UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN DE BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA
CLAVE CARRERA:10539 CLAVE ASIGNATURA:1338
CLAVE CARRERA:10540 CLAVE ASIGNATURA:1443
PAPIME PE 205615
REVISIÓN: Agosto 2024

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO

NOMBRE DEL ALUMNO: ______________________________________________

SEMESTRE LECTIVO: 2025_I GRUPO: ____________ EQUIPO: ___________

ASESORES: _______________________________________________________
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

ÍNDICE
Página

Introducción............................................................................................................. 2
Objetivos generales de la asignatura………………………………………………….. 3
Cronograma……………………................................................................................ 4
Reglamento............................................................................................................. 6
Relación de las actividades experimentales con el programa de la asignatura….. 5
Criterios de evaluación………………………………………...................................... 8
Seguridad en el laboratorio..................................................................................... 11
Equipo de protección y material de uso común...................................................... 14
Practica 1. pH en sistemas biológicos .................................................................... 15
Practica 2. Homogeneización y centrifugación....................................................... 24
Practica 3. Técnicas cromatográficas...................................................................... 34
Practica 4. Electroforesis y diálisis.......................................................................... 43
Practica 5. Extracción de DNA................................................................................ 52
Practica 6. Cuantificación de proteínas y factores que alteran su solubilidad….… 58
Practica 7. Reacciones de identificación de carbohidratos………………………..... 65
Practica 8. Extracción, separación e identificación de lípidos................................. 74
Practica 9. Cinética enzimática de la ureasa........................................................... 83
Practica 10. Metabolismo:Fermentación................................................................. 95
Hojas para examen …………………………………………………………………… 104
Vales de material………………………………………………………………………… 115

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
INTRODUCCIÓN
El manual de prácticas de laboratorio para Bioquímica General está diseñado para los
alumnos inscritos en la asignatura, sin embargo es útil para todos aquellos que requieran
iniciarse en el conocimiento básico de la bioquímica, realizando actividades prácticas
sencillas que tienen como finalidad que los estudiantes de ciencias de la salud adquieran
los conocimientos, habilidades y destrezas que se requieren para desarrollarse en esta
área.

Las actividades prácticas contemplan el empleo del equipo básico que se usa en los
laboratorios de bioquímica. El manual incluye diez prácticas, las cuales están relacionadas
con los temas del programa de la asignatura y siguen el mismo orden que los conceptos
revisados en la teoría. En la primer práctica se estudia la importancia del pH en los sistemas
biológicos; en las prácticas 2 a la 4 se trabaja con métodos y técnicas para la separación y
purificación de biomoléculas; en la prácticas 5 se realiza extracción de DNA de diversas
fuentes; en la práctica 6 se realiza separación y cuantificación de proteínas y se trabaja con
factores que alteran su solubilidad. En la práctica 7 se realizan reacciones de identificación
de carbohidratos; en la práctica 8 extracción, separación e identificación de lípidos. En la
práctica 9 se realiza una cinética enzimática y en la práctica 10 se trabaja con fermentación
bajo diferentes condiciones. La metodología utilizada en cada actividad da la oportunidad
de generar un conocimiento básico, objetivo y aplicable en futuras asignaturas.

Cada práctica consta de una introducción con el fin de darle al estudiante una idea acerca
de los conceptos que se van a trabajar, para que él con ayuda de las preguntas que debe
resolver de la investigación previa pueda profundizar en ellos, sea capaz de integrarlos y
entender plenamente el tema. También se da a conocer el objetivo general para cada
práctica, el cuál se espera cumpla al final de la misma. Se enlista el material y reactivos a
utilizar y se desglosa de manera sencilla la metodología experimental a seguir para cumplir
con el objetivo.

Al final de algunas prácticas se plantean interrogantes con el fin de dirigir al alumno en el

análisis de los resultados obtenidos y la adquisición de nuevos conocimientos, lo que ayuda
al alumno a concluir sobre los conceptos revisados en el laboratorio. Finalmente se enlistan
referencias en la que se enumeran los libros, revistas o información en internet que pueden
consultar.

Se espera que el estudiante al concluir la asignatura de Bioquímica General cuente con los
conocimientos necesarios, además de nuevas actitudes y valores para continuar con éxito
su formación profesional en el área.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

OBJETIVO GENERALES DE LA ASIGNATURA

Analizar y comparar la composición, estructura, propiedades y función de las

biomoléculas, así como distinguir los procesos metabólicos en los que estas participan
y sus mecanismos de regulación a través de su descripción y diferenciación para
comprender la química de los seres vivos, con la finalidad de aplicarlo en las
asignaturas biológicas de la carrera.

OBJETIVO DEL CURSO EXPERIMENTAL

Adquirir los conocimientos, habilidades y destrezas en el manejo de biomoléculas al

realizar actividades prácticas que permitan; separar, purificar, identificar y
cuantificarlas con diversos métodos, técnicas y reacciones de identificación para que
los estudiantes de ciencias de la salud sean capaces de aplicarlas en otras
asignaturas y en su desarrollo profesional.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
CRONOGRAMA 2025_I
CARRERA GRUPO PROFESORES DE LABORATORIO
BQD IA. Miriam Alvarez Velasco/ MenC. Jessica Georgina Filisola Villaseñor/ Q.
1301 Yesica N. Alvarez Pacheco
MenC. Tais Nopal Guerrero/ MenC. Jessica Georgina Filisola Villaseñor/ LF.
BQD 1351
Imelda Jaramillo Ugarte
BQD QFB. Gabriela Escalante Reynoso/ QFB. Nydia Berenice González Angeles/
1302
MenC. Tais Nopal Guerrero.
F QFB. Gabriela Escalante Reynoso/ Q. Karla Paola Hernández Pérez/ Dra.
1451 Sofía Piña Olmos/ Dra. Laura Denisse López Barrera
BQD 1352 MenC. Tais Nopal Guerrero/ Dra. Paulina Cortés Acevedo
BQD QFB. Gabriela Escalante Reynoso/ QFB. Nydia Berenice González Angeles/
1303 Dra. Paulina Cortés Acevedo
BQD Dra. Jazmín Flores Monroy/ Q. Karla Paola Hernández Pérez/ LF. Imelda
1353 Jaramillo Ugarte

SEMANA FECHAS ACTIVIDAD

2 12-16-agosto-24 Inscripción / Presentación

3 19-23 agosto-24 pH en Sistemas Biológicos

4 26-30-agosto-24 Homogeneización y Centrifugación

5 2-6-septiembre-24 Técnicas Cromatográficas

6 9-13-septiembre-24 Electroforesis y Diálisis

7 16 septiembre-24 inhábil

8 23-27 septiembre-24 Extracción de DNA

9 1-octubre-24 inhábil

10 7-11-octubre-24 Cuantificación de Proteínas y Factores que alteran su solubilidad

11 14-18-octubre-24 Reacciones de Identificación de Carbohidratos

12 21-25 octubre-24 Extracción, Separación e Identificación de Lípidos

13 28-31- octubre-24 Cinética Enzimática

14 4-6-noviembre-24 Metabolismo: Fermentación

15 11-15- noviembre-24 Discusión

16 ----------- Entrega de calificaciones

16-11-24 Examen departamental

FECHAS DE REGISTRO AL EXAMEN DEPARTAMENTAL : oCTUBRE

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

RELACIÓN DE LAS ACTIVIDADES EXPERIMENTALES

CON EL PROGRAMA DE LA ASIGNATURA

Prácticas de laboratorio Número y nombre de la

Unidad Temática en el
Número titulo programa de la Asignatura

1 pH en sistemas biológicos Unidad 1. Introducción a la

bioquímica

2 Homogenización y centrifugación Unidad 2. Metodología para el

estudio de las biomoléculas

3 Técnicas cromatográficas Unidad 2. Metodología para el

estudio de las biomoléculas

4 Electroforesis y diálisis Unidad 2.Metodología para el

estudio de las biomoléculas

5 Extracción de DNA Unidad 3. Biomoléculas

6 Cuantificación de proteínas y factores Unidad 3. Biomoléculas

que alteran su solubilidad
7 Reacciones de identificación de Unidad 3. Biomoléculas
carbohidratos
8 Extracción, Separación e identificación Unidad 3. Biomoléculas
de lípidos
9 Cinética enzimática de la ureasa Unidad 5. Catalizadores
biológicos

10 Metabolismo: fermentación Unidad 7. Metabolismo primario

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

REGLAMENTO GENERAL PARA LOS LABORATORIOS DEL DEPARTAMENTO DE

CIENCIAS BIOLÓGICAS
1. Este reglamento aplicará para personal académico, alumnos y laboratoristas.
2. Para todo trabajo realizado en el laboratorio, sobre la vestimenta se deberá utilizar
bata blanca, con manga larga completamente abotonada, calzado cerrado o la
vestimenta adecuada en cada laboratorio, así como traer el equipo de protección
personal y el material requerido para la realización de la práctica.
3. La persona que use el pelo largo, deberá recogerlo, por seguridad.
4. La tolerancia para el inicio de la sesión de laboratorio será hasta de 10 minutos a
partir del horario indicado para el inicio de la práctica.
5. Por seguridad, las puertas del laboratorio se mantendrán sin llave durante las
prácticas y en caso de siniestro se deberán atender obligatoriamente las indicaciones
de evacuación del personal de protección civil y/o brigadistas.
6. En todo momento se mantendrá una conducta de orden y disciplina en el área de
trabajo.
7. Es obligación de todos para el buen funcionamiento de las prácticas, mantener limpio
y ordenado el lugar de trabajo.
8. Queda prohibido en los laboratorios:
a) El ingreso a toda persona que no porte los elementos personales de
protección mínimos requeridos.
b) Tirar basura fuera del cesto.
c) Ingerir alimentos y/o bebidas.
d) Fumar.
e) Recibir visita.
f) Colocar en las puertas de acceso o salida de emergencia cualquier objeto
que imposibilite la evacuación.
g) La entrada a los inter-laboratorios a toda persona ajena a los mismos.
h) Realizar reuniones o convivios en los laboratorios.
i) Salir del laboratorio en el horario asignado para la sesión experimental.
j) Sentarse sobre las mesas de trabajo.
k) Mover el mobiliario de su lugar.
l) Utilizar las gavetas para guardar material que no corresponda a la
asignatura.
m) Usar gorra ajena a las actividades de laboratorio.
n) El uso de audífonos y/o cualquier aparato o dispositivo electrónico ajeno
al propósito de las actividades que se realicen.
9. Los residuos peligrosos deben depositarse en los contenedores destinados para tal
fin, entendiendo por residuo peligroso: elementos, sustancias, compuestos,
desechos o mezclas de ellos que en cualquier estado físico representan un riesgo

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
para el ambiente, la salud o los recursos naturales, por sus características
corrosivas, reactivas, explosivas, tóxicas, inflamables o biológico-infecciosas (Art. 3º
de la Ley General del Equilibrio y Protección del Ambiente).
10. El acceso al laboratorio se permitirá únicamente cuando esté presente uno de los
profesores del grupo.
11. El uso del laboratorio para clases teóricas deberá cumplir con los incisos 2, 6 y 7 del
presente reglamento y registrarlo en la bitácora.
12. El uso del laboratorio para trabajo extraordinario deberá programarse con el profesor
responsable en un horario que no interfiera con el destinado para el desarrollo de las
prácticas y registrarlo en la bitácora.
13. Para solicitar material y equipo, es requisito indispensable que el alumno firme el
vale de material, dejando como depósito la credencial vigente de la UNAM.
14. El alumno deberá revisar el material y/o equipo al momento de recibirlo indicando
cualquier anomalía (faltante o material dañado) y será devuelto en las condiciones
en que se recibió.
15. A la persona que, por su negligencia o descuido inexcusable, cause daños al
laboratorio, materiales o equipo, deberá cubrir los gastos que se generen con motivo
de la reparación y/o reposición.
16. Los usuarios de laboratorios que sean sorprendidos haciendo uso indebido de
equipos, sustancias, materiales, instalaciones, y demás implementos, serán
sancionados conforme a la legislación universitaria que le corresponda, según la
gravedad de la falta cometida.
17. El incumplimiento a estas disposiciones faculta al responsable para que instruya la
salida del infractor y en caso de resistencia, la suspensión de la práctica.

Atentamente
“POR MI RAZA HABLARÁ EL ESPÍRITU”
Cuautitlán Izcalli, Estado de México a 5 de agosto del 2024

VoBo Comité de Calidad de Ciencias Biológicas

Jefe del Comité de Calidad: M.C. Elizabeth Miranda Hernández
Representante del Jefe de CC: M.C. Ericka Torres Pérez
Jefes de Sección Responsables de Calidad
I.A. Miriam Alvarez Velasco Q.F.B. Gabriela Escalante Reynoso

Q.F.B María de Lourdes Galván Ruiz Q.F.B. Ladislao Palomar Morales

M.C. Javier Froylán Lazcano Reyes M.V.Z. Luis Jesús López Morales

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
M. en M.V.Z. Sonia Torres Patiño
M.C.E. Andrea De Santos López

M.V.Z. Edna Maribel Legaspi Nuevo M.V.Z. Yesica Virginia Torres Durán

CRITERIOS DE EVALUACIÓN
La evaluación del curso consiste en el 70% de teoría y 30% de laboratorio. Se debe tener
el 80% de asistencia mínimo a la teoría y al laboratorio.
La evaluación del laboratorio se hará con base en:

CONCEPTO PORCENTAJE

Promedio de prácticas 70

Discusión de prácticas 10

Examen Departamental 20

El examen departamental cuenta el 20% de la calificación de teoría y el 80% restante será

establecido a criterio del profesor del grupo.
ASISTENCIA. Es requisito indispensable para acreditar el laboratorio, tener el 80% del
total de prácticas y demás actividades realizadas y aprobadas.
PUNTUALIDAD. De acuerdo al reglamento, se dará una tolerancia de 10 minutos para la
entrada a la práctica. Es obligación de todos estar desde a la hora de inicio de la sesión.
PROMEDIO DE PRÁCTICAS. Para obtener el promedio de cada práctica se consideran: la
evaluación previa, el trabajo en el laboratorio y el reporte.
INVESTIGACIÓN PREVIA. Es un trabajo de investigación que se realiza previo a cada
práctica. No se entrega, aunque al entrar a la sesión, su asesor pedirá que se lo muestre junto
con el diagrama metodológico del trabajo práctico de la sesión, es un trabajo individual que
deberá realizarse en el manual de prácticas, en el reverso de las hojas de la práctica
correspondiente. Durante el desarrollo de la práctica su asesor revisará la calidad y contenido
de ambos.
EVALUACIÓN PREVIA. Se realiza al inicio de cada sesión y consiste en un examen de 5
preguntas de respuestas rápidas y concretas acerca de la investigación previa, o bien de la
metodología a seguir durante la práctica. Únicamente será válido si se escribe con tinta negra
o azul en el formato de la práctica correspondiente proporcionado en el manual.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
TRABAJO EN EL LABORATORIO. El trabajo de laboratorio se evalúa con una lista de cotejo
con rúbrica, de acuerdo al desarrollo que cada alumno tiene durante la práctica y el
conocimiento que tengan del trabajo a realizar. Se consideran las participaciones que el
alumno tenga durante la explicación de la práctica y las respuestas que den a las preguntas
formuladas por su asesor durante el trabajo práctico. Los puntos específicos a evaluar serán
explicados con detalle durante la presentación del curso.

REPORTE. Este es un trabajo de gran importancia, se entrega al finalizar la práctica, el

formato deberá descárgalo de la página
https://bioquimicafesc.wixsite.com/bqyfh/documentos

Se entrega una semana después de realizada la práctica, si el calendario marca inhábil

debe ponerse de acuerdo con los profesores para su entrega en esa semana. Se debe
entregar al entrar al laboratorio, solo se recibe durante los primeros 30 minutos de la sesión
experimental.
PRESENTACIÓN: VALOR 1.0 Cuidar letra, ortografía, limpieza y orden. Todo se debe
escribir con tinta negra o azul marino, los dibujos se hacen a color y deberá entregarse
engrapado.
CARÁTULA: únicamente llenar los datos que se solicitan en el formato. NO modificar
NADA, La calificación se registra únicamente a aquellos alumnos cuyo nombre aparezca
en el reporte.
OBJETIVO: VALOR 1.0 Deben plantear su propio objetivo general que responda a las
preguntas: ¿qué?, ¿cómo? y ¿para qué?
FUNDAMENTOS VALOR 1.0 En este apartado se pedirán los fundamentos
correspondientes al trabajo experimental realizado, deben usar esquemas en el caso de los
aparatos y en el caso de las reacciones escribir las estructuras y fórmulas escribiendo as
ecuaciones químicas que se llevan a cabo.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS: VALOR 2.0. Esta es una parte muy importante del
reporte, no se debe omitir nada.
Los resultados se anotarán en el espacio destinado para ellos en el formato de reporte, así
como en su manual de prácticas. No olvide anotar pesos, volúmenes, cambios de color,
temperatura y cualquier dato obtenido durante el desarrollo de la práctica.
Se debe describir todo lo que se haya observado, por ejemplo: si se hizo reaccionar A con
B, si se observó un cambio de color, de apariencia, temperatura, o si no hubo cambio
aparente, etc. Todo es importante por lo que se deben tener alerta todos los sentidos. Si se
utiliza el microscopio se debe realizar un dibujo lo más cercano a lo obaervado.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Cálculos y gráficos: En caso de que la práctica lo requiera se realizarán los cálculos
correspondientes, de forma perfectamente clara y completa. Los gráficos deben hacerse en
papel milimétrico anotando en cada coordenada la propiedad que se está representando
con sus unidades respectivas.
Se debe cuidar la escala y no olvidar poner al gráfico nombre completo que permita su
identificación.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS: VALOR 3.0 En esta parte deberán completar las

ecuaciones, formulas y datos que se piden en el formato.
Deberán responder todas las preguntas planteadas al final de cada práctica, generando los
párrafos necesarios trabajando en equipo y argumentando bioquímicamente sus
respuestas, es necesario que anoten las reacciones químicas con fórmulas, las estructuras,
este apartado es la explicación química de los resultados obtenidos uno por uno
CONCLUSIONES VALOR 1.0: Para escribir las conclusiones se deben considerar los
resultados que se obtuvieron en la práctica junto con el análisis que se hizo para cada uno
de ellos y los objetivos específicos del trabajo, además se debe tomar la precaución de no
citar ningún autor.
Se debe ser muy claro y breve en cuanto a señalar que las conclusiones están referidas a
tal objetivo, además se debe ser enfático, seguro de lo que se afirma y se presentan como
sentencias. Por ejemplo: “se logró identificar.....” o se extrajo __x_ proteína” o “, de
forma que con solo leer las conclusiones se pueda estar al tanto de lo que se hizo y
los logros obtenidos.
REFERENCIAS VALOR 1.0: Las referencias consultadas para la realización del reporte
serán las que tienen en su investigación previa los integrantes del equipo o bien aquellas
que consultaron para los fundamentos teóricos, reacciones, fórmulas, etc., tomando en
cuenta libros (no menos de 3 en cada práctica), páginas de internet, artículos, etc. y
reportarse de acuerdo a normas internacionales.
LIBRO
Hackett, W. y Robbins, G. (1992). Manual de Seguridad y Primeros Auxilios. México, D.F:
Alfaomega.
ARTICULO
Cintrón, G., Lugo, A. E., Pool, D. J. & Morris, G. (1978). Mangroves of arid environments in
Puerto Rico and adjacent islands.Biotropica, 10(2),110-121.
PAGINA DE INTERNET

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Carroll, L. & Gilroy, P. J. (2002). Transgender issues in counselor preparation. Counselor
Education & Supervision, 41, 233-242. Recuperado de http://www.counseling.org

EXAMEN DEPARTAMENTAL. Al término de las actividades programadas para el

semestre todos los alumnos inscritos en la asignatura, realizan un examen global en el que
se incluyen preguntas de todos los temas de teoría y de todas las prácticas del laboratorio.
Equivale al 20% de la calificación tanto de teoría como de laboratorio.
El examen se realiza en línea y el periodo de registro está al final del cronograma
https://bioquimicafesc.wixsite.com/bqyfh/documentos
En la liga anterior encontrará el enlace para registrarse y la información necesaria.

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
El término seguridad hace referencia a las condiciones que permiten controlar aquellas
circunstancias que pueden dar lugar a hechos repentinos capaces de producir daño. Otro
aspecto relevante en los aspectos de seguridad, son los primeros auxilios, los cuales son
los cuidados o la ayuda inmediata, temporal y necesaria que se le da a una persona que ha
sufrido un accidente, enfermedad o agudización de ésta hasta la llegada de un médico o
profesional paramédico que se encargará, sólo en caso necesario, del trasladado a un
hospital tratando de mejorar o mantener las condiciones en las que se encuentra.

