Agar Lisina
Purpura: positivo
1. Agar Lisina Descarboxilasa (K/K alcalino)
• Fundamento teórico: Esta prueba evalúa la capacidad de una bacteria para
descarboxilar el aminoácido lisina mediante la producción de la enzima lisina
descarboxilasa. Cuando el microrganismo tiene esta capacidad, produce cadaverina,
que aumenta el pH y genera un cambio de color en el medio. El medio contiene
glucosa, que inicialmente acidifica el entorno, lo que provoca un cambio de color
amarillo, pero si la lisina es descarboxilada, el medio vuelve a ser alcalino y el color
cambia a púrpura.
• Vías metabólicas: La enzima lisina descarboxilasa cataliza la descarboxilación de la
lisina, removiendo el grupo carboxilo (-COOH) y produciendo cadaverina, una amina
básica. Esta reacción ocurre en condiciones anaeróbicas inducidas en el medio por
la fermentación inicial de glucosa, que acidifica el entorno.
FUNDAMENTO En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina es el
sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de
hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El
purpura de bromocresol, es el indicador de pH (su color es amarillo a pH igual o menor a 5.2 y violeta
a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el agente solidificante.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y provocan el viraje del color
púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y se
metaboliza la lisina a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura
o violeta. Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo. A las 24
horas de incubación se observa el fondo del tubo color amarillo y la superficie de color violeta debido
al consumo de las peptonas que producen alcalinidad. La generación de sulfuro de hidrógeno, se
visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Las cepas de
los géneros Proteus, Providencia y algunas de Morganella, desaminan la lisina. Esto produce un
ácido alfa-ceto-carbónico, el cual con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color
rojizo en la superficie del medio.
2. Prueba de Agar Citrato de Simmons
• Fundamento teórico: Evalúa si la bacteria es capaz de utilizar el citrato como única
fuente de carbono y energía. Las bacterias que pueden hacerlo poseen la enzima
citrato-permeasa, que facilita la entrada de citrato a la célula, donde es metabolizado
a piruvato. Si la bacteria puede utilizar citrato, produce amoníaco, lo que aumenta el
pH del medio, cambiando el color del indicador (verde a azul).
• Vías metabólicas: El citrato no pudo ser utilizado como fuente de carbono en
condiciones anaeróbicas, por lo que esta prueba resulta negativa. Esto significa que
no posee una vía metabólica efectiva para el uso de citrato como única fuente de
carbono por lo cual debe utilizar principalmente de la glucólisis, el ciclo de Krebs y
la fosforilación oxidativa para producir energía de fuentes como la glucosa, y otras
moléculas simples como lactosa o galactosa. Además, la vía de las pentosas fosfato
es crucial para generar poder reductor (NADPH) y precursores biosintéticos.
FUNDAMENTO En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el
citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor
enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador
de pH, que vira al color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como
única fuente de carbono usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente
producción de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras
de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen
a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato
permeasa.
3. Prueba de Indol
• Fundamento teórico: Esta prueba se basa en la capacidad de las bacterias para
descomponer el triptófano en indol mediante la acción de la enzima triptofanasa. El
indol es detectado mediante la adición de un reactivo de Kovac, que reacciona con el
indol para formar un compuesto de color rosado.
• Vías metabólicas: En E. coli, la vía metabólica involucrada es la degradación del
triptófano a indol, piruvato y amoníaco mediante la acción de la enzima triptofanasa.
FUNDAMENTO La prueba de indol es un ensayo cualitativo utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la capacidad para separar indol a partir de L-triptofano.
Es necesario el crecimiento previo del microorganismo en estudio en medios de cultivo con alto
contenido de L-triptofano, como ser los medios semisólidos SIM Medio ( ) y MIO Medio ( ) o el medio
líquido Agua Triptona ( ). Al agregar el reactivo de Ehrlich al medio de cultivo, el indol generado se
combina con el grupo aldehído del p-dimetilamino benzaldehido del reactivo incorporado y se forma
un complejo de color rojo.
4. Prueba de Movilidad
• Fundamento teórico: Esta prueba evalúa si la bacteria es capaz de moverse en un
medio semisólido. E. coli es móvil gracias a la presencia de flagelos. Si la bacteria es
móvil, su crecimiento se extiende desde el sitio de inoculación hacia el medio
circundante, lo que indica que puede desplazarse.
• Vías metabólicas: Aunque la movilidad en sí misma no está directamente ligada a
una vía metabólica específica, está relacionada con el uso de energía (ATP) por parte
de las estructuras flagelares que impulsan el movimiento bacteriano.
FUNDAMENTO Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el
desarrollo microbiano.
El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente de la tripteína
y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un
conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del
reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo REF B1550361) o de Kovac´s, para originar un compuesto de color
rojo. A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que
reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de color negro. El agar es el agente
solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición
necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por
crecimiento que difunde mas allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.
