UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
Práctica N°07:
Determinación espectrofotométrica de Fe
AUTORA:
BEDON ALVA NOELIA CELESTE
EXPERIENCIA CURRICULAR:
ANÁLISIS INSTRUMENTAL
DOCENTE COORDINADOR:
CRUZ MONZÓN JOSÉ ALFREDO
TRUJILLO – PERÚ
2024
Práctica N°07:
Determinación de Fe por espectrofotometría molecular
I. Objetivos
• Cuantificar el Fe total de una muestra acuosa, utilizando la espectrofotometría.
• Evaluar la recta de calibrado obtenida para Fe total.
II. Fundamento teórico
La espectroscopía de absorción en el rango UV-Visible es una técnica común en
laboratorios de química y medicina, es útil para determinar la concentración de una
sustancia en una muestra. La técnica funciona midiendo cuánta luz pasa a través de
una muestra (transmitancia) o cuánta es absorbida (absorbancia) en un tubo o celda de
longitud conocida. La absorbancia de la muestra se relaciona con la cantidad de
sustancia presente de manera directa y sigue la ley de Beer. Para que una sustancia
absorba la radiación, la luz debe interactuar con las moléculas o átomos de una
muestra. En el caso de la luz UV-Visible, esto ocurre en longitudes de onda entre 180
y 780 nm (Torres Andrés, 2017).
Según la ley de Beer, la absorbancia es proporcional a la concentración de la muestra,
al ancho de la cubeta que la contiene y a un coeficiente de absortividad molar
específico de la sustancia. Al graficar estos elementos, se obtiene una curva de
calibración, que utiliza una ecuación para relacionar directamente la absorbancia con
la concentración de la muestra, lo que permite detectar y cuantificar compuestos en
una muestra, como los sulfatos en el agua (Cortéz, 2022).
𝐴 =𝐶∗𝜀∗𝐿
El hierro es uno de los metales más abundantes, su presencia en el agua provoca
precipitación y coloración no deseada. En cuanto a la salud, una exposición excesiva
al hierro puede causar conjuntivitis, coriorretinitis y retinitis. Además, si se llegase a
inhalar (en forma de vapor o polvos) grandes cantidades puede llevar al desarrollo de
siderosis. Este metal se puede encontrar en dos estados de oxidación con propiedades
totalmente diferentes: Fe (II) y Fe (III) (López & Rodríguez, 2018).
Para la determinación del hierro total es necesario que esté en forma de Fe+2. Esto
sucede gracias al ácido clorhídrico e hidroxilamina. El Fe+2 reacciona con un
compuesto llamado 1,10-fenantrolina, formando la ferroína, que tiene un color naranja
que varía según la cantidad de hierro total presente. El complejo resultante puede
absorber luz en el rango UV-Vis a una longitud de onda de 510 nm (Jiménez, 2017).
Según el Decreto Supremo N.° 004-2017-MINAM, los Estándares de Calidad
Ambiental (ECA) para el agua en Perú establecen límites máximos permitidos (LMP)
para diversos parámetros, incluido el hierro. Conocer y respetar estos límites es
esencial para proteger la salud pública y preservar la calidad del agua (Ministerio del
Ambiente, 2017).
Imagen 1.
Aguas superficiales destinadas a la producción de agua potable.
Nota. Datos del Decreto Supremo N° 004-2017-MINAM
III. Materiales y Reactivos
1. Preparación de 250 mL de Solución stock de Fierro:
Mezclar 5 mL de H2SO4 cc en 50 mL de agua destilada. Disolver en ella 0.1000 de
(NH4)2Fe(SO4)2.6H2O pureza 98.6%. Adicionar gota a gota KMnO4 0.1N hasta
color rosa débil. Diluir a 100 mL con agua destilada. La solución es teóricamente
de 140.5336 ppm Fe.
2. Solución de cloruro de hidroxilamonio (NH4ClO):
Pesar 2 g de la sal y aforar a10 mL con agua destilada. Sólo se conserva por 7 días.
