Departamento de Ciencias y Técnicas Fisicoquímicas

Máster en Ciencia y Tecnología Química

Bioespectroscopía

TEMA 5. ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO

INTRODUCCIÓN. FUNDAMENTOS DE UN EXPERIMENTO DE ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA (IR). Vibraciones moleculares: El modelo del
oscilador armónico simple. Grados de libertad de los átomos y modos de vibración. Dipolos eléctricos, momento dipolar e interacciones con
otros campos eléctricos en moléculas vibrando. Transiciones entre niveles de energía vibracional. LOS ESPECTROS IR. Modos normales de
vibración y bandas fundamentales. Otras bandas que podemos encontrar en un espectro IR. ANÁLISIS DE LOS ESPECTROS IR. Posición de las
bandas y frecuencias de grupos. Intensidad. Anchuras de las bandas IR. ASPECTOS PRÁCTICOS E INSTRUMENTALES. Instrumentación.
Manipulación de espectros. APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA IR A BIOMOLÉCULAS Y AGREGADOS MOLECULARES. Enlace de
Hidrógeno. Espectros IR de proteínas. Espectros IR de ácidos nucleicos.

INTRODUCCIÓN
La espectroscopía de absorción en la región del infrarrojo del espectro electromagnético, situada
entre la región del visible y las microondas, está fundamentada en las vibraciones moleculares. El
espectro infrarrojo de una molécula es el resultado de medir la intensidad de una radiación
absorbida, para cada longitud de onda que hace posible la transición entre dos niveles de energía
vibracional diferentes. Cada una de estas absorciones características de energía se corresponde con
un movimiento vibracional en la molécula. Esta es una de las técnicas espectroscópicas de análisis
más importante ya que, a pesar de trabajar con fotones “pocos energéticos”, los espectros que se
obtienen contienen gran información, tanto cualitativa como cuantitativa. Una de sus principales
ventajas es que se puede estudiar prácticamente todo tipo de muestras, en cualquier estado, y
evitando los riesgos que puede tener el uso de radiaciones más energéticas, como las Ultravioleta-
Visible. Además, los importantes avances a nivel instrumental y la gran variedad de nuevos métodos
experimentales que se han ido desarrollando han ido haciendo tratables muestras que en principio
no lo eran.
Además de la espectroscopía de absorción infrarroja, existe otra técnica que refleja las transiciones
entre los distintos estados vibracionales de una molécula: la espectroscopía Raman. Los principios
que subyacen a la espectroscopía Raman son totalmente distintos a la absorción infrarroja, ya que lo
que se detecta es la radiación dispersada por las moléculas cuya frecuencia es el reflejo de esos
mismos saltos vibracionales. De ella nos ocuparemos en el siguiente tema.

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FUNDAMENTOS DE UN EXPERIMENTO DE ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA (IR)

En nuestro estudio de las moléculas, un hecho que siempre debemos tener presente es que estas no
están completamente “inmóviles”, ni siquiera en las formas más “rígidas” de la materia (sólidos). Las
moléculas que integran un determinado compuesto se trasladan linealmente, rotan sobre sí mismas
y sus átomos vibran. Estos movimientos, en una determinada molécula, estarán más o menos
“impedidos”, según el medio en el que se encuentre. Resulta bastante intuitivo pensar que, mientras
que la traslación y la rotación serán prácticamente “libres” en fase gaseosa, cuando la molécula pase
a fases condesadas, el choque con el resto de moléculas próximas hará que estos movimientos se
atenúen, o puedan incluso llegar a anularse. Por el contrario, las vibraciones de los átomos que
componen la molécula, si bien también van a estar influenciadas por las interacciones con los átomos
de las moléculas próximas, no van a anularse por completo nunca. Incluso a una temperatura de 0 K,
la molécula posee una determinada energía de vibración a la que denominamos Energía del Punto
Cero (ZPE, zero-point energy).
Para entender las interacciones de la radiación infrarroja con la materia tenemos que analizar las
variaciones que se producen en los dipolos moleculares durante esos movimientos de vibración y
rotación de las moléculas (aunque las transiciones rotacionales también pueden observarse como
consecuencia de la absorción de radiación IR, estas sólo aparecen resueltas en los espectros de
moléculas en fase gaseosa, por lo que no suelen ser muy utilizadas en el estudio de biomoléculas, con
las que se trabaja más frecuentemente en fases condensadas).
A continuación revisaremos los aspectos básicos relacionados con las vibraciones y los momentos
dipolares moleculares.

Vibraciones moleculares: El modelo del oscilador armónico simple

Como ya hemos mencionado, las moléculas no son asociaciones rígidas de átomos. En condiciones
normales los átomos están en continuo movimiento vibratorio sobre sus posiciones de equilibrio.
Para analizar y describir este movimiento de vibración vamos a comenzar por el caso más sencillo:
una molécula diátomica. El análisis de la curva de energía potencial de dos átomos interaccionando
nos aporta una forma sencilla de relacionar estructura y energía. En la Figura 1 podemos observar
como la energía de esta molécula cambia según se modifica la distancia entre los dos átomos que la
componen. En el mínimo de la curva de energía potencial, las fuerzas de atracción y las de repulsión
entre los dos átomos están equilibradas, siendo a esta distancia de separación a la que denominamos

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distancia de enlace. En este punto, los movimientos de extensión y contracción que se producen
entre los dos átomos que, como hemos dicho, estarán en movimiento oscilante continuo, pueden ser
descritos mediante un modelo básico, que resulta muy útil y aplicable en muchos casos (aunque no
estrictamente correcto), en el que consideramos este sistema como dos masas unidas por un enlace
que se comporta como si fuera un muelle. De esta forma, en una primera aproximación, podemos
analizar las vibraciones de este enlace como las de dos átomos sometidos a oscilaciones armónicas
simples sobre la distancia de equilibrio que los separa. Para caracterizar cualquier movimiento
armónico consideramos dos parámetros, la amplitud y la frecuencia. La amplitud estará relacionada
con la distancia que se desplazan los dos átomos respecto a su posición de equilibrio. La frecuencia es
el número de veces que se repite un ciclo completo del movimiento vibratorio por segundo.

Figura 1. Curva de energía potencial para una molécula diatómica. Re es la longitud de enlace en el equilibrio. La
parábola representa la energía potencial de una molécula ideal que realiza una oscilación armónica simple sobre
Re. La curva de energía potencial experimentalmente observada para una molécula diatómica viene
representada por la curva de Morse. Adaptada de Campbell et al [1]

Basándonos en esto y aplicando la ley de Hooke podemos deducir que la frecuencia de una vibración
molecular, vib vendrá dada por:

1 k 1 k
 vib (s-1 ) = o  vib (cm-1 ) =
2  2 c 

Donde c es la velocidad de la luz, k es la constante de fuerza del enlace y  es la masa reducida, que
viene definida por:
1 1 1
= +
 M A MB
siendo MA y MB son las masa atómicas de los dos átomos (A y B).

