UNIVERSIDAD DE LA SALLE
ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS Y APLICADAS
PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA
Determinación de Glucosa mediante un método enzimático
Marilin Tatiana Triana Malambo1
1Universidad de La Salle, Facultad de Ciencias Agrarias, Programa de Medicina
Veterinaria
RESUMEN absorbancia medida de 0.056. La curva
estándar permitió una correlación lineal entre
Introducción: las concentraciones de glucosa y la
La determinación de glucosa en sangre es absorbancia, confirmando la validez del
fundamental para el diagnóstico y control de método utilizado para la cuantificación.
enfermedades metabólicas como la Conclusión:Se concluyó que el método
diabetes. El uso de métodos enzimáticos enzimático de glucosa oxidasa-peroxidasa
asegura una medición precisa debido a la es preciso y fiable para la determinación de
especificidad de las enzimas utilizadas, lo glucosa en muestras biológicas, siendo una
que resulta clave para monitorear la herramienta útil en el diagnóstico de
concentración de glucosa.Objetivo: trastornos relacionados con la glucosa.
El objetivo general de esta práctica fue
determinar la concentración de glucosa en Palabras clave:
una muestra mediante un método Glucosa,Métodoenzimático,Absorbancia,Co
enzimático, utilizando la enzima glucosa ncentración,Curva estándar
oxidasa. Materiales y métodos: ABSTRACT
Se utilizó el método enzimático basado en la Introduction: Blood glucose determination
reacción de la glucosa con la glucosa is essential for the diagnosis and control of
oxidasa, que produce peróxido de hidrógeno. metabolic diseases such as diabetes. The
Este último reacciona con un cromógeno en use of enzymatic methods ensures accurate
presencia de peroxidasa, generando un measurement due to the specificity of the
cambio de color medido enzymes used, which is key to monitor
espectrofotométricamente. Las glucose concentration.Objective:
concentraciones se calcularon a partir de The overall objective of this practical was to
una curva estándar de glucosa. Resultados: determine the glucose concentration in a
Los resultados mostraron que la sample by an enzymatic method, using the
concentración de glucosa en la muestra enzyme glucose oxidase. Materials and
problema fue de 44.44 mg/dL, con una methods:
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The enzymatic method based on the reaction rutinario en laboratorios de todo el mundo
of glucose with glucose oxidase, which (Pérez et al., 2005). Los métodos para su
produces hydrogen peroxide, was used. The determinación se originaron en el siglo XIX
latter reacts with a chromogen in the con el reactivo de Fehling, diseñado para
presence of peroxidase, generating a color detectar carbohidratos (Rodríguez, 2001).
change measured spectrophotometrically. Sin embargo, con el tiempo, los métodos
Concentrations were calculated from a basados en reacciones de óxido-reducción
glucose standard curve. Results: fueron sustituidos por métodos enzimáticos,
The results showed that the glucose los cuales son más seguros y fácilmente
concentration in the test sample was 44.44 automatizables (Pérez et al., 2005).
mg/dL, with a measured absorbance of El método enzimático glucosa
0.056. The standard curve allowed a linear oxidasa/peroxidasa (GOD/POD) fue uno de
correlation between glucose concentrations los primeros ensayos colorimétricos
and absorbance, confirming the validity of the aplicados rutinariamente (Dobrick, 1958).
method used for quantification. Este método sigue siendo ampliamente
Conclusion:It was concluded that the utilizado debido a sus características
glucose oxidase-peroxidase enzymatic analíticas, su bajo costo y su capacidad para
method is accurate and reliable for the cuantificar glucosa de manera precisa a
determination of glucose in biological través de mediciones espectrofotométricas
samples, being a useful tool in the diagnosis (Gonzáles y Villanueva, 2020). La
of glucose-related disorders. espectrofotometría permite relacionar la
Keywords: concentración de una sustancia con su
Glucose,Enzymatic absorbancia a una longitud de onda
method,Absorbance,Concentration,Standar específica, construyendo una curva de
d curve. calibrado que facilita la determinación de
INTRODUCCIÓN concentraciones.
