DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA

E INMUNOLOGÍA
1º CÁTEDRA
MICROBIOLOGÍA I.
VIROLOGÍA: TEÓRICO 19

VIRUS
Generalidades
e Introducción a la
Patogénesis viral
José Raúl Oubiña
Objetivos generales de la Cursada
Se pretende que los alumnos logren
en el área Virología:
✓ Comprender en profundidad la Patogénesis de las

✓ infecciones virales para poder sustentar mejor las

✓ bases que posibiliten obtener un adecuado

✓ Diagnóstico, instrumentar las medidas de Profilaxis

✓ e inferir nociones generales de Epidemiología

 Elementos
Biología de
molecular Infectología

Virología

Epidemiología Inmunología
 Importante
Como se mencionó al inicio de la Clase Teórica,
se exhiben en este PDF algunas imágenes no utilizadas
durante su dictado, al sólo efecto de facilitar
la correlación / sistematización temática por parte de cada alumno
como plataforma Introductoria a la Virología
y su ulterior revisión, una vez concluida la cursada.

Unas pocas imágenes “anecdóticas”

no han sido incorporadas a este material iconográfico.
• Comentarios “virulentos”
• Un virus es…
• Virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
• Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Virus en el organismo: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
 Escherichia coli
(1000 x 3000 nm)

Glóbulo rojo
(dam=7.500 nm)

Ribosomas
bacterianos
(25 nm) Virus viruela
(200 x 300 nm)
Virus polio
(30 nm) Bacteriófago T4
(200 x 300 nm)
Virus del mosaico del tabaco
(15 x 300 nm)
Megavirus chilensis: ¡700 nm!

¡El tamaño no es un criterio adecuado para definir un virus!

El 1er. Paso para una buena defensa contra el
“venenoso” enemigo…

…es descubrir su
presencia !
 HSV-1 / 2 RSV HSV-1 / 2 Influenza Rotavirus
Así TLR2 TLR4 TLR9 TLR7/8 TLR3
empezamos
a
defendernos
(I)
Superficie
Intracelular:
celular endosoma
y RE
MaI/TRAP
MaI/TRAP
MyD88
MyD88 TRIF
MyD88 TBK1
IRAK 1 / 2
TRIF IKK ε
IKK α, β, γ
IRF 3, 5, 7
NFκB

IL-6, IL-8, MCPI, RANTES IFN-α,IFN-β, RANTES

De: Virología Médica. Carballal G, Oubiña JR. 20t5.

 Chan YK & Gack MU. Nature Microbiology 14:360-373, June 2016

Así
<CARDIF empezamos
a
defendernos
(II)

Vía de señalización
RLR – MAVS
(= VISA = IPS-1)
(RIG-1 Like Receptors
MAVS: mitochondrial antiviral signaling
protein)
IPS-1: Interferon promoter stimulator -1;
VISA: Virus inducing signaling adaptor)
TRIM25 (tripartite motif protein 25) y
RIPLET ubiquitino-ligasas.
14-3-3 epsilon: chaperona
Así
empezamos
a
defendernos
(III)
 ¿Son agentes infecciosos?
Infección: del latín infectio, “teñir”

Ver el vídeo de un laboratorio de máxima bioseguridad (BSL4) para manipular

patógenos de clase IV como el virus Ebola:
[Link]

Paciente infectado con virus

Ébola
infectar

Del lat. infectāre 'emponzoñar', 'corromper'.

1. tr. Dicho de algunos microorganismos patógenos, como los virus o las bacterias:
Invadir un ser vivo y multiplicarse en él.
 ¿Pueden
multiplicarse
en medios axénicos?
 Virus gigantes (Megavirales)
Agaricus bisporus 1) Mimivirus / 2) Cafeteria roenbergensis
(champiñón común)

Virus X de los hongos 1) Virófago Sputnik / 2) Virófago Mavirus

(virus anti-virus; asociación parasitaria)
 ¡Sólo infectan células vivas!
¡Son Parásitos genéticos
obligatorios!
Egreso celular de HIV
¡Expresando proteínas
no codificadas por el genoma celular
pero utilizando su maquinaria para sintetizarlas!
✓ Comentarios “virulentos”
• Un virus es…
• Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
• Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Virus en el organismo: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
 ¿Tienen vida los virus?

Ver:
[Link]
past-issues/what-is-life/article/are-viruses-
[Link]

Y Ud. …¿qué respondería?

 Síntesis:
Los virus exhiben 3 características

Parasitismo
genético

100 nm

Infectividad

Antigenicidad
Virus influenza
 VIRUS

• AGENTES INFECCIOSOS

• PARÁSITOS GENÉTICOS INTRACELULARES OBLIGADOS

• CARECEN DE METABOLISMO PROPIO

• PUEDEN CRISTALIZARSE

• ¿Son o no son seres vivos?

✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
• Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
• Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Virus en el organismo: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
 3700 a.C. Jeroglífico hecho en Memphis, capital del
antiguo Egipto que representa a un sacerdote con
signos clínicos típicos de poliomielitis paralítica.

1193 a.C. El faraón Siptah gobierna Egipto (1200-

1193) y muere repentinamente a la edad de 20 años. La
momia muestra la pierna izquierda atrofiada con lesión
clásica de poliomielitis paralítica.
 Octubre de 2015: la OMS
declara el cese de la circulación
mundial del virus polio tipo 2
 Vacuna oral anti-poliomielitis
¡El cambio!

Vacuna
Vacuna
bivalente
trivalente
anti-polio
anti-polio

Cambio en 1 único día en 155 países:

el 29 de abril de 2016
 Virus Zika 2019:
microcefalia congénita
 ¿Qué virosis podrían ser
erradicadas del planeta en un
futuro no muy lejano?
• Sarampión
• Polio
• Hepatitis B ¿Por
•…
qué?
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
• Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Virus en el organismo: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
 ESTRUCTURA VIRAL

Partículas
Defectivas
Viriones
/
subvirales

Partículas
Partículas
virales
Viriones /
defectivas
subvirales

Proteínas estructurales y no estructurales. Virión vs. partícula viral vs. partícula defectiva
 PICORNAVIRUS HERPESVIRUS

ADENOVIRUS
VIRUS HEPATITIS B

VIRUS INFLUENZA

VIRUS PAPILOMA
HUMANO
 Simetría viral
Helicoidal Icosaédrica Mixta
(todos con envoltura)
Compleja

Bacteriofago T4
Viruela

Ebola

HIV

Adenovirus

Influenza
Relación estructura – función (I)
◆ Ácido nucleico: información genética
infectividad
◆ Tamaño: 1000 a 100.000 codones
(300 codones / gen)
◆ Disposición: continua (lineal, circular o
superenrollado) o segmentada
◆ Polaridad: + o -
 Clasificación de virus

Desnudo o Envuelto
Desnudo Envuelto
Envuelto
Microscopia de fuerza atómica

El grupo de A.
Gamarnik
documenta la
circularización
de los extremos
del RNA del
virus dengue.

Álvarez DE, y cols. J Virol, 79:6631-43. 2005

 Reasociación de genes en virus
con genomas a RNA segmentados
Ej. influenza, rotavirus, Junín, hantavirus

Infección dual de una

célula
por 2 virus parentales

Progenie
Clasificación de virus

Envuelto Envuelto
Desnudo Envuelto Desnudo/Envuelto
(citoplasmático)
(citoplasmático)

Papiloma
 HBV
genes solapados

Genoma HBV Algunos virus

hacen
¡Ahorro genético!
 Relación estructura-función (II)
Cápside: Proteica

◆ 1. Protección del genoma

◆ 2. Antigenicidad

◆ 3. Unión a receptores en virus desnudos

◆ 4. Mantiene a los ácidos nucleicos en

conformación adecuada para transcriptasa
◆ 5. Reprime expresión de genes tempranos
 M.E. de nucleocápsides de un arenavirus (simetría helicoidal)
sombreado con paladio-oro (a-e) o platino-carbón (f).

200 nm

100 nm

100 nm 100 nm

Young P- Howard CR, J Gen Virol 1983) 100 nm 100 nm

 Relación estructura – función (III)
◆ Envoltura: glicoproteica y
glicolipídica
◆ Idem funciones “1”, “2” y “3” de la
cápside.

Activa en tres etapas de la replicación:

adsorción, fusión y brotación.
Virus pandémico influenza A (H1N1) 2009
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
✓ Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Virus en el organismo: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
Complejidad
estructural del HBV
Partículas
filamentosas
subvirales

Dryden KA et al. Mol. Cell 22: 843-50, 2006.

Partículas Viriones
esféricas
subviraless HBs Ag
Partículas
Partículas
infecciosas
defectivas /
de Dane
subvirales
40 nm

HBc Ag
 Virus hepatitis A (HAV):
VP1 desnudo y cuasi-envuelto
El HAV circula como población de partículas desnudas
¡y también envueltas en membranas exosomales del hospedador!

Feng et al, Nature, April 18, 496: 367, 2013

30 nm
Virus hepatitis E José Raúl Oubiña
Cátedra I de Microbiología, Parasitología e
Inmunología
Fac. de Medicina. UBA. 2016
HPV: diferentes epítopes en las VLPs
genotipo-específicas 6, 35,16 y 18

50 nm
 Replicón de HCV
(construcción artificial)

Resistencia a Geneticina (G418)

 ¿“Virus lentos”
= Priones?

