Uso de la cromatografía de capa fina para la
separación de aminoácidos y detección mediante la
reacción con ninhidrina
Margarita Y. Juárez Velásquez. Carné 211068
Departamento de Química, Facultad de ingeniería, Universidad del Valle de Guatemala.
ABSTRACT: La práctica realizada fue con el objetivo de aprender sobre la técnica del uso de la
cromatografía de capa fina para la separación de aminoácidos en conjunto con la reacción de
ninhidrina para la detección de estos. Se realizo una placa cromatográfica con 3 aminoácidos de
referencia: glicina, aspartato y arginina, y también una muestra de aminoácidos desconocida. Esta
mostro coloraciones y diferentes factores de retardo con los cuales se pudo identificar la presencia
de los aminoácidos de referencia en la muestra desconocida. Se concluyo que la polaridad de las
fases móviles y estacionarias tuvo un impacto significativo en la resolución y selectividad de los
aminoácidos en TLC. Esto demuestra la importancia de cambiar las condiciones de cromatografía
para separar los compuestos pertinentes, en este caso el aspartato, de manera más efectiva.
Palabras clave: Aminoácidos, Xantoproteica, Polaridades, Cromatografía
Introducción En este caso se necesitaba una prueba de
color como lo es la reacción de ninhidrina
La cromatografía es una técnica de para la determinación de los aminoácidos. En
separación en la que una muestra se separa en esta prueba calienta una solución alcohólica
dos fases una fase estacionaria de gran área de tricetona, "ninhidrina", con un aminoácido
superficial, y una fase móvil. La fase lo cual produce un intenso color azul violeta,
estacionaria retrasa el paso de los por lo que es un método sencillo para detectar
componentes de la muestra. Si los aminoácidos (Libretexts, 2022b).
componentes pasan a través del sistema en
diferentes velocidades estos se separan en Métodos
determinados tiempos. La separación
1. Placa cromatográfica
cromatográfica se logra cuando el tiempo un
analito difiere del resto de componentes en la • Cortar una tira de la placa de sílica gel
muestra (TP Laboratorio químico, 2015). para cromatografía de 5 x 7 cm.
Existen varios métodos de separación por
cromatografía como por columna y capa fina. • Hacer una linea con LAPÍZ a lo largo
del extremo inferior de la hoja a 0.5
En la cromatografía de capa fina utiliza cm del margen.
alúmina o gel de sílice como fase estacionaria
(Hunt, 2023). Ahora para comprender más a • Dibujar 4 puntos en la línea inferior.
detalle estos métodos debemos conocer que • En la parte inferior del papel, sobre los
son fases estacionarias y móviles. Fase puntos que dibujó e indicando el
estacionaria es sustancia que se fija en papel, nombre de la muestra que aplicará:
sobre la superficie en que se separan los
componentes. Fase móvil es la fase que se • 3 gotas de los estándares dealanina,
mueve en una dirección determinada, como lo arginina y ácido aspártico y 1 gota de
es un líquido. Esta sustancia se mueve a mezcla de aminoácidos desconocida.
través del papel, sobre la superficie en que se
• Utilice un capilar para agregar la
separan los componentes. (TP Laboratorio
muestra.
químico, 2015).
2. Preparación del recipiente
• Preparar el recipiente donde va a 2 de la muestra tienen el mismo factor. En el
colocar el papel filtro, use un beaker caso de la primera coloración de la muestra
de 250 ml y agréguele 10-15 ml de la no esta tan alejada del factor de la Arginina.
mezcla de alcohol etílico: hidroxido Además el Rf de la arginina es la más baja de
de amonio. todas.
• Dejarlo tapado con un vidrio de reloj. Gly= Glicina
Asp=Aspartato
• Colocar la tira de papel filtro dentro Arg=Arginina
del beaker, dejando que corra el X =Muestra desconocida
solvente hasta la línea de arriba.
• Asegúrese de que el papel esté lo más Discusión
recto posible. Vuelva a tapar el beaker
Se conoce
con el vidrio de reloj.
• Terminada la cromatografía saque la
a la
placa, y marque con lápiz la distancia
recorrida por el eluyente.
• Deje secar la placa dentro de la
•
campana de extracción.
Agregue ninhidrina con un asperjador
cromatogra
•
y póngalo en el horno a secar.
Determine los Rf de los estándares y
fía en
•
de la muestra.
Identifique los componentes de la capa fina
(TLC)como
muestra desconocida utilizando los Rf
de los estándares de aminoácidos
conocidos.