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Así, una molécula diatómica concreta, en la que las masas de sus átomos y la constante de fuerza de
su enlace poseerá unos determinados valores, tendrá, igualmente, una frecuencia de vibración
característica. A este movimiento oscilante de los átomos es a lo que denominamos modo de
vibración. En el caso de moléculas diatómicas será la única posibilidad de movimiento vibracional
(modo de vibración que denominamos tensión). En moléculas con mayor número de átomos, las
posibilidades serán mayores, y tendremos mayor número de modos posibles de vibración. Debemos
mencionar que los átomos en las moléculas reales no se comportan exactamente con movimientos
armónicos simples, es decir, la curva de energía potencial real para una molécula diatómica
determinada experimentalmente no es una parábola, sino que se ajusta a la denominada Curva de
Morse (Figura 1), a esto volveremos un poco más adelante.
Como dijimos antes, incluso a una temperatura de 0 K la molécula posee una determinada energía de
vibración a la que denominamos Energía del Punto Cero (ZPE, zero-point energy). Esta energía de
vibración en el nivel más bajo posible, estado fundamental, viene dada por ½ hvib.

Grados de libertad de los átomos y modos de vibración

Si considerásemos un único átomo, aislado, este tendría tres grados de libertad, que son las
translaciones a lo largo de los tres ejes de un sistema de coordenadas cartesianas. Cuando el átomo
forma parte de una molécula, estos grados de libertad se mantienen, es decir, la molécula tendrá 3N
grados de libertad (siendo N el número de átomos). Estas 3N posibilidades las podemos descomponer
en:
• Considerando a la molécula como un todo, esta tendrá tres grados de libertad translacional,
• Si es no lineal, tendrá además tres grados de libertad rotacional, o si es lineal, dos grados de
libertad rotacional.
• El resto de grados de libertad (3N-6, ó 3N-5 para moléculas lineales) se corresponden con los
distintos modos de vibración posible en esa molécula.

Para una molécula diatómica hay sólo un modo de vibración (lo de denominamos tensión de enlace o
stretching). En moléculas poliátomicas, las posibilidades serán mayores, y su movimiento vibratorio
completo, más complejo, lo podríamos describir como la combinación de lo que denominamos sus
modos normales de vibración. Es decir, en moléculas poliátomicas, el movimiento global de la
molécula puede ser representado por la combinación de los 3N-6 (o 3N-5 en moléculas lineales)

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posibles modos fundamentales de vibración. La descripción de los movimientos vibratorios de los

átomos en estas moléculas la realizamos frecuentemente en términos de movimiento de tensión
(stretching, ), de flexión en el plano (bending, ) o de flexión fuera del plano o torsión (torsión, ).
En la Figura 2 se muestran estos movimientos vibratorios en un grupo químico hipotético, con tres
núcleos, no lineales, unidos al esqueleto de una molécula. La tensión de los dos enlaces podrá estar
en-fase (tensión simétrica) o fuera-de-fase (tensión antisimétrica). Lo mismo sucede en las flexiones.
En este último caso, determinados movimientos reciben nombres específicos, muy descriptivos,
como, por ejemplo, vibración de tijera o scissoring, torsión o twisting, balanceo o rocking y aleteo o
wagging

Figura 2. Vibraciones fundamentales en-fase y fuera-de-fase para tres átomos no lineales.

Adaptada de Van Holde et al. [3].

Dipolos eléctricos, momento dipolar e interacciones con otros campos eléctricos en

moléculas vibrando
Dos átomos diferentes unidos covalentemente, como sucede por ejemplo en el HCl, originan un
dipolo eléctrico. Esta molécula diatómica tendrá un momento dipolar, que es la magnitud que nos
relaciona la carga y la distancia que están en juego en ese dipolo eléctrico. Si colocásemos una
molécula de HCl entre dos placas de un condensador, como muestra la Figura 3, los dos átomos de la

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molécula se alejarían el uno del otro, por atracción de cargas con el campo eléctrico en el que se
encuentran (Figura 3A). Si este campo eléctrico fuese invertido, la repulsión de cargas haría que los
dos átomos de la molécula se aproximasen entre sí (Figura 3B). De esta forma, si la alternancia del
campo eléctrico se pudiese realizar con la misma frecuencia con la que, de forma natural, se extiende
y se contrae este enlace (modo de vibración), se produciría una transferencia de energía (resonancia)
desde el campo eléctrico al dipolo eléctrico de la molécula, siendo esta energía convertida en energía
de vibración. Es decir, esta energía se invierte en “fomentar” ese modo de vibración, de forma que la
frecuencia de la oscilación no cambia, pero cambia su amplitud. En un determinado tiempo, esta
energía se disipará mediante colisiones con los alrededores y será convertida en calor.

Figura 3. Adaptada de D. W. Mayo y col. [7].

Cuando una muestra recibe una radiación electromagnética cuya frecuencia está en el rango de las
frecuencias con la que vibra en sus diferentes modos de vibración, la componente eléctrica de esa
radiación interaccionará con la muestra, tal y como acabamos de ver para nuestra molécula de HCl
situada entre las placas de un condensador. Este rango de frecuencias en el espectro
electromagnético cae en la región que denominamos infrarrojo. Así pues, la componente de campo
eléctrico de esta radiación interaccionará con los campos eléctricos originados por los dipolos
moleculares de la misma forma que hemos visto ilustrado para el caso del HCl en presencia de un
campo eléctrico.

Transiciones entre niveles de energía vibracional

Cuando una radiación electromagnética infrarroja incide sobre una muestra, su energía no es
suficiente para producir transiciones electrónicas, pero esta energía sí es similar a las pequeñas
diferencias energéticas entre los distintos estados vibracionales existentes en las moléculas. Se puede
comprobar que cualquier molécula en su estado fundamental es susceptible de absorber un fotón de
radiación IR y pasar a otro estado con energía vibracional más alta, siendo estas las transiciones que