Stanley B. Prusiner
Carleton Gadjusek
Premio Nobel de Medicina o
Premio Nobel de Medicina o Fisiología
Fisiología , 1997
1987
 “Virus lentos” :
NO existen…

≠ Priones: ¡SÍ!

El gen PRNP está La proteína del prión Un prión es una

en el DNA y codifica o PrP está ubicada en partícula infecciosa
la proteína del prión la superficie celular hecha de proteínas
de prión mal plegadas

Génesis de los priones

En síntesis: ¿Qué es un virus?
. Parásito genético intracelular obligado
. Carece del potencial bioquímico y genético para generar su
propia energía
. Utiliza la maquinaria celular para realizar la síntesis de más
viriones.
VIRIÓN
Partícula viral completa y dotada de capacidad infectante.
¡No todas las partículas virales son viriones!

VLP: Viral like particles o partículas semejantes a virus artificiales. No infectan pues carecen del
genoma viral, aunque mantienen su capacidad inmunogénica. (Ej. vacuna para HPV o HEV)

Replicón: ácido nucleico (DNA o RNA) capaz de replicarse en forma autónoma (Ej. replicones
artificiales de HCV).

Priones
Agentes infecciosos de enfermedades definidas que se cree, consisten en un tipo simple de
proteína sin presencia de ácido nucleico. La proteína y el gen que la codifica se encuentran
en células sanas, no infectadas. Estos agentes están asociados con enfermedades humanas
tales como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, scrapie en ovejas y la encefalopatía bovina
espongiforme (BSE) en ganado vacuno.
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
✓ Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Viroma: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
• Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
Genoma Proteoma Metaboloma

VIROMA
Y por si esto fuera poco……
[Link].[Link].000.000.000
1031 virus en el planeta
 Retrovirus
endógenos Infecciones
persistentes

Bacteriófagos
comensales

Viroma Infecciones
agudas
humano
Bacteriófagos con
potencial patogénico
o con genes de
resistencia a
Antibióticos

Nuevos
Nuevos
Bacteriófagos
virus
 Viroma humano…
(colección de todos los virus en
el cuerpo humano) ¿tenemos
virus como flora normal?
Crecimiento de la base
de datos de virus
Secuencias nucleotídicas

Otros
 Componentes del viroma y su asociación
con la relación genotipo / fenotipo

Interacción Variación Relación Fenotipos

entre Reinos genética Genotipo /
del huésped fenotipo
Intercambio viral Inflamación
con otros organismos
sistémica
Viroma Inmunofenotipo
eucariótico
Susceptibilidad a la
enfermedad

Simbiosis mutualista

Variación fenotípica
Diversificacion viral interindividual
Y rápida evolución

Enfermedad viral
´típica
Viroma
procariótico

Virgin HW. Cell 2014 157, 142-150.

Importancia del viroma humano en la génesis de las enfermedades

Diversidad individual de viromas

Sensores de los productos virales y de la infección

TLR RIG-1 MDA-5 cGas Muchos otros
Genes inducidos

Set de Set de Set de Set de Muchos otros

genes genes genes genes Genes
A B C D E

Integración de Variación normal

genes A-E de la transcripción
inducidos mediante en estado de salud
diversos sensores

Disparadores

Diferentes enfermedades Virgin HW. Cell 2014 157, 142-150.

 VIROMA
Categoría de inmunomodulación
Potenciación Potenciación M
M M
a a a
g g g
n n n
i i i
t t t
u Supresión u u
d d d
Naturaleza

Immunity 2015 42, 805-813DOI: (10.1016/[Link].2015.05.003)

Copyright © 2015 Elsevier Inc. Terms and Conditions
 Virus
✓ Agentes patógenos
✓ Algunos son agentes comensales

Ejemplos de su uso por el hombre:

✓ Agentes vacunales

✓ Vectores de expresión en ingeniería genética

✓ Bacteriófagos (propuestos para control de la multi-

resistencia bacteriana a antibióticos)

✓ Virus oncolíticos (en investigación para su potencial

aplicación en tumores humanos)
 Vías de ingreso viral al organismo

CONJUNTIVA

ARTRÓPODOS
SANGRE
TRACTO RESPIRATORIO

INJURIA
TRACTO GASTROINTESTINAL
TRACTO UROGENITAL
PIEL y MUCOSAS
ANAL

VERTICAL

Modificado de [Link]
 Entrada, diseminación y eliminación

virus Diseminación Sitios de replicación Replicación en

diseminación
puerta de
Herpes
Superficie:
. piel entrada
. mucosa
. tractos Ganglio linfático
simplex
Sangre HPV
Viremia primaria