3. Solución de cloruro 1,10-cloruro de fenantrolina (C12H9ClN2.H2O):
Pesar 0.125 g de la sal y llevar a 25 mL con agua destilada. Sólo conserva por 7
días.
4. Preparación de 250 mL de Ácido Sulfúrico 1M:
Tomar 13.5 mL H2SO4 cc (sp = 1.84; % = 98), y aforar a 250 ml con agua destilada.
5. Preparación de 100 mL de Buffer Acetato de Amonio - Ácido Acético Glacial:
Pesar 40g CH3COONH4 y adicionar 50 ml de CH3COOH glacial (sp = 1.06;
mínimo 96%), aforando a 100 mL con agua destilada.
6. Preparación de 100 mL de Buffer de Acetato de Sodio - Ácido Acético Glacial:
Pesar 27.40 g CH3COONa.3H2O y adicionarle 11.50 mL de CH3COOH glacial (sp
1.06 mínimo 96%), aforando a 100 mL con agua destilada.
7. Preparación de 50 mL de una Solución de ácido ascórbico al 10%:
Pesar 5 g de C6H8O6 y aforar a 50 mL con agua destilada.
8. Preparación de 100 mL de Solución de NaOH 2M:
Pesar 8 g de NaOH a aforar a 100 mL con agua destilada.
IV. Procedimiento
Preparación de recta de calibración de Fe:
1. Tomar 05 fiolas volumétricas de 50 mL, numerarlas y colocar en ellas:
0; 150; 300; 450 y 600 uL de la solución stock de Fe preparada con una
micropipeta.
2. Añadir agua destilada a c/u hasta aproximadamente 25 mL.
3. Colocar 2 mL de solución de CH3COONH4 – CH3COOH glacial.
4. Adicionar 1 mL de cloruro de hidroxilamonio.
5. Si se sospecha presencia de PO43- agregar 1 mL de ácido ascórbico.
6. Verificar un pH entre 3 y 4. De ser necesario ajustar con H2SO4 1M o NaOH 2M.
7. Adicionar 2 mL del reactivo cloruro de 1,10 Fenantrolina.
8. Aforar a la marca con agua destilada.
9. Dejar reaccionar durante 10 min. a oscuras.
10. Fijar la longitud de onda 510 nm correspondiente al Fe
11. Usando la fiola N° 1 (blanco) calibrar el espectrofotómetro a cero de absorbancia.
12. Proceder a leer la absorbancia de cada solución estándar.
13. Graficar la Abs vs [Fe] y obtener la ecuación de recta que cumple la Ley de Beer
Preparación y medición de la muestra:
1. La muestra debe ser incolora, fíltrela si es necesario con carbón activado para
quitarle la coloración o de lo contrario centrifugarla.
2. Colocar en una fiola de 50 mL una cantidad determinada de muestra (20 mL),
previamente tratada según el paso anterior.
3. Adicionar cada uno de los reactivos al igual que a las soluciones patrón.
4. Si la absorbancia estuviera fuera del rango de la curva de calibración, entonces se
debe tomar un volumen menor de muestra (o mayor si la absorbancia es muy
pequeña).
5. Con el valor de absorbancia determinar a partir de la curva de calibración la
concentración de Fe presente en la fiola, para luego multiplicar por el factor de
dilución de la muestra. De esta manera obtenemos las ppm Fe presentes en el agua
examen.
Para la presente marcha tenemos:
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎
= ∗
(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎) (𝑔𝑟á𝑓𝑖𝑐𝑎) 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 50
= ∗
(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎) (𝑔𝑟á𝑓𝑖𝑐𝑎) 20
V. Cálculos y Resultados
1. Determinar la [Fe] real para un peso real de 0.1756 g de (NH4)2Fe(SO4)2.6H2O del
98.6% de pureza, el cual finalmente fue aforado a 100 mL con agua destilada.
