INMUNOLOGíA
UADE
FAIN
DEBAL
Microbiología General
1
BIBLIOGRAFÍA
Tortora G., Funke B., Case C. Introducción a la microbiología;
Zaragoza :Acribia, 1993. 3° Ed. Código de Biblioteca: 576.8/T714/
Capítulo 15 (Defensas inespecíficas del huesped):hasta pág. 402
(mecanismo de fagocitosis ya no).
Capítulo 16 (Defensas específicas del huesped): pág. 415 hasta pág. 426
(anticuerpos monoclonales).
Capítulo 17 (Aplicaciones de la inmunología) : hasta pág. 449 (técnica
ELISAinclusive).
9° Ed. Bs. As. Ed. Médica Panamericana, 2007
Capítulo 16 Inmunidad innnata: defensas inespecíficas del huésped:hasta
pág. 482 (fagocitosis ya no).
Capítulo 17 Inmunidad adquirida: defensas específicas del huésped: hasta
pág. 511 (linfocitos T e inmunidad celular).
Capítulo 18 Aplicaciones prácticas de la inmunología: completo en
figura 18.14.b (elisa indirecto paso 1).
Ver edición 12 – 2017.
Madigan M., Martinko J., Parker J. Brock, Biología de los
microorganismos, desde 8a ed. Código Biblioteca: 579 MAD BRO 8A
1998. Cap. 20 y 21 – 12°Ed.: Unidad 7: cap. 29 a 32 2
TEMARIO
Inmunología – Tipos de inmunidad
Antígenos y Anticuerpos
Aplicaciones prácticas de la inmunología:
- Vacunas
- Técnicas inmunodiagnósticas: reacciones de
precipitación, aglutinación, ELISA,
inmunofluorescencia.
3
Mecanismos de patogenicidad …
a evitar a través del sistema inmune …
4
Inmunología
Rama de la Biología, que estudia los mecanismos de defensa de los organismos
superiores, frente a microorganismos patógenos y a estructuras moleculares que
no son reconocidas como propias.
• Sistema inmunitario: Células y moléculas responsables de la inmunidad
RESPUESTA COORDINADA Y GLOBAL A LA INTRODUCCIÓN DE SUSTANCIAS
EXTRAÑAS
RESPUESTA INMUNE
Respuesta desencadenada por la presencia en el organismo de agentes extraños o
antígenos encaminada a neutralizarlos o destruirlos
• Distingue lo PROPIO de lo AJENO (normalmente).
• Conjunto de procesos muy complejos en los que participan varios tipos de células y
sustancias, y las relaciones entre ellos.
• Se desencadena por:
• Invasión microorganismos patógenos,
• introducción de sustancias extrañas al organismo (heterólogo)
• introducción de sustancias extrañas ligadas a células de tipo homólogo (injertos, trasplantes)
• sustancias propias reconocidas como extrañas (enfermedad autoinmunes)
Inmunología
Rama de la Biología, que estudia los mecanismos de defensa de los
organismos superiores, frente a microorganismos patógenos y a
estructuras moleculares que no son reconocidas como propias.
Inmunidad innata Inmunidad adquirida (defensa específica)
(defensa inespecífica) 3° línea de defensa (linfocitos T y B - anticuerpos)
1° Línea de 2° Línea de
defensa defensa
Piel Leucocitos
Mucosas fagocíticos
Microbiota Inflamación
normal Fiebre
Sustancias
antimicrobia
nas
6
Mecanismos de defensas inespecíficos
1° barrera
Microbiota
intestinal
2° barrera
Sangre: Plasma - Elementos corpusculares
Plaquetas - glóbulos rojos – glóbulos blancos (leucocitos)
GRANULOCITOS: neutrófilos-basófilos-eosinófilos
AGRANULOCITOS: monocitos – células dendríticas - linfocitos
7
8
9
Inmunología
Rama de la Biología, que estudia los mecanismos de defensa de los
organismos superiores, frente a microorganismos patógenos y a
estructuras moleculares que no son reconocidas como propias.
Inmunidad innata Inmunidad adquirida (defensa específica)
(defensa inespecífica) 3° línea de defensa (linfocitos T y B - anticuerpos)
1° Línea de 2° Línea de ACTIVA PASIVA
defensa defensa El individuo genera linfocitos Los Ac se generan en otro
especializados y anticuerpos (Ac) organismo
Piel Leucocitos Natural Artificial Natural Artificial
Mucosas fagocíticos
Microbiota Inflamación Soportar Inducida Ac de Ac se
normal Fiebre con éxito mediante madre a obtienen a
Sustancias una vacunas hijo partir del
antimicrobia infección (moo o (placenta – suero de
nas toxinas calostro) persona o
inactivados) animal
inmunizado
10
Inmunidad
adquirida
(específica,
adaptativa)
Humoral
Celular
11
Biología ANTIGENO
Toda sustancia ajena al organismo capaz de desencadenar la respuesta inmune de
generación de anticuerpos
La región inmunológicamente activa de un antígeno (por donde se une al Ac) se
denomina determinante antigénico o epítopo.