Sitios de
Vaso replicación
Músculo Hígado Bazo sanguíneo

Sangre HIV
Sangre HBV Viremia
secundaria

Sitios de replicación

Piel Mucosa Pulmón Riñón Tracto gastro- Encéfalo

intestinal
Transmisión
a otro
hospedador
Principles of Virology, ASM Press. S. J. Flint, 2009
 ¿Por qué puede diseminarse una infección?
TIPOS DE INFECCIÓN SEGÚN ESPACIALIDAD
Diseminación viral: polaridad celular como determinante
principal del patrón de infección

Apical INFECCIÓN LOCALIZADA

la progenie viral que se libera infecta células
adyacentes, desde el sitio primario de
replicación.

Basolateral
INFECCIÓN DISEMINADA
se disemina más allá del sitio primario de
replicación. Cuando varios órganos son
afectados se hace referencia a una
infección sistémica.
 Egreso del virus sarampión en células
epiteliales polarizadas
Polo apical: Polo basolateral: Polo apical: Polo basolateral:
48 hs p.i. 48 hs p.i. 7 días p.i. 7 días p.i.
Baja magnificaciòn
Alta magnificaciòn
Infecciones virales
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
✓ Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Viroma: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
✓ Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
• ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
Un virus no puede infectar cualquier tipo de célula...
Tropismo: Capacidad de un virus de infectar una población
determinada de células de un órgano o tejido. Está influenciada
por factores virales (por ej., puerta de entrada) y del huésped
(cofactores celulares, correceptores).

Susceptibilidad no es lo mismo que Permisividad

Una célula es susceptible si tiene el receptor para el virus.

Una célula es permisiva si tiene todos los factores celulares

requeridos para completar una infección productiva.
 CICLO DE REPLICACIÓN

1) Adsorción
2) Penetración
3) Desnudamiento
4) Replicación del
genoma/Síntesis de
proteínas virales
5) Ensamblaje
6) Egreso
Replicación de genoma: - en el núcleo (virus con DNA, a excepción de poxvirus)
- en el citoplasma (virus con RNA, a excepción de influenza, hepatitis D
y retrovirus, que lo hacen en el núcleo)
Cultivo de células VERO
no infectado
 Infección aguda productiva ¡Infección productiva!
asociada a lisis celular con

DICT50/ ml de
sobrenadante
destrucción de la monocapa
Virus detectable en extractos celulares
y en el sobrenadante.
El título se determina en forma semi-
cuantitativa en DICT50 / ml

////
1h 5 – 11 días
post-infección
Título de virus Junín
en sobrenadante

Cultivo de células VERO infectado con virus Junín:

la ACP demuestra el aislamiento de un virus
(necesitará identificarse mediante neutralización, IF, etc.)
 Cuantificación del título viral
mediante plaqueo

Título: UFP/ml

Dulbecco R, 1952.
Premio Nobel de Medicina o Fisiología, 1975. Clones de virus
 Cuantificación del título viral
en estudios de patogénesis
Título: UFP/ml

Diluciones decimales de los

homogenatos celulares de órganos de cobayo
infectados con virus Junín

M.Ósea

Hígado

12 x 104 = 1,2 x 105

Bazo

Pulmón

Título: Nº de UFP/ml x factor de dilución de la muestra

 Replicación viral

2 objetivos

1. Generar copias de genoma para la progenie viral

2. mRNAs para síntetizar proteínas estructurales y

no estructurales
 CARGA VIRAL
Nº de copias genómicas virales /ml de fluido (por ej. plasma)
o mg de tejido.

1. HIBRIDACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

Amplificación de la señal (b-DNA)

2. PCR y TMA (Transcription mediated amplification)

Amplificación del ácido nucleico diana
(Amplicor y Nuclisens)

3. PCR en tiempo real

 Posible transmisión sexual interhumana del virus Zika,
sólo durante las 1ras. semanas (≈ 30 días) después aparecer la enfermedad .

RNA
viral

VIRIÓN
¿La susceptibilidad celular implica su permisividad?

Fuente: Virología Médica

Carballal & Oubiña,2015
 Tipos de infección a nivel celular

INFECCIÓN PRODUCTIVA
Ciclo de replicación completo con producción de progenie viral.