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detectamos en IR. Como sabemos por la mecánica cuántica, los niveles de energía están cuantizados.
En la curva de Morse de la Figura 1 podemos ver representados estos niveles de energía vibracional
mediante líneas horizontales. La proximidad entre esos niveles va disminuyendo según estamos en
valores mayores de energía potencial, y a la vez, según la energía aumenta, los átomos se alejan de
sus posiciones de equilibrio y caen dentro de la región “no parabólica” de la curva de Morse (en estas
situaciones las vibraciones no pueden ser descritas mediante el modelo de un oscilador armónico
simple, sino como una oscilación anarmónica).
Es decir, en un momento dado, una molécula estará en un determinado nivel energético de
vibración. La diferencia de energía entre el estado fundamental y el primer estado vibracional
excitado es lo suficientemente grande como para poder considerar que, a temperatura ambiente, la
mayoría de las moléculas están en estado vibracional fundamental. En cada molécula encontraremos
unos modos de vibración que serán excitados con las diferentes energías de los fotones infrarrojos.
Cuando este fotón con la misma frecuencia con la que cambia el momento dipolar llega a ese dipolo,
se produce una transferencia de energía y el fotón es absorbido. El efecto de esa absorción es un
aumento de la amplitud del movimiento vibratorio (momento de transición), o lo que es lo mismo, si
pensamos en dos átomos, un aumento de la longitud media del enlace y por tanto del momento
dipolar inicial. En esta situación se ha producido una transición desde el estado vibracional
fundamental a un estado excitado.
Recapitulando, para que se produzca una absorción de radiación IR por una muestra, la frecuencia de
la radiación debe coincidir con la de los diferentes modos de vibración de la molécula, y por otra
parte, para que sea observable es necesario que durante la vibración haya una variación del
momento dipolar. Esta es la regla de selección que determina las transiciones observables en IR: para
que una vibración de una molécula sea espectroscópicamente activa en IR, el momento dipolar
neto debe cambiar durante la vibración.
En realidad, básicamente sólo se observan transiciones entre el nivel fundamental y el primero
excitado, a las que denominamos “transiciones fundamentales” o “primeros armónicos”. En
condiciones de anarmonicidad (por ejemplo, en enlaces de hidrógeno), se producen transiciones a
niveles superiores, a las que denominamos “segundos armónicos” o “sobretonos”.
Las bandas a las que dan lugar las diferentes transiciones en el espectros IR las analizaremos a
continuación.

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LOS ESPECTROS IR
Modos normales de vibración y bandas fundamentales
En la región de la radiación infrarroja del espectro electromagnético podemos distinguir tres zonas: IR
próximo (entre 12500 y 4000 cm-1), IR medio (entre 4000 y 200 cm-1) e IR lejano (entre 200-10 cm-1).
Las absorciones observadas en IR próximo son principalmente sobretonos o bandas de combinación
de las bandas fundamentales de tensión de grupos O-H, N-H y/o C-H (las mencionaremos más
adelante). En la región de IR lejano encontramos vibraciones asignables al esqueleto molecular, a
torsiones moleculares, vibraciones de red y modos en los que participan átomos pesados. En la
región de IR medio es donde aparecen principalmente las bandas de vibración originadas por las
transiciones fundamentales, estas son: las absorciones características de los principales grupos
químicos (fundamentalmente entre 4000 y 1400 cm-1), y las vibraciones correspondientes al
esqueleto molecular (principalmente entre 1400-200 cm-1), que son el resultado del acoplamiento de
vibraciones de prácticamente todos los átomos y grupos que constituyen la molécula, y que pueden
ser utilizadas a modo de “huella dactilar” para cada compuesto.
Los espectros de infrarrojo son complejos, con un gran número de bandas aun en moléculas
relativamente pequeñas. Como ya sabemos, para una molécula no lineal con N átomos esperamos
3N-6 modos posibles de vibración, susceptibles de dar lugar a transiciones fundamentales. Algunos
de ellos no será activos en IR (los que, como hemos visto, no impliquen una variación en el momento
dipolar de la molécula durante la transición). En general, podemos deducir que las moléculas más
simétricas tendrán menos vibraciones activas en IR. Afortunadamente muchos de los modos
normales de vibración están localizados (incluyen un gran desplazamiento de algunos átomos y muy
poca interacción con los movimientos vibratorios de los otros átomos). Esto permite poder definir
algunas frecuencias características de grupos concretos. Aun tratándose de vibraciones activas en IR,
los modos que estén principalmente originados por las vibraciones de enlaces más apolares, como
por ejemplo C-C o N=N, darán bandas más débiles en IR.
En la Figura 4 vemos algunos de los modos de vibración típicos que aparecen en el espectro IR de
moléculas biológicas.

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Figura 4. Algunos de los modos de vibración típicos que aparecen en el espectro IR de moléculas
biológicas. Se muestran los desplazamientos aproximados originados por los enlaces de hidrógeno y
las regiones donde se observan las absorciones del agua. Adaptada de Van Holde et al. [3].

Otras bandas que podemos encontrar en un espectro IR

En algunos casos también podremos encontrar otro tipo de bandas vibracionales (secundarias), no
originadas por los modos normales fundamentales de vibración, y que debemos tener en cuenta a la
hora de interpretar el espectro IR. Así, además de las bandas fundamentales podremos encontrar los
sobretonos, que son el reflejo de transiciones vibracionales a frecuencia doble o triple de la
fundamental, debido a que el salto es al segundo o tercer nivel excitado (Δv=+2 ó +3) (asumiendo
niveles energéticos igualmente espaciados). Se trata de transiciones mucho menos probables y, por
tanto, de baja intensidad. También pueden aparecer las denominadas bandas de combinación: estas
son el resultado de la absorción simultánea de energía por dos modos que absorben a distinta

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frecuencia (1 y 2 ). La banda resultante aparecerá a 1 ± 2. Las bandas de combinación y sobretonos
son observadas fundamentalmente en la región del IR próximo.
Otro efecto que debemos considerar es la denominada resonancia de Fermi, que normalmente
produce dos bandas muy próximas, en dónde únicamente esperábamos una. Esto sucede cuando un
sobretodo o banda de combinación tiene una frecuencia igual o similar a la de una banda
fundamental, produciéndose un desdoblamiento de la banda original que da lugar a dos bandas
(doblete de Fermi), ambas con aproximadamente la misma intensidad.

ANÁLISIS DE LOS ESPECTROS IR

El espectro IR es una herramienta con mucha información pero, en muchas ocasiones, muy difícil de
analizar. Afortunadamente, ya hemos comentado que se ha comprobado que los diferentes grupos
químicos muestran bandas vibracionales características, pudiendo, en ocasiones, relacionarse
diferentes átomos o grupos de átomos con bandas de absorción en regiones definidas del espectro
infrarrojo (frecuencias de grupos). Estas bandas involucran a ese grupo concreto, de forma
mayoritaria, y no al resto de la molécula, lo que ha sido una de las claves para que esta técnica se
haya venido utilizando como técnica analítica esencial en la identificación de sustancias o tipo de
sustancias. Además, hoy se dispone de grandes colecciones de espectros de referencia que están en
catálogos, o bancos de datos, que dan información valiosa en la asignación de grupos funcionales y
en la determinación de estructuras orgánicas. Por otra parte, una observación más detallada de la
posición, intensidad, anchura media y perfil de una banda permite extraer conclusiones mucho más
sustanciales relacionadas con la estructura molecular y las interacciones en las que está involucrada
la molécula, o incluso grupos atómicos concretos de la molécula (enlaces de hidrógeno, apilamiento,
asociaciones,…).

