Estudio Integrado de Técnicas Microbiológicas:
Preparación de Medios de Cultivo, Evaluación de
Superficies, Siembra por Estriado y Tinción de
Gram
Margarita Y. Juárez Velásquez. Carné 211068
Departamento de Química, Facultad de ingeniería, Universidad del Valle de Guatemala.
ABSTRACT: La experimentación llevada a cabo consistió en cuatro de las técnicas microbiológicas
básicas, entre ellas: la preparación de medios de cultivo, la evaluación de superficies, la siembra por
estriado y la tinción de Gram. En la primera parte logró la preparación de un medio de cultivo en
estado sólido, utilizando agar nutritivo, que permitió reflexionar sobre la importancia de los
nutrientes y el pH para el crecimiento bacteriano. Se prosiguió con la evaluación de superficies ya
sea desinfectadas y no desinfectadas con cloro, en donde se evidencio que reducía el crecimiento
bacteriano, pero no conllevaba a la eliminación de los mismos. A posterior el estriado permitió
aislar colonias individuales de bacterias, es conductual para la ampliación de estudio con las cepas
microbiológicas. Y la tinción de Gram permitió la correcta identificación de bacterias, en este caso
Gram positivas, al observar la morfología de cocos. Todas estas prácticas permitieron articular los
conceptos de crecimiento bacteriano, desinfectantes, aislamientos de colonias y clasificación de
bacterias apoyada en habilidades de laboratorio.
Palabras clave: Microbiología, Bacterias Gram positivas, Aislamiento de colonias, Desinfectantes,
Crecimiento bacteriano
Introducción selectivos, que varían en composición y
aplicación (Krikorian, 1991). Por
La microbiología es una disciplina consiguiente, la evaluación de
fundamental en el estudio de los superficies permite determinar la presencia y
microorganismos y su interacción con el cantidad de microorganismos en diferentes
entorno (UNIVERSITAT CARLEMANY, sustratos, lo que es vital para aplicaciones en
2023). En este contexto, la preparación salud pública, industria alimentaria y
adecuada de medios de cultivo, la evaluación biotecnología (Pérez et al., 2009).
de superficies, la siembra de
microorganismos por estriado y la tinción de Como seguimiento se puede realizar una
Gram son prácticas esenciales que permiten a siembra por estriado que facilita el
los investigadores explorar la diversidad aislamiento de colonias puras, que permite
microbiana y comprender sus características. estudiar características específicas de cepas
Estas cuatro técnicas no solo están microbianas (Cruz et al., 2010). Finalmente,
interconectadas, sino que también forman la la tinción de Gram es un procedimiento
base para el aislamiento y la identificación de fundamental en microbiología que clasifica a
microorganismos en diversos entornos. las bacterias en dos grandes grupos: Gram
positivas y Gram negativas, basado en las
La preparación de medios de cultivo es el características de su pared celular. Esta
primer paso crucial en el proceso, ya que técnica no solo ayuda en la identificación
proporciona el ambiente nutricional necesario inicial de los microorganismos, sino que
para el crecimiento microbiano. Este implica también proporciona información sobre su
la formulación adecuada de sustratos que estructura y posible respuesta a tratamientos
proporcionen los nutrientes necesarios para el antimicrobianos (Godínez & Fabiola, 2015).
crecimiento microbiano. Existen diferentes En conjunto, estas prácticas interrelacionadas
tipos de medios, como los agares nutritivos o forman un marco integral para el estudio
microbiológico, permitiendo a los encendió el mechero y se calentó el aza de
investigadores explorar aspectos inoculación hasta que estuviera al rojo vivo y
fundamentales del comportamiento ser esterilizada. Luego se reviso que no
microbiano y su interacción con el entorno. estuviera tan caliente el aza para poder tomar
una parte de una colonia del cultivo a aislar,
Métodos en este caso se utilizó la caja con la
1. Medio de cultivo evaluación de superficies. Nota: nunca se
abre completamente la caja con el cultivo a
Primero se pesó la cantidad de medio de aislar. Seguido a esto se tomo un poco de una
cultivo para la cantidad deseada, y se agregó colonia con el aza y se tomo la caja en la cual
a un Erlenmeyer. En este caso se necesitaban se sembró, se paso el aza en movimientos de
50 mL de agar nutritivo y se pesó según las zigzag desde una de las orillas de la caja.