INFECCIÓN ABORTIVA
El virus infecta una célula susceptible pero irreversiblemente
no completa su ciclo de replicación (NO hay progenie viral)
(por carecer de algún gen viral esencial o celular no expresado
Por ej.: Influenza en ciertas células macrofágicas de pulmón
No necesariamente benigna para la célula:
• Daño en membranas, lisis de endosomas, activación de vías de apoptosis, de
piroptosis (por ej. con HIV), producción de interferones, etc..
 ¿Se puede crear un virus?

Chemical synthesis of poliovirus cDNA: generation of infectious

virus in the absence of natural template.
Cello J, Paul AV, Wimmer E. Science. 297(5583):1016-8, 2002.

Full-length poliovirus complementary DNA (cDNA) was synthesized by assembling

oligonucleotides of plus and minus strand polarity. The synthetic poliovirus cDNA was
transcribed by RNA polymerase into viral RNA, which translated and replicated in a
cell-free extract, resulting in the de novo synthesis of infectious poliovirus. Experiments
in tissue culture using neutralizing antibodies and CD155 receptor-specific antibodies
and neurovirulence tests in CD155 transgenic mice confirmed that the synthetic virus
had biochemical and pathogenic characteristics of poliovirus. Our results show that it
is possible to synthesize an infectious agent by in vitro chemical-biochemical means
solely by following instructions from a written sequence.
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
✓ Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Viroma: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
✓ Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
✓ ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
 Unión y adsorción del virus a la célula

El ingreso del virus a la célula es el resultado de la interacción del virus con un

receptor celular especifico.

Receptores celulares

Moléculas de la superficie celular que tienen diversas funciones

En algunos casos interviene un co-receptor

Distintos virus pueden usar un mismo receptor

Algunos virus pueden usar más de un tipo de receptor

La presencia del receptor es necesaria pero no suficiente para asegurar la replicación

 RECEPTORES VIRALES
HIV
LIGANDOS VIRALES Y RECEPTORES
CELULARES
 HCV
LDL
LDL

Clatrina
CD81 CLDN-1, 6 o 9
SR-BI

LDL-R Endosoma temprano

GAG

Fusión

Liberación
del RNA viral H+

Fuente: Virología médica. Carballal G, Oubiña JR. 2015.

 Cómo ingresa un virus a una célula?
FUSIÓN DE MEMBRANAS
Paramyxovirus
Liberación del Acido Nucleico (AN)
(F de memb a pH neutro)

Citoplasma

ENDOCITOSIS
Liberación del AN

Citoplasma
Endosoma

Liberación del AN

Lisis

Citoplasma Endosoma Núcleo

 Vías endocíticas utilizadas por los virus

Adeno Influenza (algunas partículas) ECHO 1, Cox B

Arena SV 40
Polioma, SV 40

ECHO 1
 Entrada del virus a la célula Macropinocitosis

Macropinocitosis de HIV-1 por macrófagos (A y B). Ingreso por vesículas recubiertas (C y D)

Marechal V et al., J Virol 75 (22): 11166,. 2001
Transporte en el citosol de componentes virales
MEMBRANA
PLASMÁTICA CITOESQUELETO

Virus en la célula:
“¿A dónde voy?”
DINEÍNA

ENDOSOMA
 MIGRACIÓN INTRACELULAR

La disrupción de los microtúbulos en células tratadas con colchicina (D,E,F; tinción con fluoresceína),
impide el tráfico nuclear de una cepa de poliomavirus murino (VP1 viral teñida de rojo con rodamina
en células control NIH3T3 sin tratar; A,B y C)

Sanjuan NA et al. Virology, 2003

 Transporte intracelular de componentes virales

Entrada al núcleo
Virus con genoma
a ADN, retrovirus,
influenza, HDV

Influenza Herpes Adenovirus Hepadnavirus

 ¿TODOS LOS VIRUS UTILIZAN LA
MISMA ESTRATEGIA DE
REPLICACIÓN?
¿QUÉ ES UN INTERMEDIARIO DE LA
REPLICACIÓN?
¿QUÉ IMPORTANCIA TIENE CONOCER
LA ESTRATEGIA DE REPLICACIÓN
VIRAL PARA UN MÉDICO?
 Virus a DNA y a RNA
• Los virus a DNA –en general- replican en el núcleo
(Hay excepciones: como ejemplos, miembros de la familia Poxviridae
[virus viruela, virus molusco contagioso, etc.]) replican en citoplasma.
• Los virus a RNA –en general- replican en el
citoplasma
(Hay excepciones: como ejemplos, el virus influenza, el virus hepatitis
D, los retrovirus, etc.), replican en el núcleo.
 SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
DISTINTAS ESTRATEGIAS SEGÚN EL GENOMA VIRAL

Clasificación de Baltimore
Todos los
Todos los caminos
caminos conducen
conducen al
a ...
... mRNA