Es imprescindible el contar con las hojas de datos de seguridad de las sustancias químicas
con que se trabaja en el laboratorio para consulta específica en caso de accidente.
El objetivo de esta sección es el de presentar sugerencias generales para atender a
personas que hayan sufrido algún accidente, específicamente en el laboratorio de
bioquímica general y/o biología celular.
Los accidentes más frecuentes en un laboratorio son:

1. Cortes y heridas

Quitar cualquier prenda de vestir que cubra la herida, protegerse las manos con guantes o
una bolsa de plástico limpia. Lavar la parte del cuerpo afectada con agua y jabón. No
importa dejar sangrar algo la herida, pues ello contribuye a evitar la infección. Aplicar
después agua oxigenada y cubrir con gasa, tapar después con gasa esterilizada y sujetar

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
con venda o tela adhesiva. Si persiste la hemorragia o han quedado restos de objetos
extraños (trozos de vidrio, etc...), se acudirá a un centro sanitario.

2. Quemaduras o corrosiones
Por fuego u objetos calientes

Nota: Quitar la ropa que cubra el área afectada, si está pegada a la zona no quitar

QUEMADURA QUÉ HACER QUÉ NO HACER

Primer grado
Aplique agua fría y/o
(enrojecimiento, No aplique ningún
una gasa esterilizada
inflamación ligera y ungüento casero
seca
dolor)
Segundo grado Sumerja en agua fría,
(formación de ampulas, seque con una tela No reventar ampulas, no
inflamación, dolor esterilizada. Consiga quitar jirones de tejido.
severo) atención médica.
Tercer grado (presencia Cubra con una tela
No retirar ropa pegada,
de tejido carbonizado, estéril. Consiga atención
no aplicar hielo.
no hay dolor) médica.

Por ácidos, en la piel. Cortar lo más rápidamente posible la ropa empapada por el ácido.
Agregar abundante agua a la parte afectada. Neutralizar la acidez de la piel con disolución
de bicarbonato sódico al 1%. (Si se trata de ácido nítrico, utilizar disolución de bórax al 2%).
Después vendar.

- Por álcalis, en la piel. Aplicar agua abundante y aplicar disolución de ácido bórico al 2%,
o ácido acético al 1 %. Posteriormente secar, cubrir la parte afectada con pomada y vendar.

- Por otros productos químicos. En general, eliminar los fluidos emanados con grandes
cantidades de agua cuando menos por 10 minutos. Conseguir atención médica.

3. Salpicaduras en los ojos

- Por ácidos. Inmediatamente después del accidente irrigar los dos ojos con grandes
cantidades de agua templada de ser posible. Mantener los ojos abiertos, de tal modo que
el agua penetre debajo de los párpados. Continuar con la irrigación por lo menos durante
15 minutos. A continuación lavar los ojos con disolución de bicarbonato sódico al 1 % con

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
ayuda del lavador ocular, cambiando la disolución dos o tres veces, dejando por último en
contacto durante 5 minutos. Conseguir atención médica.

- Por álcalis. Inmediatamente después del accidente irrigar los dos ojos con grandes
cantidades de agua, templada a ser posible. Mantener los ojos abiertos, de tal modo que el
agua penetre debajo de los párpados. Continuar con la irrigación por lo menos durante 15
minutos. A continuación lavar los ojos con disolución de ácido bórico al 1 % con ayuda del
lavador ocular, cambiando la disolución dos o tres veces, dejando por último en contacto
durante 5 minutos.

- Por otros productos químicos. Inmediatamente después del accidente, irrigar ambos ojos
con grandes cantidades de agua, a ser posible templada, a chorro o con ayuda de una pera
de goma grande. Mantener los ojos abiertos. Si es necesario, enganchar los párpados,
estirarlos hacia el exterior de modo que el agua penetre por debajo de los mismos.
Continuar la irrigación por al menos 15 minutos más.

4. Ingestión de productos químicos

Antes de cualquier actuación concreta: SE REQUIERE ATENCIÓN MÉDICA URGENTE.
Retirar el agente nocivo del contacto con el paciente. No darle a ingerir nada por la boca
ni inducirlo al vómito.

- Ácidos corrosivos. No provocar jamás el vómito. Administrar lechada de magnesia en

grandes cantidades. Administrar grandes cantidades de leche.

- Álcalis corrosivos. No provocar jamás el vómito. Administrar abundantes tragos de

disolución de ácido acético al 1 %. Administrar grandes cantidades de leche.

5. Inhalación de productos químicos

Aislar a la víctima de la atmósfera tóxica y hacerle respirar aire puro. Si se observa paro
respiratorio practicarle las maniobras de resucitación en el ambiente exterior del mismo
lugar del accidente.

Referencias:
Hackett, W. y Robbins, G. (1992). Manual de Seguridad y Primeros Auxilios. México, D.F:
Alfaomega.
Garibay,C.,Peláez, I. 2006. “Manual de Primeros Auxilios Básicos”. UNAM, México D.F.
Mateo, P., Gonzalez, A. 2004. “Manual para el Técnico en prevención de riesgos laborales”.
FC Editorial, Tomo I, Madrid, España.
http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/laboratorio/auxilios.htmL (Agosto 2008)
http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/laboratorio/normas. htmL (Agosto 2008)

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
EQUIPO DE PROTECCIÓN Y MATERIAL DE USO COMÚN
EQUIPO DE PROTECCIÓN
En cada práctica es requisito indispensable el uso de:
Bata blanca hasta la rodilla de manga larga, en buenas condiciones, limpia y planchada
Cubrebocas nivel 3
Guantes de nitrilo para cirujano
Lentes de seguridad aun cuando se usen anteojos
MATERIAL DE USO COMÚN
Cada alumno debe contar con:
Manual de prácticas engargolado con pastas EN COLOR AZUL REY y con nombre
Marcador indeleble de punto fino de color oscuro
Lápices de colores Propipeta
1 regla 1 espátula pequeña
1 tijeras
Cada equipo de trabajo debe contar con:
1 L de alcohol 96º 1 caja de tubos capilares
Detergente líquido para trastes 25 gasas no estériles
Escobillón para tubos de ensaye papel aluminio
Escobillón para vasos y matraces algodón
1 rollo de servitoallas 500 mL cloro
1 pinzas de disección 5 abatelenguas
1 navaja de un solo filo 5 palillos de madera largos
Cerillos o encendedor
10 bolsas de plástico para basura pequeñas
Una franela para el área de trabajo mínimo 60 x 50 cm
2 jergas o franelas (una para secar material y otra para derrames)

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 1
pH EN SISTEMAS BIOLÓGICOS
INTRODUCCIÓN
Las moléculas presentes en las células vivas, existen y reaccionan en un ambiente acuoso.
El agua es fundamental para la vida, solubiliza, modifica y determina las propiedades de las
biomoléculas, porque propicia la formación de enlaces débiles entre los grupos funcionales
de ácidos nucleicos, proteínas y carbohidratos. Un sistema acuoso determina también una
propiedad muy importante, el pH y la comprensión de los mecanismos homeostáticos
mediante los cuales los organismos conservan un ambiente intracelular relativamente
constante, incluye la consideración del pH y del amortiguamiento en los líquidos corporales
y compartimientos subcelulares. La disociación de los grupos funcionales de las
biomoléculas en solución acuosa a diversos valores de pH, es crucial para el correcto
desarrollo de las reacciones químicas y bioquímicas que tienen lugar tanto en los seres
vivos como, a nivel experimental, en el laboratorio.

El termino pH fue introducido en 1906 por Sorensen, quien lo definió como el logaritmo
negativo de la concentración del ion hidrógeno. Esta definición, si bien no muy estricta, es
adecuada para casi todos los propósitos bioquímicos; el pH de una solución que contiene
un ácido débil (como lo es el agua) se correlaciona con la constante de disociación de dicho
ácido. La interrelación puede establecerse de modo convencional en la ecuación de
Henderson-Hasselbach. Las soluciones de ácidos débiles y sus bases conjugadas o bases
débiles y sus ácidos conjugados tienen capacidad amortiguadora, lo cual se refiere a la
tendencia de una solución a resistir un cambio en el pH después de la adición de un ácido
o una base fuertes de manera más eficaz, que un volumen igual de agua.
Ya que los cambios sutiles en el pH de un ácido débil en la vecindad de su pKa modifican
de modo significativo las proporciones relativas de sus variantes ionizada y no ionizada, las
reacciones intracelulares se amortiguan para minimizar los cambios en el pH. El
amortiguamiento también se requiere, ya que el metabolismo produce la liberación y
captación de protones. En realidad, un producto final del metabolismo oxidativo es el bióxido
de carbono, el anhídrido de ácido carbónico que, de no amortiguarse, acidifica
intensamente los líquidos intracelulares. Los mecanismos homeostáticos que conservan el
pH intracelular incluyen los amortiguadores fisiológicos, sobre todo el fosfato, bicarbonato
y proteínas. Todos aceptan o liberan protones, por tanto, amortiguan o resisten los cambios
en el pH.
Cuando se realizan experimentos con extractos de tejidos o enzimas purificadas, el pH se
conserva mediante la adición de amortiguadores, como MES, fosfatos, HEPES y TRIS,
entre otros.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
OBJETIVO
Explicar la función de una solución buffer, por medio de la preparación de un sistema de
amortiguamiento y la demostración de su capacidad para oponerse a los cambios de pH,
para comprobar la importancia de éstos en los sistemas biológicos.

Extraer las antocianinas de la col mediante un tratamiento térmico, para comprobar su

función como indicador ácido base.

INVESTIGACIÓN PREVIA
1. Defina ácido y base, según las teorías de Arrhenius, Brönsted-Lowry y Lewis
2. Concepto de pH. ¿Cómo se calcula? ¿De qué formas se puede medir?
3. ¿Qué es una solución buffer, como está constituida?
4. Escriba la ecuación de Henderson-Hasselbach. ¿Cuál es su utilidad?
5. Describa los sistemas fisiológicos de amortiguamiento de pH. Anote también las
reacciones de cada uno y sus valores de pka.
6. Anote la formula, reacción y rango de vire del rojo neutro así como los colores obtenidos
en los diferentes valores de pH
7. Describa el fundamento del potenciómetro y las tiras de papel para medir pH.
8. Anote la fórmula de las antocianinas y explique porque se comportan como indicadores
de pH
9. Anote las fórmulas y colores de las antocianinas en la escala de pH

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
1 aguja para vacutainer
1 tubo para vacutainer con anticoagulante
Un trozo pequeño de col morada

REACTIVOS FORMA DE PREPARACION

Na2HPO4 0.15 M
KH2PO4 0.15 M
Rojo neutro 0.01g en 50 mL de etanol. Agregar 50 mL agua
NaOH 0.4 N
HCl 0.4 N
Buffer de referencia pH 4 y 7

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

Durante la explicación se tomará una muestra sanguínea de uno de los integrantes del
equipo, misma que será procesada por los asesores para obtener plasma.

A) PREPARACIÓN DE SISTEMAS AMORTIGUADORES

Col morada.

En un mechero ponga a hervir 100 mL de agua destilada, en ella coloque unos trozos
pequeños de col de forma que queden cubiertos por el agua. Deje hervir durante 5 minutos
y apague el mechero.

Buffer de fosfatos

1. Rotular 4 tubos marcándolos con el pH esperado.

2. Agregar en cada tubo con una pipeta, las soluciones y cantidades mostradas en la
siguiente tabla, TENGA CUIDADO DE MEDIR LAS CANTIDADES PRECISAS, USAR
UNA PIPETA PARA LA SAL (Na2HPO4) Y OTRA DIFERENTE PARA EL ACIDO (KH2PO4).

Na2HPO4 0.15M (mL) KH2PO4 0.15M (mL) pH esperado

9.7 0.3 8.3
8.0 2.0 7.4
6.1 3.9 7.0
2.7 7.3 6.4

B) MEDICIÓN POTENCIOMÉTRICA DEL pH

1. Seguir las instrucciones de su asesor con relación al calibrado y manejo del
potenciómetro, tomar las lecturas de pH de los tubos y anotar en la sección
correspondiente.

C) COMPROBACIÓN DE pH CON TIRA INDICADORA UNIVERSAL

1. Introducir una tira de indicador universal de pH en los tubos, comparar los colores
desarrollados con la tabla del frasco de las tiras y anotar el valor obtenido. Anotar sus
resultados

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

D) ESTIMACIÓN DEL pH POR USO DE UN INDICADOR

Rojo neutro

1. Añadir dos gotas de indicador rojo neutro, a cada uno de los tubos con buffer de fosfatos,
mezclar bien y anotar los colores desarrollados.

Antocianinas

En la gradilla coloque 7 tubos de ensaye rotulados del 1 al 7

A cada uno de ellos agregue 5 ml de agua destilada y un ml del agua de la col donde se
encuentran las antocianinas
Se busca obtener 3 colores ácidos, 3 básicos y el neutro de acuerdo a la siguiente imagen

Para lograrlo realice lo siguiente:

Para el tubo 1 que será el más ácido con un color rosa agregue gotas del HCl 0.4 N y agite
entre cada una hasta obtener el color de la imagen
Para el tubo 7 que será el más básico de color verde agregue gotas del NaOH 0.4 N y
agite entre cada una hasta obtener el color de la imágen

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Para los tubos ácidos coloque en otro tubo de ensaye 3 ml de agua destilada y coloque una gota
del HCl 0.4 N, mezcla bien.

Al tubo 2 y 3 agrega gota a gota mezclando entre cada una la mezca ácida hasta obtener
colores diferentes entre rosa y violeta como en la imagen.

Para los tubos básicos coloque en otro tubo de ensaye 3 ml de agua destilada y coloque una gota
del NaOH 0.4 N, mezcla bien.

A los tubos 5 y 6 agrega gota a gota mezclando entre cada una la solución básica hasta
obtener uno de los colores entre azul y verde como en la imagen.

Para el tubo 4 que es el neutro revise el color obtenido y agregue según sea necesario la solución
ácida o básica para obtener el color azul de la imagen.

Una vez que logres los colores avisa a tu asesor para su revisión

E) EFECTOS DE UN BUFFER PARA OPONERSE A LOS CAMBIOS DE pH

1. Un solo equipo con una tira de indicador universal, medir el pH de la solución de

NaOH 0.4 N y del HCl 0.4 N. Anotar el resultado.

Buffer fosfatos

2. Del tubo con pH 7, tomar 5 mL y transferirlos a otro tubo de ensaye rotulado como 7b.
3. Al tubo 7, añadir gota a gota con una pipeta, solución de NaOH 0.4 N, contar las
gotas necesarias para que el color de la solución del tubo, sea igual a la del tubo mas
básico.
4. Al tubo 7b, añadir gota a gota con una pipeta, solución de HCl 0.4 N, contar el número
de gotas necesarias para que el color de la solución del tubo 7b vire hasta color rosa.
5. Tomar 5 mL del tubo de pH 8.3, añadir con cuidado, gota a gota con una
pipeta, solución de HCl 0.4 N y contar el número de gotas necesarias para virar el color a
rosa.

Agua

7. Realizar el procedimiento descrito en los puntos 3 y 4 sustituyendo las soluciones buffer

por agua destilada utilizando 2 gotas de indicador rojo neutro (PRIMERO MEDIR EL pH
INICIAL).

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2025_I
Plasma

8. Realizar el procedimiento descrito en los puntos 4 y 5 sustituyendo las soluciones buffer

por 1 mL de plasma empleando 2 gotas de indicador rojo neutro (PRIMERO MEDIR EL pH
INICIAL).
9. Tomar en cuenta las variables implicadas y comparar los resultados.

Antocianinas

Colocar 50 ml agua en un vaso y añadir la cantidad necesaria de indicador de pH de col

lombarda para que la disolución tenga un color apreciable. Si se coloca un papel blanco debajo del
vaso se observa mejor su color.
A continuación se agregan unas gotas de NaOH o.4 N a la disolución coloreada hasta que ésta
adquiera una coloración verdosa.
Se toma la mitad de esa disolución y se coloca en otro vaso, que será el color de referencia.
Seguidamente se sopla através de una pipeta en el interior de la disolución durante un minuto hasta
que la disolución cambiaráe de color volviéndose azul.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Medición potenciométrica de pH

Tubo pH esperado
pH

Uso de tira indicadora universal de pH

Tubo pH esperado
pH

Determinación de pH por uso de un indicador

Tubo pH esperado
pH* de acuerdo al cálculo
Color obtenido
* Realizar los cálculos de pH de cada sistema utilizando la ecuación de Henderson-Hasselbach

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2025_I

Efectos de un buffer para oponerse a cambios de pH:

pH del NaOH 0.4 N _____________

pH del HCl 0.4 N ______________

Muestra pH inicial Solución adicionada Número de gotas

Tubo 7 NaOH 0.4 N

Tubo 7b HCl 0.4 N

Agua destilada NaOH 0.4 N

Agua destilada HCl 0.4 N

Plasma NaOH 0.4 N

Plasma HCl 0.4 N

Tubo pH 8.3

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Realicen un párrafo para cada una de las partes de la práctica, tomando como guía lo que
se pide. Empleen las cuartillas que sean necesarias para ello.

Medición de pH
- Fundamente a que se deben las diferencias en los valores obtenido para un mismo
tubo con los distintos métodos y considerando los resultados ¿Cuál consideran el método
más eficiente? y ¿Por qué?

Determinación de pH por uso de un indicador

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
- Explique en base a la composición química (estructura) del rojo neutro y de las
antocianinas ¿Por qué un indicador me permite tener más rangos en cuanto coloraciones
de vire que el otro?

Resistencia a los cambios de pH

- Para explicar químicamente a que se debe la diferencia en el número de gotas
gastadas de forma experimental para lograr el cambio en el pH, toma en cuenta lo siguiente:
¿El agua es capaz de amortiguar el pH? Qué solución resiste más los cambios de pH el
buffer de fosfatos o el plasma anoten las reacciones químicas implicadas en ambos casos.
- Anote la reacción química que ocurre en el momento de soplar en el vaso, que
compuesto contiene el aire que soplamos y que sucede químicamente para logar el cambio
de color.

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Tiras de pH impregnadas con Depositar en la basura
R1 30 tiras No aplica
soluciones buffer municipal
Na2HPO4 0.15 M, KH2PO4 0.15M Verter a la tarja y dejar correr
R2 1L No aplica
un poco de agua
Tiras de pH impregnadas con Depositar en la basura
R3 10 tiras No aplica
NaOH 0.4 N municipal
Tiras de pH impregnadas con HCl Depositar en la basura
R4 10 tiras No aplica
0.4 N municipal
Na2HPO4 0.15M, KH2PO4 0.15M, Verter a la tarja y dejar correr
R5 150 mL No aplica
NaOH un poco de agua
Verter a la tarja y dejar correr
R6 H2O, NaOH, H2O, HCl 100 mL No aplica
un poco de agua
Verter a la tarja y dejar correr
R7 Plasma sanguíneo, NaOH, HCl 100 mL No aplica
un poco de agua
Inactivar en un vaso de
precipitados con solución de
Tubos con tapón morado y agua: cloro (3:1) , enjuagar en
R8 10 tubos No aplica
coágulos sanguíneos la tarja al chorro de agua para
desechar coágulos y depositar
los tubos en la basura municipal

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
REFERENCIAS

Murray, K., Granner K. y Rodwell, W. (2008). Harper: Bioquímica Ilustrada (18ª ed.) México
D.F: El Manual Moderno,
Areal, R. (1996). Química Orgánica Aplicada I (2ª ed.). Barcelona, España: Servei de
Publicacions de la UPC.

Devlin, T. (2006). Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas (4ª ed.). Barcelona,
España: Reverté.

Flores A., Sánchez, S. y Uribe, S. Bioquímica. Manual de Prácticas. México DF: Mc Graw-
Hill Interamericana

https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=92030108

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
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2025_I
PRÁCTICA 2
HOMOGENEIZACIÓN Y CENTRIFUGACIÓN
INTRODUCCIÓN
Gran parte del conocimiento estructural y funcional con que actualmente se cuenta acerca
de la célula, ha surgido del trabajo experimental realizado con biomoléculas aisladas y
separadas de cualquier organismo ya sea animal, vegetal, bacteriano o viral. La bioquímica
es una ciencia de laboratorio que tiene una naturaleza multidisciplinaria y abarca temas,
que van desde organismos multicelulares a unicelulares, de sistemas celulares enteros a
sistemas subcelulares divididos y de agregados moleculares a las moléculas mismas.

Las investigaciones en Bioquímica están enfocadas al estudio, de una o más de las

moléculas que participan en un fenómeno biológico, tratan de explicar cómo participan las
llamadas biomoléculas en estos fenómenos. Estas investigaciones se realizan como
estudios In vivo, que son los que utilizan sistemas celulares intactos y estudios In vitro, que
son los que usan componentes celulares previamente aislados, es decir, sistemas libres de
células.