Posición de las bandas y frecuencias de grupos

El máximo de absorción de cada banda determina la posición de esta y se expresa, por conveniencia,
en cm-1 (números de onda). Podemos definir regiones del espectro donde aparecen las vibraciones,
de forma más o menos pura, de los distintos grupos atómicos. En la Figura 4 veíamos algunos de los
modos de vibración típicos y la posición en la que aparecen en el espectro IR de moléculas biológicas.
En general, la región del IR medio (4000 y 200 cm-1) puede ser dividida en cuatro regiones: entre
4000-2500 cm-1, dónde aparecen las vibraciones de tensión de los enlaces sencillos X-H (vibraciones

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de tensión O-H, C-H y N-H), entre 2500-2000 cm-1, la región de tensiones de triples enlaces, entre
2000-1500 cm-1, la región de las tensiones de dobles enlaces y, por último, la región que
denominamos “huella dactilar” de los compuestos, por debajo de 1500 cm-1. En general, los grupos
O-H producen una ancha banda entre 3700-3600cm-1, los grupos N-H se observan entre 3400 y 3300
cm-1, con una banda absorción en general más estrecha que la de los grupos O-H, y las bandas de
tensión C-H aparecen hacia 3000-2850 cm-1. Si el enlace C-H se encuentra adyacente a un doble
enlace o a un anillo aromático, aparecerá a mayor número de onda, absorbiendo hacia
3100-3000 cm-1.
Las vibraciones de tensión de triples enlaces caen entre 2500-2000 cm-1, debido a la alta constante de
fuerza de estos enlaces. Los enlaces CC absorben entre 2300 y 2050 cm-1, normalmente de forma
muy débil, mientras que los grupos nitrilo (CN) absorben entre 2300 y 2200 cm-1, y con una
intensidad media.
Las bandas principales que podemos observar entre 2000 y 1500 cm -1 son originadas por las
tensiones de los enlaces C=C y C=O. Las tensiones del grupo carbonilo son unas de las absorciones
que más fácilmente se pueden reconocer en un espectro IR, apareciendo entre 1830 y 1650 cm -1
normalmente. Las tensiones C=C aparecen alrededor de 1650 cm -1 y son más débiles, estando incluso
ausentes, en muchos casos, por razones de simetría. La tensión C=N, que también aparece en esta
región, suele presentar una absorción más fuerte.
En general, la posición exacta de cada banda va a depender de una serie de factores, como son la
formación de enlaces de hidrógeno, los efectos de sustituciones isotópicas, etc., es decir, del entorno
químico concreto en el que estén los átomos involucrados en la vibración.

Intensidad
Junto con las energías de las transiciones vibraciones, la fuerza de sus interacciones con la radiación
IR (esto es, las intensidades de las bandas) son las principales fuentes de información en
espectroscopía vibracional. La absorbancia IR de una muestra viene determinada por la ley de
Lambert-Beer, que establece una relación lineal entre la concentración y la absorbancia, siendo el
parámetro que define esa linealidad igual al producto entre el coeficiente de absortividad molar y el
“paso óptico” o anchura de la célula en la que está colocada la muestra durante la medida. El
coeficiente de absortividad refleja la probabilidad de transición, que está relacionada con la magnitud
del momento dipolar de transición. Esta magnitud es tan sensible al ambiente que las vibraciones de

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grupos característicos en diferentes moléculas muestran una variación enorme en sus coeficientes de
absortividad. Es por esto por lo que en muchos casos las intensidades de las bandas IR
(especialmente en los espectros de sólidos) se caracterizan indicando de forma relativa si son bandas
muy fuertes (very strong, vs), fuertes (strong, s), media (medium, m), débiles (weak, w) o muy débiles
(vw). Para análisis de tipo cuantitativo, una correcta medida de la intensidad de la banda implica la
medida del área total bajo la señal detectada. El análisis de las posibles desviaciones de la linealidad
del coeficiente de absortividad molar en función de la concentración o la temperatura pueden dar
idea de procesos de asociación o interacción de un determinado grupo químico.

Anchuras de las bandas IR

Las bandas de absorción de infrarrojo no son infinitamente estrechas (líneas) ya que existen
diferentes factores que contribuyen a su ensanchamiento. Una causa del ensanchamiento de las
bandas es el tiempo de vida “finito” de los estados involucrados en la transición: en principio, el
tiempo de vida de los niveles vibracionales excitados es pequeño, lo que determina que las señales
del espectro tengan “anchura” (hay una relación entre el tiempo de vida de un estado excitado y la
anchura de la banda de absorción asociada con la transición: menor tiempo de vida de un estado
implica menor definición de su energía, y mayor anchura de banda). Otra fuente de ensanchamiento
son las colisiones entre moléculas. En el caso concreto de las transiciones vibracionales de muestras
en disolución, de especial interés en sistemas biológicos, la interacción de un determinado grupo
químico con el entorno implica que este entorno interactúa con los niveles vibracionales modificando
la diferencia energética entre los niveles involucrados en una transición, y desplazando así el número
de onda de la señal. Por ejemplo, podemos esperar que los solventes polares estabilicen los estados
vibracionales excitados si son más polares que el estado fundamental. Esto provocará una
disminución de la energía de la transición y por tanto un desplazamiento en la frecuencia de
absorción. En cualquier instante, la “cavidad” que forma el solvente alrededor de la molécula puede
“reordenarse” a causa del movimiento molecular, esto ocasiona que las transiciones
correspondientes tengan energías ligeramente diferentes, dando lugar a un ensanchamiento de la
banda de absorción.
La anchura de la banda la determinamos mediante la medida de lo que denominados anchura media,
que es la anchura de una banda medida en el punto medio de la intensidad máxima (Figura 5).

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Figura 5. Anchura media de una banda (FWHM). Tomada de D. W. Mayo y col. [7].

ASPECTOS PRÁCTICOS E INSTRUMENTALES

La espectroscopía de vibración es aplicable prácticamente a cualquier estado de la muestra, como
son disoluciones (acuosas y no acuosas), suspensiones, precipitados, geles, películas, fibras, cristales
líquidos, monocristales, sólidos amorfos y sólidos policristalinos, lo que implica una ventaja frente a la
difracción de rayos X, complementando a esta en la obtención de información estructural de
muestras en condiciones más próximas a la situación fisiológica. Además, los datos obtenidos de una
muestra dada, en un estado determinado, pueden ayudar a interpretar los datos obtenidos en otro
estado de la misma muestra, lo que conlleva importantes beneficios prácticos. Por otra parte, la
espectroscopía de vibración tiene otras ventajas, como son el ser una técnica no destructiva y sin
limitación en el tamaño de la molécula investigada (mono-, oligo- y polimeros), siendo esta una de las
ventajas principales frente a la Resonancia Magnética Nuclear. A continuación detallaremos algunos
aspectos esenciales de la instrumentación y de las metodologías empleadas en la interpretación y
manejo de los espectros IR.