RNAsc RNAdc RNAsc

(+) (-)

El genoma RNApol/
viral actúa RNAdep viral RNApol/
como RNAdep
mRNA viral

RNApol II
celular RNApol/
RNAdep viral RNApol II
celular
Transcriptasa
inversa viral
RNA
ambisentido Hepatitis D
Todos los
Todos los caminos
caminos conducen
conducen al
a ...
... mRNA

RNAsc RNAdc RNAsc

(+) (-)

El genoma RNApol/
viral actúa RNAdep viral RNApol/
como RNAdep
mRNA viral

RNApol II
celular RNApol/
RNAdep viral RNApol II
celular
Transcriptasa
inversa viral
RNA
ambisentido Hepatitis D
 Ribonucleoproteínas (RNP) de
Pichindé

200 nm

100 nm

100 nm 100 nm

Young P- Howard CR, J Gen Virol 100 nm 100 nm

 E
x
Western t - +
Blot para la r

Nucleo- a
c
proteína NP
t
presente en
o
las RNP del
virus RNP
Pichindé
para
RNP: ribonucleoproteína
investigar la
actividad de Pichinde:
RNA arenavirus no patógeno
para el humano
polimerasa
viral
asociada a
dicha
fracción
Auto-
radiografía Gel Northern blot
del Gel Northern blot
Actividad de RNA polimerasa
del virus Pichinde:
Actividad de RNA polimerasa
del virus Pichinde:

Síntesis de RNA
 Potenciales blancos terapéuticos en la infección por HCV

Inhibidor de la helicasa viral:

(en ensayo)

Inhibidor de la proteasa NS3 viral:

telaprevir, bocepravir (en uso en 2014!)

Acción sobre la región 5’ NC (IRES):

oligonucleótidos antisentido, siRNA (en ensayo)
 Modelo tridimensional de la
Transcriptasa inversa de HIV y HBV

(180) (204)
Variabilidad del HBV (II)

➢ Cambios menores:
Transcriptasa inversa
1 /103 – 104 nt/site/yr

Evolución de
cuasiespecies

➢Cambios mayores
Fuerte presión de selección de la
Rta. Inmune / Recombinación
¿Nos infectamos con un solo virus?
 La presión de selección (ej: sistema
inmune, terapia) altera la composición
…algunos serán eliminados pero otros…
…perduran !
 Cuasiespecies del HBV
Pacientes
Banda
1 2 3 4 5 en la
SSCP 1 2 3 4 5
1 X

2 X X

3 X X X X

4 X

5 X X X X

6 X X X X

7 X X X X X

8 X

9 X X X

10 X X X X X

11 X X X

12 X X X X X
 Variantes y mutantes del HBV
Variantes
(≠ nt)

Mutantes
(≠ aa)

1. Presión de
selección De Franchis et
2. Fenotípicamente al, 2003;
definidas Wai et al, 2004
 Mecanismos generadores de
VARIABILIDAD GENÉTICA
MUTACIONES
DELECIONES
INSERCIONES
RE-ASOCIACIONES
RECOMBINACIONES
 ¿El hospedador se infecta con UN virus
o …con una POBLACIÓN VIRAL?

CUASIESPECIES:
variantes genéticas cercanamente
relacionadas y viables sometidas
a proceso de evolución y
selección
SEROTIPO ≠ GENOTIPO

SEROTIPO 1 SEROTIPO 2 SEROTIPO 3

Genotipo 1 ¡IMPLICANCIAS MÉDICAS!
Genotipo 2 Protección serotipo-específica (polio)
Genotipo 3
Inmunofacilitación con Ac heterotípicos (dengue)
 ORDEN JERÁRQUICO VIRAL

• ESPECIE
• SEROTIPO(s)
• Mutante(s) (eventuales)
• Genotipos
• Formas recombinantes (eventuales)
• Cuasiespecies (virus a RNA [con RNA polimerasa-RNA dependiente o
con transcriptasa inversa] y a DNA [con transcriptasa inversa])

No hay lectura de prueba de las respectivas polimerasas

 MIGRACIÓN INTRACELULAR POR
MICROTÚBULOS

Partículas de poliomavirus murino (50 nm) unidas a microtúbulos de células BMK. 96 h post-infección,
presumiblemente al egresar de la célula.
Sanjuan NA et al. Virology, 2003
 Salida (egreso) de la progenie viral de la
Brotación
célula

Apoptosis

Endocitosis reversa
 Doitsh et al, Nature 505 509, 2014

Pan et al, PLOSOne 9: e93994, 2014

 NLRP3: Nod-like receptor Protein 3
RIP: receptor interacting protein
MLKL: seudokinasa mixed lineage kinase domain-like
Pgam5: fosfatasa Phosphoglycerate mutase 5
MOMP: Mitochondrial outer membrane permeabiliza

Upton & Ming-Chan. Cell, 54: 273,2014.

