INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS ACADEMIA DE MICROBIOLOGÍA
Profesores de laboratorio: QBP. Miriam Juárez Juárez, M.en E. Elsa Mijangos Espriella
Nombre del alumno: Bryan Alexis Vazquez Corona EQUIPO: 2
No. y Título de la Práctica: 4 Cultivo y Fecha: 21/10/24 Grupo: 3AM1 Semestre: 25-1 Lab. Microbiología Ambiental
Aislamiento
Practica No. 4
Cultivo y Aislamiento
Objetivo general
Aislar, contar y describir la morfología colonial de microorganismos
procariotas obtenidos de dos diferentes tipos de muestras (líquidas
y sólidas) y aplicar diferentes técnicas de cultivo.
Objetivos específicos
Aislar microorganismos procariotas por la técnica de estría
cruzada, diluciones decimales con sus variantes: vaciado en placa
y extensión con varilla de vidrio.
Cuantificar los microorganismos aislados con base a los criterios
establecidos en la NOM-092-SSA1-1994.
Describir la morfología de tres colonias aisladas.
Cultivar los microorganismos aislados por la técnica de estría
simple, punto, botón, estría masiva y picadura.
Resultados
Tabla1. Resultados obtenidos del conteo de cada muestra
Vaciado en placa Extensión con varilla
Equipo Muestra (UFC/mL o G) (UFC/mL o G)
Dilución 1 Dilución 1 Dilución 1 Dilución 2
1 Suelo 10
−4
10
−5
10
−4
10
−5
(compost
a) 585 2470 0 0
650 2590 0 0
2 Lechuga Incontable Incontabl −1
1 0 −0 10
−3
e
1300
−2
1 0 −780
1690
3 Agua Incontable Incontabl Directa Directa
purificad e
2275 1755
a
4 Suelo 10
−4
10
−5
10
−4
10
−5
(compost
a) 1300 455 0 0
1105 325 2 1
Figura
Figura 1.
4. Estría por puntos
Escherichia coli Figura 5.
Figura 2. Mohos
Estría por puntos
cultivados Figura
Figura 6. Escherichia
3. Estría masiva coli
de sembrado en PDA y en AN
cultivado en CN y en 3
mohos del equipo CGS de mohos del
en CN y en CGS equipo 2
Figura 7. Mohos sembrados Figura 8. Estría simple con
en PDA y en AN Escherichia coli
Cuestionario
1. Realizar un esquema del aislamiento de un microorganismo a
partir de una muestra del medioambiente
2. ¿Qué es un cultivo axénico o puro?
Se denomina cultivo puro o axénico al que contiene sólo un tipo de
microorganismo, éstos se inician a partir de colonias aisladas, de
manera que todos los individuos provengan del mismo linaje.
3. ¿Qué importancia tiene la obtención de un cultivo puro?
Los cultivos puros son esenciales para estudiar las características
metabólicas e identificarlos.
4. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de aislamiento por estría
cruzada?
El fundamento principal es diluir progresivamente la cantidad de
microorganismos presentes en una muestra, distribuyéndolos en la
superficie de un medio de cultivo sólido (generalmente agar).
5. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de aislamiento por vaciado
en placa?
El fundamento principal es la mezcla de una muestra diluida de
microorganismos con agar derretido y su posterior solidificación, lo
que permite la distribución uniforme de los microorganismos en toda
la placa.
6. ¿En qué casos se utiliza la técnica de extensión con varilla?
Se utiliza en la cuantificación de microorganismos, aislamiento de
microorganismos y recuperación de microorganismos de superficies.
7. ¿Para qué se hacen las diluciones? ¿Es posible sembrar una
muestra en forma directa?
Las diluciones en microbiología se realizan con el objetivo de reducir
la concentración de microorganismos en una muestra para que sea
posible contar o aislar colonias individuales de manera más precisa y
eficiente.
Sí es posible sembrar una muestra de forma directa, pero depende de
la concentración de microorganismos en la muestra original.
