrenadante y un materioal sedimentado. En los otros dos casos las
patículas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido líquido (centrifugación mediante
un gradiente de densidades).
Las partículas se pueden separar en función de la velocidad de sedimentación (centrifugación diferencial), la
masa (centrifugación zonal) o la densidad (centrifugación isopícnica). La centrifugación zonal y la
centrifugación isopícnica constituyen ejemplos de centrifugación mediante un gradiente de densidades.
Hay diferentes tipos de centrífugas según el rango de velocidades de giro:
A. Centrífugas de baja velocidad, de sobremesa o clínicas. De pequeño tamaño y sin refrigeración.
Alcanzan una velocidad máxima de 5000 rpm. Son Útiles para la separación de partículas grandes
como células o precipitados de sales insolubles.
Las centrífugas micrófugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de más
de 10.000 rpm, Los volúmenes de trabajo son muy pequeños. Son útiles en el campo de la biología
molecular.
B. Centrífugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son
refrigeradas y algunas tienen sistema de vacío para evitar el calentamiento del rotor a causa del
rozamiento con el aire. Son útiles en la separación de fracciones celulares, pero insuficientes para la
separación de ribosomas, virus o macromoléculas en general.
C. Ultracentrífugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeración i
de alto vacío. Hay ultracentrífugas analíticas que permiten la obtención de datos precisos de
propiedades de sedimentación (coeficientes de sedimentación, pesos moleculares), y preparativas,
útiles para aislar partículas de bajo coeficiente de sedimentación (microsomas, virus, macromoléculas).
11.2.1 Centrifugación diferencial
Es el proceso que tiene como resultado la obtención de un sobrenadante y un material sedimentado.
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11.2.2 Centrifugación mediante un gradiente de densidades:
Este tipo de centrifugación es un proceso mediante el cual las partículas se distribuyen en fracciones de
diferentes densidades de un fluido líquido. El método es un poco más elaborado que la centrifugación
diferencial, no obstante presenta ventajas que compensan el trabajo añadido. La técnica permite la separación
de varios o todos los componentes de la muestra y la realización de medidas analíticas. El método de
gradiente de densidades implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona
superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular, de tal
manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solución resultante. Como solutos se utilizan la
sacarosa, polisacáridos sintéticos, derivados yodados del ácido benzoico, o sales de metales alcalinos
pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se deposita en la parte superior del gradiente
como una fina banda y, tras centrifugar, la separación de los componentes de la muestra se presenta como
diferentes bandas o zonas que pueden ser separadas (o fraccionadas).
Hay dos variantes de este método, la centrifugación zonal y la centrifugación isopícnica:
[Link] Centrifugación zonal
En la centrifugación zonal la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente
de densidades previamente formado. A causa de la fuerza centrífuga las partículas se mueven a
velocidades que dependen de la masa y sedimentan en diferentes zonas del gradiente. La
densidad máxima del gradiente no ha de exceder a la de las partículas a separar.
[Link] Centrifugación isopícnica
La centrifugación isopícnica separa les partículas en un gradiente de densidades en función de la
densidad de las mismas. Las partículas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto
donde la densidad de éstas i la del gradiente son idénticas (de aquí el nombre de ‘isopícnico’).
En este caso, es condición fundamental que la densidad máxima del gradiente final ha de
exceder siempre a la densidad de las partículas. Por este motivo la sedimentación final no se
produce si se controlan las condiciones de centrifugación, ya que las partículas flotan sobre un
"colchón" de material que posee una densidad superior a la de éstas. Esta técnica se utiliza, por
ejemplo, para separar partículas similares en tamaño pero de diferente densidad. En este sentido,
la centrifugación isopícnica es un método adecuado para separar ácidos nucleicos o diferentes
orgánulos celulares.
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