MICROSCOPIA
HISTORIA DE LA MICROSCOPIA
En las primeras décadas del siglo XVIIse
iniciaron experiencias de las lentes.
Se basaron en otro instrumento: telescopio
(Galileo en 1609)
Antes de microscópio los seres mas pequeños
conocidos eran los insectos diminutos.
Inicalemnet dos tipos de microscópios: sencillo
y compuesto.
Sencillo solo era una lente montada.
Compuesto una combinación de lentes
(Zacharias Jansen HOLANDA)
Posterior al invento de Jansen se invento el
sistema de 3 lentes que es la configuración
“estandar” que mantienen los microscópios de
hoy
Acontesimientos mas sobresalientes:
Jan Swammerdan (Holanda): observación
de insectos. Descubrió que la sangre no es
un liquido uniforme sino que existen
“corpúsculos” que le dan color
Nehemiah Grew (Ingkaterra): estudio de
órganos de plantas y descubre granos de
polen.
Reigner de Graaf (Holanda): estudio de
animales decubriendo ciertos elementos en
ovario que desde entonces se conocen
como Folículos de Graaf.
Marcello Malpighi (Italia): estudio de red
pulmonar, descubrio que arterias y venas se
encontraban unidos por una red de vasos
llamados capilares.
Robert Hook (Inglaterra): Mejoras
importantes en el sistema
microscópico. Varias observaciones
microscópicas de importancia.
Observaciónes de corcho donde
observó celdillas de aire a las que
llamo células (habitaciones de
monasterios).
Desde Malpighi hasta Hooke principal
problema fue las lentes imperfectas,
con superficies irregulares y fallas
internas.
Lentes pulidas………..
Comerciante Holandes Anton Van Leeuwenhoek puliendo lentes
cuidadosamente logró aumentar objetos hasta 270 veces sin perjuicio en la
nitidez. Tenias 419 lemntes de cristal de roca y diamante (tamaño de alfiler)
por lo que sus microscópios eran mas pequeños que los habituales en esa
época.
Logró observar con mayor nitidez globulos rojos y
capilares y los describió con mayor exactitud que los
verdaderos descubridores (Swammerdam y Malpighi).
Descubrimiento mas importante: microorganismos
“invisibles” en agua estancada, los que mas tarde se
llamarian bacterias y “animáculos” que son conocidos
actualmente como protozoarios.
Otto Muller (Dinamarca): logró observar con suficiente
claridad bacterias y los clasificó en Bacilos y espirilos.
El principal problema en los primeros microscópios era
la aberracion cromática ( descomposición de luz
blanca).
Jpseph Jackson Lister (Inglaterra) diseñó un
microscópio acromático. Describió por peimera vez la
forma exacta de glóbulos rojos (Bicóncavos).
Sus avances dieron orígen al microscópio óptico
1930 aparece el microscópio electrónico que aumentaba mil veces mas la magnificación de
un microscópio óptico. Con este microscópi se puedo observar por primera vez ADN, virus,
bacterias, entre otros pequeños organelos.
Recibiern el premio nobel en medicina en 1974 por sus logros en Biología celular utilizando
el microscópio elecrónico.
Microspopio : partes
Componentes mecánicos
Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y sujeción de los sistemas ópticos y
de iluminación así como de los objetos que se van a observar.
BASE O PIE: es un soporte metálico, amplio y sólido que sostiene alos componentes del
microscópio.
BRAZO O ESTATIVO: Permite sujetar, y trasladar el microscopio. Soporta al tubo
óptico, sistema de revolver y platina.
PLATINA: Superficie plana de posición horizontal que posee una perforación circular
central. En ella se apoya la preparación (lámina portaobjetos que contiene a la
muestra que se va a examinar) que se sujeta a la platina mediante pinzas o con un
carrito que, mediante mandos especiales facilitan el movimiento de la preparación de
derecha a izquierda y de adelante hacia atrás.
