Que es un nucleótido: un grupo fosfato, una pentosa(ribosa o desoxirribosa) y una base

nitrogenada (adenina, timina, guanina, citosina, uracilo)

Nucleósido: no tiene fosfato

Ácidos nucleicos son biomoléculas, macromoléculas, de elevado peso molecular y son

polímeros de nucleótidos.
● Nucleótido es una molécula formada por tres moléculas simples: ácido fosfórico,
pentosa y base nitrogenada
● La pentosa puede ser la ribosa o la desoxirribosa
● La base nitrogenada puede ser:
○ Derivadas de la purina: adenina. Guanina
○ Derivadas de la pirimidina: Citosina Timina Uracilo

○ OH: ribosa
○ H: desoxirribosa
Conformación de las cadenas polinucleotídicas:
● Los polinucleótidos se forman por la unión de nucleótidos mediante enlaces
fosfodiéster entre el OH del C-3 de un nucleótido y el OH del C-5 del siguiente
nucleótido
● Si un extremo de la cadena termina en 3’OH el otro extremo terminará en
5’[Link] estar modificados con grupos fosfato.
● Los extremos de la cadena polinucleotídica se denominan extremo 3’ y extremo 5’.
● Los polinucleótidos circulares no tienen extremos libres

Diferencias en la Estructura primaria del ADN y ARN

Propiedades del DNA y RNA
DNA
● Insoluble en soluciones diluidas de Na Cl
● Soluble en soluciones concentradas de Nacl
● Insoluble en alcohol
● Puede ser disociado de la proteína por tratamiento con un detergente o un fenol
RNA
● Soluble en soluciones diluidas de ClNa
● Insoluble en alcohol
● Puede ser disociado de la proteína por tratamiento con un detergente o un fenol

Revisión del ADN:

1. La proporción relativa de bases nitrogenadas es distinta en diferentes seres vivos.
2. En cambio, la proporción de bases nitrogenadas es constante en todas las
células del mismo ser vivo.
3. Existe la misma proporción de bases Adenina que Timina y Citosina que
Guanina.
4. La proporción de bases A+ G = C+T, o (A+ G)(C+ T ) = 1
Ejemplo:
Timina: 15%
Adenina: 15%
Completar el 50% -> Citosina=Guanina=35%

Experimento de Griffith (1928) Frederick Griffith describió el fenómeno transformación

por neumococos. Se distinguen:
➢ Neumococos de tipo R (rugoso) forman colonias de aspecto rugoso y son poco
virulentos
➢ Neumococos de tipo S (liso) forman colonias de aspecto liso y brillante . Tienen
cápsula de polisacáridos ,que las protege del sistema inmunitario del huésped y
provocan infecciones que matan al animal en 3 o 4 días

FACTOR DE TRANSFORMACIÓN= ADN

ESTRUCTURA, CARACTERÍSTICAS Y FUNCIÓN DEL ADN
ESTRUCTURA PRIMARIA
● Lo constituye la secuencia de desoxirribonucleótidos de una de las cadenas
● La cadena del DNA está polarizada, presentando un grupo fosfato libre en el C5 del
nucleótido de un extremo y un grupo OH libre en el C3 del nucleótido del otro
extremo
● Por convenio se establece la dirección 5’-3’
● El orden exacto de los nucleótidos es fundamental para la información genética que
contiene el ADN
REVISIÓN HISTÓRICA EN EL ESTUDIO DEL ADN: ESTRUCTURA SECUNDARIA
[Link] Y ROSALINE FRANKLIN 1952: Difractogramas de Rayos X:
● La molécula de ADN era una cadena extendida con una estructura altamente
ordenada
● La molécula de ADN es helicoidal y tiene 20 A° de diámetro
● La hélice del ADN está compuesta por dos hebras helicoidales
● Las bases de los nucleótidos están apiladas con los planos separados por una
distancia de 3.4 A°

ESTRUCTURA SECUNDARIA
Azúcar(ribosa) y fosfato: al exterior
Bases van al interior:
GUANINA: CITOSINA
ADENIN: TIMINA
CARACTERISTICAS
Las dos cadenas están enrolladas una alrededor de la otra formando una doble
hebra helicoidal
● Las dos cadenas de polinucleótidos se mantienen equidistantes ,al tiempo
que se enrollan en torno a un eje imaginario
● El esqueleto azúcar-fosfato (formado por una secuencia alternante de
desoxirribosa y fosfato unidos por enlaces fosfodiester 5’-3’) sigue una
trayectoria helicoidal
● Las bases se dirigen hacia el interior, interaccionan con las de la otra cadena
formando pares de bases mediante puentes de hidrógeno
● ANTIPARALELAS: PERMITE ESTABLECER LOS PUENTES DE
HIDRÓGENO
● El apareamiento de bases está presente a lo largo de toda la molécula de
DNA por lo cual la secuencia completa de bases de una cadena es
complementaria con la de la otra, lo cual sugiere que la información
hereditaria está codificada en la secuencia de bases de cualquiera de las
cadenas
DIMENSIONES DEL DNA
● El diámetro de la doble hélice es de 20 A°
● La distancia entre dos nucleótidos es 3,4 A° girados 36 grados
● Hay 10 nucleótidos por vuelta y la distancia del paso de rosca es de 34 A°
● Hendidura mayor y una mayor
Fuerzas que estabilizan la doble hélice
● Puentes de hidrógeno entre las bases
● Interacciones hidrofóbicas • Interacciones electrostáticas del fosfato
● El DNA por su carácter polianiónico puede estabilizarse con cationes como el Mg+2
o con proteínas básicas como las histonas (en las células eucarióticas)

