Problemas de Cinética Enzimática

1) Calcular la Ki de un inhibidor no competitivo si 2x10-4 M

del Inhibidor da lugar a un 75% de inhibición de una
reacción enzimática

Ki
=
Ki + [I]

Ki
0.25 =

Ki + 2 10-4 M

Ki = 6.66 10-5 M
2) Al representar por el método de Lineweaver-Burk datos obtenidos en
diferentes condiciones para una reacción enzimática se observan 3 rectas
que cortan a los ejes X,Y en los siguientes puntos:

- Calcular las constantes cinéticas y Ki de cada inhibidor

SIN INHIBIDOR
3) Se han obtenido los siguientes resultados (números color negro)
al
estudiar los efectos del pH sobre la actividad de la fosfatasa alcalina
procedente de una muestra de hueso. Determinar a qué pH la enzima
tiene máxima afinidad por el sustrato

Hay que calcular inversos y representar

pH 7.6 1
= 1.3 104 M-1 ; Km = 75 µM
Km

1 Mayor
pH 9 = 8.3 104 M-1 ; Km = 12 µM
Km afinidad
4) La Km de cierta enzima para su sustrato es 75 µM. Cuando se ensaya
con una concentración inicial de sustrato de 50 mM, se observa que al
cabo de 15 minutos se ha transformado el 30% de sustrato. a) Calcular la
velocidad máxima de la reacción. b) Cuando se ensaya la actividad con
distintas concentraciones de sustrato, en presencia de un cierto inhibidor
a una concentración de 50 µM, y se representan gráficamente los
resultados mediante la representación de dobles inversos, la pendiente
de la recta obtenida es la misma que cuando el experimento se hace en
ausencia del inhibidor, pero la ordenada en el origen aumenta al doble.
¿Qué tipo de inhibición se ha producido? Calcular la Ki. c) Calcular el
grado de inhibición cuando el ensayo se hace con una concentración de
sustrato de 150 µM, en presencia de 100 µM del inhibidor anterior.

a) Como [S] >> Km , la v es Vmax y el Producto formado es

proporcional al tiempo
Producto formado: 30% de 50 mM
50 x 0.3 = 15 mM en 15 min; en 1 min: 15 mM:15= 1 mMmin-1

b) 1 1
Incompetitiva =2 Vmax = 2 Vmax´
Vmax´ Vmax
1/v
Vmax
Vmax´=
[I]
1/Vmax´
1+
Ki
1/Vmax 2 Vmax´
Vmax´= Ki= 50 µM
50 µM
1/s 1+
Ki
 1 2
[S] [S]
V´max Vmax
v´ Km´ + [S] v´ Km´ + [S]
= =
v [S] v [S]
Vmax Vmax
Km + [S] Km + [S]

Vmax 1 1
a Km/a +[S] Km +a [S]
V´ =
V =
Vmax 1 1
Km + [S] Km + [S]

4
Km + [S] (75 + 150)µM
V´ V´ =
=
V V (75+ 3x 150) µM
Km + a [S]

v´
% Inh = 100 - x 100 V´
v = 225/ 525 = 0.43
V

% Inh = 100 - 0.43 x 100 = 57%

5) ¿Qué concentración de inhibidor competitivo se requiere
para conseguir una inhibición de 15% de una reacción
enzimática, si la concentración de sustrato es 1,7 mM, la
Km para el sustrato es 0,24 mM y la Ki para el inhibidor 2,3
x 10-5 M?
v´
% Inh = 100 - x 100
v
Una inhibición del 15% indica que v´/ v es 0.85

[S]
Vmax
v´ Km´ + [S] Km + [S]
= =
v [S] Km´+ [S]
Vmax
Km + [S]

0.24 mM + 1.7 mM
0.85 =
[I]
0.24 mM 1 + + 1.7 mM
2.3 10-2 mM

[ I ] = 0. 032 mM
 6) Una enzima se ensaya con distintas concentraciones de un
sustrato específico en ausencia y presencia de 1 mM de
inhibidor, obteniéndose los resultados (números color negro) de la
tabla:
v (µmoles/min)
___________________________________
[S] (M) 1/[S] [I]=0 [I]=1mM
___________________________________________________
0.02 50 8.33 0.12 6.25 0.16
0.05 20 16.67 0.06 10 0.1
0.1 10 25 0.04 12.5 0.08
0.5 2 41.67 0.02 15.62 0.06
0.8 1.25 44.44 0.02 16 0.06
¿Qué tipo de inhibidor es?. Calcular los parámetros cinéticos.