indicaciones del empaque. Con una probeta Luego se volvió a esterilizar el aza para luego
se midió el volumen deseado de agua tomar del estriado anterior sin levantar el aza
destilada (50 mL) y se agregó al Erlenmeyer y realizar el mismo movimiento en la otra
con el medio. Luego se calentó en una cara de la caja. Se realizo de nuevo el
plancha con un agitador magnético a una esterilizado en el mechero y nuevamente se
temperatura a la que ebulló. Retirando de la tomo del estriado anterior, para repetir el
plancha antes de que ebullera completamente, mismo movimiento de estriado en el espacio
se retiró el agitador magnético. Se espero a restante de la caja. Se sello la caja y se dejo
que estuviera a una temperatura para poder incubando, este tiempo depende de que tipo
manipularlo. Alrededor de un mechero se de cultivo se realice.
vertió el agar en las cajas Petri y se mantuvo
allí hasta solidificar. Se sellaron con Parafilm 4. Tinción de Gram
y se nombraron las cajas respectivamente. Se Primero se nombró el portaobjetos a utilizar,
conservaron en refrigeración para su siguiente seguido a esto se encendió un mechero y se
uso. esterilizó el aza para agregar una gota de agua
2. Evaluación de Superficies destilada en el aro de la punta. Esta agua se
traspaso al portaobjetos en forma de circulo.
Las cajas Petri realizadas previamente se Nuevamente se esterilizó el aza, pero en este
rotularon según las superficies a evaluar, el caso se tomo una muestra de las colonias
nombre del que la utilizo y la fecha. Se aisladas previamente. Con el aza impregnada
encendió un mechero, luego se abrieron los se froto con el agua del portaobjetos. Y se
isopos estériles. Se tomo uno y se bañó en dejó esterilizada el aza nuevamente.
agua estéril para después pasar sobre la Seguidamente se tomó el portaobjeto y se
superficie a evaluar. Luego se abrió la caja acerco al mechero sin tocar la flama y se
cerca del mechero y se estrió el isopo donde esperó a que se evaporara el agua. Después de
correspondía. Seguido a esto se desinfecto la que se evaporara el agua del portaobjetos se
superficie a evaluar y se repitió el proceso agregaron unas cuantas gotas de solución
anterior de la toma de muestra con un nuevo Gram Violeta, se espero un minuto y se lavó
isopo. Las cajas se sellaron con Parafilm para cuidadosamente el exceso con una piseta.
ser incubadas por al menos 24 horas. Siguiendo al portaobjetos se le agregaron
unas cuantas gotas de Yodo para Gram, se
3. Siembra de microorganismos por
espero un minuto y se lavó cuidadosamente el
estriado
exceso con una piseta. Luego se dejo fluir por
Primero se rotuló la caja en la cual se iba a el portaobjetos la solución decolorante de
sembrar (nombre, fecha y tipo de cultivo). Se Gram y se lavó cuidadosamente el exceso con
una piseta. Seguido a esto se agregaron un par
de gotas de safranina, se dejo reposar 1
minuto y nuevamente se lavó el exceso. Por
último, se esperó a que secara y se observó en
el microscopio.
Resultados
A continuación, se muestran los resultados de
cada una de las prácticas realizadas.
Figura 1. Medio de cultivo final.
Esta figura muestra la colonia aislada tomada
de la evaluación de superficie.
Figura 4. Tinción de Gram observado
desde el microscopio.
Esta figura muestra el medio de cultivo
realizado ya solidificado.
Figura 2. Caja evaluación de superficies
luego de incubación.
Esta figura muestra la tinción de Gram
realizada bajo el lente de inmersión. Se logra
apreciar el color morado de la bacteria.