TUBO OPTICO: Cilíndro metálico en cuya parte superior estan los lentes oculares y en
la parte inferior el sistema de lentes objetivos.
REVOLVER O PORTAOBJETIVOS: sistema giratorio en
donde se coectan los diferentes lentes objetivos.
TORNILLOS MACROMETRICO Y MICROMETRICO:
Generalmente ubicados en la parte inferiro y al
costado del brazo. Permiten e movimiento
ascendente y descendente de la platina con el
objetivo de conseguir un enfoque óptimo de la
muestra.
Componentes ópticos
Son los objetivos, los oculares, el condensador y los prismas.
Los tres primeros están constituidos por sistemas de lentes
positivos y negativos.
CONDENSADOR: Concentra y regula los rayos luminosos que
provienen de la fuente de luz
Está formado por una o dos lentes convergentes que reúnen los
rayos luminosos y los orientan hacia la abertura central de la
platina. Mediante un mecanismo de cremallera se acerca o
aleja de la platina. También tiene incorporado un diafragma iris
que regula la entrada de luz Todo ello con la finalidad de
concentrar la mayor cantidad de rayos luminosos en el plano
donde está situado el objeto a observar.
OBJETIVOS: Importantes en la formación de la imagen.
Establecen la calidad de la imagen y capacidad de captar los
detalles de la misma. (PODER DE RESOLUCION)
Poder de resolución. Se define así la capacidad de un objetivo
de poder distinguir la distancia mínima que debe existir
entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar
como dos puntos separados. La calidad de una imagen, en la
que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de detalles,
depende del poder de resolución del objetivo.
Los objetivos se clasifican de acuerdo al medio que existe
entre el objeto examinado y la lente frontal del objetivo. De
acuerdo a esta característica son secos o de inmersión. Son
objetivos secos aquellos que entre el objeto observado y el
objetivo solamente existe el aire; en cambio se denominan
objetivos de inmersión aquellos que requieren que entre la
preparación y la lente frontal del objetivo se coloque una
sustancia líquida, ésta puede ser agua, glicerina o un “aceite de
inmersión”, natural como el “aceite de cedro” o aceites
artificiales.
Otra clasificación de los objetivos se refiere al tipo de corrección al que deben someterse
las lentes con la finalidad de disminuir o anular algunas aberraciones
Acromáticos. Estos objetivos corrigen los rayos luminosos azules y rojos haciéndolos
coincidir en un solo plano focal. En tanto que los otros rayos coloreados se forman en otro
plano focal generando una imagen cuyos bordes se observan levemente difusos (espectro
luminoso secundario). Los objetivos de los microscopios “de estudiante” son acromáticos.
Semiapocromáticos. Se les conoce también como objetivos de “fluorita”, corrigen el
espectro secundario dando como resultado imágenes de bordes más nítidos. Por la alta
capacidad que tienen para transmitir las radiaciones luminosas de onda corta, se les
considera como los objetivos ideales para microscopía de fluorescencia.
Apocromáticos. En estos objetivos se hacen coincidir en un solo plano los rayos luminosos
azules, rojos y verdes, obteniendo así una imagen de bordes sumamente nítidos, pero la
corrección de esta
aberración trae consigo la acentuación de otra, que es la de curvatura de campo, pues la
superficie focal de la imagen es ligeramente curva, dando como resultado que, al observar
la imagen y tratar de enfocarla en la zona central del campo microscópico se desenfoca la
zona periférica y viceversa.
Planapocromáticos. Son los objetivos en los cuales se han corregido la mayor cantidad
de aberraciones como la cromática, curvatura de campo, de esfericidad y de astigmatismo;
por lo tanto se obtienen imágenes sumamente nítidas y el campo microscópico aparece
totalmente plano, enfocado en toda su extensión. Son los objetivos que generan imágenes
con mejor resolución, es preferible usarlos cuando se desea obtener imágenes fotográficas (
fotomicrografía).