1/v mmol/min-1 1
I= 1 mM - = -10 mM-1
Km
Km = 0.1 mM
1/Vmax´
I= 0 1
= 0.02 (µmol/min) -1
Vmax
1/Vmax
Vmax = 50 µmol/min
1/s mM
Vmax 50
Vmax´= 16.6 = Ki= 0.5 mM
[I] 1
1+ 1+
Ki Ki

Km
Km´= 0.1
[I] 0.0333= Km´=0,0333 mM
1+ 1
Ki 1+
Ki
8) La b-HMGCoA reductasa tiene una Km de 4 mM para un determinado sustrato. Si
se lleva a cabo una reacción en presencia de una [S] de 10 mM
a) ¿Qué [ I ] competitivo (Ki 3 mM) sería necesaria para inhibir un 15% la velocidad
de la misma?
b) Si se trabajase con un no competitivo ¿ que concentración sería para inhibir un
15% la velocidad de la misma?
c) Si se varia la [S] ¿habría que cambiar la concentración de I competitivo o no
competitivo para lograr el mismo grado de inhibición?

b) En una inhibición no competitiva, la relación entre V y V´, eliminando factores, queda:

c) Si el I es competitivo la [S] afecta al grado de inhibición; en el inhibidor no

competitivo, es independiente
9) Una enzima con una Km de 2.6 10-3 M se ensayó con una
concentración inicial de sustrato de 0,3 M. La velocidad
observada fue de 5.9 10-5 M min-1. Si la concentración inicial
de sustrato fuera 2 10-5 M, ¿Cuál será la concentración de
producto tras 5 y 10 minutos?

La velocidad observada es la Vmax ya que S es >> Km

Si la [S] es 2 10-5 M ¿v?

[S]
v = Vmax
Km + [S]

2 10-5 M
v = 5.9 10-5 M min-1
2.6 10-3 M + 2 10-5 M

v = 4.5 10-7 M / min

A los 5´: 4.5 10-7 x 5 = 2.25 10-6 M

A los 10´: 4.5 10-7 x 10 = 4.5 10-6 M

no
10) La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilasa,
una enzima presente en algunas bacterias resistentes a la penicilina. La
cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto en una disolución se midió
en función de la concentración de penicilina, obteniéndose los datos de la
tabla (números de color negro).
a)¿Sigue la penicilasa una cinética de Michaellis Menten? Si es así ¿cuál
es el valor de Km? ¿cuál es el valor de Vmax?

[Penicilina] 1/S M-1 moles hidrolizados/min 1/v (moles/min) -1

0.1 10-5 M 10 105 0.11 10-9 9.1 109
0.3 10-5 M 3.3 105 0.25 10-9 4 109
0.5 10-5 M 2 105 0.34 10-9 2.9 109
1 10-5 M 1 105 0.45 10-9 2.2 109
3 10-5 M 0.3 105 0.58 10-9 1.7 109
5 10-5 M 0.2 105 0.61 10-9 1.6 109

1
= 2 105 M-1 Km = 0.5 10-5 M
Km

1
= 1.5 109 (moles/min)-1 Vmax= 0.66 10-9 moles/min
Vmax
11) Al ensayar la actividad de una enzima con concentraciones
saturantes de sustrato se obtuvo una velocidad de catálisis de 300
µmol/l min en ausencia de inhibidores, y de 160 µmol/l min en
presencia de 10 µM de un cierto inhibidor acompetitivo.
Para [S] = 10 mM y en ausencia del inhibidor se obtuvo una velocidad
de 125 µmol/l min.
Calcular Km y Vmax, Km´, Ki y el grado de inhibición para [I] = 10 µM
y [S] = 10 mM.

A una [S] = 10 mM v= 125 µmol/l/min

[S] 10
v = Vmax ; Km= 14 mM
; 125 = 300
Km + [S] Km + 10

Vmax 300
Vmax´= ; Ki= 11.42 µM
; 160 =
[I] 10
1+ 1+
Ki Ki
Km 14
Km´= ; Km´= 7.48 mM
; Km´ =
[I] 10
1+ 1+
Ki 11.42
10
160
v´ 7.4 + 10 91.95
= = = 0.73
v 10 125
300
14 + 10

% Inh = 100 - 0.73 x 100 = 27%

12) Calcular la [ I ] competitivo (Ki= 10-7 M) necesaria para
inhibir en un 20% la velocidad de una reacción enzimática
(Km 1.6 10-4 M) cuando la [S] es 0.4 mM

v´
% Inh = 100 - x 100
v

Una inhibición del 20% indica que v´/ v es 0.8

[S]
Vmax
v´ Km´ + [S] Km + [S]
= =
v [S] Km´+ [S]
Vmax
Km + [S]

1.6 10-4 M + 4 10-4 M

0.8 =
[I]
1.6 10-4 M 1 + + 4 10-4 M
10-7 M

[ I ] = 0.875 10-7 M
13) Un microorganismo marino contiene una enzima que hidroliza la
glucosa-6-sulfato dando glucosa. Para detectar dicho
microorganismo se hace un ensayo que se basa en la velocidad de
formación de glucosa.
Los parámetros cinéticos de la enzima en un extracto libre de células
son Km de 6.7 10-4 M y Vmax de 300 nM min-1.
La galactosa-6-sulfato es un inhibidor competitivo. Calcular la Ki para
la galactosa-6-sulfato a una concentración de glucosa-6-fosfato 2 x
10-5 M y galactosa-6-sulfato 10-5 M, sabiendo que la velocidad inicial
es 1.5 nM min-1.

[S] [I]
v´ = Vmax Km´= Km 1 +
Km´ + [S] Ki

2 10-5 M
1.5 nM min-1 = 300 nM min-1
10-5 M
6.7 10-4 M 1 + + 2 10-5 M
Ki

Ki = 1.6 10-6 M