Para lograr aislar las biomoléculas se han utilizado diversos métodos y técnicas de
laboratorio, como ejemplo de estos se encuentra la homogenización, que es un método de
preparación de muestras que consiste en la ruptura de membranas celulares, de órganos y
tejidos para obtener un –homogenado- que contiene los diferentes componentes
moleculares y se puede realizar mediante métodos mecánicos, físicos, químicos y
biológicos, la elección de alguno en particular depende del tipo de tejido que se quiera
disgregar. Para minimizar los efectos causados por la homogeneización, se deben
mantener las sustancias en condiciones tan próximas como sea posible a las que se
considera se encuentran en la célula.

Después de la homogeneización los componentes celulares se pueden aislar mediante

centrifugación. Las técnicas de separación por centrifugación se basan en el
comportamiento de las partículas ante un campo centrífugo aplicado; las partículas están
suspendidas en un medio líquido específico contenido en un tubo situado en un rotor. El
rotor está centrado sobre el vástago propulsor de la centrífuga. Las partículas que difieren
en densidad, en tamaño o en forma sedimentan a diferentes velocidades cuando se
someten a un campo centrífugo; en síntesis la centrifugación es una técnica mediante la
cual se separan, aíslan y purifican los componentes de un tejido en suspensión, con base
en su comportamiento en un campo gravitacional aumentado cuando se le aplica una fuerza
centrífuga bajo alta velocidad rotacional, y a partir de ello se van a obtener dos fracciones:
el sobrenadante y la pastilla, sedimento o pellet.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
OBJETIVO
Descubrir que en bioquímica para estudiar el material biológico es necesario obtener muestras
puras o enriquecidas en un determinado componente celular y para ello hay que disgregarlas u
homogeneizarlas y separar sus componentes por centrifugación, tomando en cuenta las variables
físicas y químicas que permitan conseguir esas fracciones celulares para que puedan ser
caracterizadas con un mínimo de interferencias.

INVESTIGACIÓN PREVIA
¿Qué es la homogenización y que parámetros físicos y químicos se deben considerar al realizarla?
Por qué es importante considerar:
Una temperatura de 4°C
El medio utilizado en la homogenización (NaCl 0.9%)
El periodo de homogenización empleado para cada homogeneizador
Investigue la composición general del tejido vegetal y tejido animal relacionados con la práctica
¿Qué tipo de homogeneizador se debe utilizar para muestras blandas, duras y semiduras?
¿Qué es la centrifugación y cuál es su fundamento?
¿Cuáles son los parámetros físicos que se deben considerar durante la centrifugación de un
homogenizado tisular?
Describa las características de una centrífuga. ¿Qué tipos de centrífugas existen?

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS, SOLO
UNO DE ELLOS DE ACUERDO A LO INDICADOR POR SU ASESOR
1 hígado de pollo
1 trozo de cerebro de res
1 trozo de músculo de res
3 corazones de pollo
3 hojas de espinaca

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

500 mL de solución isotónica de 0.9 g de NaCl por cada 100 mL de
NaCl solución (aforado)
50 mL de solución de NaCl al 0.2% 0.2 g de NaCl por cada 100 mL de
solución (aforado)
50 mL de solución de NaCl al 1.5% 1.5 g de NaCl por cada 100 mL de
solución (aforado)

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
NOTA: TODO EL MATERIAL Y SOLUCIONES QUE SE UTILIZAN PARA REALIZAR LA
HOMOGENEIZACIÓN DEBEN ESTAR PREVIAMENTE ENFRIADOS A 4°C

TIPOS DE HOMOGENEIZADORES

1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. Cortar la muestra asignada en fragmentos pequeños, pesar 3 porciones de 1 g cada una

2. Colocar por separado, cada porción en el homogeneizador correspondiente: virtis(vaso
especial solicitarlo a su asesor), potter y mortero

2. HOMOGENEIZACIÓN EN VIRTIS

1. Agregar 5 mL de solución isotónica de cloruro de sodio (previamente enfriada a 4 0C) al

vaso del virtis
2. Homogeneizar durante 3 minutos (siguiendo las instrucciones de su asesor)
3. Dejar sobre hielo para centrifugar posteriormente

3. HOMOGENEIZACIÓN EN POTTER

1. Agregar 5 mL de solución isotónica de cloruro de sodio (previamente enfriada a 4 0 C) al

homogenizador potter.
2. Homogeneizar con 15 pasos (siguiendo las instrucciones de su asesor)
3. Dejar sobre hielo para centrifugar posteriormente

4. HOMOGENEIZACIÓN EN MORTERO

1. Agregar 5 mL de solución isotónica de cloruro de sodio (previamente enfriada a 4 0 C) al

mortero
2. Homogeneizar triturando el tejido con el pistilo durante 3 minutos
3. Dejar sobre hielo para centrifugar posteriormente

5. CENTRIFUGACIÓN

1. Transferir por completo el contenido del mortero, potter y vaso del virtiz incluir los sólidos
si existen. Formar parejas entre los tubos de los homogenados,.
2. En una balanza granataria de dos platos, equilibrar el peso de cada una de las parejas
de acuerdo a las instrucciones de su asesor.Considerar los cuidados al realizar una
centrifugación (se coloca en cada plato de la balanza un vaso de precipitados de plástico,
una camisa metálica y un tubo con homogenado)

3. Colocar la pareja de tubos previamente equilibrados dentro de la centrifuga en

posiciones opuestas
4. Centrifugar a 2500 rpm durante 10 minutos

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
5. Cuando se cumpla el tiempo de centrifugación, apagar la centriguga y esperar a que se
detenga totalmente. Sacar los tubos de la centrífuga
6. Colocar los tubos en una gradilla y comparar los tres tipos de homogenizadores para
cada tejido. Comparar tamaño, forma, color y demás características de las pastillas y
sobrenadantes
7. Con una pipeta de 10 mL, transferir cuidadosamente y por separado los sobrenadantes
a tubos de ensaye y medir el volumen
8. Observar a contraluz los sobrenadantes de los tejidos y comparar
9. Describir en la tabla I, de cada uno de los juegos de homogenizados por tejido, las
diferencias que observa, discuta y con base en ello proponer cuál es el mejor
homogenizador para cada tejido

Recopilar la información de los demás equipos para establecer cual se consideran el

mejor homogeneizador para cada una de las diferentes muestras que se trabajaron
en el grupo

EFECTO DE LA RELACIÓN VOLUMEN DE SOLUCIÓN DE HOMOGENIZACIÓN :

CANTIDAD DE TEJIDO

Es muy importante respetar los volúmenes, evite juntar su muestra con la de otro
equipo, independientemente del homogeneizador que haya elegido

1. Cortar la muestra en fragmentos pequeños, pesar 3 porciones de 1 g cada una

2. Rotular de la siguiente manera 3 tubos de ensaye previamente enfriados: 1/3, 1/5, 1/10
3. En el homogeneizador seleccionado colocar la muestra y 3 mL de solución salina
isotónica y homogeneizar.
4. Transferir el contenido al tubo rotulado como 1/3.
5. Centrifugar equilibrando con un tubo 1/3 de otro equipo.
Repetir los pasos 3 a 5 con volúmenes de 5 y 10 mL

6. Comparar el efecto de la variación de volumen de solución de homogenización en la

pastilla y sobrenadante

7. Describir en la tabla II, de cada uno de los homogenizados las diferencias que observa,
discutir los resultados y con base en ello proponer cuál es la mejor relación volumen de
solución de homogenización/cantidad de tejido

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2025_I
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE HOMOGENIZACIÓN EN EL
TEJIDO

1. Cortar la muestra en fragmentos pequeños, pesar 3 porciones de 1 g cada una

2. Rotular 3 tubos de ensaye como: 0.2%, 0.9% y 1.5%
3. En el homogeneizador seleccionado colocar la muestra y 5 mL de solución de NaCl al
0.2%, y homogeneizar.
4. Transferir el contenido al tubo rotulado como 2%.
5. Centrifugar sin olvidar equilibrar los tubos.
Repetir los pasos 3 a 5 con volúmenes de 5 mL de solución de NaCl al 0.9% y 5 mL de
solución de NaCl al 1.5%

6. Comparar el efecto de la variación de concentración de la solución de homogenización

en la pastilla y sobrenadante
7. Describir en la tabla III, de cada uno de los homogenizados las diferencias que observa,
discutir los resultados y con base en ello proponer cuál es la mejor concentración de la
solución para homogeneizar

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
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2025_I

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
TABLA I. TIPO DE HOMOGENEIZADOR

TIPO DE OBSERVACIONES PASTILLA OBSERVACIONES

HOMOGENIZADOR POR TEJIDO SOBRENADANTE

VIRTIS

POTTER

MORTERO

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2025_I

MEJOR HOMOGENEIZADOR POR TEJIDO:

Tejido características Mejor homogeneizador

TABLA II. RELACIÓN DE VOLUMEN DE SOLUCIÓN DE HOMOGENEIZACIÓN:

VOLUMEN DE TEJIDO

VOLUMEN DE OBSERVACIONES PASTILLA OBSERVACIONES

SOLUCIÓN POR TEJIDO SOBRENADANTE

1/3

1/5

1/10

MEJOR RELACIÓN DE VOLUMEN DE SOLUCIÓN: CANTIDAD DE TEJIDO: _________

_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

TABLA III. CONCENTRACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE HOMOGENEIZACIÓN

CONCENTRACIÓN OBSERVACIONES PASTILLA OBSERVACIONES

DE LA SOLUCIÓN POR TEJIDO SOBRENADANTE

0.2%

0.9%

1.5%

MEJOR CONCENTRACIÓN DE LA SOLUCIÓN: ________________________________

_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
INSTRUCCIONES: En equipos de trabajo redacta en párrafos y de manera impersonal (es
decir con tus palabras) las respuestas a lo que se te solicita. Utiliza el número de cuartillas
que te permitan responder de manera adecuada. Recuerda que las indicaciones propuestas
son una guía para elaborar el análisis de resultados por lo que NO DEBES ANOTARLAS.

Centrifugación: explica el fundamento de la técnica; para que te sirvió

realizarla; qué partes se pueden identificar en cada tubo después de
centrifugar y para que te sirve saber esa información. Recuerda considerar
errores experimentales si se presentaron indicando de qué manera afectan los
resultados.
Homogeneización:
De acuerdo con los resultados obtenidos indica cual fue el mejor
homogeneizador para cada tipo de tejido utilizado por los diferentes equipos,
justificando como se observaron los sobrenadantes y las pastillas. Indica si lo
que obtuviste experimentalmente coincide con lo reportado en la literatura
explicando si/no y porqué. Recuerda considerar errores experimentales si se
presentaron indicando de qué manera afectan los resultados.
Explica si la cantidad de volumen de solución homogeneizadora utilizada
afectó el proceso de homogeneización y como se vieron afectados los
sobrenadantes y pastillas después de centrifugar. Recuerda considerar
errores experimentales si se presentaron indicando de qué manera afectan los
resultados.
Explica si la concentración de la solución homogeneizadora afectó el proceso
de homogeneización y como se vieron afectados los sobrenadantes y pastillas
después de centrifugar. Recuerda considerar errores experimentales si se
presentaron indicando de qué manera afectan los resultados.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
DISPOSICIÓN DE RESÍDUOS
CANTIDAD
CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN GENERADA POR
CRETIB DISPOSICIÓN
GRUPO (10 equipos)
Restos de muestras de Aproximadamente 200 No aplica Residuo biológico no
hojas de espinaca, g tóxico ni infeccioso,
petalos de flores y depositar en la basura
R1
muestras animales como: municipal
higado de pollo, bisteck y
cerebro de res
Pastillas de los Aproximadamente 100 No aplica Residuo biológico no
homogenados g tóxico ni infeccioso,
R2
depositar en la basura
municipa
Sobrenadante de los Aproximadamente 250 No aplica Verter a la tarja y dejar
R3
homogenados mL correr suficiente agua

REFERENCIAS
Tejera, S., Rodríguez, A., y Rodríguez, M. (2004). Laboratorio de Química Orgánica.
Técnicas Básicas. SL.Tenerife: Arte Comunicación Visual.

Coyne, G. (1997). The Laboratory Companion. A Practical Guide to Materials, Equipment

and Technique. USA: John Wiley & Sons.

Alberts B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. (2008). Molecular
Biology of The Cell (5a ed.). USA: Garland Science.

Rendina, G. (1974). Técnicas de bioquímica aplicada. México, D.F: Interamericana.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 3
TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
INTRODUCCIÓN
Uno de los problemas con el que continuamente se encuentra el bioquímico es el de la
separación y purificación de uno o más compuestos biológicos en una mezcla. Para
conseguir tales separaciones, uno de los métodos más utilizados es la cromatografía. Las
técnicas cromatográficas pueden utilizarse para la separación de grandes (varios gramos)
o pequeñas cantidades (picogramos) de materiales. La selección de una forma particular
de cromatografía para conseguir una separación depende de la estructura química, y por
consecuencia de las propiedades físicas y químicas de los componentes de una mezcla, y
es frecuente que se puedan utilizar varios métodos cromatográficos uno tras otro para lograr
la separación y purificación de un compuesto.

La cromatografía es un método de separación y purificación, que se basa en las diferencias

de migración de los componentes de una mezcla sobre una fase estacionaría por influencia
de una fase móvil. Todos los sistemas cromatográficos constan fundamentalmente de dos
fases; una de ellas es la fase estacionaria, que puede ser sólida, líquida o una mezcla
sólido-líquida inmovilizada. La segunda fase, la fase móvil, puede ser líquida o gaseosa. La
selección de las fases se hace de forma tal que los compuestos a separar tengan distintos
coeficientes de distribución. El término coeficiente de distribución o reparto se usa
generalmente para describir el modo en que un compuesto se distribuye entre dos fases
inmiscibles.

Cromatografía en papel. Esta técnica se basa en el principio de que un compuesto se

distribuye entre dos fases líquidas. La fase estacionaria la constituye el agua atrapada entre
las fibras de celulosa y la fase móvil una mezcla de disolventes orgánicos que se moverán
a través del papel por capilaridad arrastrando a los componentes de la mezcla que se
distribuyen de acuerdo a sus coeficientes de reparto.

Cromatografía en capa fina. El principio general implica los fenómenos de adsorción y

reparto. Para la cromatografía en capa fina se recubre una lámina de vidrio o aluminio con
una capa delgada de un adsorbente (con espesor entre 0.25-0.5 mm, dependiendo del tipo
de análisis), y se seca en estufa a 100-120 C; la muestra se aplica con micropipeta o jeringa,
se introduce la placa en una cámara previamente saturada con la mezcla de disolventes y
se permite que se efectúe la separación de los componentes a medida que la mezcla
asciende por la placa.

Los pigmentos contenidos en diversos vegetales poseen propiedades que les permiten
distribuirse de forma diferente en los materiales utilizados para separaciones
cromatográficas, además de que por ser coloridos resulta muy sencillo visualizar la
separación.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
OBJETIVO
Separar los pigmentos presentes en diversas muestras vegetales por cromatografía en
papel, capa fina (TLC) y columna, para comparar los resultados obtenidos en las diferentes
técnicas.

INVESTIGACIÓN PREVIA
1. Investigar los pigmentos se encuentran en las muestras vegetales a trabajar.
2. Investigar las formulas químicas y propiedades físicas y químicas de los pigmentos del
punto anterior.
3. Proporcionar el fundamento y tipos de cromatografía
4. Cuáles son las fases móviles y estacionarias de las cromatografías a realizar?
5. ¿Cómo se realizan la cromatografía en papel, en capa fina y en columna?
6. Investigar la polaridad de los solventes que conforman las fases móviles.

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
Hojas de espinacas
Pétalos de rosa roja, geranio rojo o anaranjado, bugambilia rosa
Hojas de plantas de ornato con dos o más colores
Algodón
100 g azúcar refinada

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

300 mL de etanol absoluto Q.P.
700 mL de éter de petróleo Q.P.
20 mL de acetona Q.P.
20 mL de benceno Q.P.
500 mL de butanol
150 mL ácido acético
20 g de sulfato de sodio anhidro Q.P.
500 g de silica gel para columna

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2025_I
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
A) HOMOGENEIZACIÓN
Pesar 3 g de hojas de espinaca y cortarlas en trozos pequeños
Pesar 3 g de cada una de las otras muestras y cortar en trozos pequeños
Colocar cada muestra en morteros por separado
Adicionar 10 mL de etanol absoluto a cada muestra
Homogenizar fuertemente.

B) CENTRIFUGACIÓN
Colocar en tubos para centrifuga cada uno de los homogenados obtenidos con todo y los
restos solidos que tenga, un tubo por cada homogenado.
Equilibrar los tubos en una balanza granataria de dos platos, junto con las camisas
correspondientes
Colocar los tubos dentro de la centrifuga

Nota: No olvidar colocar cada par de tubos en posiciones opuestas.

Centrifugar durante 10 min a 2500 rpm

Sacar los tubos de la centrifuga y realizar sus observaciones en cuanto a color e
intensidad del sobrenadante y de la pastilla

C) SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFÍA

1. CROMATOGRAFÍA EN PAPEL (HOMOGENADO DE ESPINACA)
1.. Cortar una tira de papel Whatman de 3 x 20 cm. Hacer las marcas indicadas por su
asesor. Todas las marcas se deben hacer con lápiz y no debe tocarse el papel con las
manos, utilice guantes.

EQUIPO

Fig. 1. Aplicación de la muestra en

Punto de aplicación 1.5 cm cromatografía en capa fina y papel

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2025_I
2. Colocar sobre la tira de papel, con ayuda de un capilar o micropipeta una muestra del
sobrenadante del homogenado de hojas de espinaca. La mancha debe tener una coloración
lo más intensa posible y además debe ser lo más compacta que se pueda (por lo menos
cinco aplicaciones en el mismo punto, dejar secar entre cada aplicación) (figura 1)
INTRODUCIR SIMULTÁNEAMENTE, TODAS LAS TIRAS DE PAPEL DEL GRUPO A LA
CÁMARA DE CROMATOGRAFIA SIGUIENDO LAS INSTRUCCIONES DE SU ASESOR.
3. Correr la cromatografía en una mezcla: éter de petróleo-acetona-benceno (85:5:10) en
una cámara cromatográfica de 25x25x10 cm, previamente saturada durante 15 min.
4. Sacar el cromatograma, marcar inmediatamente con lápiz el frente del disolvente.
Posteriormente marcar las manchas. Dejar secar y calcular los Rf de cada componente,
registrar los resultados en la tabla I de la sección resultados y observaciones.

2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (HOMOGENADO DE PÉTALOS DE FLORES)

Cortar las placas de silica gel 60F en rectángulos de 2 x 5 cm, cuidar de no maltratarla ni
tocarla con los dedos.
Aplicar la muestra con un capilar aproximadamente a 1.5 cm del borde (figura 1), aplicar
varias veces (mínimo 5 veces) dejar secar entre una y otra aplicación para obtener una gota
concentrada y compacta.
Correr la cromatografía en una mezcla: butanol-ácido acético concentrado-agua destilada
(63:16:21) en una cámara de cromatografía 20x15x8 cm, previamente saturada durante 15
min.
Colocar la placa en la cámara de cromatografía, cuidar que el solvente no toque la gota de
muestra y tapar rápidamente
Sacar la tira de la cámara cuando el solvente se encuentre aproximadamente a 1 cm del
borde superior.

Dejar secar y calcular los Rf de cada componente, registrar los resultados en la tabla II de
la sección resultados y observaciones

3a. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Lavar y secar perfectamente una columna para cromatografía o una bureta de 25 mL.
Colocar un pequeño trozo de algodón en el fondo.

En cada mesa un equipo realizará esta cromatografía con espinacas y el otro con
flores de acuerdo a las instrucciones de su asesor.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Espinacas
2. Para empacar la columna para cromatografía coloque el embudo en la parte superior y
agregue la sacarosa. La columna empacada debe tener 20 cm de longitud. Una vez
empacada adicionar una pequeña capa de sulfato de sodio anhidro, puede golpear
suavemente la columna para que se compacte ligeramente.
3. Agregar el éter de petróleo para eluir la columna con la llave abierta siempre para obtener
un goteo lento pero constante, evitar cerrar la llave durante el proceso, esto podría
fraccionar la columna y ya no funcionará. Una vez logrado esto permitir que la fase móvil
se absorba casi por completo y adicionar inmediatamente 1mL del sobrenadante de
espinaca, cuidar que no entre aire a la columna.
4. Una vez introducida la muestra permitir que se estratifique dentro de la fase estacionaria,
y entonces agregar un exceso de fase móvil para dejar que la muestra corra sin permitir
que se seque la superficie; recibir las diferentes fracciones coloridas en tubos de ensaye.