Discusión
En cada una de las prácticas realizada se
determinaron objetivos a cumplir y se
mencionaran de acuerdo con la práctica.
Primero se realizo la preparación de un medio
de cultivo, el cual su objetivo general era
En esta figura podemos observar del lado aprender a elaborar un medio de cultivo
izquierdo la superficie sin desinfectar y la siguiendo el procedimiento brindado en clase
derecha la que se desinfecto con cloro. para su futura aplicación. Además, se agregó
un objetivo específico que fue elaborar un
Figura 3. Caja de estriado con el cultivo
agar nutritivo (figura 1) por medio de un
aislado luego de incubación.
reactivo para comprender su preparación en
medio sólido. A través del aprendizaje
práctico y teórico sobre la elaboración y los
componentes del medio, se adquieren
habilidades valiosas que serán aplicables en su aplicación (Ortiz-Magdaleno et al., 2024).
investigaciones futuras. En este caso se En contraste a esto se puede inferir que la
utilizo un medio prefabricado que contienes observación del crecimiento diferencial de
los nutrientes calculados a una medida, pero colonias entre superficies tratadas y no
en caso de realizarlo desde cero se pueden tratadas proporciona una medida clara de la
cambiar aspectos del contenido de nutrientes eficacia del desinfectante utilizado.
y hasta el pH que se necesite (Mondino,
Seguidamente la práctica de siembra por
2009). Además, comprender cómo cada
estriado utilizó dos de las colonias que
reactivo influye en el crecimiento microbiano
crecieron en la caja del lado no desinfectado.
fomenta una apreciación más profunda por
Se tomo como objetivo general aprender la
las técnicas microbiológicas y su importancia
técnica de estriado mediante la dilución de
en diversas áreas científicas. En base a esto
muestras, distribución homogénea y medio de
podemos inferir que se lograron ambos de los
cultivo para su futura aplicación en
objetivos planteados, ya que se siguió la
microbiología. Y como especifico: Realizar
metodología planteada para realizar el medio
un estriado por agotamiento para separar y
y se comprendió el uso que puede tener este
aislar colonias mediante múltiples pasadas en
tipo de medio de cultivo ya que fue utilizado
placa. El crecimiento bacteriano en ambos
para la evaluación de superficies.
lados de la placa (figura 3) parece ser
Siguiendo con lo antes mencionado en la homogéneo, con diferentes tipos de colonias
práctica de evaluación de superficies se tenia que pueden tener variaciones en
el objetivo general de evaluar diferentes tipos pigmentación y morfología, lo que sugiere la
de desinfectantes aplicándolos en superficies presencia de diversas especies bacterianas.
para analizar su eficiencia. Y como objetivo No se observan signos de contaminación
específico: aprender a emplear técnicas cruzada, lo cual es crucial en técnicas
asépticas para evitar contaminaciones en los microbiológicas para evitar resultados
cultivos. Como se puede observar en la figura erróneos. El éxito de esta técnica radica en su
2 si hubo crecimiento de colonias más capacidad para reducir gradualmente el
pequeñas en el lado desinfectado que en el número de bacterias, permitiendo que, al final
lado que no. Esto implica que la eficacia del del proceso, crezcan colonias individuales
cloro no fue completa si no que solo fue bien aisladas. Estas colonias pueden luego
parcial. Aunque si fue efectivo ya que seleccionarse para estudios posteriores, como
disminuyo la cantidad de crecimiento la identificación de especies o la realización
bacteriano, en estudios previos han de pruebas bioquímicas (Moreno &
demostrado que varios desinfectantes, como Albarracín, 2012).