0.1756(0.986) 𝑔 (𝑁𝐻4 )2 𝐹𝑒(𝑆𝑂4 )2 ∙6𝐻𝑆 𝑂 55.85 𝑔 𝐹𝑒 103 𝑚𝑔 𝑆𝑂42−
[𝐹𝑒] = ∗ 391.85 𝑔 (𝑁𝐻 ∗
0.25 𝐿 4 )2 𝐹𝑒(𝑆𝑂4 )2 ∙6𝐻𝑆 𝑂 1 𝑔 𝑆𝑂42−
De donde:
[𝐹𝑒] = 98.7108 𝑝𝑝𝑚
2. Determine los volúmenes teóricos a tomar de la solución stock preparada. Complete
la tabla:
Tabla 1.
Datos para los volúmenes teóricos de la alícuotas de la solución stock.
mL a tomar µL a tomar
Std [Fe]final req. Aforar a (mL) [Fe]o
(sol. stock) (sol. stock)
1 0.00 50 98.7108 0.0000 0.0
2 0.25 50 98.7108 0.1266 126.6
3 0.50 50 98.7108 0.2533 253.3
4 0.75 50 98.7108 0.3799 379.9
5 1.20 50 98.7108 0.6078 607.8
C2 V2 C1 V1
Nota. Elaboración propia.
𝐶2 𝑉2 (0.00)(50)
Para Std 1: 𝑉1 = = = 0.0000 𝑚𝐿
𝐶1 98.7108
𝐶2 𝑉2 (0.25)(50)
Para Std 2: 𝑉1 = = = 0.1266 𝑚𝐿
𝐶1 98.7108
𝐶2 𝑉2 (0.50)(50)
Para Std 3: 𝑉1 = = = 0.2533𝑚𝐿
𝐶1 98.7108
𝐶2 𝑉2 (0.75)(50)
Para Std 4: 𝑉1 = = = 0.3799 𝑚𝐿
𝐶1 98.7108
𝐶2 𝑉2 (1.20)(50)
Para Std 5: 𝑉1 = = = 0.6078 𝑚𝐿
𝐶1 98.7108
3. Determinación real de las concentraciones usando valores ajustados de volumen.
Al trabajar con una micropipeta es recomendable ajustarlo en un solo volumen y
tomar la cantidad que necesitemos para cada fiola, esto es para evitar el margen de
error de la micropipeta. Entonces, tomaremos: 0, 150, 300, 450 y 600 µL; sin
embargo, los valores reales (medidos anteriormente) son diferentes.
Tabla 2.
Concentración final de Fe.
µL a tomar mL a tomar Aforar a
Std [Fe]o [Fe]final
(sol. stock) (sol. stock) (mL)
1 0.0 0.0000 98.7108 50 0.0000
2 147.7 0.1477 98.7108 50 0.2916
3 295.4 0.2954 98.7108 50 0.5832
4 443.1 0.4431 98.7108 50 0.8748
5 590.8 0.5908 98.7108 50 1.1664
V1 C1 V2 C2
Nota. Elaboración propia.
𝐶1 𝑉1 (98.7108)(0.0000)
Para Std 1: 𝐶2 = = = 0.0000 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
𝑉2 50
𝐶1 𝑉1 (98.7108)(0.1477)
Para Std 2: 𝐶2 = = = 0.2916 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
𝑉2 50
𝐶1 𝑉1 (98.7108)(0.2954)
Para Std 3: 𝐶2 = = = 0.5832 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
𝑉2 50
𝐶1 𝑉1 (98.7108)(0.4431)
Para Std 4: 𝐶2 = = = 0.8748 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
𝑉2 50
𝐶1 𝑉1 (98.7108)(0.5908)
Para Std 5: 𝐶2 = = = 1.1664 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
𝑉2 50
4. En base a las lecturas obtenidas para estándares y usando un volumen de muestra
de 20 mL determine la concentración real en la muestra problema.
Tabla 3.
Datos leídos en el espectrofotómetro.
