Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA DE FISOTERAPIA, INGENERIA BIOMEDICA E INSTRUMENTACION QUIRURGICA
CURSO DE:
BIOQUIMICA
PRESENTADO POR:
GONZALEZ ARIACNA
COMAS JULIANA
GARCIA BLEINER
MONTES LUISA
PEREZ HIMMLER
DOCENTE:
ZARATE PEÑATE ELOINA BIOL. MAGISTEREN INMUNOLOGIA
BARRANQUILLA – ATLANTICO
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
1. INTRODUCCIÓN
La cuantificación de proteínas es un proceso fundamental en biología molecular y
bioquímica, ya que permite medir la concentración de proteínas en una muestra.
Esto es esencial para diversas aplicaciones, como el estudio de funciones celulares, la
caracterización de biomoléculas, y el desarrollo de tratamientos en investigación
médica y farmacéutica. La cuantificación de proteínas es el proceso de medir la
concentración de proteínas en una muestra. Es una técnica esencial en biología
molecular, bioquímica y biotecnología, ya que permite evaluar la cantidad de proteína
presente, lo cual es crucial para diversas aplicaciones como: Investigación básica: Para
entender funciones celulares y procesos biológicos.
Desarrollo de fármacos: Para evaluar la eficacia de compuestos en la modulación de
proteínas específicas.
Diagnóstico clínico: En la medición de biomarcadores asociados a enfermedades.
2. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
➢ Determinar proteínas presentes en los fluidos biológicos.
➢ Cuantificar el nivel de proteínas presentes en la orina y suero sanguíneo
➢ Identificar las patologías que se pueden desarrollar cuando hay exceso y deficiencia de
proteínas en el cuerpo humano.
➢ Asociar los resultados de la determinación de proteínas totales con los estados
patológicos asociados con el metabolismo de los aminoácidos y las proteínas
3. MATERIALES Y REACTIVOS
➢ Tubos de ensayo pequeños y sin ➢ Beacker de 250 mL (2)
tapa (4) ➢ Orina *
➢ Gradilla ➢ Agua
➢ Micropipeta 100-1000 uL ➢ Suero sanguíneo/plasma
➢ Puntas azules ➢ Kit de proteína total Byosistems
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
4. PROCEDIMIENTO
Análisis cuantitativo de proteína
El kit está compuesto por los siguientes reactivos:
Reactivo de Biuret, viene listo para su uso, pero se debe dejar reposar hasta temperatura
ambiente antes de ser utilizado. Sus componentes son: Tartrato sódico de potasio, sulfato
cúprico, Hidróxido de sodio, yoduro de potasio y un agente tensoactivo.
Patrón, que es albúmina bovina y viene listo para su utilización. El patrón es el control
positivo del ensayo.
Preparación de la muestra
➢ Tomar cuatro (4) tubos de ensayo y marcarlos como 1, 2, 3 y 4
➢ Luego, realizar el procedimiento cómo se indica en la figura 1.
➢ Llevar al espectrofotómetro y leer a 545 nm.
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
Figura 1: Análisis cuantitativo de proteínas
5. CUESTIONARIO
a. Anota los resultados y aplique la fórmula para la determinación de concentración de la
muestra.
muestra=Abs muestraAbs patrón ×[ ] patrón 
Valor de referencia: Ir al inserto del kit la concentración del patrón vienen expresadas en el
inserto del kit utilizado.
¿Qué resultados obtuviste?
0,073
69,6g/Lx102,05Gg/L
¿Es normal? SI_______ NO _______x_ Justifica tu respuesta
Como resultado en la muestra tomada, hubo exceso de proteína.
➢ ¿Cuál es la proteína más proporción en el suero?
La albúmina es la proteína de más concentración en la sangre. La albúmina
representa el 60% de las proteínas que contiene el suero, el resto son las globulinas.
Globulinas: Las globulinas se pueden dividir en alfa-1, alfa-2, beta y gamma
globulinas
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
➢ ¿Es normal hallar proteínas en una orina y por qué?