5. Anotar sus resultados en la tabla III de la sección resultados y observaciones

Pétalos u hojas de planta de diferente color

2. Para empacar la columna para cromatografía coloque el embudo en la parte superior y

agregue la sacarosa. La columna empacada debe tener 20 cm de longitud. Una vez
empacada adicionar una pequeña capa de sulfato de sodio anhidro, puede golpear
suavemente la columna para que se compacte ligeramente.
3. Eluir la columna con la fase móvil de butanol-ácido acético concentrado-agua destilada
(63:16:21) y cuando ya exista un goteo constante, adicionar 1 mL del sobrenadante de
pétalos, de manera que se permita estratificar la muestra en todo lo ancho de la pipeta
para evitar un mal corrimiento.
4. Permitir que las muestras penetren en la fase estacionaria. Después se debe eluir con
la fase móvil y recibir las diferentes fracciones coloridas en tubos de ensaye.
5. Anotar sus resultados en la tabla IV de la sección resultados y observaciones
NOTA: las primeras fracciones recibidas que no presenten color pueden reutilizarse
ya que aún no presentan componentes de la muestra.

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2025_I
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Tabla I. Cromatografía en papel de pigmentos de espinaca.

Número color de los Rf de cada Observaciones

componentes componente
separados

Tabla II. Cromatografía en capa fina de pigmentos de pétalos de flores u hojas de plantas
de distintos colores.

color de los Rf de cada Observaciones

Muestra componentes componente
separados

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2025_I
Tabla III. Cromatografía en columna de pigmentos de espinaca.

color de los Observaciones

componentes
separados

1
2
3
4
5

Tabla IV. Cromatografía en columna de pigmentos de pétalos de flores u hojas de plantas

con distintos colores.

Muestra ( color de los Observaciones

nombre de componentes
la flor) separados

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2025_I

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Recuerden redactar un párrafo por cada parte donde justifiquen químicamente y

argumenten sus resultados, tomando en cuenta lo siguiente:

De la homogeneización, justifique brevemente con base en los resultados reportados:

Si el homogeneizador empleado es el adecuado para el tejido vegetal.
Porque se emplea el etanol como solvente.

De la centrifugación, justifique la importancia de equilibrar los tubos y colocarlos uno frente

a otro,
¿a qué velocidad centrifugó y a cuantas g equivale?,
¿es suficiente para separar la muestra trabajada?

Y de las diferentes cromatografías, compárelas justificando:

¿Qué diferencias y semejanzas existen entre las cromatografías en papel, en capa fina y
en columna? Centrarse en: fase estacionaria, móvil y el soporte de la cromatografía.
¿el orden de separación de los pigmentos es el mismo en todas?
¿se observaron los mismos pigmentos en ambos casos para las espinacas y para los
pétalos de las flores?
¿cómo es la interacción entre los pigmentos y la fase móvil en cada caso?
Con base en sus resultados, ¿cuál cromatografía es mejor para cada una de las muestras?

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2025_I
DISPOSICIÓN DE RESÍDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Fragmentos de muestras No aplica Residuo biológico no tóxico ni
R1 vegetales: hojas de espinaca y infeccioso, depositar en la
petalos de flores basura municipal
Pastillas de los homogenados y No aplica Depositar en la basura
sobrenadantes municipal
R2 Sobrenadantes:disponer en
frascos debidamente
etiquetados
Mezcla de butanol-Acido acético 100 mL Inflamable Reutilizar para otros grupos o
R3 concentrado-agua destilada disponer en un frasco
debidamente etiquetado
Papel filtro con pigmentos 10 tiras No aplica Depositar en la basura
R4
vegetales municipal
Mezcla: éter de petróleo-acetona- 100 mL No aplica Reutilizar para otros grupos o
R5 benceno disponer en un frasco
debidamente etiquetado
Placas de cromatografia con 20 placas pequeñas Depositar en la basura
R6
pigmentos de flores municipal
Azúcar refinada con una pequeña Aproximadamente 300 g No aplica Dejar secar al aire y depositar
cantidad de sulfato de sodio en la basura municipal
R7
anhidra e impregnada con eter de
petroleo
Eter de petróleo Alcohol con pigmentos Inflamable Disponer en un frasco
R8
vegetales debidamente etiquetado
Silica gel con una pequeña Toxico Disponer en un frasco
cantidad de sulfato se sodio debidamente etiquetado
R9 anhidro e impregnada con
butanol-ácido acético
concentrado-agua destilada
Pequeñas cantidades de No aplica Volumenes muy pequeños.
pigmentos de petalos de flores Disponer en un frasco
R10
con butanol-ácido acético debidamente etiquetado para
concentrado-agua destilada el residuo

REFERENCIAS
Pavia D., Lampman, G. & Kriz, G. (1982). Introduction to Organic Laboratory Techniques.
A Contemporary Approach (2a ed.). USA: CBS College Publishing.

Sikorski, Z. (2007). Chemical and Functional Properties of Food Components (3a ed.). LLC,
USA: Taylor & Francis Group.

Hernández H. y González, C. (2002). Introducción al Análisis Instrumental. Barcelona,

España: Ariel, S.A.

Landgrebe, J. (2005). Theory and Practice in the Organic Laboratory (5a ed.). USA:
Thomson LeRNAing, Inc.

Mackenzie, C. (2004). Experimental Organic Chemistry (4a ed.). USA: Prentice-Hall.

Cela, R., Lorenzo, R. y Casais, M. (2002). Técnicas de Separación en Química Analítica.

España: Síntesis, S.A.

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2025_I
PRÁCTICA 4
ELECTROFORESIS Y DIÁLISIS
INTRODUCCIÓN
DIÁLISIS
La diálisis es un método de separación y purificación de biomoléculas que consiste en el
paso de moléculas de bajo peso molecular a través de una membrana dializadora
(semipermeable) cuyos poros son ultramicroscópicos; por ejemplo el celofan o celulosa,
pergamino y el colodión. El disolvente y las moléculas de bajo peso molecular como iones
inorgánicos (ej. cloruro y sodio) y pequeñas moléculas orgánicas (glucosa) atraviesan la
membrana desde la solución más concentrada a la más diluida, la difusión es el fenómeno
por el cual las moléculas disueltas tienden a distribuirse uniformemente en el seno del
líquido, siendo inversamente proporcional a su peso molecular.
ELECTROFORESIS
La electroforesis es una herramienta práctica para la separación y purificación de mezclas
de compuestos biológicos que sirve tanto de método analítico, como preparativo para
realizar posteriormente otras técnicas analíticas.
La electroforesis es el fenómeno por medio del cual una molécula con carga neta se
desplaza en un campo eléctrico. Considerando esta definición, las moléculas biológicas que
poseen grupos ionizables y puede existir en disolución en forma de especies con carga
eléctrica, tanto como cationes (+) o como aniones (-), son aminoácidos, péptidos, proteínas
y ácidos nucleicos. Además, las moléculas que tienen cargas similares poseerán distintas
relaciones carga/masa, debido a diferencias de peso molecular. En conjunto estas
diferencias constituyen la base suficiente para una migración diferencial, cuando los iones
en disolución se someten a un campo eléctrico.
Los cationes se trasladan hacia el cátodo (-) y los aniones hacia el ánodo (+) a velocidades
que dependen del equilibrio entre la fuerza impulsora del campo eléctrico sobre los iones
cargados de la muestra y las fuerzas de retardo entre las moléculas migrantes y el medio
circundante, y que son principalmente de fricción y electrostáticas.
La velocidad con que las diferentes sustancias se desplazan durante el transcurso de la
electroforesis se denomina velocidad de migración. El desplazamiento de los componentes
de la muestra durante el transcurso de la misma depende de:
La muestra
El campo eléctrico
La solución buffer
El medio de soporte

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2025_I
Por todo lo anteriormente expuesto la electroforesis se emplea como un método analítico y
preparativo efectivo en el área bioquímica.
Cámara de Electroforesis
Permite separar moléculas cargadas eléctricamente, al aplicarse un campo eléctrico.
Existen cámaras de electroforesis verticales y horizontales, en el laboratorio de Bioquímica
Celular, utilizaremos la cámara horizontal.

OBJETIVO
Demostrar la utilidad de la diálisis, aplicando este método a una muestra de saliva para
comparar la actividad de la enzima amilasa salival dializada y no dializada, mediante un
método cualitativo de colorimetría visual.

Aplicar el método electroforético al separar una mezcla de aminoácidos, mediante

electroforesis en papel y para su identificación revelarlos con ninhidrina.

INVESTIGACIÓN PREVIA

¿Qué es la diálisis y cuál es su fundamento?

¿Qué es la amilasa salival, que reacción cataliza y cuáles son sus condiciones óptimas de
actividad? ¿Qué cofactores y/o activadores requiere?
¿Cuál es la composición de la saliva?
Investigar la reacción del lugol con el almidón, y con los demás productos de la reacción
catalizada por la amilasa salival.
¿Qué es la electroforesis y cuál es su fundamento? ¿Qué influencia tiene el paso de la
corriente (voltaje e intensidad), el amortiguador, la muestra y medio de soporte sobre el
método de electroforesis?
¿Qué es el pI y cómo se calcula de un aminoácido con 2 y 3 valores de pka?

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Investigar el comportamiento acido básico de los aminoácidos

¿De qué elementos consta una cámara de electroforesis? ¿Qué carga tienen el ánodo y el
cátodo?
Investigar la estructura química y valores de pka de los aminoácidos a utilizar.
¿Cuál es la fórmula de la ninhidrina? Cuál es la reacción química que se llava a cabo con
los distintos aminoácidos.

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
Hilo cañamo
Una liga
Masking tape

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

100 mL de solución de lugol (I2/KI) al 0.253g de yodo metálico y 0.166 g de KI en 100 mL
0.01M (en gotero ambar) agua destilada
2 L de solución buffer de boratos a pH 2.48 g ác. Bórico + 3.33g borato de sodio aforar a
8.6 1 L con agua destilada. Ajustar pH = 8.6
30 mL de revelador de ninhidrina en Disolver 0.5g de ninhidrina en 100 mL de butanol
butanol (en recipiente ámbar con
rociador de vidrio)
5 mL de mezcla de aminoácidos Pesar 0.1g de cada aminoácido y agregar a 1 mL
(prolina, ác. glutámico, lisina, de de solución salina (NaCl 0.9%)
reciente preparación) en frasco
gotero pequeño
4 galones de agua destilada
50 mL de solución de almidón al 1% Disolver 10 g de almidón en 200 mL de agua
destilada fría. Calentar aproximadamente 750 mL
de agua hasta ebullición. Adicionar lentamente y
con agitación a la solución anteriormente
preparada y dejar en ebullición 4-5min, enfriar a
temperatura ambiente y completar el volumen de
1000 mL con H2O

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2025_I
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
A) DIÁLISIS
1. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
1. Un alumno donará la muestra. Enjuagar perfectamente la boca y masticar una liga para
estimular la producción de saliva
2. Colectar en un vaso de precipitados de 50 mL, una muestra de 10 mL de saliva
2. DIÁLISIS DE UNA MUESTRA DE SALIVA
Un equipo designado por el asesor de laboratorio realizara lo siguiente:

- En un vaso de precipitados de 250 mL calentar a ebullición aproximadamente 100 mL de

agua destilada. Colocar dentro del agua los tubos para diálisis, una vez que estos se
suavicen un poco sacarlos del agua y repartirlos a los equipos.
NO TOCAR EL TUBO CON LOS DEDOS, EMPLEAR GUANTES.
1. Cerrar cuidadosamente el tubo para diálisis por un extremo empleando hilo cáñamo a
manera de formar una pequeña bolsa
2. Colocar dentro de la bolsa 2 mL de saliva y cerrar el otro extremo con hilo dejando
aproximadamente 10 cm de hilo para fijarlo, siga en todo momento las indicaciones de su
asesor
3. Sumergir la bolsa en 1L de agua destilada fijándola al exterior del vaso con el hilo
excedente. Una vez que todos los equipos coloquen sus bolsas de diálisis, poner en
agitación durante 60 min
4. Cambiar el agua cada 20 min
5. Al terminar el tiempo establecido, sacar los tubos de diálisis y manejar con mucho cuidado
su muestra de saliva dializada

B. ACTIVIDAD DE AMILASA SALIVAL

Antes de iniciar esta parte:

Colocar en un tubo de ensaye 10 mL de almidón al 1% y poner en un baño a 37 o

Colocar en un tubo de ensaye agua destilada y poner en un baño a 37 o

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
1. Preparar 1 mL de una dilución agua:saliva no dializada, por ejemplo, puede `prepararla
de la siguiente manera: 0.5 mL de saliva con 0.5 mL de agua o bien 0.3 mL de saliva con
0.7 mL de agua, etc . Elija usted con cual dilución iniciar (o solicite instrucciones a su
asesor)
2. Colocar en un tubo de ensaye 1mL de solución de almidón al 1% (a 37º en agua e
incubar a 37oC por 2min
4. Añadir al tubo el mL de saliva diluida y continuar la incubación a 37 oC. Iniciar en ese
instante la medición del tiempo de reacción.

5. Tomar a los 30 seg una muestra de la mezcla de incubación SIN SACAR EL TUBO DEL
BAÑO DE AGUA y colocar sobre una cavidad de una placa de porcelana a la cual
previamente se le han depositado 2 gotas de solución de lugol, éste debe de colocarse
sólo con segundos de anticipación.
6. Repetir la reacción cada 30 segundos (60, 90, 120, 150, 180, etc.) hasta que la coloración
obtenida sea amarilla (solución de lugol)
7. Buscar la dilución adecuada para que el tiempo en que la enzima degrade el almidón sea
de entre 2 y 3 min( 120 – 180 seg).
Si el tiempo es mayor entonces deberá preparar una dilución con mayor cantidad de saliva
y menor de agua, por ejemplo si se inicio con 0.5 de saliva y 0.5 mL de agua ahora puede
emplearse 0.7 de saliva y 0.3 mL de agua.
Si por el contrario la reacción termina antes de los 120 seg entonces se deberá preparar
una dilución mayor, por ejemplo si partimos de la dilución de 0.5 mL de saliva y 0.5 mL de
agua ahora puede realizarse con 0.3 mL de saliva y 0.7mL de agua.

Nota: Se deben realizar tantas diluciones como sea necesario hasta encontrar la dilución
indicada.

8. Una vez obtenida la dilución adecuada, esperar a que termine la diálisis y repetir la
metodología con una muestra de saliva dializada a la misma dilución (no pipetear el
precipitado obtenido en el tubo de diálisis)

Registrar sus resultados en la tabla correspondiente, comparar resultados y concluir

C. ELECTROFORESIS EN PAPEL
1. Cortar una tira de papel filtro Whatman de 2 X 30 cm y realizar con lápiz una marca
en el centro (zona de aplicación de la muestra), anotar en el extremo superior derecho de
la tira el número de equipo, así como la dirección del ánodo y del cátodo como se muestra
en el esquema:

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2025_I
No. equipo

+ -
2. Llenar la cámara de electroforesis con 1 L de buffer de boratos de pH 8.6
3. Tomar la tira de papel filtro con pinzas y humedecer suavemente sobre la superficie del
buffer. Colocarla de manera horizontal sobre los soportes de la cámara y sujetar de los
extremos con un par de imanes. Evita que la tira toque la parte central de la cámara.
4. Colocar con un micropipeta 10 µL de la mezcla de aminoácidos, en la zona marcada
previamente
5. Colocar la tapa a la cámara de electroforesis y conectar a la fuente de poder (negro
con negro y rojo con rojo) para cerrar el circuito

6. Dejar correr la electroforesis a 200 volts durante 60 minutos ¡peligro, el circuito es de

alto voltaje, evite el contacto con éste
7. Después de transcurrido el tiempo indicado, desconectar, destapar la cámara, sacar
con una pinza la tira de papel (electroforegrama), secar y revelar
8. Rocar la tira de papel de manera uniforme con ninhidrina y con ayuda de una parrilla
muy calentar y secar hasta que aparezcan manchas de color amarillo y morado

9. Observar, registrar sus resultados y analizar

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Todos los resultados observados se registran en los siguientes cuadros:
* En el cuadro A, por cada una de las diluciones realizadas colorear un recuadro con el
color obtenido en la reacción e indicar dependiendo del color, positivo (en caso de que
exista aún presencia de almidón ) o negativo ( en caso de ausencia del mismo debido a
su degradación)
* En el cuadro B, anotar la carga neta de cada aminoácido (calculada previamente), así
como la dirección de la migración electroforética tanto hipotética como experimental (ánodo,
cátodo o no migró)

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2025_I
CUADRO A: Resultados de la actividad de la enzima amilasa salival dializada y no dializada

AMILASA SALIVAL NO DIALIZADA AMILASA

DILUCIONES REALIZADAS SALIVAL
DIALIZADA
TIEMPO DE
TOMA DE
MUESTRA Colorea los recuadros con el color correspondientes a cada
sistema

30 seg

60 seg

90 seg

120 seg

150 seg

180 seg

210 seg

240 seg

270 seg

300 seg

330 seg

360 seg

390 seg

420 seg

450 seg

480 seg

510 seg

540 seg

570 seg

600 seg

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2025_I
CUADRO B: Resultados de la técnica de electroforesis en papel realizada a una mezcla
de 3 aminoácidos empleando una solución buffer a pH 8.6

CARGA
NETA MIGRACIÓN MIGRACIÓN
AMINOÁCIDO OBSERVACIONES
HIPOTÉTICA EXPERIMENTAL
A pH 8.6

Ácido
glutámico

Prolina

Lisina

Dibujo del electroforegrama

+ -
No. equipo

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Recuerden redactar la discusión de sus resultados tomando en cuenta lo siguiente:

En la diálisis…
Anota la reacción de la hidrólisis del almidón catalizada por la amilasa incluyendo los
cofactores y condiciones de reacción
Justifica los resultados obtenidos con el lugol con los diferentes productos de la reacción
en las distintas diluciones realizadas
De las moléculas que se intercambiaron ¿Cuál influye directamente sobre la actividad de la
amilasa? ¿cuál es su función?
Para qué se cambia el agua durante la diálisis cada 20 minutos
Con base en sus resultados explique la diferencia de actividad entre la saliva dializada y sin
dializar

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2025_I
En la electroforesis
Importancia de establecer un pH de trabajo al realizar la electroforesis
Con base en las estructuras químicas de los aminoácidos al pH de 8.6 justifique su
desplazamiento electroforético.
Explique por qué la ninhidrina y los aminoácidos de la mezcla, reaccionan de forma distinta
y en el caso de la prolina se obtiene un color amarillo.

DISPOSICIÓN DE RESÍDUOS
CANTIDAD GENERADA POR CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
R1 Saliva No Verter a la tarja y dejar correr
aplica un poco de aguaVet
R2 Agua destilada de la dialisis Verter a la tarja
R3 Tubos de reacción contienen: No Verter a la tarja y dejar correr
saliva diluida y almidón al 1% aplica un poco de agua
R4 Limpiar placa de porcelana con
Gotas de polisacáridos con lugol
servitoalla y tirar a la basura
en la placa de porcelana
municipal. Lavar placa
Buffer fosfatos pH 8.6 1000 mL Reutilizar para otros grupos o
R5 disponer en un frasco
debidamente etiquetado
Revelador de ninhidrina Reutilizar para otros grupos o
R7 disponer en un frasco
debidamente etiquetado

REFERENCIAS
Cela, R., Lorenzo, R. Y Casais, M. (2002). Técnicas de Separación en Química Analítica.
España: Síntesis.

Alberts B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. (2008). Molecular
Biology of The Cell (5a ed.). USA: Garland Science, Taylor & Francis Group.

San Andrés Tejera, L., Afonso, M. y Rodríguez, M. (2004). Laboratorio de Química

Orgánica. Técnicas Básicas. Tenerife, España: Arte Comunicación Visual.

Higson, S. y Balderas, P. (2007). Química Analítica. México, DF: McGraw-Hill

Interamericana.

Coyne, G. (1997). The Laboratory Companion. A Practical Guide to Materials, Equipment

and Technique. USA: John Wiley & Sons.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 5
EXTRACCIÓN DE DNA
INTRODUCCIÓN
La capacidad de los organismos para reproducirse y transmitir su información genética se
debe a los ácidos nucleicos porque éstos almacenan esa información. Los ácidos nucleicos
son el DNA (ácido desoxirribonucleico) y el RNA (ácido ribonucleico), a excepción de
algunos virus, todos los sistemas biológicos utilizan al DNA como molécula almacenadora
de información. La estructura y función bioquímica de las células se debe a sus proteínas,
el tipo de proteínas que están presentes en un organismo está determinado por la
secuencia del DNA. La información no fluye directamente del DNA a la proteína, sino que
pasa primero por la molécula de RNA a través de un proceso denominado transcripción.
Posteriormente la secuencia de RNA se traduce en una secuencia de proteína en los
ribosomas, lo que se conoce como traducción proteica (Jorde 2004).