(Universidad del Valle de Guatemala, 2024)
Resultados
el
Cuadro 1. Factor de retardo de los reactivos y
la muestra desconocida.
procedimie
Reactivo
Gly
Rf
0.72
nto en el
cual una
Asp 0.64
Arg 0.26
X1 0.30
X2 0.72
Este cuadro muestra los factores de retardo de
dos pruebas de cromatografía de capa fina de
fase
los aminoácidos conocidos y las 2
coloraciones de la muestra desconocida, se
puede observar que la glicina y la coloración
móvil una división
avanza a de la
través de cromatogra
una fase fía plana
estacionaria (Skoog D. &
por et al, 2005,
capilaridad, 1014).
ayudada en Se conoce
ocasiones a la
por la cromatogra
acción de fía en
la gravedad capa fina
o de un (TLC)como
potencial el
eléctrico, procedimie
siendo esta nto en el
cual una eléctrico,
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la gravedad capa fina
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ayudada en 1014).
ocasiones
Se conoce a la cromatografía en capa
fina (TLC)como el procedimiento en el
cual una fase móvil avanza a través de una
por la
fase estacionaria por capilaridad, ayudada en
ocasiones por la acción de la gravedad o de
un potencial eléctrico, siendo esta una
acción de división de la cromatografía plana (Skoog et
al., 2014). Mediante este recurso se determinó
la distancia de migración (Rf) de cada
aminoácido conocido (glicina, aspartato y
arginina) varió durante la práctica en función
de su polaridad y capacidad de interacción
con la fase estacionaria. Además, se
realizaron comparaciones para identificar y La resolución y selectividad de los
cuantificar los patrones de migración de los aminoácidos en la TLC fueron
aminoácidos conocidos con los de la muestra significativamente influenciadas por
desconocida. Como se observa en el cuadro 1, la polaridad de las fases móviles y
el Rf de la glicina y la coloración 2 de la estacionarias. Esto demuestra la
muestra desconocida son iguales por lo que si importancia de modificar las
estaba presente este aminoácido en la condiciones de cromatografía para
composición de la muestra. lograr la separación más eficiente de
los compuestos relevantes, en este
En el caso de la primera coloración no esta
caso el aspartato.
tan alejada del Rf de la arginina además la
formar y color (Figura 1) es muy parecida por Referencias
lo que también esta presente en la muestra
desconocida. Por otro lado en el caso del TP Laboratorio químico. (2015). ¿Qué es la
aspartato no es posible determinar su Cromatografía?
https://www.tplaboratorioquimico.co
presencia en la muestra ya que tiene un Rf
m/laboratorio-quimico/procedimiento
muy cercano a la glicina y no se puede s-basicos-de-laboratorio/que-es-la-
apreciar su coloración en la lámina de gel de cromatografia.html
sílice (Figura 1). Para esto se recomienda Hunt, F. (2023). Diferencia entre la capa fina
cambiar la fase móvil para que sea menor su de papel y la cromatografía en
desplazamiento y así poder tener una mejor columna. STREPHONSAYS.
separación de componentes. https://es.strephonsays.com/paper-
and-vs-thin-layer-and-vs-column-
Es importante tener en cuenta que, aunque la chromatography-8153
cromatografía de capa fina con reacción de Libretexts. (2022b, 2 noviembre). 25.4:
ninhidrina es una herramienta útil y Análisis de aminoácidos. LibreTexts
ampliamente utilizada para encontrar Español.
aminoácidos, tiene algunas limitaciones. Por https://espanol.libretexts.org/Quimica
ejemplo, puede ser difícil identificar con /Qu%C3%ADmica_Org
precisión los aminoácidos en muestras %C3%A1nica/Libro
desconocidas sin estándares de referencia %3A_Principios_B
adecuados. La resolución y la interpretación %C3%A1sicos_de_Qu
de los resultados también pueden verse %C3%ADmica_Org
%C3%A1nica_(Roberts_y_Caserio)/
afectadas por la presencia de compuestos
25%3A_Amino%C3%A1cidos
interferentes en la muestra.
%2C_P%C3%A9ptidos_y_Prote
%C3%ADnas/25.04%3A_An
%C3%A1lisis_de_Amino
%C3%A1cidos
Universidad del Valle de Guatemala. (2024).
Practica no. 3. Enzimas: Tirosinasa.
Conclusiones 6pp
La cromatografía de capa fina con la Anexos
reacción de ninhidrina fue efectiva
Figura 1. Lamina final de gel de sílice con
para la identificación, por lo que se
coloraciones.
pudo determinar la presencia de
glicina y arginina en la muestra
desconocida.
Esta imagen muestra la placa final después de
la reacción de ninhidrina, en la cual se
aprecian las diferentes coloraciones en este
orden (izquierda a derecha): glicina,
aspartato, arginina y la muestra desconocida.
