LABORATORIO # 5
Actividad Enzimática
INTRODUCCIÓN:
Las enzimas son proteínas, polímeros formados por aminoácidos covalentemente unidos entre sí,
que catalizan en los organismos una gran variedad de reacciones químicas. La actividad catalítica de
las enzimas depende de que mantengan su plegamiento, es decir, su estructura tridimensional. En
esta estructura tridimensional se forman cavidades, llamadas “sitio activo”, las cuales muestran
afinidad por las moléculas específicas (sustratos) que se convertirán en productos. La combinación
de grupos funcionales químicos presentes en estas cavidades genera un conjunto de interacciones
covalentes y no covalentes entre la proteína y el sustrato, que hacen que la conversión de éste en
un producto se vea favorecida. Como cualquier catalizador, al finalizar la transformación del sustrato
y liberarse el producto del sitio activo, la enzima regresa a su estado original y puede involucrarse
en un nuevo ciclo de catálisis.
Como proteínas que son, las enzimas están sujetas a ser afectadas por diferentes agentes físicos y
químicos, algunas veces la acción de la enzima se destruye completamente (por ejemplo: la
desnaturalización), y otras apenas se modifica. Dentro de ciertos límites, la velocidad de una
reacción enzimática es directamente proporcional a la concentración de la enzima presente. Cuando
la reacción ha progresado un tiempo es probable que se produzcan cambios en su velocidad, debido
a que la concentración del sustrato disminuye, pudiendo convertirse luego en factor limitante o a
que la acumulación de los productos retarda o inhibe el proceso.
Así podemos hablar de condiciones óptimas de temperatura y pH para cada tipo de enzima.
OBJETIVOS:
1. Observar el efecto de las enzimas en una reacción química.
2. Estudiar algunas de las características enzimas y su efecto en ciertas condiciones de laboratorio
MATERIALES:
Laboratorio
Bióxido de manganeso, Tubos de ensayo, Mortero, Vaso químico de 250 ml, Probeta de 10 ml,
Gradilla, Plato Caliente para Baño María, Espátula, Solución pH 4 y 10, Pipetas con dispensadores
Estudiantes
Arena, Hígado de res, Agua oxigenada, Papa cruda, Cuchilla, Termómetro, Marcador
PROCEDIMIENTO:
A. Propiedades de las enzimas
1. Efecto de un catalizador
La catalasa es una enzima presente en las células del hígado y de la papa que acelera la hidrólisis del
Peróxido de hidrógeno, un químico tóxico, en agua y oxígeno. Cuando esta reacción ocurre, se
desarrolla una efervescencia fácil de observar.
Rotule 4 tubos de ensayo con las letras 1, 2, 3, y 4. En cada uno vierta 1 ml de agua oxigenada.
Seguidamente al tubo 1, añada un poco de arena; al tubo 2, un poco de bióxido de manganeso, al
tubo 3, un pedacito de hígado crudo y al tubo 4, un pedacito de igual tamaño de papa cruda. Observe
la velocidad de la reacción en cada caso y reporte los resultados de la siguiente manera:
No efervescencia, Moderada efervescencia, Poca efervescencia, Mucha efervescencia
Anote sus resultados en el cuadro 1.
Cuadro 1. Efecto de un catalizador.
Tubo Contenido Observaciones
1
2
3
4
¿En qué se parece la catalasa al bióxido de manganeso (Mn02)?_______________
__________________________________________________________________. ¿En qué
difieren?_________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
2. Reúso de una enzima
a. En tubo de ensayo vierta aproximadamente 2 ml de agua oxigenada y seguidamente agregue un
pedacito de hígado crudo. Una vez haya terminado la reacción, divida el contenido líquido en dos
tubos de ensayo (A y B), divida también el pedacito de hígado en dos y agregue la mitad a cada tubo.
Luego al tubo A le pone un pedacito de hígado nuevo y al tubo B aproximadamente 1 ml de agua
oxigenada. ¿Qué observa? ____________________________________. Explique lo observado.
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
b. Ponga en dos tubos de ensayo: hígado crudo macerado con arena en uno y en el otro, papa cruda
macerada también con arena. Añada l ml de agua oxigenada en cada tubo de ensayo. ¿Qué observa?
_________________________________. Explique lo
observado________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
B. Factores que afectan la actividad enzimática
1. Efecto de la temperatura en la actividad enzimática. Marque tres tubos de ensayo con las letras
1, 2 y 3. A cada uno de los tubos de ensayo agregue hígado crudo macerado. Luego efectúe las
siguientes pruebas:
Tubo 1 Déjelo hervir por 30 minutos en baño maría. Vierta luego aproximadamente 1 ml de agua
oxigenada.
Tubo 2 Déjelo por 30 minutos en hielo. Vierta luego aproximadamente 1 ml de agua oxigenada
Tubo 3 Déjelo por 30 minutos en agua a 37°C. Agregue luego aproximadamente 1 ml de agua
oxigenada.
Anote sus resultados en el cuadro 2.
Tubo Tratamiento Observaciones
1
2
3
Con base en sus resultados. ¿Qué concluye del efecto de la temperatura sobre la acción de las
enzimas?_________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________.
2. Efecto del pH en la actividad enzimática.
Marque tres tubos de ensayo con las letras 1, 2 y 3. En el tubo 1 vierta aproximadamente 1 ml de
agua; en el tubo 2, vierta aproximadamente 1 ml de una solución de pH 4 y en el tubo 3, añada 1 ml
de una solución pH 10. Luego, agregue una porción de hígado macerado en cada uno de los tubos,
déjelos reposar por 30 minutos. Finalmente vierta en cada uno de los tubos 3 ml de agua oxigenada.
Anote sus resultados en el cuadro 3
Tubo Tratamiento Observaciones
1
2
3
¿En qué tubos hubo efervescencia? ____________________________. Explique sus resultados.
________________________________________________________________________________
________________________________
3. Efecto de la concentración del sustrato en la actividad enzimática.
Enumere 5 tubos de ensayo del 1 al 5. Con la ayuda de una pipeta vierta en cada tubo 1, 2, 3, 4 y 5
ml de agua oxigenada respectivamente. Mantenga fijo el volumen total (4 ml) en cada tubo con
agua. Luego agregue 1 gramo de hígado crudo macerado en cada tubo (el hígado debe pesarlo en
una balanza). Observe la velocidad de la reacción en cada tubo. Anote sus resultados en el cuadro
4.
Tubo Tratamiento Observaciones
1
2
3
4
5
¿Qué concluye de esta experiencia? _____________________________________
__________________________________________________________________.
INVESTIGACIÓN:
1. ¿Podemos afirmar que todas las enzimas son proteínas? Explique.
2. La amilasa salival es una enzima que está presente en la saliva y actúa sobre los carbohidratos.
¿Qué efecto podría tener esta enzima sobre las grasas y proteínas? Explique.
3. Investigue sobre las funciones de la enzima catalasa.
BIBIOLOGRAFÍA
De Robertis, E. & J. Hib. (2004). Fundamentos de Biología Celular y MoleculaR . (4a ed.). Editorial El
Ateneo.
Karp, G. (2011). Biología Celular y Molecular: conceptos y experimentos. (6a ed.). McGraw
Hill Interamericana.
