LABORATORIO # 3
EXTENDIDOS O FROTIS DE SANGRE
OBJETIVOS:
Definir el término hematología como rama de la medicina que estudia la morfología de la sangre.
Realizar los extendidos sanguíneos usando diferentes técnicas
INTRODUCCIÓN: Debido a que en hematología se requiere estudiar a la sangre con sus elementos
formes, así como hacer recuentos de células y revisiones morfológicas, es indispensable obtener la
sangre. En todo laboratorio clínico, podemos afirmar que la calidad de un examen empieza con la
calidad de la muestra, por lo que resulta fundamental conocer la metodología correcta para la
obtención de las mismas.
Para algunas determinaciones en las que se requieren pequeñas muestras, es posible obtenerla
mediante punción capilar, sin embargo, para la mayoría de exámenes, se utiliza la punción venosa,
va depender del requerimiento o prueba para analizar. Nunca debemos olvidar que todo el material
que se use para obtener muestras debe ser estéril y desechable, para no poner al paciente en peligro
de contaminación. Por otro lado, es importante considerar las medidas de bioseguridad para evitar
que nosotros nos podamos contaminar al obtener muestras de pacientes enfermos.
Tener conocimientos anatómicos es vital para la obtención de muestras, ya que los vasos sanguíneos
que se acercan o se alejan de los capilares, se vuelven progresivamente de diámetro mayor al
acercarse al corazón.
En general, en un frotis podemos evaluar lo siguiente: A) Morfología eritrocitaria. B) Distribución de
los eritrocitos. C) Morfología y recuento diferencial de los leucocitos. D) Morfología y apreciación
cualitativa del número de plaqueta, entre otros.
Por ende el examen morfológico de las células hematopoyéticas con el microscopio de luz requiere
la preparación de un frotis de sangre, bien teñido, y la precisión de la evaluación morfológica
depende, en parte de su calidad.
MATERIALES:
Algodón, Lancetas estériles, Alcohol etílico al 70%, guantes de látex, papel toalla, tinción de Giemsa
o Wright, agua destilada, vasija cuadrada 30 x 30cm porta y cubre objetos estériles.
METODOLOGÍA:
Un frotis de sangre óptimo tiene las siguientes características:
Longitud mínima de 2.5 cm
Transición gradual de un frotis grueso a uno delgado
Borde cuadrado o recto
Márgenes lisos y continuos
Ausencia de estrías, ondas o interrupciones
PUNCIÓN CAPILAR. La sangre de fluido directo es llamada comúnmente capilar o periférica y es la
fluye después de efectuar una punción superficial cutánea.
Esta punción se realiza cuando se requiere obtener cantidades muy pequeñas de sangre y la punción
venosa resulta difícil.
La metodología para realizar la punción, obtención de muestras y tinción es la siguiente:
1. Seleccionar el sitio adecuado: Los sitios más utilizados son: el lóbulo de oreja, la yema de un
dedo y el talón. Este último es el de elección en recién nacidos. Es importante asegurarse
del sitio elegido se encuentre tibio, para garantizar que los vasos sanguíneos se encuentren
dilatados y la sangre fluya libremente, de lo contrario, se obtendrá muy poca sangre.
2. Asepsia: Usando uN algodón impregnadO con alcohol etílico al 70%, frotar perfectamente
el sitio elegido para la punción mediante un barrido. Con esto, se elimina suciedad y se evita
la introducción de gérmenes al puncionar. Antes de hacer esto, dejar que el alcohol se
evapore hasta sequedad.
3. Punción: Con una lanceta estéril y desechable, hacer la punción insertándola de un solo
golpe en un ángulo de 90 grados, y verificando que se introduzca hasta el tope. De esta
manera, siempre se logra hacer una punción uniforme en profundidad y amplitud.
4. Obtención de la muestra: Desechar la primera gota de sangre que aparezca pues contiene
líquido tisular y diluye la sangre. Dejar que la sangre fluya libremente y recogerla en este
caso sobre la placa de portaobjeto. La gota de sangre debe tener un diámetro de 2 a 3 mm
a 1 ó 2 centímetros del borde del portaobjetos, colocando éste en posición horizontal sobre
la mesa de trabajo.
5. Colocar un segundo porta objetos (extensor), en una posición de 30 a 45 grados con
respecto al primero, con su eje mayor paralelo a él de tal modo ser fácilmente cogidos entre
los dedos pulgar e índice de la mano libre. El borde más abajo del portaobjetos extensor,
que debe ser liso y regular, se aplica firmemente sobre la superficie del primero, de manera
que la gota de sangre esté por debajo de él. Entonces, el segundo portaobjetos se desliza
lentamente hacia la sangre hasta que se produzca el contacto, después del cual la sangre se
deslizará uniformemente entre la superficie de contacto de ambos portaobjetos.
6. El portaobjetos extensor es movido rápida y suavemente en dirección opuesta,
manteniendo el contacto y el ángulo entre los dos portaobjetos. La extensión formada debe
ser uniforme y de aproximadamente la mitad de la longitud de la laminilla. El grosor de la
extensión y del ángulo en que se sitúa éste: a mayor ángulo mayor grosor, a mayor
velocidad, menor grosor (Figura 1 y 2). El grosor de la extensión dependerá únicamente de
la cantidad de sangre aplicada, por lo que es muy importante calcularla bien.
7. Secar de inmediato soplando vigorosamente con un pedazo de cartón o una secadora
eléctrica.
8. Teñir con los colorantes Giemsa o Wright, cubriendo la extensión, Cubrir las láminas con 15
a 20 gotas del colorante, dejar hacer efecto por 2 a 3 minutos, poner 20 gotas de agua
destilada en la lámina y homogeneizar, colorar durante 3 a 5 minutos, escurrir y lavar en
agua corriente. Secar las láminas en posición vertical.
9. Identificar con el aumento 100 x se rastrea el frotis de sangre periférica para asegurar una
distribución regular de leucocitos y observar células inmaduras o anormales, agrupamientos
de plaquetas y patrones anormales, agrupamiento de plaquetas y patrones anormales de
distribución de los eritrocitos como pilas de monedas o aglutinación (Figura 3)
Figura 1 y 2. Extendido de sangre de manera longitudinal y transversal. Fuente: Ovine, E y A.A
Selva (1990). “El Laboratorio en la Clínica” 4ª edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires,
Argentina.
Figura 3. Tipos de Leucocitos
INVESTIGACIÓN:
Mencionar los principales trastornos en los distintos tipos de leucocitos
Definir eritrocitos, leucocitos, coagulación, hematocrito, hemograma
BIBLIOGRAFIA:
- Stanley S. Raphael: Lynch: Técnicas de laboratório; 1986.
- Waessner: Técnicas de citologia hematológica; 1990.