CARACTERÍSTICAS DEL ADN

● Soluciones muy viscosas por su longitud y por su estructura.
● Debido a los fosfatos es débilmente ácido.
● Se puede desnaturalizar a 95º C, 5´
● Se puede renaturalizar e hibridar a 65ºC, 12h

Desnaturalización del DNA

● El DNA se desnaturaliza por el calor y valores extremos de pH ,la viscosidad
disminuye cuando el DNA se descompone en sus cadenas
● Se produce efecto hipercrómico se eleva el rango de su absorción ultravioleta
● Tm (temperatura de fusión) es el punto medio de la curva de fusión
 Relación entre Tm y contenido de GC del DNA
El Tm se incrementa linealmente con la fracción molar del par de bases GC ,lo cual
indica que el triple enlace de hidrógeno es más estable que el doble enlace entre AT

Otros tipos de hélices de DNA

● El DNA de doble hélice es una molécula de conformación variable,el tipo
clásico de Watson y Crick es designado como B-DNA
● Cuando la humedad relativa se reduce a 75% se produce un cambio a la
forma A-DNA.
● Hay formas con dobles hélices orientadas a la izquierda a las que se
denominan Z-DNA
Diversas formas estructurales del DNA
Tamaño y empaquetamiento del DNA
 ESTRUCTURA TERCIARIA DEL DNA
● Representa la forma superenrollada de la estructura secundaria.
● Es la forma en la que se encuentra generalmente el DNA en el interior
de la célula
● En procariotas el DNA se encuentra en forma circular
● En eucariotas se encuentra en forma lineal pero altamente
empaquetado

Cromosomas
● Las moléculas de DNA suelen estar empaquetadas en la célula en estructuras
denominadas cromosomas
● La mayor parte de las bacterias y los virus tienen un único cromosoma, mientras que
las células eucarióticas puede variar entre uno y 190
● La mayor parte de los procariotas son haploides, una sola copia de su cromosoma,
la mayor parte de células eucariotas son diploides, hay especies que pueden ser
poliploides.
La molécula del DNA vírico es pequeña
● Los virus están formados por un ácido nucleico encerrado en una cubierta proteica
● El ácido nucleico puede ser el DNA o RNA de cadena sencilla o de doble cadena
● En los virus sencillos la cubierta protectora, que se denomina cápside está formada
por proteínas.
● En los virus más complejos la nucleocápside formada por ácido nucleico y proteina
está rodeada por una cubierta membranosa que procede de la membrana celular de
la célula hospedadora
Las bacterias contienen cromosomas y DNA extracromosómico
● El cromosoma es una molécula de DNA circular que está enlazada y
enrollada de forma que puede comprimirse en un espacio pequeño.
● Además del cromosoma de DNA circular que se encuentra en el nucleoide,
muchas bacterias contienen una o más pequeñas moléculas de DNA circular
que se encuentran libres en el citosol
● Estos elementos extracromosómicos se denominan plásmidos
● Algunos plásmidos son portadores de genes que confieren resistencia frente
a antibióticos
CROMOSOMA EUCARIÓTICO
● Los CROMOSOMAS eucarióticos aparecen como cuerpos bien definidos en
el núcleo durante la mitosis.
● En las células que no están en división , el material cromosómico es amorfo
,aparece disperso y desordenado y se denomina CROMATINA
● Cuando las células se preparan para la división la cromatina se condensa y
se estructura en cromosomas, cuyo número es característica de cada
especie

○ OH: ribosa
○ H: desoxirribosa
AMBIENTE QUE SE DEBE TRABAJAR: LIBRE DE NUCLEASAS
ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA

EXTRACCIÓN DE ADN
Hay más de un tipo de ADN:
-Nuclear
-Mitocondrial
objetivo de una buena extracción:
-ALTA CANTIDAD
ALTA PUREZA
ALTA CALIDAD
tipos de arn
ARN: MENSAJERO
RIBOSOMAL
TRANSFERENCIA

Para extraer el ADN usaremos el método FENOL/CLOROFORMO

Lisis: PARA LIBERAR CONTENIDO, LIBERAR ÁCIDOS NUCLEICOS

Usaremos un tampón, sales, detergentes, y proteinasa K
Extracción y purificación de adn: PARA FAVORECER LA SOLUBILIDAD
DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS EN FASE ACUOSA Y LAS PROTEÍNAS Y
LÍPIDOS SE MANTENGAN EN LA INTERFASE O EN LA FASE ORGÁNICA
Aqui se utiliza solventes organicos
Fenol/cloroformo

PRECIPITAR:
con etanol al 70%
CENTRIFUGAR: HABRÁ UN PRECIPITADO Y UN SOBRENADANTE, SE ELIMINÓ EL
SOBRENADANTE Y NOS QUEDAMOS CON EL PRECIPITADO
LAVADO: etanol al 70%
ELUYIR: en el tampon TE (quelante de metales, y las nucleasas, requieren mg como
cofactor)
Para extraer el ARN usaremos el método TRIZOL
Lisis:
Usaremos un tampón, sales de tioguanidio y fenol
Extracción y purificación de adn:
Solventes orgánicos, cloroformo (se forman dos fases)
PRECIPITAR:
CENTRIFUGAR:

Protocolos
260 nm: concentracion de acido nucleico
● carga neta de los ácidos nucleicos: negativo, se favorece con los tampones
que se utilizan
● lo acidos nucleicos se separan en función del peso molecular y se dirigen al
polo positivo
● colorante: bromuro de tibio
● se usa gel de agarosa al 1%
● de 15 a 30 minutos para gelificar
● el buffer de carga contiene glicerol, colorante (más usado azul de bromofenol)
● el tipo de ARN más abundantes es el ribosomal con 75%, el 2do es el de
transferencia, y 3ro es el mensajero