Los ácidos nucleicos son polímeros lineales cuya unidad repetitiva es el nucleótido, cada
nucleótido consta de tres componentes: un éster fosfórico, una pentosa y una base
nitrogenada. En el caso del DNA el azúcar es la desoxirribosa y para el RNA la ribosa. Las
bases nitrogenadas son la adenina, guanina, citosina, timina y uracilo. En el DNA están
presentes las cuatro primeras bases indicadas y en el RNA el uracilo está en lugar de la
timina. El orden en el cual los nucleótidos aparecen en el ácido nucleico, codifica la
información genética. En otras palabras, los nucleótidos sirven como un alfabeto genético
donde está codificada la estructura de cada proteína presente en las células. La estructura
principal del DNA es la doble hélice, en esta estructura, las bases nitrogenadas se
encuentran en el centro de la molécula y los esqueletos de azúcar y fosfato se encuentran
en la parte exterior de la hélice. Las zonas aniónicas están en contacto con el agua, éstas
estructuras son ligeramente solubles en agua, esto es importante ya que interaccionan con
el medio acuoso de las células vivas (Devlin, 2006).

El RNA es el principal material genético de los virus, y además es importante en la

producción de proteínas en los organismos. Existen varios tipos de RNA, el transferencia,
ribosómico y mensajero, pero también existen otros relacionados con otras funciones
celulares.

Propiedades del DNA

Insoluble en soluciones diluidas de NaCl
Soluble en soluciones concentradas de NaCl
Insoluble en etanol
Puede ser disociado de las proteínas por tratamiento con detergente o fenol

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Propiedades del RNA
Soluble en soluciones diluidas de NaCl
Insoluble en etanol
Puede ser disociado de las proteínas por tratamiento con detergente o fenol

EXTRACCIÓN DEL DNA

La extracción de DNA requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tiene que
romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el DNA.
Por último hay que proteger el DNA de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay
que hacer que precipite en etanol o isopropanol.

OBJETIVO
Realizar la extracción de DNA a partir de tejidos vegetales y células animales, mediante
materiales de uso común, para observar las fibras obtenidas y argumentar cada paso de la
metodología

INVESTIGACIÓN PREVIA
¿Químicamente qué son los ácidos nucleicos, como están constituidos y cuál es su función?
Haga una tabla en la que muestre por lo menos 5 diferencias entre DNA y RNA
¿Cuáles son las conformaciones estructurales más comunes del DNA?
Indique y justifique la función de cada uno de los reactivos utilizados en la práctica
¿De manera sencilla, cómo podría identificar químicamente si lo que se obtuvo es DNA?
Que reacciones químicas podría realizar.

MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS

1 kiwi o 10 fresas
1 cebolla
Detergente líquido lavavajillas sin cloro
NaCl
1 trozo de papaya con cáscara
1 navaja de un solo filo
500 mL de etanol 96º
1 tabla para cortar

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
NOTA: Colocar desde el inicio de la sesión, el etanol a enfriar. Etiquetar con marcador
indeleble su número de equipo y entregar al asesor

A) EXTRACCIÓN DEL DNA DE CEBOLLA

Cortar 20 g de la zona central de la cebolla en cuadrados,

En un vaso precipitados de 600 mL agregar 10 mL de detergente líquido, 2 g NaCl y añadir

100 mL de agua

Agregar al vaso los trozos de cebolla.

Homogeneizar con homogeneizador de aspas, a velocidad máxima durante 30 segundos

Filtrar sobre gasa el líquido obtenido a un vaso de precipitado de 100 mL hasta la mitad
aproximadamente y quitar la espuma.

Picar finamente un trozo de papaya sin cáscara, colocar sobre una gasa y exprimir
cuidadosamente, recolectar el jugo

Añadir a la mezcla 10 mL de jugo de papaya y mezclar bien

Añadir un volumen de etanol muy frío equivalente al del filtrado, haciéndolo resbalar
cuidadosamente, por las paredes del vaso para que forme una capa sobre el filtrado, utilice
la varilla de vidrio para ayudarse

Dejar reposar durante 2 ó 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos capas.
A continuación introducir la varilla y extraer las fibras blancas de DNA

B) EXTRACCIÓN DEL DNA DE KIWI

Preparar en un recipiente un baño de agua con hielo, de una profundidad entre 5 a 8 cm

Preparar un baño de agua caliente a 80ºC de una profundidad entre 5 a 8 cm
Preparar la siguiente disolución de extracción de DNA: en un vaso de precipitados de 250
mL, disolver 2 g de NaCl en 90 mL de agua, agregar 10 mL de detergente líquido y agitar
con varilla de vidrio ¡muy suavemente!
Pelar el kiwi y cortar en trozos pequeños
Pesar 30 g de kiwi o de fresas y homogeneizar en el mortero
Colocar el homogenado de kiwi o fresas en un vaso de precipitado de 100 mL
Verter la disolución de extracción de DNA (paso 3) sobre el homogenado, de forma que el
volumen total sea aproximadamente el doble del homogenado

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Colocar el vaso de precipitados con la mezcla homogenado:disolución de extracción en el
baño de agua caliente durante 15 minutos. Agitar ocasionalmente para distribuir el calor. La
temperatura del baño no debe bajar de 60ºC en ningún momento durante el periodo de
incubación.

Después de los 15 minutos, transferir el vaso al baño de hielo y reposar allí por 5 minutos,
agitarla ocasionalmente a medida que se enfría.
Filtrar sobre gasa y recibir el filtrado en un vaso de precipitado de 100 mL.
Agregar cuidadosamente con pipeta graduada de 10 mL, 30 mL de etanol frío, dejar
resbalar por las paredes del vaso para formar una fase alcohólica sobre el filtrado.
Observar lo que ocurre en la interfase entre el alcohol y el filtrado. Anotar sus
observaciones.
Permitir que la disolución repose por dos minutos, sin moverla. Si se desea, se puede
recoger el DNA, enrollándolo en el palillo.

C) EXTRACCIÓN DE DNA DE CÉLULAS EPITELIALES DE LA MUCOSA BUCAL

Un voluntario se enjuaga la boca vigorosamente con 25 mL de agua destilada moviendo el

agua de una mejilla a otra durante 30 segundos para desprender células. Depositar el agua
en un vaso de precipitados de 50mL
Añadir 5 mL de solución de extracción (preparada en el paso 3 de la extracción de DNA de
kiwi).
Agitar la solución con varilla de vidrio, lentamente para que no se forme espuma.
Agregar cuidadosamente 20 mL de etanol frío al vaso de precipitados, resbalar por las
paredes del vaso.
Observar en la interfase entre las dos capas, la formación de hilos de DNA

OBSERVACIONES Y RESULTADOS.

Representar en un dibujo como se observa el DNA extraído de cada una de las muestras

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
DNA de cebolla DNA de Kiwi DNA de células epiteliales

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Explicar químicamente lo siguiente:

La función de los componentes de la solución de extracción: Agua, NaCl, detergente

En el caso de la cebolla: ¿porque el homogeneizar con aspas? ¿Cuál es la enzima que

tiene la papaya? ¿Qué tipo de enzima es y cuál es la función específica que realiza en la
extracción del DNA?

¿En el caso del kiwi o las fresas porqué homogeneizar con mortero? ¿Cuál es la finalidad
del aumento de temperatura durante la extracción, que moléculas específicamente interesa
que se desnaturalicen? ¿Qué efecto provoca el choque térmico sobre el homogenado del
kiwi?

Células epiteliales ¿Por qué no es necesario el uso de ningún homogeneizador?

Fundamente. ¿Por qué se obtiene menor cantidad de DNA en la muestra de células
epiteliales?

En todas las muestras… ¿Cuál es el efecto que provoca la adición del etanol frio sobre los
extractos? Con base en sus resultados, ¿se encuentra el DNA totalmente puro? Justifique
su respuesta.

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Depositar en la basura
R1 Trozos de cebolla No aplica
municipal
Cáscara y pulpa de papaya Depositar en la basura
R2 No aplica
municipal
Gasa con trozos de cebolla Depositar en la basura
R3 No aplica
municipal
Mezcla de extracción de cebolla
Verter a la tarja y dejar correr
R4 (detergente líquido, NaCl, agua) y Aprox 1 L No aplica
un poco de agua
etanol
Cáscara y trozos de kiwi Depositar en la basura
R5 No aplica
municipal
Mezcla de extracción de kiwi
Verter a la tarja y dejar correr
R6 (detergente líquido, NaCl, agua) Aprox 600 mL No aplica
un poco de agua
y etanol
Mezcla de extracción(detergente
Verter a la tarja y dejar correr
R7 líquido, NaCl, agua) con saliva y Aprox 500 mL No aplica
un poco de agua
etanol

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

REFERENCIAS

Clark, D. (2005). Molecular Biology. USA: Elsevier.

Watson, J. (2003). El Secreto de la Vida. España: Santillana Ediciones Generales.

Flores A., Sánchez, S. y Uribe, S. (año) Bioquímica. Manual de Prácticas. México DF: Mc
Graw-Hill Interamericana.

Devlin, T. (2006). Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas (4ª ed.). Barcelona,
España: Reverté.

Jorde, B., Carey, C., Bamshad, J. y White, R. (2004) Genética Médica (3ª ed.). España:
Elsever

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2025_I
PRÁCTICA 6
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y FACTORES QUE
ALTERAN SU SOLUBILIDAD
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biomoléculas formadas por aminoácidos, unidos por enlace peptídico
que desempeñan una gran variedad de funciones celulares, entre ellas; estructural,
transporte, enzimas, hormonas, anticuerpos, toxinas, almacén, reguladoras, transmisión de
información, etc. Para realizar estudios químicos y biológicos de una proteína es necesario
separarla y purificarla y para lograr esto se toman en cuenta características tales como el
tamaño molecular, la solubilidad, la carga eléctrica, diferencias en sus características de
absorción y afinidad biológica con otras moléculas, etc.

La solubilidad permite diferenciar entre albúminas y globulinas, en tanto las albúminas son
solubles en agua destilada, las globulinas no lo son. Tanto albúminas como globulinas son
solubles en soluciones isotónicas pero si se incrementa la concentración del soluto iónico
se precipitan, primero las globulinas y después las albúminas. El conocer la solubilidad de
las diferentes clases de proteínas es muy útil para el trabajo experimental, ya que permite
diseñar métodos para el aislamiento o la purificación de una proteína específica.

La solubilidad de una proteína depende de la polaridad de los aminoácidos que la

conforman, de la temperatura, del pH del medio, de la presencia de iones disueltos, de la
presencia de otros solutos que compitan por el agua disponible (por ejemplo, los iones y el
alcohol). Existen cuatro factores principales que alteran la solubilidad de una proteína:
[sales], pH, temperatura y polaridad del solvente. Generalmente, un aumento en la
temperatura provoca una disminución en la solubilidad de las proteínas por ruptura del
puentes de hidrogeno. Los solventes orgánicos, al disminuir la constante dieléctrica del
medio, incrementan las interacciones proteína-proteína promoviendo su precipitación. La
precipitación consiste en la conversión de proteínas solubles a un estado insoluble.
Cualquier proceso capaz de modificar la estructura tridimensional de las proteínas sin
ruptura de enlaces covalentes se llama desnaturalización, la mayoría de las veces la
desnaturalización es irreversible y conduce a la pérdida de la estructura y función de la
molécula proteínica. Una proteína desnaturalizada exhibe su mínima solubilidad.
Existen diversos métodos para cuantificar proteínas en solución acuosa como: el método
de Biuret, de Folin y Ciocalteu, de Lowry, entre otros. Biuret es uno de los métodos más
utilizado para medir la concentración de proteínas en una muestra, porque existen muy
pocas interferencias con otros compuestos para el desarrollo del color. Sin embargo, la
cantidad de proteína necesaria (20-40 mg) limita el uso del reactivo, así como el que
algunos pigmentos absorben a la misma longitud de onda y que existe interferencia del
NH4+, lípidos y algunos carbohidratos en la reacción.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
OBJETIVO
Cuantificar proteínas de leche y huevo y comprobar los factores que alteran la solubilidad
de las proteínas en soluciones acuosas, a través de la precipitación de la caseína por
cambio de pH para cuantificarla por gravimetría y aplicar un método espectrofotométrico
para calcular la cantidad de proteínas del suero y de la clara de huevo.

INVESTIGACIÓN PREVIA
Investigar la composición completa de la leche y el huevo.
Explicar el comportamiento de las proteínas al ser sometidas a cada uno de los factores
que alteran la solubilidad proteica.
Explicar la diferencia entre desnaturalizar e hidrolizar. ¿Qué efecto tiene sobre la caseína
de la leche un cambio de pH?
Investigar el fundamento de la reacción de Biuret. Incluir interferencias.
¿Qué es una curva patrón? ¿Cómo se construye y para qué sirve?
Investigar la ley de Lambert Beer
Explique que el efecto salting-in y salting-out
¿Cómo influye la constante dieléctrica sobre la solubilidad de las proteínas?
¿Cómo influye la temperatura sobre la solubilidad de las proteínas?

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
20 mL de leche descremada
1 huevo
1 limón
1 navaja de un solo filo

REACTIVOS FORMA DE PREPARACION

400 mL de NaCl al 0.9% 2.25g de NaCl en 250mL de agua destilada
30 mL de HCl al 2% 4.54mL de HCl y aforar a 100mL con agua
destilada
30 mL de (NH4)2SO4 saturado 100g de sulfato de amonio en 250mL
50 mL albúmina (5mg de albúmina 250mg de albúmina en 50mL de NaCl 0.9%
sérica/mL) Disolver la albúmina en la mitad del
disolvente, agitando lentamente y evitando
la formación de espuma. Una vez disuelta
transferir a un matraz volumétrico y aforar

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2025_I
150 mL de reactivo de Biuret Disolver 1.5 g de sulfato de cobre y 6 g de
tartrato doble de sodio y potasio en 500 mL
de agua destilada. Adicionar 300 mL de
hidróxido de sodio al 10 % con agitación
constante. Agregar 1 g de yoduro de potasio
y agitar hasta que se disuelva. Aforar a 1 L
con agua destilada. Guardar en frasco
ambar.
40 mL acetona Q.P.
30 mL etanol al 96º
agua destilada

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
A) SEPARACIÓN DE CASEÍNA DE LA LECHE
Diluir 10 mL de leche descremada con 25 mL de agua destilada, en un vaso de 100 mL
Añadir lenta y cuidadosamente gotas de jugo de limón hasta llegar al punto isoeléctrico de
la proteína (pH de 4.8) momento en el cual se observará precipitación
Agitar suavemente durante 2 min y dejar reposar por 3 min
Transferir todo volumen equitativamente a 4 tubos de centrifuga .
Centrifugar a 2500 rpm por 10 min.
Unir todo el sobrenadante y rotularlo como L
Dejar los tubos boca abajo en la gradilla mientras realizan e resto de la práctica, hasta 45
minutos antes de la salida.
Con una espátula pequeña sacar toda la caseína de los tubos y colocar en un papel filtro
previamente pesado. Lavar el precipitado consecutivamente con 1 mL de etanol y con 1 mL
de acetona
Dejar secar sobre el papel filtro (24 hrs mínimo)
Obtener por diferencia el peso del precipitado

B) DILUCIÓN DE LA CLARA DE HUEVO

Pesar con cuidado un huevo
Romper la cáscara, separar la clara de huevo y medir su volumen en una probeta
Diluir 5 mL de clara de huevo con 15 mL de solución salina 0.9%. Mezclar con varilla de
vidrio.
Filtrar la solución sobre gasa
Rotular el filtrado como H

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
COMPROBACIÓN DE LOS FACTORES QUE ALTERAN LA SOLUBILIDAD PROTEICA

Proceda a realizar esta parte cuando tenga listas las muestras L Y H

Medir en tubos de ensaye y por separado, 4 alícuotas de 1 mL cada una de sobrenadante

de leche (L) y de filtrado de huevo ( H ), rotular cada tubo como L1, L2, L3, L4; H1, H2, H3,
H4, según corresponda
Adicionar a los tubos 1 , 1 mL de HCL al 2%
Adicionar a los tubos 2 , 1 mL de acetona
Adicionar a los tubos 3 , 1 mL de (NH4)2SO4 saturado
Calentar en un baño a ebullición los tubos 4
Realizar cuidadosamente sus observaciones y registrarlas en la tabla I

D) CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
1. Disponer de una solución patrón de albúmina en NaC1 al 0.9% de concentración 5 mg
de albúmina sérica por mililitro para preparar la curva patrón:

2. Preparar una serie de tubos que contengan cantidades crecientes de solución patrón. De
acuerdo al siguiente cuadro. El tubo No. 1 es el “tubo blanco o blanco de reactivos” (contiene
todos los reactivos con excepción de la proteína)

Debe respetarse el orden de adición de los reactivos

TUBOS
REACTIVOS
1 2 3 4 5 6 7 (L) 8(H) 9

Albúmina 5mg/mL (mL) - 0.1 0.3 0.5 1 1.5 - - -

Caseína 0.5

Sobrenadante L (mL) - - - - - - 1.0 - -

Filtrado H (mL) - - - - - - - 0.1 -

NaCl al 0.9% (mL) 3.5 3.4 3.2 3 2.5 2 2.5 3.4 3

Reactivo de Biuret (mL) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
3. Preparar simultáneamente los tubos 7, 8 y 9, son los tubos problema de suero de leche,
filtrado de clara de huevo y caseína.

4. Mezclar cuidadosamente cada uno de los tubos, incubar en un baño de agua a 50°C
durante 10 min, para desarrollar el color. Los colores que aparecen son estables durante 1
hora.

5. Después de que los tubos se han enfriado y desarrollado el color, se efectúan las lecturas
a 540 nm en el espectrofotómetro y se registran en la tabla II

6. Trazar un gráfico Absorbancia vs Concentración (en el eje de las abscisas (x) C en

mg/mL de proteína y en el eje de las ordenadas (y) la absorbancia).
7. Interpolar la absorbancia del tubo problema para conocer la cantidad de proteína en la
muestra
8. Calcular la concentración de proteína en la muestra original, tomar en cuenta las
diluciones realizadas (en caso de dudas solicite asesoría) y comparar con los datos
reportados en la literatura o las etiquetas de los productos utilizados.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
TABLA I. FACTORES QUE ALTERAN LA SOLUBILIDAD PROTÉICA

MUESTRA OBSERVACIONES

L1

L2

L3

L4

H1

H2

H3

H4

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2025_I
TABLA II. CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

No. TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9

C ( mg/mL )

Absorbancia

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

NOTA: El trabajo lo deben realizar en equipo. Recuerden que deben redactar empleando
enunciados cortos. Consideren estos puntos para su discusión, sin embargo, no son
preguntas. Por otro lado, se pueden considerar más puntos que sean de interés que no
estén contemplados en estos puntos mínimos. Recuerden que se deben considerar los
resultados que obtuvieron como equipo.

Principales componentes del huevo y la leche, mencione las principales proteínas.

Fenómeno que ocurre al agregar limón a la leche.
Función del etanol y acetona con el precipitado obtenido.
Explicar lo que ocurre con cada una de las muestras y con cada uno de los factores que
afectan la solubilidad proteica, que proteínas son las que se estarían afectando.
Explicar lo que ocurre con la cuantificación de proteínas en la leche.
Comparar los valores de proteínas obtenidas con lo reportado por los fabricantes.

REFERENCIAS

Hernández, L. y González, C. (2002). Introducción al Análisis Instrumental. Barcelona,

España: Ariel.

Landgrebe, J. (2005). Theory and Practice in the Organic Laboratory (5a ed.). USA:
Thomson LeRNAing.