Std ppm Fe Abs
1 0.0000 0.000
2 0.2916 0.020
3 0.5832 0.063
4 0.8748 0.125
5 1.1664 0.161
Muestra 0.012
Nota. Elaboración propia.
5. Construcción de recta de calibrado y determinación de concentración de Fe en la
muestra de agua problema.
Gráfica 1.
Recta de calibrado para sulfatos.
Nota. Elaboración propia
Sin embargo, debemos ajustar los puntos del gráfico y considerar los que creamos
convenientes. En este caso, tendremos en cuenta las absorbancias y [Fe] 2, 3 y 5.
Gráfica 2.
Recta modificada de calibrado para sulfatos.
Nota. Elaboración propia
Ahora determinamos las ppm de Fe presentes en el agua potable:
Tenemos:
𝐴𝑏𝑠. = 0.012
𝐴𝑏𝑠. = 0.1622(𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒) − 0.029
Entonces: 0.012 = 0.1622(𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒) − 0.029
0.012 + 0.029
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 =
0.1622
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 = 0.2528
Recordamos que:
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎
= ∗
(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎) (𝑔𝑟á𝑓𝑖𝑐𝑎) 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
50 𝑚𝐿
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 = 0.2528 ∗
20 𝑚𝐿
𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 = 0.632
VI. Conclusiones
• Se determinó la concentración total de hierro en la muestra, obteniendo un
valor de 0,632 mg/L mediante espectrofotometría molecular. Esto fue posible
al medir la absorbancia de la muestra y usar una curva de calibración para
convertirla en concentración de hierro. Comparado con los ECA de Perú, este
nivel supera el límite de 0,3 mg/L para aguas que pueden potabilizarse solo con
desinfección, pero se encuentra dentro del límite de 5 mg/L para aguas que
necesitan tratamiento avanzado y por debajo de 1 mg/L para tratamiento
convencional. Esto sugiere que, para ser potable, esta agua requeriría al menos
un tratamiento convencional.
• La ecuación de la recta de calibración obtenida para el hierro total fue 𝐴𝑏𝑠. =
0.1622(𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒) − 0.029, esto muestra una relación lineal sólida entre la
concentración de hierro y la absorbancia. La pendiente positiva indica que, a
mayor concentración, la absorbancia también aumenta, lo cual asegura una
cuantificación precisa y una sensibilidad adecuada en el rango medido.
VII. Referencias
Cortéz, J. (2022). Espectrofotometría uv-vis para la detección de metales en agua. 14.
https://doi.org/10.13140/RG.2.2.31957.09444
Jiménez, X. (2017). Validación de un método espectrofotométrico para la
determinación de hierro en muestras de agua procedentes de torres de
refrigeración y condensadores.
https://repositori.urv.cat/fourrepopublic/search/item/TFG%3A1356
López, E. P., & Rodríguez, D. C. A. (2018). Cuantificación por absorción atómica de
Cu, Fe y Zn en alcohol destilado y agua. Cuadernos de Investigación UNED,
10(2), 387-396. https://doi.org/10.22458/urj.v10i2.1998
Ministerio del Ambiente. (2017). Aprueban Estándares de Calidad Ambiental (ECA)
para Agua y establecen Disposiciones Complementarias | SINIA.
https://sinia.minam.gob.pe/normas/aprueban-estandares-calidad-ambiental-eca-
agua-establecen-disposiciones
Torres Andrés, A. (2017). Análisis de contaminantes en aguas residuales industriales
mediante espectrofotometría de absorción molecular y atómica.
https://riubu.ubu.es/handle/10259/4605
Anexos
Anexo 1.
Preparación de las muestras de la solución stock.
Nota. Elaboración propia.
Anexo 2.
Muestras de la solución stock y de agua para la lectura en el espectrofotómetro.
Nota. Elaboración propia.
Anexo 3.
Lectura de las soluciones stock en el espectrofotómetro.
Nota. Elaboración propia.