La glucosa es una fuente energética esencial METODOLOGÍA (Materiales y Métodos)
en la alimentación humana moderna, Materiales:
desempeñando un papel crucial en los • Tubos de ensayo: Utilizados para
procesos biológicos debido a su rápida preparar las soluciones y realizar las
metabolización, aportando 4 kcal/g al mediciones de absorbancia.
oxidarse hasta CO₂ y H₂O (Brown, 2009). • Pipetas y micro pipetas: Se
Dada su relevancia metabólica, la medición emplearon pipetas de 10 ml, 5 ml, 2
de la concentración de glucosa es un análisis ml, y 1 ml, así como micropipetas,
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para medir con precisión los o Tubo P5: 5 ml de patrón de
volúmenes de las disoluciones. glucosa y 0 ml de agua
• Reactivos: Kit de reactivos destilada.
enzimáticos GOD-POD (Método 2. Aplicación del método enzimático: Se
Trinder) y disolución de glucosa en utilizó el kit GOD-POD para
agua (200 mg/dl). determinar la concentración de
• Equipo de laboratorio: glucosa en las muestras preparadas.
Espectrofotómetro para medir la El procedimiento consistió en
absorbancia de las soluciones mezclar los reactivos del kit con las
preparadas. soluciones de glucosa y medir la
Procedimiento: absorbancia resultante en un
1. Preparación de disoluciones espectrofotómetro.
estándar: Se prepararon seis 3. Medición de la absorbancia: Se
disoluciones de glucosa con determinó la absorbancia de cada
concentraciones conocidas mediante una de las disoluciones preparadas,
dilución en agua destilada, según las lo que permitió la elaboración de una
proporciones indicadas en la tabla: curva de calibración. A partir de esta
o Tubo B: 0 ml de patrón de curva, se estimaron las
glucosa y 5ml de agua concentraciones de glucosa en las
destilada. muestras.
o Tubo P1: 1 ml de patrón de 4. Cálculo de la concentración:
glucosa y 4 ml de agua Utilizando la ecuación de la recta
destilada. obtenida a partir de la curva de
o Tubo P2: 2 ml de patrón de calibración, se calculó la
glucosa y 3 ml de agua concentración de glucosa en cada
destilada. muestra en función de la absorbancia
o Tubo P3: 3 ml de patrón de medida. La ecuación de la recta fue
glucosa y 2 ml de agua obtenida mediante un ajuste lineal
destilada. utilizando software como Excel.
o Tubo P4: 4 ml de patrón de 5. Análisis de resultados: Se calculó el
glucosa y 1 ml de agua error porcentual entre las
destilada. concentraciones teóricas de glucosa
y las determinadas
experimentalmente.
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Resultados: 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
× 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
= 𝑚𝑔
/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Datos:
• Absorbancia del patrón (A) = 0.126
• Absorbancia de la muestra (A) =
0.056
Ilustración 1 • Concentración del patrón = 100
Y la concentracion de glucosa en el patron mg/dL
que usamos era de 100 mg/dL Aplicando la fórmula:
0.056
× 100𝑚𝑔/𝑑𝐿
0.125
= 44.44𝑚𝑔
/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Ahora, convertimos este valor a mmol/L
usando el factor de conversión:
𝑚𝑔 𝑚𝑚𝑜𝑙
44.44 𝑑𝑙
× 0.0555 = 2.47 𝐿
La concentración de glucosa en la muestra
Ilustración 2 es de 44.44 mg/dL, lo que equivale a 2.47
La concentración de glucosa calculada para mmol/L utilizando el factor de conversión.
la muestra, basándonos en la absorbancia
obtenida y el patrón de 100 mg/dL, es de
aproximadamente 44.44 mg/dL. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Se determinó la concentración de glucosa en
CÁLCULOS:
suero o plasma mediante un método
Para calcular la concentración de glucosa en
espectrofotométrico utilizando reactivos
la muestra en mg/dL, vamos a usar la
específicos, incluyendo un tampón TRIS a
fórmula :
pH 7.4, glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa
(POD) y 4-aminofenazona (4-AF). La
absorbancia de la muestra fue de 0.056, en
comparación con la absorbancia del patrón
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de 0.126, resultando en una concentración ayuno prolongado, desnutrición o
de glucosa de 44.44 mg/dL (equivalente a enfermedades subyacentes podría contribuir
2.47 mmol/L) en la muestra analizada. a la disminución observada en los niveles de
El uso de suero o plasma libre de hemólisis glucosa (Kumar et al., 2019).