No es normal encontrar proteínas en la orina en cantidades significativas. La orina
generalmente no contiene proteínas porque los riñones, al filtrar la sangre, retienen las
proteínas necesarias y permiten que los desechos y el exceso de líquidos
La presencia de proteínas en la orina es un indicador de daño en los riñones y puede ser
una señal de enfermedades renales o sistémicas. Su detección es importante clínicamente,
ya que permite evaluar la función renal y detectar posibles problemas de salud.
Cite tres casos donde se permite hipoproteinemia
Durante el embarazo, especialmente en el tercer trimestre, es común observar una
disminución de los niveles de albúmina debido a la dilución de la sangre por el aumento
del volumen plasmático. Este fenómeno es fisiológico y, en ausencia de otras
complicaciones como la preeclampsia, no suele ser preocupante.
Desnutrición moderada en recuperación:
En personas que están en recuperación de desnutrición o en pacientes posquirúrgicos
que han pasado por periodos de alimentación insuficiente, es común observar
hipoproteinemia transitoria. Con el tiempo y la mejora del estado nutricional, los niveles
de proteínas suelen normalizarse.
Enfermedad hepática crónica compensada:
Pacientes con enfermedades hepáticas crónicas, como la cirrosis en fases tempranas o
compensadas, pueden presentar niveles bajos de proteínas plasmáticas, especialmente
albúmina. Mientras no existan signos de descompensación hepática (como ascitis o
encefalopatía hepática), la hipoproteinemia puede ser manejada clínicamente.
¿A que hace referencia la proteinuria
Las proteínas en la orina (lo que también se denomina proteinuria) es el exceso de
proteínas sanguíneas en la orina. La proteína es una de las sustancias que se determina
en una prueba de laboratorio para analizar el contenido de la orina (análisis de orina).
El término proteinuria se usa en ocasiones de manera intercambiable con el término
albuminuria, pero tienen significados algo distintos. La albúmina es el tipo más común de
proteína que circula en la sangre. Algunos análisis de orina solo detectan el exceso de
albúmina en la orina. El exceso de albúmina en la orina se denomina albuminuria. La
proteinuria se refiere al exceso de diversas proteínas sanguíneas en la orina.
Los niveles bajos de proteína en la orina son normales. Los niveles altos de proteína en la
orina tampoco son poco inusuales si son temporales, en especial en los jóvenes después
de hacer ejercicio o durante el transcurso de una enfermedad.
Tener niveles elevados de proteína en la orina de forma persistente puede ser un signo de
enfermedad renal.
¿La deficiencia de proteínas en la dieta alteraría la división celular? Explique su
respuesta.
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
Sí, la deficiencia de proteínas en la dieta puede alterar la división celular.
Las proteínas son fundamentales para muchos procesos biológicos esenciales, incluyendo la
división celular, que requiere una serie de componentes que dependen de la presencia
adecuada de proteínas.
Síntesis de ADN y ARN: Durante la división celular, el ADN debe replicarse, y la transcripción
del ADN a ARN también es fundamental. Las enzimas involucradas en estos procesos, como la
ADN polimerasa y la ARN polimerasa, son proteínas. Si la dieta no provee suficientes
proteínas, la producción de estas enzimas puede verse comprometida, afectando la
replicación del ADN.
Formación del huso mitótico: Durante la mitosis, la correcta segregación de los cromosomas
requiere la formación del huso mitótico, compuesto por proteínas como la tubulina. Una
deficiencia en proteínas puede impedir la formación adecuada de estos componentes,
afectando la correcta distribución de los cromosomas.
Reparación celular: Las proteínas también son importantes para la reparación del ADN y la
regulación de puntos de control durante el ciclo celular. Si no hay suficientes proteínas
disponibles, las células pueden no reparar correctamente los daños en el ADN, lo que puede
llevar a errores en la división celular o incluso a la apoptosis (muerte celular programada).