. La imagen que forman los objetivos es aumentada de tamaño, invertida y real.
Índice de refracción: Se denomina así a la relación existente entre la velocidad de la
luz en el aire y su velocidad en el medio transparente utilizado. De la misma manera, se pueden
obtener los índices de refracción de una serie de sustancias que se utilizan en la construcción y
tallado de las lentes de los objetivos. La velocidad de la luz es de 300,000 Km/sg en el aire. Al
atravesar un medio transparente como el vidrio del cual están fabricados las lentes de los
microscopios, su velocidad se reduce a 200, 000 km./sg. Por lo tanto el vidrio tendrá un índice
de refracción de 1.5; pues el índice de refracción de un objeto o una sustancia transparente se
expresa mediante la fórmula:
IR= Velocidad de la luz en el aire /Velocidad de la luz en el medio
Agua = 1.3300
Aceite de inmersión = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200
Flint = 1.6600
Angulo de apertura: Es la capacidad de un objetivo de captar los rayos luminosos
refractados cuando éstos atraviesan un medio transparente. Cuanto mayor sea este
ángulo, la lente frontal del objetivo aceptará una mayor cantidad de ellos
Apertura numérica (NA): Es una medida que indica la capacidad del objetivo
de poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales
está constituido el objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el
poder del microscopio de formar imágenes que muestren al observador una
serie de detalles del objeto que se está examinando. Cuanto mayor sea la
apertura numérica de un objetivo, éste tendrá una mayor capacidad de
mostrar detalles finos en la imagen que forma.
OCULAR: Es el encargado de formar una segunda imagen a
partir de la imagen primaria que forma el objetivo. La imagen
del ocular es de mayor tamaño, virtual y derecho. Esta imagen
únicamente amplía un número determinado de veces (5x, 8x,
10x, 12x) a la imagen formada por el objetivo. No añade, por
más aumentos propios que posea, ningún detalle a los
generados por el objetivo.
En la generalidad de los casos, los oculares están construidos
por dos lentes convergentes (planos convexos). La primera
lente se denomina “de campo o frontal”, está situada en la
parte anterior del ocular (fig. micros.8) y, es la encargada de
recoger y ampliar la imagen generada por el sistema de lentes
del objetivo. La lente posterior, en contacto estrecho con el
ojo del observador, se denomina lente “ocular” y es la
responsable de aumentar nuevamente la imagen y orientarla
hacia el ojo del observador
COMPONENTES DE ILUMINACION
Las fuentes de iluminación son de dos tipos: natural y
artificial.
La luz natural, emitida por el sol, se obtiene de manera
indirecta mediante un espejo que posee una superficie plana
y otra cóncava. El espejo está situado en la superficie
superior de la base o pie. Un mecanismo especial permite
orientarlo hacia un lugar iluminado indirectamente por el sol
(una ventana, por ejemplo) y luego dirigir el haz luminoso
hacia la lente del condensador
La luz artificial se genera a través de una lámpara de bajo
voltaje (generalmente de 6 voltios) que, mediante un
reostato regula la emisión y la intensidad de luz. Al igual que
el espejo, este sistema de iluminación se inserta en la base o
pie del microscopio
FILTROS. En diversas partes del recorrido de haz
luminoso, aunque en la mayoría de los casos se sitúan entre
la fuente luminosa y el condensador. Tienen por finalidad
modificar la longitud de onda de la luz que ilumina el objeto
a observar. Por ejemplo, cuando se utiliza Son estructuras
transparentes (de vidrio, plástico o gelatina) coloreadas que
se localizan luz artificial es necesario emplear filtros azules
pues modifican el color ligeramente amarillento que poseen
los rayos luminosos que emite las lámparas eléctricas,
transformándolos en rayos de luz “blanca”. Este color de luz
es más aceptada por la retina y en las preparaciones
histológicas coloreadas mejora facilita la rendición de color
de las estructuras celulares o tisulares examinadas