Llamas, J., García, E. y Canoira, L. (1986). Quimiometría y Métodos Instrumentales de

Análisis. España: Universidad Politécnica de Madrid.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Verter a la tarja y dejar correr
R1 Sobrenadante de suero de leche No aplica
un poco de agua
Etanol/acetona. Sobrenadante de
Verter a la tarja y dejar correr
R2 suero de leche y filtrado de clara
un poco de agua
de huevo con acetona
Papel filtro con caseína Depositar en la basura
R3 10 cuadritos de papel No aplica
municipal
Cascarón de huevo Depositar en la basura
R4 10 No aplica
municipal
Verter a la tarja y dejar correr
R5 Clara de huevo Aprox 300 mL No aplica
un poco de agua
Sobrenadante de suero de leche y
Verter a la tarja y dejar correr
R6 filtrado de clara de huevo con HCl No aplica
un poco de agua
diluido
Sobrenadante de suero de leche y
Verter a la tarja y dejar correr
R7 filtrado de clara de huevo con No aplica
un poco de agua
(NH4)2SO4
Sobrenadante de suero de leche y Verter a la tarja y dejar correr
R8 No aplica
filtrado de clara de huevo un poco de agua
R9 Soluciones de reacción de biuret, Disponer en un frasco
Aprox 450 mL T
contiene cobre II debidamente etiquetado

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2025_I
PRÁCTICA 7
REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIÓN

Los carbohidratos son compuestos orgánicos formados en su mayoría de carbono,

hidrógeno y oxígeno, algunos contienen azufre y nitrógeno, son productos primarios de la
fotosíntesis. Químicamente son polihidroxialdehídos, polihidroxicetonas o compuestos que
por hidrólisis los producen. Muchos de ellos tienen la fórmula empírica Cn(H20)n por lo que
originalmente se les dio el nombre de hidratos de carbono. Reciben también otros nombres
como el de glúcidos, sacáridos o azúcares.
Este grupo de biomoléculas constituyen la mayor parte de la materia orgánica de la Tierra
y desempeñan una gran variedad de funciones celulares como son: almacén de energía,
combustibles e intermediarios metabólicos, estructurales, antibióticos y coenzimas, forman
parte de los ácidos nucleicos, así como de las paredes celulares de las bacterias y plantas
y del exoesqueleto de insectos. Además unidos a otro tipo de biomoléculas sirven para el
reconocimiento y adhesividad entre células, para la respuesta inmunológica y la
comunicación entre células adyacentes o distantes a través de receptores hormonales.
Los carbohidratos se clasifican de acuerdo al número de unidades monoméricas que
contienen. Así los monosacáridos son las unidades fundamentales de la estructura de los
carbohidratos, por hidrólisis ya no producen azúcares más sencillos, como ejemplos están
glucosa, fructosa, manosa, ribosa, galactosa, etc. Los oligosacáridos contienen en su
estructura de 2 a 10 unidades de monosacárido y de estos los más comunes son los
disacáridos, que están formados por dos unidades de monosacárido unidos por enlace
glucosídico, los ejemplos típicos son: sacarosa, maltosa y lactosa. Los polisacáridos son
polímeros formados por más de 10 unidades monosacáridas que pueden ser iguales o
diferentes por lo que se conocen una gran variedad de homo y heteropolisacáridos. Como
ejemplos de polisacáridos se pueden mencionar el almidón, glucógeno, celulosa, quitina,
heparina, etc.
Se comportan como ácidos muy débiles y la presencia del grupo carbonilo en los
carbohidratos, permite que estas moléculas presenten gran variedad de reacciones, Las
pruebas de laboratorio para identificar a los carbohidratos son sumamente sencillas y se
basan en las características químicas antes mencionadas. Entre las reacciones más
frecuentemente usadas para la identificación de carbohidratos se encuentran: Benedict,
Tollens, Fehling, Bial, Molish-Udransky, Seliwanoff, Dishe, formación de osazonas, y para
polisacáridos la reacción con lugol. Varias de las pruebas coloridas presentan mayor o
menor sensibilidad en unos carbohidratos que en otros, dependiendo de sus características
químicas particulares, es decir, si se trata de cetosas, aldosas, pentosas, ácidos urónicos,
etc.

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2025_I
OBJETIVO
Realizar reacciones químicas de identificación de carbohidratos en muestras puras y en
productos que los contengan, para utilizarlas como métodos de identificación.

INVESTIGACIÓN PREVIA
Concepto y clasificación de carbohidratos
Que funciones desempeñan los carbohidratos en un sistema biológico
Lista de propiedades físicas y químicas de carbohidratos
Explicar el fundamento químico, anotando las estructuras en cada una de las reacciones
que se van a realizar, justificando el uso de cada reactivo.
Investigar en que consiste la hidrólisis ácida, cuales son los productos obtenidos de cada
muestra a hidrolizar.
Investigar los carbohidratos presentes en cada una de las muestras a trabajar.

MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
10 mL de miel de abeja
10 mL de leche
10 mL de miel de maíz
1 limón
1 papa pequeña

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

5 sobres con 0.2 g de Clorhidrato de

fenilhidracina Q.P c/u

5 sobres con 0.3 g de acetato de sodio

c/u

35 mL de solución al 0.1% de c/u de 0.1 g del carbohidrato en 100 mL de agua

los siguientes carbohidratos: xilosa, destilada
glucosa, ribosa, manosa y 50 mL de
sacarosa

Soluciones A y B de Fehling (75 mL de Sol. A: 6.93 g de sulfato de cobre aforado a 100

cada una) mL con agua

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Sol. B: 25 g de KOH + 34.6 g de tartrato doble
de sodio y potasio aforado a 100mL con agua
mezclar 1:1

Lugol (dos frascos gotero con 25 mL 0.7g de yodo metálico + 1.8g de KI + 1mL de HCl
c/u) al 2% aforado a 50mL con agua

250 mL de HCl concentrado

250 mL de H2SO4 concentrado

75 mL de solución de almidón al 1% 1 g de almidón en 100 mL de agua

100 mL reactivo de Molish (en frasco 5 g de alfa naftol en 100 mL de etanol 96º
gotero)

100 mL de reactivo de Bial (en frasco 3 g de orcinol aforado a 100mL con etanol + 20
gotero) gotas de FeCl3 al 10% en agua

1 sobre con 0.1 g de cada uno de los

siguientes carbohidratos: glucosa,
ribosa, galactosa, manosa, fructosa

10 L agua destilada

50 mL de NaOH 1 N

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
DILUCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

1. Diluir 2 gotas de miel de maíz con 10 mL de agua destilada.

2. Diluir 2 gotas de miel natural con 10 mL de agua destilada.
3. En un vaso diluir 2 mL de leche con 10 mL de agua destilada. Adicionar gotas de limón
hasta desnaturalizar las proteínas. Transferir a un tubo de ensaye y dejar reposar para que
la caseína sedimente. El suero de leche se utilizara para la reacción de Fehling.
4. Raspar un trozo pequeño de papa y colocarlo en un tubo de ensaye. Agregue 5 mL de
agua destilada y disgregue con ayuda de una varilla de vidrio toda la muestra, la solución
debe verse turbia. Agite cada vez que vaya a utilizarla para asegurar que el almidón no este
sedimentado,

NOTA: ESTAS MUESTRAS PREPARADAS O DILUIDAS SON LAS QUE SE VAN A

UTILIZAR PARA LAS SIGUIENTES REACCIONES

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2025_I
B) HIDRÓLISIS ÁCIDA DE CARBOHIDRATOS

Etiquetar 3 tubos de ensaye como: papa, almidón y sacarosa. Se colocan en cada tubo 2
mL de la muestra correspondiente
Añadir a cada tubo 0.5 mL de HCl concentrado y mezclar suavemente
Los tubos se colocan en un baño María en ebullición durante 10 minutos
Retirar los tubos del baño y enfriarlos al chorro del agua. Cuidar de no contaminar el
contenido de los mismos
Neutralizar el contenido de todos los tubos con 0.5 mL de NaOH

C) REACCIÓN DE MOLISH

Preparar una serie de 8 tubos de ensaye y se etiquetarlos como: almidón, glucosa, ribosa,
manosa, galactosa, sacarosa, miel de maíz y miel natural
Colocar en cada tubo 0.5 mL de las muestras correspondientes
Agregar 2 gotas de reactivo de Molish y se mezclar perfectamente.
Dejar resbalar por las paredes del tubo cuidadosa y lentamente 1 mL de H2SO4
concentrado, y sin agitar permita que se estratifique
Observar en la interfase el anillo de color rojo violeta que se indica prueba positiva.

D) REACCIÓN DE BIAL

Disponer una serie de 4 tubos de ensaye y se etiquetan como: glucosa, ribosa, miel de maiz
y miel natural
Colocar en cada tubo 1 mL de cada uno de las muestras correspondientes
Añadir a cada tubo 8 gotas del reactivo de Bial y mezclar
Agregar cuidadosamente a cada tubo 1.5 mL de HCl concentrado, agitar suavemente y
tapar
Colocar los tubos en un baño María en ebullición durante 10 min
Observar la coloración verde-azulada que indica prueba positiva

E) REACCIÓN DE FEHLING

Preparar 16 mL del reactivo de Fehling (mezcle 8 mL de la solución A y 8 mL de la solución

B de Fehling)
Disponer una serie de 12 tubos de ensaye y etiquetar como: agua, glucosa, ribosa, sacarosa, miel
Karo y miel natural, suero de leche, hidrolizado de papa, hidrolizado de almidón, hidrolizado de
sacarosa, almidón y solución de raspado de papa.

Colocar en cada tubo 2 mL de agua

Añadir a cada tubo 1 mL de la mezcla del reactivo de Fehling y mezclar
Agregar a cada tubo 0.5 mL de la muestra correspondiente, mezclar y tapar
Colocar los tubos en un baño María en ebullición
Observar la aparición de un precipitado rojo ladrillo que indica prueba positiva

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
F) REACCIÓN DE LA FENILHIDRACINA (FORMACIÓN DE OSAZONAS)

Preparar la osazona del carbohidrato proporcionado por su asesor.

Colocar en un tubo de ensaye 0.1g del carbohidrato correspondiente, 0.2 g de fenilhidrazina
y 0.3 g de acetato de sodio
Añadir a cada tubo 2 mL de agua y mezclar hasta disolución
Tapar los tubos con tapones metálicos
Colocar el tubo en un baño María en ebullición hasta la aparición de cristales
Sacar los tubos y dejar enfriar
Decantar la mayor parte del líquido (debe quedar un poco)
Tomar cuidadosamente una pequeña cantidad de los cristales y colocarlos sobre un
portaobjetos, sin presionar colocar un cubreobjetos
Examinar los cristales bajo el microscopio
Dibujar los cristales de todas las osazonas preparadas

G) PRUEBA DE LUGOL

Colocar en una placa de porcelana en diferentes pozos 2 gotas de las siguientes muestras:
almidón, almidón hidrolizado, solución de papa, solución de papa hidrolizada.
A cada muestra agregar 2 gotas del reactivo de lugol
Observar el color que se desarrolla

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Todos los resultados observados se registran en los siguientes cuadros:

En el cuadro A, únicamente escribir positivo o negativo, dependiendo del color o precipitado
observado.

En el cuadro B se deben de dibujar los cristales de las osazonas de los carbohidratos y sus
fórmulas.

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2025_I
CUADRO A: Resultados de las reacciones generales para carbohidratos.

CARBOHIDRATO PRUEBA DE PRUEBA DE PRUEBA DE PRUEBA DE

MOLISH BIAL FEHLING LUGOL
ALMIDÓN

SACAROSA

GLUCOSA

MANOSA

GALACTOSA

RIBOSA

SUERO DE LECHE

PAPA

MIEL KARO

MIEL NATURAL

HIDROLIZADO DE
PAPA
HIDROLIZADO DE
SACAROSA
HIDROLIZADO DE
ALMIDÓN

MUESTRA
PROBLEMA Nombre del carbohidrato identificado en la muestra problema:

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2025_I
CUADRO B: Resultados de la formación de osazonas.

CARBOHIDRATO CRISTALES DE OSAZONAS FÓRMULA DE LAS OSAZONAS

GLUCOSA

MANOSA

XILOSA

RIBOSA

FRUCTOSA

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2025_I
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

NOTA: El trabajo lo deben realizar en equipo. Recuerden que deben redactar empleando
enunciados cortos. Consideren estos puntos para su discusión, sin embargo, no son
preguntas. Por otro lado, se pueden considerar más puntos que sean de interés que no
estén contemplados en estos puntos mínimos. Recuerden que se deben considerar los
resultados que obtuvieron como equipo.

Principales componentes del huevo y la leche, mencione las principales proteínas.

Fenómeno que ocurre al agregar limón a la leche. Que proteína se separa y cual es el
fundamento de ello.
Función del etanol y acetona con el precipitado obtenido.
Explicar lo que ocurre con cada una de las muestras y con cada uno de los factores que
afectan la solubilidad proteica, que proteínas son las que se estarían afectando.
Explicar lo que ocurre con la cuantificación de proteínas en la leche.que compuesto
interfiere y porqué.
Comparar los valores de proteínas obtenidas con lo reportado en los productos comerciales.

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Muestras de miel, leche y para Verter a la tarja y dejar correr
R1 No aplica
diluidas un poco de agua
Soluciones neutralizadas de Verter a la tarja y dejar correr
R2 No aplica
hidrólisis de carbohidratos un poco de agua
Disponer en un frasco
R3 Molish
debidamente etiquetado
Disponer en un frasco
R4 Bial
debidamente etiquetado
Disponer en un frasco
R5 Fehling
debidamente etiquetado
Cristales de ozasonas con acetato
Disponer en un frasco
R6 de sodio No aplica
debidamente etiquetado
Cristales de ozasonas con acetato
R7 de sodio No aplica Tirar a la basura municipal

Limpiar placa de porcelana con

Gotas de polisacáridos con lugol
R8 servitoalla y tirar a la basura
en la placa de porcelana
municipal. Lavar placa

REFERENCIAS

Mackenzie, C. (2004). Experimental Organic Chemistry (4a ed.). USA: Prentice-Hall.

Sanmartín, C. (2005). Experimentación en Química Orgánica. México: Ulzama.

Wingrove, A. y Caret, R. (1981). Química Orgánica. México: Oxford University Press.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. (2008). Molecular
Biology of The Cell (5a ed.) País: Garland Science.

San Andrés Tejera, L., Afonso, M. y Rodríguez, M. (2004). Laboratorio de Química

Orgánica. Técnicas Básicas. Tenerife, España: Arte Comunicación Visual.

Higson, S. y Balderas, P. (2007). Química Analítica. México, D.F: McGraw-Hill

Interamericana.

Coyne, G. (1997). The Laboratory Companion. A Practical Guide to Materials, Equipment

and Technique. USA: John Wiley & Sons.

Day, R. y Underwood, A. (1989). Química Analítica Cuantitativa (5a ed.). México: Prentice-
Hall Hispanoamericana.
Frasman, G. (1989). Practical Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. USA: CRC
Press.

73
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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 8
EXTRACCIÓN, SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE
LÍPIDOS
INTRODUCCIÓN
Los lípidos son una mezcla heterogénea de compuestos orgánicos que se encuentran en
los seres vivos y que pueden extraerse de las células por medio de solventes no polares
como éter, benceno, cloroformo, tetracloruro de carbono, etc. Desde un punto de vista
bioquímico los lípidos son esteres reales o potenciales de ácidos grasos. Debido a su valor
energético son constituyentes muy importantes en la dieta, ya que las grasas y los aceites
proporcionan de dos veces más calorías que los carbohidratos y las proteínas

Se les clasifica atendiendo a alguna propiedad física o química, por ejemplo con base en
la estructura química se les divide en dos grandes grupos: lípidos saponificables y lípidos
no saponificables. Los lípidos saponificables son ésteres de ácidos grasos con un alcohol,
que con frecuencia es la glicerina y al hacerlos reaccionar con una base fuerte, como el
hidróxido de sodio o de potasio, forman jabones. Los aceites, las grasas, las ceras, los
esfingolípidos y los fosfoglicéridos son ejemplos de este tipo de lípidos. Los lípidos no
saponificables no contienen grupos éster, su estructura puede ser cíclica o lineal,
pertenecen a esta categoría los ácidos grasos, los esteroides, las prostaglandinas y los
terpenos. Otra clasificación los agrupa de acuerdo a sus productos de hidrólisis. Se les
divide en tres categorías: Lípidos simples, lípidos complejos y lípidos derivados.

En el reino animal, los lípidos son los compuestos de reserva de energía de largo plazo más
importantes. Los lípidos protegen a los órganos vitales, evitando daños traumáticos y
manteniendo la temperatura óptima del cuerpo. Son además parte integral de la estructura
de la membrana celular y, como tal, están relacionados con el transpone de iones y
moléculas a través de dichas membranas. Otras funciones que desempeñan son: reserva
energética, mensajeros químicos, pigmentos y aromas, componentes esenciales del
reconocimiento celular, etc.

Los lípidos se encuentran en los tejidos vivos en forma de mezclas complejas y muy
heterogéneas, el aislamiento, purificación e identificación son etapas a la vez difíciles y muy
interesantes. La metodología moderna es sumamente rica y versátil, incluye marcaje con
isótopos, cromatografía de gases y HPLC. Sin embargo los métodos clásicos de extracción
con solventes y la separación e identificación por cromatografía en capa fina siguen
rindiendo buenos resultados y son importantes en el aprendizaje ya que marcan la base
histórica y metodológica del estudio de los lípidos. Los fosfolípidos, los glicerofosfolípidos
son muy abundantes, su presencia en animales depende del tejido y de la dieta. Un modelo
muy utilizado para el estudio de la química de lípidos es la yema de huevo, puesto que
presenta una gran cantidad y una amplia variación de los mismos.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

OBJETIVO
Aplicar técnicas de extracción, separación, identificación de lípidos, así como comprobar la
solubilidad que presentan muestras puras y comerciales en solventes apolares, mediante
el aislamiento con solventes orgánicos, el separación cromatográfica en capa fina
bidimensional, la identificación con diferentes reactivos reveladores, con la finalidad de
confirmar algunas características fisicoquímicas de los fosfolípidos de la yema de huevo y
de diversos lípidos.

INVESTIGACIÓN PREVIA
Investigar las propiedades fisicoquímicas y estructura de los lípidos estudiados en la
práctica.
Presentar en una tabla las estructuras químicas de los fosfolípidos
Explicar el fundamento de la extracción por solventes
Investigar el fundamento de la cromatografía en capa fina y explicar el uso de mezclas de
solventes como fase móvil
Investigar la composición química de la yema de huevo
Investigar el fundamento, estructura y reacción química de cada uno de los reveladores a
utilizar en la práctica.

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL QUE DEBEN PROPORCIONAR LOS ALUMNOS
Aceite de oliva 5 mL
Aceite comestible 5 mL
Leche entera 20 mL
Dos huevos

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

450 mL de metanol
850 mL cloroformo
10 mL de ácido acético
30 mL de revelador de ninhidrina 0.5 g de ninhidrina se aforan a 100 mL en butanol.
al 0.5 % (frasco ámbar rociador)
30 mL de revelador de molibdato 6.85 g de molibdato de sodio + 0.4 g de sulfato de
(en frasco ámbar con rociador) hidracina, se llevan a 100mL con agua y se le

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2025_I
agregan 100 mL de H2SO4 concentrado, enfriar y
aforar a 1000 mL
30 mL de reactivo de bismutato A) 1.7 g de nitrato de bismuto se aforan a 100 mL
(en frasco ámbar con rociador) con una solución al 20 % de ácido acético en agua
B) 40 g de yoduro de potasio se aforan a 100 mL
con agua. Se hace una solución de 16 mL de
A + 4 mL de B y se aforan a 100 mL con la solución
al 20 % de ácido acético en agua
250 mL de solución de KCl al 0.1 1.86 g de KCl aforado a 250 mL con agua destilada
M
15 mL de glicerina gotero
15 mL de ácido oléico en gotero
1g de ácido palmítico
50 ml etanol 96°
50 mL acetona QP
50 mL benceno QP

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
A) EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE YEMA DE HUEVO

1. Separar la yema de la clara de huevo, teniendo cuidado de que no se rompa. Desechar

la clara
2. Colocar la yema en un vaso de precipitados de 250 mL
3. Preparar 60 mL de una mezcla cloroformo-metanol (2:1)
4. Añadir 40 mL aproximadamente de la mezcla a la yema de huevo y agitar fuertemente
con el agitador de vidrio
5. Filtrar la mezcla sobre gasa, recibir el filtrado en un vaso de 100 mL
6. Transferir el filtrado al embudo de separación y añadir los 20 mL restantes de la mezcla
de cloroformo-metanol
7. Agitar fuertemente y dejar reposar para que se separen las fases (en caso de que no se
separen agregar 15 mL de KCl 0.1M, se vuelve a agitar y se deja reposar)
8. Colectar la fase orgánica en matraz Erlenmeyer y desechar la fase polar
9. Evaporar la fase orgánica en un baño de agua en las parrillas y dentro de la campana,
hasta más o menos un 20% del volumen original

PREPARACIÓN DE LAS CÁMARAS PARA CROMATOGRAFÍA. LO REALIZA EL

EQUIPO DESIGNADO POR EL ASESOR

Lavar y secar cuidadosamente dos cámaras para cromatografía y engrasar las tapas
En una cámara agregar 100 mL de una mezcla cloroformo-metanol 1:1, tapar y dejar saturar
durante 15 min. Etiquetar como 1, se usará para el primer corrimiento
En la otra cámara adicionar 100 mL de una mezcla cloroformo-metanol-ácido acético-agua
en una relación 64:24:8:4, tapar y dejar saturar durante 15 min. Etiquetar como 2, se usará
para el segundo corrimiento

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Etiquetar ambas cámaras con el nombre de los solventes, así como las cantidades
utilizadas.