Producción de aminoácidos esenciales: La disponibilidad de proteínas en la dieta afecta la
cantidad de aminoácidos disponibles en el cuerpo, que son los bloques de construcción de
nuevas proteínas. Sin suficientes aminoácidos, las células no pueden sintetizar las proteínas
necesarias para la división celular, incluyendo factores de crecimiento y señalización que
regulan este proceso.
¿Qué otros reactivos diferentes al Biuret se emplean para determinar proteínas
Existen varios reactivos además del Biuret que se utilizan para determinar proteínas.
Método de Lowry: Este método es muy sensible y se basa en la reacción de las proteínas con el
reactivo de Folin-Ciocalteu, produciendo un color azul que se mide espectrofotométricamente1.
1. Ácido bicinconínico (BCA): Este método es similar al de Lowry, pero utiliza el reactivo BCA
que forma un complejo púrpura con las proteínas en presencia de iones cúpricos1.
2. Método de Bradford: Utiliza el colorante Coomassie Brilliant Blue G-250, que se une a las
proteínas y cambia de color de marrón a azul, permitiendo la cuantificación mediante
espectrofotometría1.
3. Espectrometría de masas: Aunque es más complejo y costoso, este método permite
identificar y cuantificar proteínas con gran precisión2.
4. Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE): Este método separa las proteínas según
su tamaño y permite su cuantificación mediante tinción con plata o azul de Coomassie3.
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
Cada uno de estos métodos tiene sus ventajas y limitaciones, por lo que la elección del
reactivo depende del tipo de muestra y del nivel de sensibilidad requerido.
6. CONCLUSIONES
1. La cuantificación de proteínas es fundamental para entender funciones celulares y procesos
biológicos, proporcionando información clave en la investigación básica y aplicada.
2. En el desarrollo de fármacos, esta técnica es esencial para evaluar cómo los compuestos
afectan a proteínas específicas, ayudando a optimizar tratamientos más efectivos.
3. En el ámbito clínico, la medición de proteínas permite el diagnóstico temprano y el
seguimiento de enfermedades, lo que es crucial para una intervención médica oportuna.
4. Además de su relevancia en investigación y medicina, la cuantificación de proteínas
también juega un papel importante en biotecnología, donde se utiliza para optimizar procesos
industriales como la producción de enzimas, vacunas y otros productos
biológicos a gran escala.
7. BIBLIOGRAFIAS.
Aroda V, Edelstein S, et al. Protein quantification methods: an overview. Biochem J.
2020;477(1):1-16.
Bensadoun A, Weinstein J. Assay of proteins in the presence of detergents. Anal Biochem.
1976;70(1):241-250.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol
reagent. J Biol Chem. 1951;193(1):265-275.
4. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities
of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72(1-2):248-
254.
5. Gornall AG, Bardawill CJ, David MM. Determination of serum proteins by means of the
biuret reaction. J Biol Chem. 1949;177(2):751-766.
6. Pettersen EF, Goddard TD, Huang CC, et al. UCSF Chimera--a visualization system for
exploratory research and analysis. J Comput Chem. 2004;25(13):1605-1612.
7. Wilkins MR, Gasteiger E, Bairoch A, et al. Protein identification and analysis tools in the
ExPASy server. Methods Mol Biol. 1999; 112:531-552.
8. Schagger H, von Jagow G. Tricine-SDS-PAGE for the separation of proteins in the range of 1
to 100 kDa. Anal Biochem. 1987;166(2):368-379
9. Bligh EG, Dyer WJ. A rapid method of total lipid extraction and purification. Can J Biochem
Physiol. 1959;37(8):911-917.
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
10. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of
bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-685.
11. Timmons P, et al. Protein assays in molecular biology. Biotechniques. 1998;25(3):520-
532.
12. Fiske CH, Subbarow Y. The colorimetric determination of phosphorus. J Biol Chem.
1925;66(2):375-400.
13. Yang Y, Li Y, Zhang Y, et al. Quantitative determination of total protein in serum and
plasma using the BCATM protein assay. Clin Chem. 2011;57(10):1361-1365.
Elaborado por: David Torres y Katia Pertuz
