PRÁCTICA 2
IMPORTANCIA DEL USO DE LA MICROPIPETA EN CULTIVO DE CÉLULAS.
INTRODUCCIÓN
El manejo de líquidos es una aplicación central en los laboratorios de producción
e investigación biológica, química y farmacéutica. Al hablar de manejo de líquidos
nos referimos a la transferencia de líquidos de un recipiente a otro.
En la investigación biológica y bioquímica la disponibilidad de muestra ha sido
siempre un factor limitante. Por este motivo se ha intentado siempre disminuir el
volumen de reacción y por consiguiente buscar herramientas que permitieran el
manejo de volúmenes cada vez menores. (Sambrook, 2001).
La importancia de un buen pipeteo repercute en los resultados de una
experimentación, independientemente de que tan vanguardista sea la
investigación o el gran equipo que se posea, la técnica de pipeteo puede llegar a
marcar la diferencia entre obtener o no resultados óptimos.
(Quiminet, 2017)
Medición del volumen
La unidad de volumen para el trabajo normal de laboratorio varía entre los
decímetros cúbicos (dm3) o los centímetros cúbicos (cm3), cuya denominación en
unidades normales son litro (L) y mililitro (mL), respectivamente. Esto, debido a
que la mayoría del material de vidrio de laboratorio está calibrado en tales
unidades.
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Unidades de volumen más utilizadas
Los instrumentos y equipos más usados para medir líquidos en el intervalo entre
un litro, mililitro y microlitros son: el matraz aforado, la probeta, la pipeta, la
micropipeta (ver Figura 1). Estos instrumentos se fabrican casi siempre, de vidrio
o de plástico y se consiguen de diferentes tamaños.
Figura 1. Instrumentos comúnmente utilizados para medir el
volumen de los líquidos.
El material volumétrico y pipetas que se emplea más frecuentemente, juegan un
papel crucial en la determinación del nivel de exactitud y precisión en un gran
número de análisis realizados en el laboratorio. Si se emplean las pipetas en el
laboratorio, deben seleccionarse adecuadamente y emplearse con cuidado.
OBJETIVO
Que el alumno reafirme la destreza en el uso de la micropipeta, y que reconozca
su importancia en el cultivo de células animales.
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MATERIAL
-Balanza analítica
-Tubos Eppendorf
-Puntas para micropipeta
-Micropipeta de 1000 l
-Agua destilada
MÉTODO
Manejo correcto de la micropipeta
Las micropipetas son instrumentos útiles para medir pequeños volúmenes que
van desde 0.5 μl hasta 1 mL. Existen pipetas automáticas de 5 mL.
Instrucciones generales para el correcto manejo de la micropipeta, que
puede variar ligeramente según la marca (Figura 2).
1. Seleccionar la micropipeta a utilizar según el volumen requerido.
2. Tomar la micropipeta cuidadosamente con una mano e identificar el
volumen máximo que puede medir.
3. La micropipeta indica en el botón pulsador el intervalo o volumen
máximo que pueden pipetear.
4. Oprimir el botón pulsador para familiarizarse con la presión que debe
ejercerse sobre él.
5. “Sentir” que este botón tiene tres posiciones:a. La inicial en la cual se
encuentra cuando no se ejerce presión sobre el botónb. La primera
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posición en la cual se ejerce presión con el dedo pulgar sobre el botón y
este muestra cierta rigidez.c. La segunda posición en la cual se ejerce
aún más presión sobre el botón hasta llegar al “tope” de este.
6. Una vez reconocidos las diferentes posiciones del botón pulsador o
pistón, proceder a seleccionar el volumen que se pretende medir.
7. Localizar el indicador de volumen, compuesto de tres dígitos.
8. Es muy importante que para prevenir un daño en el mecanismo interno
de la micropipeta no sobrepasar el volumen máximo para cada
micropipeta.
9. Colocar la punta adecuada de acuerdo al volumen de la pipeta, para
insertar la punta de forma correcta y evitar que esta se desprenda, es
necesario ejercer una fuerte presión.
10. Tener localizados y cerca el recipiente que contiene la solución que se
va a tomar y el recipiente donde se colocará el volumen de solución
tomada.
11. Para absorber el líquido, presionar el botón hasta la primera posición,
con la pipeta en posición vertical, introducir la punta aproximadamente 5
mm en el líquido y después, lentamente, permitir que el pistón vuelva a
la posición original.
12. Esto permite tomar el volumen correspondiente. Es muy importante no
soltar el botón pulsador ya que esto permite la entrada de aire en la
punta y esto provoca la toma de volúmenes incorrectos.
13. Colocar la parte inferior de la punta contra la pared interior del
recipiente donde se va a depositar el líquido.
14. Apretar el botón pulsador suavemente hasta la primera posición.
Apretar el botón pulsador hasta el segundo tope para vaciar el resto del
líquido.
15. Mantener apretado el botón pulsador en el segundo tope hasta sacar la
punta del recipiente.
16. Soltar el botón pulsador
17. Apretar el botón del expulsador de la punta para que esta sea liberada.
18. En la balanza analítica se depositaré el tubo Eppendorf en una base de
unicel y se tarara la balanza (ponerla en 0.0000 g)
19. Se tomará 1 ml de agua destilada y se registrara el valor de peso, esto
se realizará por cada integrante de equipo haciendo 10 mediciones.
20. Los valores serán registrados en la siguiente tabla.
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Tabla 1. Valores individuales de los pesos del volumen de
1 ml por integrante de equipo
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Nombre
integrant
e
10
Promedio
D.E.
RESULTADOS
Calcular el promedio y desviación estándar por integrante y por equipo.
Comparar y establecer diferencias significativas entre los equipos al
realizar una prueba de ANOVA y Tukey.
DISCUSIÓN
CONCLUSIÓN
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BIBLIOGRAFÍA
Jagnow G, David W. (1991). Biotecnología. Introducción con experimentos.
Editorial. Acribia. Zaragoza, España. 251p.
Murali D. (1982). Control de Calidad en los Laboratorios. Editorial. Reverté.
España.
Quiminet (2017). Cinco técnicas de pipeteo para aumentar su rendimiento. Aquí
hay algunos errores muy comunes de la técnica de pipeteo y como evitarlos.
Quiminet.com. URL: htpp//www.quiminet.com/artículos/cinco-tecnicas-de-pipeteo-
para-aumentar-su-rendimiento-4306427.htm
Sambrook J, y Russell D, (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3ª ed.
Editorial. Cold Spring Harbor Laboratories. NY, USA. 2344 pp.
Cuestionario
1.- ¿Que hace la micropipeta como instrumento de medición de volumen ser
fiable para el uso en cultivo de tejidos? (concepto de precisión y exactitud)
2.- ¿Para qué sirve la micropipeta?
2.- ¿Que importancia tiene la repetición de toma de un volumen dado, desde
el punto de vista estadístico?
3.- ¿Qué importancia tiene que las micropipetas estén calibradas?
4.- ¿Cómo se reduce el error experimental?
5.- ¿Cuáles son las indicaciones para toma una muestra viscosa con la
micropipeta?
6.- ¿Como deberá cuidarse y limpiarse las micropipetas