Antígenos
Adaptado de Bueno R., s.f.
CONCEPTO Y NATURALEZA DE LOS ANTÍGENOS
• Antígeno= cualquier sustancia que es reconocida como
extraña y que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria.
• Macromoléculas
– Naturaleza Proteica (unidos a glúcidos o lípidos)
Polisacáridos complejos
Libres - Membrana plasmática
– Estado Forman parte de - Glicocalix
estructuras biológicas - Flagelos (flagelina) – fimbrias (pilina)
- Pared y cápsula bacteriana
- Cápsida y envuelta viral
• Haptenos= sustancias de bajo PM no inmunogénicas, que pero
unidas a ciertas proteínas portadoras, activan a las células
productoras de Ac. Ej.: Penicilina
LOCALIZACIÓN DE ANTÍGENOS DE
Salmonella spp.
Esquema de Kaufmann-White
Cápsula
Ag Vi
Pared
celular
ADN
Ag somático O
Flagelo bacteriano
Ag flagelar H
Biología ESTRUCTURADEANTICUERPOS
Proteínas globulares: Inmunoglobulinas (Ig)
Región variable
Sitio de unión al
antígeno
(parátopo), se
puede unir al
menos a dos
moléculas de un
mismo antígeno.
Dos cadenas L (ligeras)
Región constante, más cortas y también
integrada por el tallo y una idénticas entre sí.
parte de ambas ramas.
Dos cadenas H (pesadas)
iguales entre sí, y de gran
tamaño.
Adaptado de Bueno R., s.f.
Biología
2.º Bachillerato TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS
Tipos de anticuerpos
En mamíferos, 5 tipos (según cadenas H): G-D-E-A-M
- + abundantes
- 1° defensas del
recién nacido.
Son las primeras
Secreciones que se forman
Alergias como respuesta a
(Calostro)
Mucosas un antígeno.
Adaptado de Bueno R., s.f.
Linfocitos B y generación de anticuerpos
Adaptado de Bueno R., s.f.
Linfocito B
activado
2. Esta unión 3. Plasmocitos (cél. plasmáticas):
estimula y activa en ganglios linfáticos; producen los
1. Cuando un antígeno anticuerpos que salen de los ganglios.
penetra en el organismo, al linfocito, que
Células de memoria: en la sangre y
acaba por encontrar al prolifera
rápidamente fabrican pequeñas cantidades de
linfocito que muestra en su anticuerpos durante mucho tiempo
superficie el anticuerpo con generando dos
estirpes celulares. después de superada la infección.
el que se puede acoplar.
Biología ANTIGENO
Toda sustancia ajena al organismo capaz de desencadenar la respuesta inmune de
generación de anticuerpos.
Anticuerpos
Proteínas globulares producidas por linfocitos B que reconocen en forma específica
epítopos (determinantes antigénicos) localizados en antígenos.
Adaptado de Bueno R., s.f.
Reacciones Antígeno-Anticuerpo
19
20
Reacciones Antígeno-Anticuerpo
Útiles por su aplicación práctica
Vacunación - Diagnóstico
Anticuerpos en suero sanguíneo
Antisuero
Serología
Detección de antígenos (bacteria) en muestras
Detección de anticuerpos en suero sanguíneo
Precipitación Inmunomarcación
Aglutinación Neutralización
21
Reacciones Antígeno-Anticuerpo
•Precipitación. Cuando se unen antígenos solubles con varios
determinantes anticuerpos solubles forman un precipitado insolubles.
•Aglutinación (directa o indirecta). Los anticuerpos se unen a antígenos
presentes en la superficie de ciertas células (microorganismos, «antígenos
particulados»). Se forman así aglomerados de células. Antígenos
«aglutinógenos» y anticuerpos «aglutininas».
•Inmunomarcación. Se une los anticuerpos a determinadas moléculas
(enzimas, fluoróforos, isotopos radioactivos, etc.), que permiten evidenciar la
presencia del anticuerpo sobre un antígeno.
•Neutralización. La unión del anticuerpo al antígeno provoca
que éste no pueda realizar alguna función o actividad vital
(se bloquea la acción).
22
Caso SARS-CoV2
Bloqueo de sitio de proteína S (envuelta del virus) que se une al receptor celular
ACE2
El virus no se puede unir a la célula, por lo tanto es neutralizado
23
Anticuerpos monoclonales
Son anticuerpos producidos en el laboratorio
por cultivo de un clon celular que produce un
anticuerpo específico.