Discusión y análisis de resultados
Equipo 1, muestra de suelo
585+650=1235
(1235
2 )( ) 1
10
−4
5
=62 x 1 0 UFC /mL
5
62 x 1 0 UFC/mL valor estimado de mohos y levaduras en agar citrato
Simmons incubados a 37°C durante 48 horas mediante la técnica de
vaciado en placa.
Equipo 2, muestra de lechuga
1300+1690=2990
(2990
2 )( ) 1
10
−3
5
=15 x 1 0 UFC /mL
5
15 x 1 0 UFC/mL valor estimado de mohos y levaduras en agar citrato
Simmons incubados a 37°C durante 48 horas mediante la técnica de
extensión con varilla.
Equipo 3, muestra de agua purificada
2275+1755=4030
(4030
2 ) ( 10 )=20 x 1 03 UFC /mL
3
20 x 1 0 UFC/mL valor estimado de mohos y levaduras en agar citrato
Simmons incubados a 37°C durante 48 horas mediante la técnica de
extensión con varilla.
Equipo 4, muestra de suelo
455+325=780
( 7802 )( 1 01 )=39 x 1 0 UFC /mL
−5
6
6
39 x 1 0 UFC/mL valor estimado de mohos y levaduras en agar citrato
Simmons incubados a 37°C durante 48 horas mediante la técnica de
vaciado en placa.
Para la Figura 8 se describió y por su morfología y el moho utilizado es
Aspergillus
Forma = circular
Elevación = convexa
Bordes = entero
Consistencia = algodonoso
Color = negro y blanco
Para la Figura 8 se describió y por su morfología son bacterias de
Escherichia coli
Forma = circular
Elevación = umbilicada
Bordes = ondulada
Consistencia = suave
Color = Verde metálico
En la figura 4 se puede diferenciar el crecimiento de Escherichia coli en
caldo nutritivo y en caldo glucosa sales, el cual es más abundante en el
caldo glucosa-sales mientras que en la figura 5 el crecimiento de mohos
es mas abundante en el caldo nutritivo ya que los mohos crecen mejor
en caldo nutritivo que en caldo glucosa-sales porque el caldo nutritivo
contiene una variedad más rica y completa de nutrientes que satisfacen
mejor las necesidades metabólicas de los hongos, mientras que el caldo
glucosa-sales es más limitado en términos de nutrientes esenciales, lo
que restringe su crecimiento. Mientras que en Escherichia coli crece
mejor en caldo glucosa-sales porque este medio es más simple y le
proporciona glucosa, su fuente preferida de energía, en una forma
fácilmente accesible. En cambio, el caldo nutritivo contiene compuestos
complejos que requieren un mayor esfuerzo metabólico para
descomponer, lo que puede ralentizar el crecimiento.
Conclusión
La práctica demostró la importancia de seleccionar el medio de cultivo
adecuado según las necesidades nutricionales de los microorganismos.
Escherichia coli, como organismo que prefiere fuentes simples de
carbono, creció mejor en caldo glucosa-sales, mientras que los mohos,
con requerimientos más complejos, se desarrollaron más eficientemente
en caldo nutritivo. Además, las técnicas de aislamiento, como la estría
cruzada y el vaciado en placa, fueron fundamentales para obtener
colonias puras y permitir un análisis detallado del crecimiento
microbiano. Por último, las diluciones fueron cruciales para asegurar un
manejo adecuado de la carga microbiana, evitando el sobrecrecimiento
y facilitando un conteo preciso de los microorganismos presentes en las
muestras.
Referencias
Lozano, L. C., Ramírez, L. C. C., & Suárez, D. M. T. (2021). Las
bacterias, su nutrición y crecimiento: una mirada desde la
química. Nova, 19(36), 49-94.
Pérez Sánchez, R. (2019). MANUAL DE MICROBIOLOGÍA (2a ed.)
Sánchez, R. P. (2019). Manual de Microbiología (Segunda edición).
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