PREPARACIÓN DE LA PLACA PARA CROMATOGRAFIA

Cortar de una placa para cromatografía un cuadrado de 10 x 10 cm (usar guantes)

Realizar con lápiz las marcadas indicadas en el siguiente dibujo:
Equipo
Segunda dirección
Primera dirección

1.5 cm
1.5 cm
SEPARACIÓN DE LÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Aplicar cuidadosamente con un capilar la muestra del extracto orgánico, en el recuadro

marcado en la placa para cromatografía (ver dibujo anterior)
Dejar secar y volver a aplicar, repetir 4 o 5 veces
Colocar las placas de todo el grupo, al mismo tiempo en la cámara para cromatografía
marcada con el número 1
Dejar correr la cromatografía hasta que el solvente recorra hasta 2 cm antes del borde
superior
Sacar las placas y dejar secar unos 10 minutos, agite para acelerar el secado

Girar las placas 90º respecto al primer corrimiento y colocarlas en la cámara marcada con
el número 2
Dejar que el solvente ascienda hasta recorra hasta 2 cm antes del borde superior
Sacar los cromatogramas. Dejar secar (agite para acelerar el secado)

IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS
Observar los cromatogramas bajo luz ultravioleta
Marcar cuidadosamente con lápiz, las manchas que se observan
Revelar las placas con los reveladores de ninhidrina, bismuto y molibdeno. Sus asesores
indicarán que revelador le toca a cada equipo de trabajo
Rociar los cromatogramas con el revelador correspondiente en la campana
El cromatograma rociado con ninhidrina, se coloca cuidadosamente sobre una placa de
calentamiento durante unos minutos, sin que toque directamente la superficie, hasta que
se observen manchas de color púrpura

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

PRUEBAS DE SOLUBILIDAD

TRABAJAR UNA SOLA MUESTRA CON TODOS LOS SOLVENTES

Etiquetar 5 tubos de ensaye chicos con el nombre del solvente indicado en la tabla A
Colocar 5 gotas del lípido indicado o una pizca en el caso de sólidos más 10 gotas del
solvente respectivo.
Mezclar suavemente, observar y anotar el resultado en la tabla indicada anteriormente
Lave muy bien los tubos con jabón y séquelos entre una muestra y la siguiente para evitar
resultados incorrectos

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
TABLA A. PRUEBAS DE SOLUBILIDAD.

LIPIDO REACTIVO

Agua Acetona Etanol Benceno Cloroformo

Glicerina

Ácido oleico

Acido palmítico

Aceite comestible

Aceite de oliva

Leche entera

(-) INSOLUBLE
(+/-) PARCIALMENTE SOLUBLE
(++) SOLUBLE
(+++) MUY SOLUBLE
E. IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

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2025_I

Cada equipo dibuja de su cromatograma respetando los colores que se observan e

intercambian sus dibujos con todo el grupo, de tal manera que cada equipo debe tener 4
dibujos que corresponden a la observación con luz ultravioleta y a cada uno de los
reveladores ninhidrina, bismutato y molibdato,.
Para su reporte, Investigue qué tipo de lípido identifica cada revelador y con luz ultravioleta,
además de expresar su fórmula.

Revelador: Revelador:
____________________ ___________________

Revelador: Revelador:

_____________________ ____________________

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
INSTRUCCIONES: Analizar y discutir cada resultado obtenido, con base en un contexto
bioquímico, utilice citas bibliográficas para sustentar sus argumentos, apóyese de la
investigación previa. Las siguientes preguntas guía podrán utilizarse solo de apoyo para
desarrollar su análisis.

Con base en la solubilidad, explique:

Químicamente en las pruebas de solubilidad, ¿por qué en algunos casos las muestras son
solubles en los solventes empleados? ¿y en otras no?, justifique con las fórmulas y las
características químicas de cada uno.

Con base en la extracción, explique:

¿Por qué se realiza la extracción con la mezcla de cloroformo-metanol?

¿En cuál fase, de los componentes de la mezcla, se encuentran los lípidos?
¿Qué sucede con los componentes de interés al evaporar la fase clorofórmica?

Con base en la cromatografía, explique:

¿Por qué se considera útil, en esta práctica, el empleo de la cromatografía bidimensional?

Explique cómo influye en la separación cromatográfica, la polaridad y proporción de los

solventes empleados en cada cámara, emplee las estructuras de las muestras y los
solventes

Con base en la Cámara cromatográfica, explique:

Cámara 1: Cloroformo:Metanol 50:50

¿Qué componentes lipídicos se separan con esta mezcla? Justifique químicamente su
respuesta

Cámara 2: Cloroformo: metanol: ácido acético: agua 64:24:8:4

¿Qué pasa con la polaridad de la mezcla?, ¿los componentes lipídicos se separan con
dicha fase? Justifique químicamente su respuesta

Con base en el revelado, explique:

Al observar el revelado, ¿qué ocurre al hacer incidir luz ultravioleta en el cromatograma?.

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 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Explique y justifique la reacción y condiciones empleadas en el ensayo con ninhidrina e
indique que componentes se hacen evidentes.
¿Qué componentes se hacen evidentes al utilizar Bismutato como revelador?
Fundamente químicamente
¿Qué componentes se hacen evidentes al utilizar Molibdato como revelador? Fundamente
químicamente

PRÁCTICA 8: EXTRACCIÓN, SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
RESIDUO DESCRIPCIÓN CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Extracto de yema de huevo con
R1 Disponer en frasco
cloroformo No aplica
debidamente etiquetado

Placas de silica y aluminio con

R2 Envolver en papel y depositar
reveladores No aplica
en la basura municipal

R3 Reutilizar para otros grupos o

Mezcla cloroformo:metanol 1:1 100 mL Explosiva disponer en un frasco
debidamente etiquetado
Reutilizar para otros grupos o
Mezcla cloroformo:metanol:acido
R4 100 mL Corrosiva disponer en un frasco
acético:agua 65:25:8:4
debidamente etiquetado
Muestras biológicas de lípidos con Verter a la tarja y dejar correr
agua. La cantidad generada por
R5 solventes organicos Aprox 30 mL
equpo no permite disponer en
frasco de residuos.
REFERENCIAS
Wingrove, A. y Caret, R. (1981). Química Orgánica. México: Oxford University Press.

Alberts B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. (2008). Molecular
Biology of The Cell (5ª ed.). USA: Garland Science.

San Andrés Tejera, L., Afonso, M. y Rodríguez, M. (2004). Laboratorio de Química

Orgánica. Técnicas Básicas. Tenerife: Arte Comunicación Visual.

Higson, S. y Balderas, P. (2007). Química Analítica. México, DF: McGraw-Hill

Interamericana.

Coyne, G. (1997). The Laboratory Companion. A Practical Guide to Materials, Equipment

and Technique. USA: John Wiley & Sons.

Day, R. y Underwood, A. (1989). Química Analítica Cuantitativa (5ª ed.). México: Prentice-
Hall Hispanoamericana.

Frasman, G. (1989). Practical Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. USA: CRC

Press.

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 9
CINÉTICA ENZIMÁTICA DE LA UREASA

INTRODUCCIÓN

De todas las funciones de las proteínas, la catálisis es tal vez de las más importantes. En
ausencia de catálisis, casi todas las reacciones de los sistemas biológicos se llevarían a
cabo con demasiada lentitud. Los catalizadores que desempeñan esta función en los
organismos se llaman enzimas.
La cinética enzimática es una parte de la bioquímica que se encarga del estudio de la
velocidad de las reacciones enzimáticas y de los factores que la afectan. Algunos de ellos
son: la temperatura, el pH, la concentración de enzima, la concentración de sustrato, el
tiempo, presencia o ausencia de moduladores, cofactores, inhibidores, etc. Todos estos
factores determinan la actividad de una enzima y existe para cada una de ellas condiciones
bajo las cuales su actividad se considera óptima.
La ureasa o amino urea hidrolasa (E.C. 3.5.1.5.) es una metaloenzima-niquel dependiente,
con peso molecular de 483 kDa, cataliza la hidrólisis de urea a hidróxido de amonio y dióxido
de carbono, a una velocidad 1014 veces mayor que una reacción no catalizada.
Ureasa
H2N-CO-NH2 + 3H2O CO2 + 2NH4OH
Urea Hidróxido de amonio

La ureasa está presente en muchas plantas, hongos, algas y bacterias, tiene un papel
importante en el metabolismo del nitrógeno en la naturaleza. Tanto las plantas como los
microorganismos descomponen una gran variedad de fuentes de urea en su medio
ambiente.
El sitio activo de la ureasa se encuentra en la subunidad alfa de la enzima conteniendo 2
Ni2+. La ureasa contiene tres o cuatro grupos sulfhidrilos activos, algunos de los cuales
están involucrados en el sitio activo, la oxidación de estos grupos puede ocasionar una
inactivación reversible de la enzima. Metales como Ag+, Hg++, Pb++, Cu++ y otros, forman
complejos con los grupos sulfhidrilos (-SH) inactivando a la enzima.

OBJETIVO
Realizar la extracción de la enzima ureasa de fríjol de soya, mediante una homogeneización
mecánica en mortero y analizar los factores: concentración de sustrato, T (oC), pH y tiempo
como modificadores de la velocidad de una reacción enzimática para determinar las
condiciones óptimas de trabajo de la enzima.

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2025_I
INVESTIGACIÓN PREVIA

1. ¿Qué es la cinética enzimática? ¿Cómo se realiza una cinética enzimática?

2. ¿Qué factores modifican la velocidad de una reacción enzimática?
3. Investigue las gráficas teóricas de los factores que modifican la velocidad de reacción
enzimática e indique qué datos se obtienen de cada una de ellas
4. Investigue el modelo de Michaellis-Menten.
5. ¿Qué es la Km y la Vmax, ¿cómo se calcula y que indica su valor?
6. anote cual es la reacción que cataliza la ureasa, estructuras y condiciones óptimas.
7.. ¿Cuál es el inhibidor de la ureasa empleado en la práctica y cómo actúa?
8. Explique y grafique los tipos de inhibición enzimática
9. ¿Cuál es el indicador que usará para titular? ¿
¿Cuál es su estructura química y las especies y colores que genera en medio ácido y
básico?
10. ¿Cuál es la utilidad práctica de conocer una cinética enzimática? Ejemplifique a nivel
doméstico y laboral.

MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL POR EQUIPO MATERIAL POR GRUPO

1 bureta de 50 mL 1 vaso de precipitado de 600 mL
2 vaso de precipitado de 100mL 5 baños María con gradilla
20 tubos de ensaye grandes (15 cm x 3 tripies
2 cm)
3 telas de asbesto
2 pipetas graduadas de 5 mL 3 mecheros
1 pipetas graduadas de 10 mL 7 termómetros
1 embudo de filtración 1 probeta graduada de 100 mL
6 matraces Erlenmeyer de 125 mL 5 pipetas graduadas de 5 ml
2 gradilla 7 vasos de precipitado de 50 ml
1 soporte universal 3 vasos de precipitado de 250 ml
1 pinzas para bureta 2 pipetas graduadas de 10 ml
1 piseta 1 embudo de vidrio
1 pinza para tubo de ensaye 10 propipetas
2 propipetas 6 vaso de precipitado de 100 mL

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

300 mL de solución de etanol al 30% 90 mL de etanol absoluto en 300 mL
de agua destilada.
250 mL de solución de urea 0.25 M 3.75 g de urea aforados a 250 mL con
agua destilada
150 mL de Buffer de fosfatos pH 4.5

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DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
150 mL de Buffer de fosfatos pH 6.0
300 mL de Buffer de fosfatos pH 7.2
150 mL de Buffer de fosfatos pH 8.5
150 mL de Buffer de fosfatos pH 10.0
bicloruro de mercurio al 1 % (2 frascos 1g de bicloruro de mercurio en 100 mL
gotero con 10 mL c/u) de agua destilada.
HCl al 0.1 N
Solución de rojo neutro al 1% (2 1g de rojo neutro en 100 mL de etanol
frascos gotero con 10 mL c/u) al 96º
10L de agua destilada
parafilm
hielo

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

EXTRACCIÓN DE LA UREASA

1. Un solo equipo colocará en el vaso de precipitado de 600 mL 50 frijoles de soya con 200
mL de etanol al 30% y los homogeneizara con ayuda de un procesador de aspas.
Tape el vaso durante el proceso para que no salpique y homogeneice, aproximadamente 3
minutos, hasta que todos los frijoles se hayan molido y en el fondo del vaso se encuentre
un sedimento fino.

2. Filtrar sobre gasa doble recibiendo el filtrado en un vaso de precipitado de 250 mL y

etiquetar perfectamente como extracto enzimático (ureasa).

Preparación de los sistemas de trabajo.

Rotule de acuerdo al factor que vaya a trabajar el número de tubos necesario por ejemplo
en el caso de pH: blanco pH 4.5 y problema pH 4.5 una vez rotulados todos colóquelos
en la gradilla y proceda a preparar los sistemas de acuerdo a las tablas

Es indispensable respetar el orden de adición de los reactivos y condiciones de

trabajo

Deben prepararse simultáneamente los tubos blancos y problema de cada factor.

Una sola persona pipetea para disminuir variantes.

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2025_I

EFECTO DEL PH SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN

Colocar en una gradilla los siguientes tubos, que serán los blancos:

Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25M (mL) 5 5 5 5 5
Sol. Buffer de pH 5 6 7.2 8.5 10
(mL) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50º C durante 30 min.

Preparar los tubos problema de la siguiente forma:

Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25M (mL) 5 5 5 5 5
Sol. Buffer de pH 5 6 7.2 8.5 10
(mL) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50ºC durante 30 min.
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4

Al término del tiempo de incubación, transferir 5 mL del tubo blanco número 1 a un matraz
etiquetado y a otro matraz distinto 5 mL del tubo problema número 1 y agregar 2 gotas de
rojo neutro.

Titular con HCl 0.05 N hasta el vire de color rojo canela.

Nota: En todos los casos la titulación debe realizarse por parejas (blanco - problema)

Repetir los pasos 3 y 4 para los tubos 2, 3, 4 y 5

85
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

EFECTO DEL TIEMPO EN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

Colocar en una gradilla los siguientes tubos, que serán los blancos:

Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25M (mL) 5 5 5 5 5
Sol. Buffer pH 7.2 (mL) 3 3 3 3 3
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50º C durante ______min. 10 20 30 40 50

Preparar los tubos problema de la siguiente forma:

Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25M (mL) 5 5 5 5 5
Sol. Buffer pH 7.2 (mL) 3 3 3 3 3
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50º C durante ______min. 10 20 30 40 50
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4

Al término del tiempo de incubación, transferir 5 mL del tubo blanco número 1 a un matraz
etiquetado y a otro matraz distinto 5 mL del tubo problema número 1 y agregar 2 gotas de
rojo neutro.

Titular con HCl 0.05 N hasta el vire de color rojo canela.

Nota: En todos los casos la titulación debe realizarse por parejas (blanco - problema)

Repetir los pasos 3 y 4 para los tubos 2, 3, 4 y 5

86
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE LA

REACCIÓN

Colocar en una gradilla los siguientes tubos, que serán los blancos:

Tubo 1 2 3 4 5 6
Urea 0.25M (mL) 0.2 0.5 0.7 1 1.5 2
Buffer de fosfatos pH 7.2 (mL) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Agua destilada (mL) 4.8 4.5 4.3 4 3.5 3
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4 4
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50ºC durante 30 min.

Preparar los tubos problema de la siguiente forma:

Tubo 1 2 3 4 5 6
Urea 0.25M (mL) 0.2 0.5 0.7 1 1.5 2
Buffer de fosfatos pH 7.2 (mL) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Agua destilada (mL) 4.8 4.5 4.3 4 3.5 3
Incubar a 50º C durante 5 min.
Ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar a 50ºC durante 30 min.
Sulfato de cobre al 1% (GOTAS) 4 4 4 4 4 4

Transferir 5 mL de los tubos blanco 1 y problema 1 a matraces diferentes y agregar 2

gotas de rojo neutro.

Titular con HCl 0.05 N hasta el vire de color rojo canela.

Repetir los pasos 3 y 4 para los tubos 2, 3, 4, 5 y 6.

6. Registrar sus resultados en la tabla correspondiente

87
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN

Antes de iniciar asegúrese de tener los baños de agua a 50°, 70° y 90°C

Preparar la siguiente serie de tubos (serán los blancos)

Reactivos 1 2 3 4 5
Urea 0.25 M (mL) 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5
Sol Buffer pH 7.2 (mL) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Sulfato de cobre al 1% (gotas) 4 4 4 4 4
Incubar 5 minutos a 0o C T°ambien 50 o C 70 o C 90 o C
te
Extracto de ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar 30 minutos a 0o C T°ambien 50 o C 70 o C 90 o C
te

2. Prepare la siguiente serie de tubos (serán los problemas)

Reactivos 1 2 3 4 5
Urea 0.25 M (mL) 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5
Sol Buffer pH 7.2 (mL) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Incubar 5 minutos a 0o C T° ambiente 50 o C 70 o C 90 o C
Extracto de ureasa (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar 30 minutos a 0o C T° ambiente 50 o C 70 o C 90 o C
Bicloruro de mercurio al 1% (gotas) 4 4 4 4 4

Transferir por separado 5 mL del tubo 1 blanco y del tubo 1 problema a matraces
etiquetados, agregar a cada uno 2 gotas de rojo neutro

Titular con HC1 0.1N hasta el vire a color canela

Repetir los pasos 3 y 4 para los tubos 2, 3 y 4.

Registrar sus resultados en la tabla correspondiente

.

88
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Para cada factor hay dos tablas, la de arriba es para los resultados de su mesa, la de
abajo sus profesores le indicarán que resultados anotar.

Efecto del pH sobre la velocidad de la reacción. Equipo:

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo pH de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/
del blanco problema corregido
30 min
1

Efecto del pH sobre la velocidad de reacción. Equipo:

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo pH de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/
del blanco problema corregido
30 min
1

89
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

Efecto del tiempo en la velocidad de reacción. Equipo:

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo Tiempo (min) de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/X
del blanco problema corregido
min
10

20

30

40

50

Efecto del tiempo en la velocidad de reacción. Equipo:

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo Tiempo (min) de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/X
del blanco problema corregido
min
10

20

30

40

50

90
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

Efecto de la temperatura en la velocidad de la reacción

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo T (oC) de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/30
del blanco problema corregido
min
1

Efecto de la temperatura en la velocidad de la reacción

moles de
Volumen Volumen de Volumen de
urea
Tubo T (oC) de titulación titulación del titulación
hidrolizadas/30
del blanco problema corregido
min
1

91
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción

Concentración moles de
Volumen Volumen de Volumen de
inicial de urea urea
Tubo de titulación titulación del titulación
en mmoles/mL hidrolizadas/30
del blanco problema corregido
en el medio min
1

Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción

Concentración moles de
Volumen Volumen de Volumen de
inicial de urea urea
Tubo de titulación titulación del titulación
en mmoles/mL hidrolizadas/30
del blanco problema corregido
en el medio min
1

92
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

CÁLCULOS

Velocidad de reacción
Calcular los micromoles de urea hidrolizados para cada uno de los tubos, teniendo en
cuenta que la urea al hidrolizarse produce dos iones de amonio que reaccionan con el HCl
0.05 N que contienen 50 micromoles/mL, de tal manera que los micromoles de urea
hidrolizados se obtienen multiplicando el valor de titulación corregido (VTC) de cada tubo
por 25

Micromoles de urea hidrolizada = VTC x 25

VTC = VTP – VTB

donde VTP = Volumen de titulación del problema y
VTB = Volumen de titulación del blanco.

NOTA: Verificar que la concentración del HCl sea 0.05 N, de lo contrario se debe ajustar el
cálculo anterior.

Micromoles de urea hidrolizada/ 30 min = serán los micromoles de urea hidrolizados en 30

min de incubación

Estos 30 minutos deben sustituirse por los minutos de incubación en el factor tiempo y

Concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción.

Calcular los milimoles de urea iniciales por mL para cada uno de los tubos, teniendo en
cuenta que cada mL de la solución 0.25 M de urea contiene 250 micromoles/mL considerar
el volumen total en cada tubo.

Construir las gráficas correspondiente V.R. (velocidad de reacción) contra cada uno de los
factores trabajados : pH, ToC, t(min) y concentración de sustrato

tomando en cuenta que la velocidad de reacción se expresa en micromoles/ 30 min

Calcular la Km e indicar qué representa su valor.

Determinar las condiciones de pH y T óptimas de trabajo de la ureasa.
Analizar el comportamiento de la gráfica de tiempo.