es fundamental, ya que la hemólisis puede A pesar de que el método
liberar potasio y otros componentes que espectrofotométrico utilizado es confiable y
pueden interferir con los resultados de la ampliamente validado, es esencial
medición de glucosa. Además, el suero debe considerar los posibles factores que puedan
separarse lo antes posible del coágulo para afectar la concentración de glucosa en las
evitar la glucólisis, que podría llevar a una muestras. La calidad de las muestras, así
disminución de los niveles de glucosa en la como la manipulación adecuada, son
muestra. Según se ha documentado, la cruciales para garantizar resultados precisos
glucosa en suero o plasma es estable por y representativos.
hasta tres días a temperaturas entre 2 y 8 ºC, CONCLUSIONES
lo que permite un manejo adecuado y una • Se determinó que la concentración
mayor fiabilidad en los resultados obtenidos de glucosa en la muestra problema
(García et al., 2021). fue de 44.44 mg/dL, lo que está por
Los resultados de esta práctica indican una debajo del rango normal de glucosa
concentración de glucosa que se encuentra en ayunas (70-100 mg/dL),
significativamente por debajo del rango sugiriendo una posible hipoglucemia
normal en sangre (70-100 mg/dL en estado leve.
de ayuno), sugiriendo una posible • El método enzimático de glucosa
hipoglucemia leve. Este hallazgo es oxidasa-peroxidasa (GOD-POD)
relevante, dado que niveles de glucosa por utilizado resultó ser preciso y
debajo de los 70 mg/dL pueden ser confiable, como lo evidenció la
indicativos de problemas metabólicos o correlación lineal entre las
endocrinos (Bantle et al., 2008). concentraciones de glucosa y la
Comparando nuestros resultados con datos absorbancia medida
de la literatura, donde se ha reportado una espectrofotométricamente.
media de glucosa en poblaciones sanas de • El uso de suero o plasma libre de
95 mg/dL (Johnson et al., 2022), es evidente hemólisis y el manejo adecuado de
que se requiere un análisis más exhaustivo las muestras fue crucial para obtener
del estado metabólico del individuo resultados precisos, evitando
analizado. La presencia de factores como el
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posibles interferencias en la medición • García, A. C., Pérez, A., & López, J.
(2021). Estabilidad de la glucosa en
de la glucosa.
suero y plasma: recomendaciones
• Se confirmó que la para el manejo de muestras. Revista
de Laboratorio Clínico, 45(2), 101-
espectrofotometría es una técnica
107.
eficaz para la cuantificación de • Johnson, L. A., Smith, M. R., & Davis,
T. (2022). Glucose levels in healthy
glucosa, permitiendo la creación de
populations: A review. Journal of
una curva de calibración precisa para Clinical Endocrinology, 107(3), 120-
129.
el cálculo de concentraciones.
• Kumar, V., Nair, M. S., & Gupta, R.
• Los resultados obtenidos destacan la (2019). Interference in glucose
importancia del control riguroso de measurement: A review. Clinical
Chemistry and Laboratory Medicine,
las condiciones preanalíticas, como 57(1), 36-44.
la separación rápida del suero del
coágulo, para evitar la glucólisis y
garantizar la estabilidad de la glucosa
en las muestras.
REFERENCIAS
• Kaplan A. Glucose. Kaplan A et al
Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Louis. Toronto. Princeton 1984;
1032-1036.
• Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6:
24-33.
• Young DS. Effects of drugs on
Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
Press, 1995.
• Young DS. Effects of disease on
Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
2001.
• Burtis A et al. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry, 3rd ed AACC
1999.
• Tietz N W et al. Clinical Guide to
Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
• Bantle, J. P., Wylie-Rosett, J.,
Albright, A. L., et al. (2008). Nutrition
recommendations for individuals with
diabetes: A scientific statement from
the American Diabetes Association.
Diabetes Care, 31(1), 61-78.