Instrumentación
A nivel instrumental, los espectrógrafos IR de barrido son raros hoy en día. Actualmente se utilizan
mucho más instrumentos que trabajan por Transformada de Fourier. Estos, en lugar del
monocromador tienen un interferómetro de Michelson. El interferómetro contiene un espejo fijo y
uno móvil, la posición relativa de ambos espejos puede ser medida con mucha exactitud, haciendo
pasar una radiación de un láser de Helio-Neón (cuya longitud de onda es bien conocida). Esta
radiación es dividida, enviándose una parte al espejo fijo y la otra al espejo móvil. Cuando los rayos se
recombinan habrá interferencias constructivas y destructivas, dependiendo de la posición del espejo

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móvil. La intensidad del rayo recombinado será una onda sinusoidal, en función de la posición,
actuando los nodos de esta onda sinusoidal como “regla” para la medida de la posición. De la misma
forma, una radiación IR, con todas las longitudes de onda de interés experimental, se hace pasar por
el interferómetro, enviándolas a los dos espejos, y recombinándolas. Las diferentes longitudes de
onda IR interferirán en diferentes posiciones del espejo. El instrumento recoge la intensidad total, en
función de la posición del espejo. Esta función registrada (intensidad en función de la posición), es
transformada mediante la Transformada de Fourier, pasando a intensidades en función de la
frecuencia, o lo que es lo mismo, el espectro de absorción IR. Una de las principales ventajas del FT-IR
es que todas las frecuencias IR son registradas simultáneamente, desde el interferómetro de
Michelson, y son transformadas, también simultáneamente, por un ordenador. Así, el espectro es
registrado sin necesidad de barrido, lo que disminuye notablemente el tiempo de adquisición.
Desde un punto de vista práctico, unos de los principales inconvenientes de la técnica IR, que
debemos mencionar por resultar de especial interés en el estudio de sistemas de interés biológicos,
es que el agua (principal solvente en estos estudios) absorbe radiación IR justo dónde también
absorben los grupos más interesantes encontrados en biopolímeros. En cierta medida, esta dificultad
puede ser sobrellevada trabajando en disoluciones de agua pesada (D2O), donde la absorción del
solvente es desplazada a regiones menos interesante, alrededor de 2500 y 1200 cm -1 (Figura 6), y
trabajando con instrumentos FTIR de alta exactitud y células para muestras de muy poco espesor. El
trabajo con D2O implica que no debemos pasar por alto las posibles sustituciones isotópicas de
hidrógeno por deuterio que tendrán lugar en las muestras, y su repercusión en los números de onda
de las bandas IR.

Figura 6. Algunas frecuencias características de grupos químicos y los espectros de absorción IR del H 2O y el D2O.
Tomada de Campbell et al [1]

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Manipulación de espectros
La interpretación de los espectros IR puede resultar muy complicada debido, como ya hemos
mencionado, a la gran complejidad que encierran. Por ello, existen una serie de métodos que se
aplican con bastante rutina en el estudio e interpretación de las bandas del espectro, tanto en
estudios cualitativos como cuantitativos. Entre estas metodologías debemos citar la corrección de
línea base, el suavizado o “smoothing” de los espectros, la obtención de espectros diferencia, el
trabajo con primeras y segundas derivadas, la deconvolución y el ajuste de perfiles (curve fitting),
protocolos todos ellos que podremos aplicar con la ayuda de programas específicos para
espectroscopía o incluso con algunos de los programas generales de representaciones gráficas.
En la Figura 7 se incluye un ejemplo ilustrativo de corrección de línea base y de obtención de
espectro diferencia de un soluto tras restarle el espectro del disolvente.

Figura 7. Ejemplos ilustrativos de corrección de línea base y espectros diferencia. Adaptada de Stuart [4]

Con el smoothing se pretende suavizar el ruido del espectro, dando lugar a un espectro equivalente al
que podríamos obtener si lo hubiésemos registrado con menos resolución. Se pueden aplicar
diferentes funciones matemáticas en este suavizado, que básicamente definen una correlación entre
el espectro y un vector, definido con más o menos número de puntos, según el grado de suavizado
aplicado. La aplicación de primeras y segundas derivadas al análisis del espectro resulta de gran
utilidad dado el elevado grado de solapamiento de las bandas en los espectros IR de compuestos

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relativamente complejos. Si se realizan las derivadas de un único pico de absorción, el punto de corte
con el cero de la primera derivada y el mínimo de la segunda derivada indica claramente el máximo
de la banda. Si en lugar de tener único pico, en el espectro lo que estamos observando es una
envolvente integrada por varias bandas no resueltas, la primera y, especialmente, la segunda
derivada, nos ayudará a definir dónde se sitúan los “hombros” y, con ellos, las posibles bandas que
componen esa envolvente (diferentes mínimos en la segunda derivada, ver Figura 8). Con la
deconvolución y con el ajuste de perfiles lo que se pretende es analizar más en profundidad la
composición de bandas que contiene una envolvente compleja. El mecanismo que se utiliza es
diferente en ambos casos: mientras que con la deconvolución lo que se pretende es contrarrestar la
anchura intrínseca a las bandas, provocándose un “estrechamiento” matemático de estas en un
proceso iterativo, con el ajuste de perfiles lo que se hace es presuponer un determinado número de
componentes y, bajo la asunción de un determinado perfil para cada una de ellas (generalmente
gaussiano, lorentziano, o combinación de ambos), tratar de reproducir, también en un proceso
iterativo, el perfil espectral analizado.

Figura 8. Espectro IR junto con su primera y segunda derivada. Adaptada de Stuart [4]

Figura 9. Ejemplos ilustrativos de la deconvolución y el ajuste de perfiles en bandas IR. Adaptada de Stuart [4]

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Lecturas complementaria: Ajuste de perfiles en el espectro IR de proteínas

En la siguiente referencia se presenta un procedimiento de deconvolución de las componentes de las bandas
principales del espectro de una proteína mediante “curve fitting” a la vez que se lleva a cabo, simultáneamente, el
ajuste del perfil de la segunda derivada. Esta lectura sirve también como introducción al espectro IR de proteínas y la
información que nos aporta, que veremos en las siguientes secciones:

LC1- G. M. Baldassarre , C. Li , N. Eremina , E. Goormaghtigh & A. Barth

Simultaneous Fitting of Absorption Spectra and Their Second Derivatives for an Improved
Analysis of Protein Infrared Spectra Diagnosis. Molecules 2015; 20, 12599-12622;
doi:10.3390/molecules200712599

[Link]

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APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA IR A BIOMOLÉCULAS Y AGREGADOS MOLECULARES

La aplicación de la espectroscopía de absorción IR al estudio de sistemas biológicos se ha planteado
diversos y variados objetivos que, de forma fundamental, podemos agrupar en cuatro grandes
campos:

(1) como cualquier otra espectroscopía, muchos de los estudios persiguen la caracterización
estructural de la muestra; podemos destacar la caracterización de la estructura secundaria de
péptidos, proteínas y ácidos nucleicos, y el estudio de lípidos, especialmente de fosfolípidos.
Al igual que veíamos en espectroscopía electrónica, también se ha utilizado radiación IR
polarizada para obtener información estructural de muestras biológicas ordenadas (las
medidas de dicroismo IR aportan información sobre la dirección de los momentos dipolares
de transición, lo que puede relacionarse con la conformación molecular);
(2) asimismo se ha utilizado mucho en estudios de interacciones inter- e intramoleculares y
procesos de asociación (ej.: formación de enlaces de hidrógeno, seguimiento de interacciones
enzima-sustrato, auto- y heteroasociación de componentes de ácidos nucleicos, …);
(3) un tercer importante campo de aplicación podemos centrarlo en el estudio de fármacos y todo
lo relacionado con ellos, lo que hace de esta espectroscopía una herramienta de gran interés
en el sector farmacéutico y,
(4) finalmente, un cuarto campo de aplicación ha sido la utilización de la espectroscopía IR como
herramienta analítica de diagnóstico, tratando de aprovechar su carácter de técnica no
invasiva (radiación menos energética) para estudiar fluidos biológicos, células y tejidos. En
estos estudios han cobrado especial importancia distintas metodologías desarrolladas
alrededor de la espectroscopía IR, como por ejemplo la ATR (Attenuated Total Reflectance,
Reflectancia Total Atenuada) y la espectroscopía NIR (Near-IR, IR próximo), en la búsqueda de
soluciones para el estudio sistemas que contienen moléculas de agua, tan altamente
absorbentes en la región del IR-medio. En los estudios sobre células también ha aportado
importantes ventajas el desarrollo de la microscopía IR y las técnicas de imagen, que
permiten la identificación de componentes en función de la posición.

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Lecturas complementaria: Análisis clínico

En las siguientes referencias puede obtener información sobre la aplicación de la espectroscopía IR al estudio de
células y tejidos, fundamentalmente dirigidos a su uso como herramienta para el diagnóstico clínico, y la descripción
de diferentes metodologías desarrolladas en torno al IR, de especial interés en estas aplicaciones (ATR, micro-IR, NIR):

LC2- G. Bellisola y C. Sorio

Infrared spectroscopy and microscopy in cancer research and diagnosis. Am J Cancer Res
2012;2(1):1-21
Interesante artículo de revisión, muy recomendable su lectura. Incluye revisión de aspectos básicos del trabajo con
espectroscopía IR y microIR

[Link]

LC3- R. A. Shaw y H.H. Mantsch, 2000

Infrared spectroscopy in clinical and diagnostic analysis. Encyclopedia of Analytical Chemistry
Edited by Robert A. Meyers. John Wiley & Sons Ltd, Chichester. ISBN 0471 97670 9

[Link]
LC4- J. Dubois y R. A. Shaw, 2004
IR Spectroscopy in Clinica, Today’s Chemist at Work, 26-34.

[Link]

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Ejemplo y aplicación
Estudios de fluidos y células
Ejemplo 1A. D. A. Scott, D. E. Renaud, S. Krishnasamy, P. M. Nurcan Buduneli, Ş. Çetinkalp and K-Z.
Liu (2010), Diabetes-related molecular signatures in infrared spectra of human saliva.
Diabetol Metab Syndr.; 2: 48. doi: 10.1186/1758-5996-2-48 PMCID: PMC2914662

[Link]

Ejemplo 1B. L. Espina, T. K. Gelaw, S. de Lamo-Castellví, Rafael Pagán, D. García-Gonzalo (2013)

Mechanism of Bacterial Inactivation by (+)-Limonene and Its Potential Use in Food
Preservation Combined Processes. Plos ONE, 8:2, e56769

[Link]

En el campo de la medicina, la aplicación de la espectroscopía IR quizá tiene un matiz más analítico.

No obstante, en general, la base principal de la mayoría de las aplicaciones del IR en el estudio de los
sistemas biológicos tienen un carácter muy fisicoquímico, asentándose en el estudio y análisis de
bandas concretas, sobre las que se hace un trabajo previo de asignación a modos de vibración
característicos de determinados grupos o enlaces de las moléculas de interés. El estudio
pormenorizado de determinadas bandas de vibración, asignadas a grupos atómicos concretos, bajo
distintas condiciones de pH o temperatura, o en disoluciones con distinta concentración de
compuesto, permite caracterizar las interacciones o asociaciones en las que están involucrados esos
grupos atómicos que las originan, con todas las implicaciones, tanto estructurales como dinámicas,
que eso supone.
Un recurso muy utilizado en espectroscopía IR son las sustituciones isotópicas en las muestras. El
análisis del desplazamiento que experimentan determinadas bandas tras la sustitución isotópica de

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algunos de los átomos que participan en el modo de vibración (alteración de la masa reducida del
sistema vibrante), en combinación con la utilización de métodos teóricos de predicción de los modos
normales de vibración, permiten estudiar y proponer la asignación de las bandas, lo que es un punto
de partida esencial en cualquier trabajo con espectroscopía IR. La información que nos aporta el
intercambio isotópico también se utiliza en estudios estructurales. Por ejemplo, el análisis de la
influencia sobre el espectro del uso de agua deuterada como disolvente nos dará idea del
intercambio de protones que se produce en la muestra (estudios de cinéticas de intercambio
Hidrógeno/Deuterio); y ese grado de intercambio será un indicativo directo de lo expuesto que está
el grupo atómico al disolvente: si un determinado grupo está participando en enlaces de hidrógeno
inter- o intramoleculares, pero con moléculas distintas a las del disolvente, el intercambio H/D no
será tanto como si está expuesto directamente a las moléculas de agua del disolvente.
A continuación se presenta una revisión de los principales estudios realizados sobre proteínas y
ácidos nucleicos mediante espectroscopía de vibración IR, incluyendo una breve reseña al enlace de
hidrógeno, por su gran importancia en biomoléculas y por tratarse de un fenómeno ampliamente
estudiado mediante esta técnica.

Enlace de Hidrógeno
Los enlaces de hidrógeno son un fenómeno ampliamente estudiado mediante espectroscopía IR
debido al gran efecto que su formación tiene sobre las bandas IR de los grupos afectados. Se define el
enlace de hidrógeno como la atracción que tiene lugar entre un átomo altamente electronegativo
con un par de electrones no-enlazantes (como el Flúor, el Oxígeno o el Nitrógeno) y un átomo de
hidrógeno, que a su vez se encuentra unido a un átomo pequeño y también muy electronegativo.
Ejemplos muy característicos de enlaces de hidrógeno intermoleculares son los que tienen lugar
entre moléculas de agua en disolución o en sólido, de gran relevancia en sistemas biológicos por
tratarse del medio principal en el que encontramos disueltas a gran parte de las biomoléculas en los
seres vivos. También es posible encontrar enlaces de hidrógeno intramoleculares, formados entre
determinados grupos de una misma molécula, como, por ejemplo, los que determinan la estructura
de proteínas o ácidos nucleicos (Figura 7).
La participación de un determinado grupo atómico en un enlace de hidrógeno afecta a la rigidez del
enlace de forma que, por tanto, modificará la frecuencia de vibración de los modos en los que ese

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enlace participa. Por ejemplo, la vibración de tensión de un grupo O-H que forma parte de un enlace
de hidrógeno se observa entre 3500 y 2500 cm-1, mientras que si no estuviera participando en ese
enlace aparecería entre 3700-3600 cm-1 (Figura 10).