Obtención
1. Inmunización de animales contra el antígeno para el que se
desea producir anticuerpos. Linfocitos B específicos
2. Aislamiento y fusión de los linfocitos con células de mieloma
formando hibridomas
3. Selección de aquellos hibridomas que sean productores de las
inmunoglobulinas específicas deseadas
4. Clonación
Quintana, 2015
Células
productoras
deAc que se
mantienen
por cultivo
celular y
producen
gran
cantidad de
Ac puro
Quintana, 2015
Obtención de Anticuerpos Monoclonales
[Link]
Técnicas inmunodiagnósticas basadas en
inmunomarcación
ENZIMAS
ELISA
Directa (detección de antígeno)
Indirecta (detección de anticuerpo)
[Link]
FLUORÓFOROS
INMUNOFLUORESCENCIA
Directa (detección de antígeno)
Indirecta (detección de anticuerpo) 26
TEST ELISA
(“Enzyme linked immunoabsorbent assay”)
Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas
Inmunomarcación enzimática
Barato,preciso, rápido.
CUALITATIVO - CUANTITATIVO
Utiliza placas polipropileno (se adhieren firmemente las proteinas).
Directa e indirecta
Directa (sandwich) para detectar antígenos
1) Se coloca antisuero con anticuerpos primero en los pocillos
2) Se agrega los antígenos (bacterias que se aislaron, por ejemplo)
Si la bacteria se reconoce con anticuerpo (a través de los determinantes), se fijará al
anticuerpo
3) Lavado con buffer para eliminar el exceso de antígeno que no se ha fijado
4) Se agrega otro anticuerpo específico para el microorganismo ligado a una
enzima (peroxidasa, beta galactosidasa, fosfatasa alcalina)
5) Lavado que elimina el exceso de anticuerpos ligados a enzimas que no fueron fijados
6) Agregado de sustrato de la enzima: enzima actúa sobre sustrato y se produce
coloración positiva. Se puede medir intensidad de color 27
Detección de enterotoxinas de S. aureus
TEST ELISA
(“Enzyme linked immunoabsorbent assay”)
Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas
Etapa I: Adición de la Etapa II: Formación de Etapa III: Visualización
muestra “sandwich” de punto final (color)
-P. de microtitulación + - Anticuerpo específico -Sustrato químico +
anticuerpos específicos S. aureus conjugado complejo enzima-
S. aureus con enzima anticuerpo-antígeno
- Muestra (antígeno) - Complejo “sandwich” - COLOR 28
Fuente imágenes: TECRA®
ELISA DIRECTO para detectar probable verotoxina de
E. coli O157:H7
1(ABC) 3(ABC) 2(A) 2(B) 4(ABC) 2(C)
29
+ ? -
Test de embarazo: detección de la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG)
orina prueba control
30
ELISA Indirecto
(para detectar HIV en pacientes: se detecta anticuerpos)
1) Se coloca el antígeno pegado al pocillo (estructuras que tiene el virus, que
ha sido lisado)
2) Se agrega el suero del paciente (que puede tener anticuerpos si estuvo en
contacto con HIV, que quedarán fijados al antígeno)
3) Lavado con buffer para eliminar el exceso de suero que no se ha fijado
4) Agregar gammaglobulina antisuero humana ligada a una enzima
(peroxidasa, beta galactosidasa, fosfatasa alcalina)- reconoce al anticuerpo
como antígeno.
5) Lavado que elimina el exceso de gamma ligados a enzimas que no fueron
fijados
6) Agregado de sustrato de la enzima: enzima actúa sobre sustrato y
se produce coloración positiva. Se puede medir intensidad de color
31
ELISA INDIRECTO
Lavado Lavado Lavado
ANTÍGENO Suero ANTIGLOBULINA
adsorbido PROBLEMA marcada con SUSTRATO de la
(reactivo) enzima (reactivo)
ENZIMA (reactivo)
Detección de ANTICUERPOS CAMBIO DE COLOR
FV, UNL, 2008
INMUNOFLUORESCENCIA
(Inmunomarcación)
• Identificar microorganismos (Ag: directa) en muestras
o anticuerpos específicos en suero (Ac: indirecta)
usando colorantes fluorescentes como marcadores.
I. directa I.
indirecta
¿? ¿?
• Microscopio de luz UV. - Cualitativo
COLORANTE UTILIZADO: ISOTIOCIANATO DE FLUORESCEÍNA (FITC)
DIRECTA INDIRECTA
▪ RABIA ▪ CLOSTRIDIUM ▪ RABIA
▪ CAMPYLOBACTER ▪ MICOBACTERIUM ▪ Virales respiratorias
▪ LISTERIA ▪Sífilis (Treponema pallidum)
FV, UNL, 2008
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (Detectar antígeno)
1. Microorganismo 3. Anticuerpo
(Ag desconocido conjugado con FITC 5. OBSERVACIÓN
(reactivo)
problema) Microscopio
fondo oscuro-Luz
UV
Incubación
2. Fijado
4. Lavado
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (Detectar Anticuerpo)
4. Antiglobulina 6. OBSERVACIÓN
2. Suero problema (anticuerpo??) conjugada con FITC
Microscopio fondo
(reactivo)
oscuro-Luz UV
1. Extendido de 3. Lavado
cultivo celular 5. Lavado FV, UNL, 2008