 ¡El modo de diseminación del HIV
determina el desenlace de la infección!
Ausencia
Partículas Ausencia
de
de
libres detección
detección
por la Rta.
por la Rta.
inmune
inmune
innata
innata

Eliminación
del DNA viral

Detección
LT CD4+ diana Sobrevida
por la Rta.
inmune
Acumulación
del DNA viral innata

LT CD4+ Piroptosis
productivamente
infectado
✓ Comentarios “virulentos”
✓ Un virus es…
✓ Los virus ayer, hoy… ¿y siempre?
• Constituyentes virales: relación entre estructura y función
✓ Viriones, partículas subvirales, VLPs, replicones…¿y esto?
• Viroma: ¿de dónde? ¿adónde? ¿Por qué?
✓ Virus en la célula: susceptibilidad, permisividad,
infecciones productivas y abortivas…
✓ ¿Son todos los virus iguales en su estrategia replicativa?
• Las Infecciones según la temporalidad,
la espacialidad y el hospedador
Patogénesis viral (I)
◼ Según espacialidad:
localizadas o sistémicas
◼ Según temporalidad:
Agudas o
Persistentes Crónicas
Latentes
Lentas
Transformantes
❑ Según hospedador:
Inmunocompetente
o inmunodeficiente
 Una misma célula MDCK infectada por dos virus diferentes:
la población del virus SV5 egresa por el polo apical;
La población del virus de la estomatitis vesicular,
lo hace por el polo basolateral

Brotación de
Infección aguda localizada
virus influenza
por el polo
apical de
células
epiteliales
Patogénesis viral
Espectro de eventos
desencadenados por un
virus que conducen al
daño hístico y a la
enfermedad
(la “última” acometida)
 Algunos términos de utilidad...

Patogenicidad: representa el número de personas

enfermas sobre el total de infectados
Virulencia: gravedad con la que se presenta la
enfermedad.

Ejemplos:
Sarampión → alta patogenicidad
Polio → baja patogenicidad,
puede tener elevada virulencia
 “Máxima” virulencia”

Rabia
Algunos ejemplos de factores
virales asociados a la virulencia
•IRES (Internal ribosomal entry site) del
virus Coxsackie B y cardiovirulencia
• Mutación en el nucleótido (nt) 472 de la
región 5´ No codificante del RNA del virus
polio asociado a la neurovirulencia del
serotipo 3
•Mutaciones T/A en nt 1762/1764 del DNA
del virus hepatitis B (HBV) asociadas a
mayor gravedad del curso evolutivo
 Algunos términos de utilidad...(II)

 Tropismo: Capacidad de un virus de infectar una

población determinada de células de un órgano
o tejido. Está influenciada por factores virales
(puerta de entrada) y del hospedero (cofactores
celulares, correceptores)
➔ la presencia del receptor viral específico no
implica el desarrollo de una infección productiva
 Susceptibilidad vs. Permisividad

Implica distribución Implica presencia de proteínas

de los celulares requeridas por el virus para PROGENIE
receptores celulares completar una infección productiva
para un virus
 Patogénesis de las infecciones por HBV / HCV :
mecanismos de lesión
◼ Efecto citopático directo A
(En inmunosuprimidos:
al menos ciertos genotipos de HBV)

Esteatosis por HCV

◼ Patología mediada por la Rta. Inmune
Humoral (inmunocomplejos) Celular(Citotoxidad:CTL, NK y NKT)
Glomerulonefritis membranosa D
Hepatitis aguda
(HBV / HCV) fulminante por HBV

C Hepatitis aguda o
crónica por
B HBV o HCV
 Tipos de infección según temporalidad

Manifestaciones clínicas
Aguda
rotavirus, HAV
rinovirus
Producción Viral

Persistente
crónica
hepatitis B
(portador crónico)
Muerte
Persistente
latente
herpes simplex

Persistente lenta
PEES (sarampión)

Tiempo Muerte

Mimms
 Respuesta T Respuesta B
M Anticuerpos séricos
M
a
a
g Plasmocitos
g de vida larga
n
Inf. aguda n i LB de
I LT de memoria memoria
t
t polifuncionales
u Plasmocitos
u y autorrenovables de vida corta
d
d
Tiempo Tiempo