Figura 10. Enlaces de hidrógeno inter- e intramoleculares y efecto del enlace de hidrógeno en la vibración de tensión de un grupo O-H.
Adaptada de Stuart [4]

Tanto la concentración como la temperatura afectarán al grado de formación de enlaces de

hidrógeno: cuanto menor sea la concentración de uno o varios compuestos, menor será la
probabilidad de formación de enlaces de hidrógeno intermoleculares entre ellos y, en relación con la
temperatura, un aumento implicará una tendencia a la ruptura de este tipo de interacciones débiles.
En consecuencia, el seguimiento de las modificaciones en las bandas IR, en función de la
concentración o la temperatura, posibilitará el estudio de los procesos de autoasociación y
heteroasociación en los que participan las biomoléculas.

Espectros IR de proteínas
Los espectros IR de las proteínas presentan bandas de absorción asociadas con sus característicos
grupos amidas (enlaces peptídicos). Estas bandas (denominadas bandas amidas) son similares a las
que muestran, en general, las amidas secundarias. Hay nueve bandas amidas, denominadas amida A,
amida B y amidas I-VII, en orden decreciente de número de onda (Tabla 1). Algunas de estas bandas
han sido utilizadas en estudios estructurales y conformacionales, destacando en este sentido la
utilización de las bandas amida I y II.

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Tabla 1. Bandas IR amida características de proteínas. Tomada de Stuart [4]

Banda amida Número de onda (cm-1) Asignación

A 3300
 N-H (en resonancia con sobretono: 2 x amida II)
B 3110
I 1653 80%  C=O; 10%  C-N; 10% δ N-H
II 1567 60% δ N-H; 40%  C-H
III 1299 30%  C-N; 30% δ N-H; 10%  C=O; 10% δ O=C-N; 20% otros
IV 627 40% δ O=C-N; 20% otros
V 725 δ N-H
VI 600 δ C=O
VII 200 τ C-N
 = tensión; δ = flexión; τ = torsión

La banda amida II, asignada principalmente a la deformación del N-H junto con la vibración de
tensión C-N, puede aparecer desdoblada según la estructura secundaria de la proteína. Esta banda
resulta ser muy sensible a la deuteración, solapando, en las proteínas deuteradas, con la banda de
deformación del H-O-D. En ambientes hidrofóbicos o en estructuras muy ordenadas, como α-hélices
o láminas-β, se reduce la posibilidad de intercambio por deuterio del protón de este N-H.
En el análisis de la estructura secundaria de proteínas ha resultado ser más útil el estudio de la banda
amida I, asignada de forma predominante a la tensión del grupo carbonilo. La frecuencia de esta
vibración depende de la naturaleza del enlace de hidrógeno en el que están involucrados los grupos
C=O y N-H, lo que vendrá determinado por la estructura secundaria concreta que adopta la proteína
que se está estudiando. Debido a que una misma proteína contiene fragmentos polipeptídicos en
diferentes conformaciones, la banda amida I resulta ser una envolvente compleja, compuesta por un
determinado número de bandas superpuestas, cada una de las cuales representa diferentes regiones
en forma de hélice, giros o regiones desordenadas de la proteína. Estos hechos se pudieron
establecer mediante el análisis de espectros de péptidos modelos, con estructura conocida, sobre los
que se realizaron medidas precisas y cálculos teóricos de los modos normales de vibración. Así, está
establecido que en las -hélices la banda amida I aparece hacia 1650 cm-1, mientras que en las
estructuras en lámina  encontramos contribuciones a 1632 y 1685 cm-1 (Figura 11). Para poder
obtener información sobre la cantidad y tipo de estructuras secundarias que existen en una proteína
necesitamos realizar un análisis del perfil del espectro IR en esta región (banda amida I), mediante
deconvolución o ajustes de perfiles.

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Figura 11. Ajuste del perfil de la banda amida I de lisozima en D 2O. T, turns (giro); β, estructura-β; α, α-hélice; R, random coil (estructura
desordenada); S, side-chain (vibraciones de la cadena lateral de aminoácidos). Tomada de Stuart [4]

También se han estudiado las contribuciones al espectro IR de las cadenas laterales de los
aminoácidos, modos de vibración que han resultado de utilidad en la investigación de grupos locales
de una proteína. No obstante, sus intensidades son muy pequeñas y hay que tener precaución para
no confundir algunas de sus contribuciones con vibraciones amida (Figura 11).

Lecturas complementaria: Espectroscopia IR de proteínas

En las siguientes referencias puede obtener más información sobre la aplicación de la espectroscopía IR al estudio
estructural de proteínas y al seguimiento de reacciones en las que estas macromoléculas participan:

LC5- J. Kong y S. Yu, 2007

Fourier Transform Infrared Spectroscopic Analysis of Protein Secondary Structures, Acta
Biochim. Biophys. Sinica, 39:8, 549-559.

[Link]
LC6- A. Barth, 2007
Infrared spectroscopy of proteins, Biochim. Biophys. Acta,1767, 1073-1101.

[Link]

LC7- M. Jackson & H. H. Mantsch, 1995

The Use and Misuse of FTIR Spectroscopy in the Determination of Protein Structure, Critical
Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, 30(2):95-120.

[Link]

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Uno de los puntos importantes que debemos destacar en los análisis estructurales, es la
direccionalidad asociada con los dipolos de transición. En muestras orientadas, esta direccionalidad
puede ser detectada en los espectros utilizando luz IR polarizada a lo largo de una dirección concreta
con respecto a la muestra. Así, por ejemplo, en las estructuras -hélice de proteínas, los enlaces de
hidrógeno N-H…O=C que forman la estructura están orientados paralelamente al eje de la hélice,
estando el enlace C-N prácticamente en ángulo recto con respecto a este mismo eje (Figura 12). La
radiación IR polarizada será, por tanto, preferentemente absorbida por los movimientos de tensión
N-H y C=O cuando es paralela al eje. El movimiento correspondiente a la banda de amida II mostrará
absorción preferente (dicroismo) cuando la radiación IR polarizada está casi perpendicular al eje. Para
las estructuras en lámina  los efectos serán opuestos (Figura 12). Las características de las tres
bandas de absorción relacionadas con el enlace peptídico se incluyen en la Tabla 2.
El dicroismo IR se utiliza principalmente con proteínas fibrosas y otros polímeros que pueden estar
orientados. El resultado puede ser utilizado para indicar si un enlace concreto está orientado de
forma paralela o perpendicular al eje de la fibra.