93
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Los puntos referidos a continuación son una guía para realizar el análisis de resultados, no
se pide que resuelvan como cuestionario. Recuerda redactar un párrafo por cada punto a
analizar donde justifiquen químicamente y argumenten sus resultados, toma en cuenta lo
siguiente:

Explique qué tipo de enzima es la ureasa, cuál es su reacción y los productos obtenidos
además de la importancia de controlar los factores estudiados en la cinética enzimática de
la ureasa.

De acuerdo con la reacción de la ureasa justifica la forma de cuantificar el producto de la

reacción de esta enzima. Debes incluir la función de cada reactivo que se agrega a los
tubos de reacción.

- De los gráficos generados de velocidad de reacción contra cada uno de los factores que
se trabajaron experimentalmente indique sobre el gráfico los valores óptimos que se
observan en cada caso. ¿Los gráficos obtenidos con sus datos experimentales, cumplen
con el comportamiento teórico? Justifique su respuesta

Calcula el valor de Km y Velocidad máxima de reacción de acuerdo con la gráfica de

concentración de sustrato.

REFERENCIAS

Flores, L., Sánchez, S. y Uribe, S. (año). Bioquímica. Manual de Prácticas. México, DF: Mc
Graw-Hill Interamericana Editores.
Higson, S. y Balderas, P. (2007). Química Analítica. México, DF: McGraw-Hill
Interamericana Editores.
Coyne, G. (1997). The Laboratory Companion. A Practical Guide to Materials, Equipment
and Technique. USA: John Wiley & Sons.
Day, R. y Underwood, A. (1989). Química Analítica Cuantitativa (5ª ed.). México: Prentice-
Hall Hispanoamericana.
Frasman, G. (1989). Practical Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. USA: CRC
Press

94
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 10
METABOLISMO: FERMENTACIÓN
INTRODUCCIÓN
Los organismos heterótrofos obtienen energía oxidando moléculas orgánicas y acoplando
las reacciones de oxidación a la síntesis de ATP. El ATP se usa para realizar todas las
actividades necesarias para el mantenimiento del organismo.

Algunos organismos son capaces de existir en ausencia de oxígeno molecular, incluso

pueden ser perjudicados por la presencia de este elemento. La respiración anaeróbica, -en
ausencia de oxígeno- se llamada fermentación. Inicia con una sustancia rica en energía
como la glucosa, utiliza las enzimas de la glicólisis y finalmente produce etanol y anhídrido
carbónico o una mezcla de ácidos orgánicos y otros compuestos. Hay una ganancia neta
de dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa oxidada en la fermentación.
Los productos de fermentación varían de un tipo de célula o microorganismo a otro. La
fermentación alcohólica es un proceso anaeróbico realizado por las levaduras y algunas
clases de bacterias. Los seres humanos han aprovechado este proceso para la fabricación
de pan, cerveza, y vino. El bióxido de carbono crea la efervescencia en la cerveza y hace
que el pan “suba” dentro del horno. El etanol que se produce es el alcohol presente en la
cerveza y en los vinos. Para la elaboración de estos tres productos se emplea el mismo
microorganismo: la levadura común o Saccharomyces cerevisae.

Saccharomyces cerevisae

OBJETIVO
Realizar la fermentación alcohólica con levadura, bajo diferentes condiciones para
relacionar este tipo de metabolismo con la producción de energía que se realiza en estos
organismos.

95
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
INVESTIGACIÓN PREVIA
1. Investigar la definición de Respiración aeróbica y respiración anaeróbica.
2. ¿Qué tipo de fermentación realiza la levadura Saccharomyces cerevisae? Puede
metabolizar todos los carbohidratos que se van a trabajar en la práctica?
3. Explique con detalle en un esquema la glucólisis. Incluya fórmulas y enzimas que
participan. Justifique el número de moléculas de ATP que se forman
4. ¿La tasa de fermentación se afecta con la temperatura? explicar
5. ¿Qué efecto provoca el NaF sobre la glucólisis? ¿Afecta a alguna enzima en especial?
¿Cuál y cómo?

MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL ADICIONAL
1 Paquete cerrado de levadura en polvo
para hornear

REACTIVOS FORMA DE PREPARACIÓN

500 mL de solución de glucosa al 10 % p/v 10 g de glucosa se disuelven con 100 mL
de agua destilada
200 mL de solución de glucosa al 2 % p/v 2 g de glucosa se disuelven en 100 mL de
agua destilada
50 mL de solución de galactosa al 2 % p/v 2 g de galactosa se disuelven en 100 mL de
agua destilada
50 mL de solución de fructosa al 2 % p/v 2 g de fructosa se disuelven en 100 mL de
agua destilada
50 mL de solución de sacarosa al 2 % p/v 2 g de sacarosa se disuelven en 100 mL de
agua destilada
100 mL de NaF al 0.01M 0.042 g de NaF se disuelven en 50 mL de
agua destilada y se aforan a 100 mL
100 mL de reactivo de Benedict Pesar 100 g de NaCO3 y disolver en 200 mL
de agua destilada hervida
Pesar 173 g de citrato de sodio y disolver
en 200 mL de agua destilada hervida
Pesar 17.3 g de CuSO4 5 H2O y disolver
en 300 mL de agua destilada hervida
Mezclar las 3 soluciones cuando estén frías
y aforar a 1 L

96
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
METODOLOGIA EXPERIMENTAL
NOTA: Es importante revisar la temperatura a la cual deben estar las soluciones que se
van a utilizar.
Preparar un baño de agua con hielo (0 oC) y un baño a 37 oC, solicite instrucciones al
asesor para saber cuáles soluciones y que volumen de cada una se deben colocar en
cada uno.

PREPARACIÓN DE UNA SUSPENSIÓN DE LEVADURA AL 10% P/V

Pesar 7g de levadura y colocarla en un matraz Erlenmeyer de 150 mL

Agregar 70 mL de agua destilada
Agitar la mezcla hasta que se disuelva la levadura
Colocar 10 mL de suspensión de levadura en un baño de hielo, los otros 60 mL en un
baño a 37oC y taparlos.

DEMOSTRACIÓN DE LA FERMENTACIÓN DE GLUCOSA CON LA PRUEBA DE

BENEDICT

Prueba de Benedict:

Fermentación de glucosa.

En un tubo de ensaye 16 x 150 cm, agregue 10 mL de una solución de glucosa al 2%.

Agregar 3 mL de suspensión de levadura al 10% a 37°C
Mezclar perfectamente hasta que la mezcla este homogénea
Incubar a 37°C

97
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
A los 30 minutos cuando prepare la primera prueba de Benedict prepare los siguientes
tubos:

Tubo muestra Blanco levadura Blanco glucosa

Del tubo de Mezclar 3 mL de levadura al 10% 0.5 mL solución de
fermentación tome 0.5 con 10 mL de agua destilada. glucosa al 2%,.
mL De aquí tomar únicamente 0.5 mL
Agregar 1 mL del Agregar 1 mL del reactivo de Agregar 1 mL del
reactivo de Benedict Benedict reactivo de Benedict

Calentar en un baño de agua hirviendo durante 3 minutos

Prueba positiva : color rojo ladrillo Prueba negativa: color azul

Realizar una prueba de Benedict con 0.5 mL de la mezcla a los 60, 90 y 120 minutos de
incubación.
Registrar sus resultados en la tabla 1

C) FERMENTACIÓN CON DIFERENTES CARBOHIDRATOS

Rotular cinco tubos de ensaye como: agua, glucosa, fructosa, sacarosa, galactosa es muy
importante respetar el orden de adición de los reactivos.

Adicionar 2 mL de suspensión de levadura

Tener listas las pipetas de 2 mL rotuladas para los siguiente carbohidratos, un trozo de
Servitoalla y papel Parafilm

Para cada uno de los tubos por separado y uno por uno: en el momento en el que la
levadura entra en contacto con el carbohidrato inicia su metabolismo por lo que es
muy importante hacerlo rápidamente.

Adicionar a cada uno lo siguiente:

Agua: 2 mL de agua destilada
Glucosa: 2 mL de glucosa al 2%
Fructosa: 2 mL de fructosa al 2 %
Sacarosa: 2 mL de sacarosa al 2%
Galactosa: 2 mL de galactosa al 2 %

98
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Llenar completamente una pipeta graduada de 2mL con la solución del tubo que
corresponda y tapar el extremo con un dedo, mientras sella el lado opuesto con un trocito
de “parafilm”. Utilizar una pipeta pasteur, continuar el llenado de la pipeta graduada hasta
que la solución llegue hasta antes de que se desborde.
Invertir la pipeta y colocar dentro del tubo de ensaye.

Iniciar la toma del tiempo.

Observar cada 5 minutos, durante media hora y con ayuda de una regla anote el volumen
desplazado del líquido.
Registrar sus datos en la tabla 2.

D) FERMENTACIÓN A DIFERENTES TEMPERATURAS

Preparar un baño de agua con hielo (0°C) y un baño a 37°C

Rotular dos tubos de ensaye de 16 x 150 cm como: A (0°C) y B (37°C)
Adicionar a cada uno lo siguiente:
A: 7.5 mL de suspensión de levadura incubada 0°C + 7.5 mL de glucosa al 10% + agua
destilada fría el volumen necesario para llenarlo al borde.
B: 7.5 mL de suspensión de levadura a 37°C + 7.5 mL de glucosa al 10% + de agua
destilada a 37°C. el volumen necesario para llenarlo al borde.
Colocar sobre cada tubo un tubo de ensaye de 25 x 150 cm, inviértalos rápidamente y
ponga el tubo A en el baño de agua con hielo (0°C) y el B en el baño a 37°C.
Iniciar la toma del tiempo.
Observar cada 5 minutos, durante media hora y con ayuda de una regla anote el volumen
desplazado del líquido.
Registrar sus datos en la tabla 3.

E) EFECTO DEL NaF SOBRE LA FERMENTACIÓN

Rotular dos tubos de ensaye de 16 x 150 cm como: C (sin NaF) y D (con NaF)
Adicionar a cada uno lo siguiente:
C: 7.5 mL de suspensión de levadura a 37°C + 7.5 mL de glucosa al 10% + de agua
destilada a a 37°C. la necesaria para llenarlo hasta el borde.
D: 7.5 mL de suspensión de levadura a 37°C + 7.5 mL de glucosa al 10% + solución de
NaF 0.01M a 37°C el volumen suficiente para llenarlo hasta el borde.
Colocar sobre cada tubo un tubo de ensaye de 25 x 150 cm, inviértalos rápidamente y
ponga los dos tubos en un baño a 37°C.
Iniciar la toma del tiempo.
Observar cada 5 minutos, durante media hora y con ayuda de una regla anote el volumen
desplazado del líquido.
Registrar sus datos en la tabla 4.

99
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Tabla 1. Demostración de la fermentación de glucosa con la prueba de Benedict

Muestra Prueba de Benedict

Glucosa

Levadura

30 min

60 min

90 min

120 min

Tabla 2. Fermentación con diferentes carbohidratos

Tiempo (min) Agua Glucosa Fructosa Sacarosa Galactosa

5

10

15

20

25

30

100
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Tabla 3. Fermentación a diferentes temperaturas

Tiempo (min) A (0oC) Volumen desplazado A (37oC) Volumen desplazado

5

10

15

20

25

30

Tabla 4. Efecto del NaF sobre la fermentación

Tiempo (min) TUBO C Volumen desplazado TUBO D Volumen desplazado

(sin NaF) (con NaF)

10

15

20

25

30

101
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

¿Cómo fueron los resultados de la reacción de Benedict para la glucosa y levadura?.

Muestra Resultado Justificación bioquímica

esperado
(+ o -)
Glucosa
Levadura

Explique los resultados de la reacción de Benedict a diferentes tiempos:

¿Hasta los cuantos minutos la reacción resulto positiva? ¿En que tiempo la reacción resulto
negativa? ¿Cuál es la explicación bioquímica de esto?

Respecto a los diferentes carbohidratos

Durante la metodología, ¿cómo se generaron las condiciones anaeróbicas requeridas?

¿Qué tipo de carbohidrato sostuvo la tasa de fermentación más rápida? ¿Puede la levadura
metabolizar todos los carbohidratos que se utilizaron? Escriba con fórmulas las reacciones
de la glucólisis, incluya enzimas e indique la regulación de la ruta. Y con color amarillo
resalte donde puede ingresar cada uno de los carbohidratos utilizados.

Respecto a la tempertatura
¿Qué diferencia observó en la fermentación al trabajar en 0°C o en 37°C? como afecta la
temperatura la actividad de la levadura? ¿Cuál es la temperatura a la que se realiza la tasa
más rápida de fermentación?

Respecto al inhibidor

¿Qué efecto provoca sobre la tasa de fermentación el NaF? ¿Qué enzima inhibe?
Márquela de color rojo en la ruta de la glucolisis. ¿Cuál es la consecuencia bioquímica de
esta inhibición?

102
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
PRÁCTICA 10: FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
DISPOSICIÓN DE RESÍDUOS
CANTIDAD GENERADA CÓDIGO ALMACENAMIENTO Y
RESIDUO DESCRIPCIÓN
POR GRUPO (10 equipos) CRETIB DISPOSICIÓN
Levadura en suspención Aproximadamente 30 g No aplica Residuo biológico no tóxico ni
R1 infeccioso, verter a la tarja y
dejar correr unpoco de agua
Glucosa con reactivo de Benedict Aproximadamente 70 mL Disponer en un frasco
R2
debidamente etiquetado
Carbohidratos con levadura 100 mL Verter a la tarja y dejar correr
R3
un poco de agua
Carbohidratos, levadura y NaF Aprox 200 mL No aplica Depositar en la basura
R4
(pequeña cantidad) municipal

REFERENCIAS

Alberts, B., Dennis B., Lewis J., Raff M., Roberts K. y Watson J. (2000). Biología Molecular
de la Célula (4ª ed.). Barcelona, España: Omega.

Cox, N. (2000). Principios de Bioquímica de Lehninger (3ª ed.). Barcelona, España:

Omega.

Stryer, L. (1996). Bioquímica (4a ed.) Barcelona, España: Reverté.

Yánez, A. (1996). Manual de Prácticas de Bioquímica. México: IPN.

Clark, D. (2005). Molecular Biology. USA: Elsevier.

Watson, J. (2003). El Secreto de la Vida. España: Santillana Ediciones Generales.

103
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 1. pH en sistemas biológicos

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

104
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 2. Homogenización y centrifugación

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

105
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 3. Técnicas cromatográficas

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

106
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 4. Diálisis y electroforesis

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

107
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 5. Extracción de DNA

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

108
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 6. Cuantificación de proteínas y factores que alteran su
solubilidad

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

109
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 7.Reacciones de identificación de carbohidratos

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

110
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 8. Extracción,Separación e identificación de lípidos

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

111
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 9. Cinética enzimática

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

112
 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUIMICA GENERAL
2025_I
Práctica 10. Metabolismo: fermentación

Grupo BQD F Fecha equipo

nombre firma

113
 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

CÓDIGO: FPE-CB-DEX-01-09

VALE DE MATERIAL
N° Revisión: 00

ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 1: pH en sistemas biológicos

FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Gradilla 2
Tubos de ensaye 16 x 150 mm 20
Pipeta graduada 10mL 1
Pipeta graduada 5 mL 2
Pipeta graduada 2 mL 1
Vaso de precipitados 250mL 2
Vaso de precipitados 100mL 2
Propipeta 3
Piseta 1
Mechero 1
Tripié 1
Tela de asbesto 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

CÓDIGO: FPE-CB-DEX-01-09

VALE DE MATERIAL
N° Revisión: 00

ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 2: Homogeneización y
centrifugación
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Mortero con pistilo mediano 1
Tubos para centrífuga 15 x 100 mm 10
Tubos de ensaye 16 x 150 mm 10
Gradilla 1
Vidrio de reloj mediano 2
Pipeta graduada 5mL 3
Pipeta graduada 10mL 3
Vaso de precipitados 50mL 3
Homogenizador Potter 1
Propipeta 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

CÓDIGO: FPE-CB-DEX-01-09

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 3: Técnicas cromatográficas

FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Mortero con pistilo mediano 2
Columna para cromatografía 25 mL. 1
Soporte universal 1
Pinzas de presión para bureta 1
Tubo de ensaye 16 x 150 mm 10
Tubos de ensaye para centrífuga 15 x 100 mm 10
Gradilla 1
Pipeta graduada 2 mL 2
Pipeta graduada 10 mL 1
Vaso de precipitados 100 mL 3
Vidrio de reloj mediano 1
Propipeta 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 4: Dialisis y electroforesis

FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Placa de porcelana 1
Vaso de precipitados 50mL 1
Pipeta graduada 1mL 3
Pipeta graduada 5mL 1
Pipeta graduada 10mL 1
Tubos de ensaye 16 x150 mm 10
Pipeta Pasteur 1
Gradilla 1
Propipeta 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 5: Extracción de DNA

FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Vaso de precipitado 100mL 5
Vaso de precipitado 250mL 2
Vaso de precipitado 600mL 1
Probeta graduada 50mL 1
Probeta graduada 100mL 1
Pipeta graduada 10mL 1
Vidrio de reloj 2
Varilla de vidrio 1
Embudo de vidrio 1
Mortero chico 1
Soporte universal 1
Aro metálico 1
Triángulo de porcelana 1
Piseta 1
Propipeta 1

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LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

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Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 6: Cuantificación de proteínas
y factores que alteran su solubilidad
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Tubos de ensaye 16 x 150mm 20
Vaso de precipitado 100mL 1
Vaso de precipitado 50mL 2
Pipeta graduada 10mL 1
Pipeta graduada 1mL 2
Pipeta graduada 5mL 1
Probeta graduada 50mL 2
Embudo de vidrio 1
Varilla de vidrio 1
Tubos de ensaye 15x100 4
Triángulo de porcelana 1
Tripié 1
Gradilla 2
Pinza p/tubo de ensaye 2
Piseta 1
Propipeta 2

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

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Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

CÓDIGO: FPE-CB-DEX-01-09

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N° Revisión: 00

ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 7: Reacciones de
Identificación de carbohidratos
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Vaso de precipitados 600mL 1
Vaso de precipitados 50mL 3
Probeta 50 mL 1
Tubos de ensaye 16 x 150mm 20
Pipeta graduada 1mL 2
Pipeta graduada 2mL 2
Pipeta graduada 10mL 1
Mechero Bunsen 1
Placa de porcelana 1
Gradilla p/tubo de 16 x150mm 2
Tripie 1
Tela de asbesto 1
Pinzas p/tubo de ensaye 3
Piseta 1
Varilla de vidrio 1
Propipeta 2

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LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 8: Extracción
Separación e Identificación de Lípidos
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Vaso de precipitado 100mL 2
Vaso de precipitado 250mL 2
Embudo de vidrio 1
Embudo de separación con tapón 250 mL 1
Varilla de vidrio 1
Soporte universal 1
Matraz Erlenmeyer 250mL 1
Triangulo de porcelana 1
Probeta 100mL 1
Tubo de ensaye 15 x 100mm 5
Gradilla p/tubo 15 x 100mm 1
Aro metálico 1
piseta 1

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LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 9: Cinética Enzimática
de la Ureasa
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Bureta 50mL 1
Vaso de precipitados 100mL 2
Matraz Erlenmeyer 125mL 6
Tubos de ensaye 16 x 150mm 20
Pipeta graduada 5mL 2
Pipeta graduada 10mL 1
Piseta 1
Pinza p/tubo ensaye 2
Propipeta 2
Gradilla 2
Soporte Universal 1
Pinzas para bureta 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

CÓDIGO: FPE-CB-DEX-01-09

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ASIGNATURA Bioquímica General SEMESTRE 2025-I

NOMBRE DEL SOLICITANTE
No. DE CUENTA GRUPO No. DE EQUIPO
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA O EXPERIMENTO Práctica 10: Metabolismo: Fermentación
FECHA DE SOLICITUD FECHA DE DEVOLUCIÓN

DESCRIPCIÓN CANTIDAD OBSERVACIONES

Vaso de precipitados 250mL 3
Vaso de precipitados 100mL 2
Probeta 100mL 1
Pipeta graduada 10mL 3
Piseta 250mL 1
Pipeta graduada 2mL 6
Pipeta graduada 1 mL 2
Pipetas Pasteur 2
Tubo de ensaye 25 x 150mm 6
Tubo de ensaye 16 x 150mm 18
Gradilla p/tubo de ensaye 25 x 150mm 1
Varilla de vidrio 1
Espátula chica 1
Propipeta 1
Matraz Erlenmeyer 125mL 1
Matraz Erlenmeyer 50mL 1
Pinza p/tubo de ensaye 1

FIRMA DEL SOLICITANTE ________________________________

LABORATORISTA O PROFESOR QUE LABORATORISTA O PROFESOR QUE

ENTREGA EL MATERIAL RECIBE EL MATERIAL

Nombre y firma Nombre y firma

ADEUDO

NOMBRE Y FIRMA DEL DEUDOR