Respuesta T Respuesta B
M M Anticuerpos séricos
a a
g g Plasmocitos
n n Plasmocitos
i I de vida
Inf. crónica LB de larga?
t LT regulados (-) y/o t Memoria?
u con funcionalidad ± u Plasmocitos
d d de vida corta

Tiempo Tiempo
Virgin & Ahmed, Cell, 2009
¿Por qué un grupo significativo de mayores
de 60 años no padeció un curso grave
durante la gripe pandémica de influenza 2009?
¡Los Acs. anti-hemaglutinina del virus Influenza
causante de la pandemia de 1918 H!-SC1918)
reaccionan con la hemaglutinina del virus de 2009
(H1-CA04)!
Absorbancia (450 nm)

Log de la concentración (mg/ml)

del anticuerpo 2D1
 Acción de Anticuerpos
específicos y el complemento

Virólisis
Inmune
Neutralización con HBIG del HBV salvaje
(pero no del mutado) en hepatocitos

FcRn

Schilling et al, J Virol ,77: 8882-92. .2003

 RESPUESTA INMUNE ANTIVIRAL
DEÉBIL
OLIGOCLONAL
VIGOROSA
POLICLONAL AGUDA
MULTIESPECÍFICA

VIGOROSA
POLICLONAL
Francis V. Chisari MULTIESPECÍFICA

DÉBIL
PERSISTENCIA OLIGOCLONAL
 100 nm

A B

A. Atrofia de vellosidades del

intestino delgado proximal
después de la infección por
rotavirus.
B. Ídem por microscopía
Gastroenteritis por
electrónica por scanning rotavirus: infección
C.y D. Vellosidades normales
con células vacuoladas del aguda localizada
intestino delgado distal. C D
 Polio: infección aguda sistémica
30 nm

Aunque las secuelas persisten,

¡la infección es aguda!
BRONQUIOLITIS AGUDA:
INFECCIÓN AGUDA LOCALIZADA POR VIRUS
SINCICIAL RESPIRATORIO
 INFECCIÓN PERSISTENTE
La presencia del virus perdura por períodos prolongados de
tiempo y puede producir virus continuamente o,
intermitentemente.
En algunos casos, persiste el genoma viral sin detección de proteínas.

CRÓNICA LATENTE LENTA TRANSFORMANTE

PEES
Hepatitis B Herpes
Encefalopatía HPV
simplex por priones

Rta. inmune Rta. inmune Rta. inmune Rta. Inmune

específica específica específica específica
+/- + - +/-
Un balance muy delicado …
ELIMINACIÓN VIRAL
DAÑO CELULAR

CTL
Treg Efector

CTL
Efector

Treg
PERSISTENCIA VIRAL
PROTECCIÓN CONTRA EL DAÑO CELULAR
 Panencefalitis esclerosante
subaguda: infección persistente
Lenta

1/106 casos

Sarampíón:
infección aguda
 Varicela y zóster: dos enfermedades y
un único virus…

Varicela: infección aguda Zóster: recurrencia de la infección

persistente latente
 Sanjuan, N. et al.
Arch. Virol. 91:329; 1986

Herpes labial: recurrencia de la infección persistente latente

 Hepatitis C crónica

Célula
infectada
Escape viral

Eliminación viral citolítica

Agotamiento de LT

Eliminación viral no citolítica

Importancia de la IL-21 en el control de las
infecciones crónicas
TfH
Th17
Infección crónica NKT
LT CD8+
LT CD8+
↑IL-21 Control
viral
Carga viral

Agotamiento Permanente
LT CD4+ parcial mantenimiento y función

Infección crónica

Infección aguda

CURSO DE LA INFECCIÓN
Infección aguda
Control
viral
LT CD4+ LT CD8+

Johnson and Jameson, Science 2009

 Infección por
HCV

¿Por qué puede evolucionar

a la cronicidad?
Hígado normal

Hepatitis crónica y cirrosis

50 nm
Lesión genital maligna por HPV: infección
abortiva persistente transformante.
GB virus C (Pegivirus humano-1):
¿the good boy virus?

HIV

Bhattaray N & Stapleton JT. Trends Microbiol 20: 12242-130, 2012.

Ruegamer T et al. AIDS. 32(14):1951-1957, 2018.
Louis Pasteur (aun hemipléjico) dedicó su vida a la humanidad
 Premio Nobel 2018 en
Fisiología o Medicina

James P. Allison y Tasuku Honjo recibieron el galardón el 1-10-2018 por sus

descubrimientos sobre CTLA-4 y PD-1, reguladores de la inmunoterapia
anti-tumoral. ¡Extraordinaria implicancia en Virología:
ensayos clínicos en curso para evaluar un potencial adicional tratamiento
de las hepatitis crónicas B y C!