el hipoclorito de sodio y soluciones a base de
Por último, tenemos la tinción de Gram a
amonio cuaternario, son eficaces para reducir
partir de una de las colonias del estriado por
la carga microbiana en superficies inertes
agotamiento realizado. Se tuvo como objetivo
(Robles et al., 2018). La implementación
general aprender sobre la tinción de Gram de
correcta de técnicas asépticas y el uso
manera precisa y siguiendo cada paso del
adecuado de desinfectantes no solo
procedimiento para diferenciar las bacterias
contribuyen a la seguridad alimentaria, sino
Gram positivas y Gram negativas para
que también son esenciales en entornos
comprender su importancia en el diagnostico
clínicos donde la contaminación cruzada
microbiológico. Y como objetivo específico
puede tener consecuencias graves. Por
describir los pasos críticos del proceso de
ejemplo, en clínicas dentales, se ha
tinción mediante la ejecución práctica en
demostrado que ciertos desinfectantes
laboratorio para asegurar una diferenciación
eliminan eficazmente patógenos comunes tras
nto en el
precisa entre Gram positivas y negativas. En
este caso como se observa en la figura 4 se
puede observar el color morado de las
cual una
bacterias lo cual indica que son Gram
positivas. Este resultado es significativo
porque sugiere una estructura celular que
retiene el cristal violeta debido a la presencia
de una pared celular gruesa compuesta
principalmente por peptidoglicano (Asanza
fase
et al., 2024). Además, se puede observar su
morfología de cocos. Los cocos son bacterias
esféricas que pueden presentarse solas, en
móvil
pares (diplococos), en cadenas
(estreptococos) o en racimos (estafilococos). avanza a
La identificación de cocos Gram positivos es
particularmente relevante, ya que muchos de
estos organismos son patógenos comunes en
través de
una fase
infecciones humanas. Por ejemplo, el
género Staphylococcus, que incluye especies
como Staphylococcus aureus, es conocido
por causar infecciones cutáneas y sistémicas,
mientras que los estreptococos pueden estar
implicados en infecciones faríngeas y
estacionaria
neumonía (Ferré et al., 2011).
por
Se conoce capilaridad,
a la ayudada en
cromatogra ocasiones
fía en por la
capa fina acción de
(TLC)como la gravedad
el o de un
procedimie
potencial (TLC)como
eléctrico, el
siendo esta procedimie
una división nto en el
de la cual una
cromatogra fase
fía plana móvil
(Skoog D. & avanza a
et al, 2005, través de
1014). una fase
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Se conoce por
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ayudada en 1014).
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Conclusiones
Se alcanzaron los objetivos
planteados en la elaboración de un
por la medio de cultivo, donde se aprendió a
seguir el procedimiento adecuado
acción de
para su preparación. Esto proporciona
habilidades prácticas que pueden
aplicarse en futuras investigaciones,
la gravedad
comprendiendo cómo los nutrientes y
el pH influyen en el crecimiento
microbiano.
o de un La evaluación de superficies mostró
que, aunque el desinfectante utilizado
(cloro) redujo el crecimiento
potencial bacteriano, no fue completamente
eficaz. Este hallazgo subraya la
importancia de elegir desinfectantes
eléctrico, adecuados y de aplicar técnicas
asépticas correctamente, aspectos
siendo esta
cruciales en microbiología clínica y
seguridad alimentaria.
La práctica de siembra por estriado
una división
fue exitosa al lograr la distribución
homogénea de colonias y evitar la
contaminación cruzada. Esta técnica
de la permite el aislamiento de colonias
individuales, facilitando su estudio
detallado y posterior identificación.
cromatogra La tinción de Gram permitió
identificar bacterias Gram positivas,
resaltando la relevancia de esta
fía plana técnica en la diferenciación entre
bacterias según su estructura celular.
Este tipo de tinción es esencial para
(Skoog D. & el diagnóstico de infecciones
bacterianas y el tratamiento
adecuado.
Las prácticas realizadas, desde la
preparación de medios de cultivo
hasta la tinción de Gram, son
esenciales para identificar patógenos
comunes, como bacterias Gram Mondino, P. (2009). Preparación de medios
positivas en forma de cocos. Este de cultivo. Métodos en Fitopatología.
conocimiento tiene implicaciones Robles, M.D., Villegas, E., Cortez, O.M.,
clínicas importantes, especialmente Castellanos, I.E., Plascencia, P.C., &
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