Figura 12. Adaptada de Campbell y col.[1]

Tabla 2. Algunas bandas de absorción IR características del enlace peptídico. Tomada de Campbell y col.[1]

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Ejemplo y aplicación
Espectroscopía IR de proteínas
Aplicación de FTIR, en conjunto con otras técnicas, al estudio del proceso de desnaturalización térmica de una proteína (en
este caso la Ribonucleasa A, RNasa A). La banda amida I sirvió de testigo de los cambios en la estructura secundaria.

Ejemplo 2A. S. D. Stelea, P. Pancoska, A. S. Benight y T. A. Keiderling (2001). Thermal unfolding of

ribonuclease A in phosphate at neutral pH: Deviations from the two–state model.
Protein Sci. 10(5): 970–978.

[Link]

Utilización del VCD para la caracterización de la estructura secundaria de una proteína

Ejemplo 2B. S. R. Ryu, B. Czarnik – Matusewicz, R. K. Dukor , L. A. Nafie & Y. M. Jung (2012). Analysis
of the molten globule state of bovine α – lactalbumin by using vibrational circular
dichroism. Vibrational Spectroscopy. 60: 68 – 72.

[Link]

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Espectros IR de ácidos nucleicos

Al igual que en proteínas, la espectroscopía IR también ha sido muy aplicada al estudio estructural de
los ácidos nucleicos. Las vibraciones de la base (1800-1500 cm-1) son marcadores muy sensibles de la
formación de enlaces de hidrógeno (formación de pares de bases) y del apilamiento entre bases
vecinas. También hay modos de vibración activos en IR con contribuciones principales del residuo de
azúcar y del grupo fosfato. Las bandas que aparecen en la región de 1500-1250 cm-1 son debidas,
fundamentalmente, al acoplamiento vibracional entre base y azúcar; mientras que entre 1250 y 800
cm-1 se observan otros modos asignables al azúcar y al grupo fosfato. Se han establecido relaciones
entre estas bandas y los parámetros conformacionales relativos al esqueleto azúcar-fosfato, por
tanto, del análisis del espectro IR de nucleótidos y ácidos nucleicos podremos obtener información
sobre los diferentes tipos de estructuras en hélice que forman los polinucleótidos, además de poder
investigar los procesos de autoasociación y heteroasociación de los nucleótidos que los componen.
En la Tabla 3 se incluyen las principales modos de vibración IR de los ácidos nucleicos.

Tabla3. Principales bandas IR de ácidos nucleicos. Tomada de Stuart [4]

Número de onda (cm-1) Asignación
2960-2850  CH2
1705-1690  C=O (RNA)
1660-1655  C=O (DNA); δ N-H;  C=O (RNA)
1610  C=C anillo imidazol
1578  C=N anillo imidazol
1244 asim PO2- (RNA)
1230 asim PO2- (DNA)
1218 δ C-H (RNA)
1160, 1120  C-O ribosa
1089 sim PO2- (DNA)
1084 sim PO2- (RNA)
1060, 1050  C-O ribosa
1038  C-O ribosa
1015  C-O ribosa y deoxiribosa
996  anillo uracilo; δ anillo uracilo
970, 916 Vibraciones del esqueleto azúcar-fosfato
 = tensión; sim = tensión simétrica; asim = tensión asimétrica; δ = flexión; τ = torsión

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Lecturas complementaria: Bandas IR de ácidos nucleicos en disolución

El siguiente artículo de revisión recopila y discute las bandas IR características descritas para de los ácidos nucleicos en
diferentes conformaciones:
LC8- M. Banyay, M. Sarkar y A. Gräslund, 2003
A library of IR band of nucleic acids. Biophys. Chem. 104, 477-488.

[Link]

Ejemplo y aplicación
FT-IR y la estructura secundaria del ADN

Ejemplo 3. D. R. Whelan, K. R. Bambery, P. Heraud, M.J. Tobin, M. Diem, [Link] y B. R.

Wood (2011) Monitoring the reversible B to A-like transition of DNA in eukaryotic cells
using Fourier transform infrared spectroscopy, Nucleic Acids Res. 39: 13, 5439–5448.

[Link]

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Finalmente, para terminar con la revisión de las principales aplicaciones de la espectroscopía

vibracional IR y su aportación al conocimiento de la estructura y dinámica de biomacromoléculas
consideramos importante presentar dos interesantes campos de investigación: uno centrado en el
desarrollo y utilización de sondas IR: aminoácidos y nucleósidos modificados que, una vez
introducidos de forma específica dentro de las proteínas y el ADN permiten obtener información
característica sobre estos sistemas a través de diferentes metodologías basadas en la espectroscopía
IR (más información en el artículo de revisión referenciado como Lectura complementaria 8) y otro
centrado en la espectroscopía IR Bidimensional (Lectura complementaria 9).

Lecturas complementaria: Sondas IR para el estudio de biomoléculas

LC9- Heejae Kim and Minhaeng Cho, 2013
Infrared Probes for Studying the Structure and Dynamics of Biomolecules, Chem. Rev., 113,
5817−5847.

[Link]

LC10- R. E. Hill, N. T. Hunt, J. D. Hirst, 2013

Studying Biomacromolecules with Two-Dimensional Infrared Spectroscopy, Advances in
Protein Chemistry and Structural Biology, 93: 1-36 , Chapter 1, Elsevier.

[Link]
dimensional+infrared+spectroscopy.&ots=8TtjEftBb_&sig=qMoF5v9r0uzIBppTx_hOQY6qWdU#v=onepage&q=Studying%20bio
macromolecules%20with%20two-dimensional%20infrared%20spectroscopy.&f=false

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REFERENCIAS
[1] I. D. Campbell & R. A. Dwek, Biological Spectroscopy, 1984, Chapter 3, Infrared Spectroscopy, The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Advanced Book Program, California.

[2] F. Siebert & P. Hildebrandt, 2007, Vibrational Spectroscopy in Life Science: Vibrational Spectroscopy in
Life Science, Wiley-VCH

[3] K.E. Van Holde, W.C. Jonson, y P.S. Ho, (1ª ed. 1998, 2ª ed. 2006) Principles of Physical Biochemistry,
Prentice Hall, Upper Saddle River, Nueva Jersey.

[4] B. Stuart , 2004, Infrared Spectroscopy: Fundamentals and Applications. John Wiley & Sons.

[5] G.G. Hammes (2005). Spectroscopy for the Biological Sciences, John Wiley & Sons, Inc. Nueva Jersey.
Capítulo 5.

[6] D. Steele, 1999, IR Spectroscopy, Theory, Encyclopedia of Spectroscopy and Spectrometry, Vol. 2,
Academic Press.

[7] D. W. Mayo, F. A. Millar y R. W. Ana, 2003, Course Notes on the Interpretation of Infrared and Raman
Spectra, John Wiley & Sons.

[8] J. C. Lindon, G. E. Tranter, J. L. Holmes, 1999, Medical Science Application of IR, Encyclopedia of
Spectroscopy and Spectrometry, Vol. 2, Academic Press.

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