1.

ESTERILIZACIÓN
Esterilización es el proceso mediante el cual se elimina toda forma de vida microbiana, incluyendo
bacterias, virus, hongos y esporas, de un objeto o superficie. Esto es esencial en microbiología para
asegurar que los cultivos se realicen en un ambiente libre de contaminantes. Existen diversos métodos
de esterilización, que se dividen en físicos, químicos y físico-químicos.

2.Métodos de Esterilización con Métodos Físicos

2.1.1 Calor

Aumentar la temperatura por encima de la temperatura máxima de crecimiento de los microorganismos

provoca la pérdida de viabilidad → microorganismos dejan de ser capaces de crecer y dividirse.

Parámetros utilizados para medir la inactivación por calor:

● Tiempo Térmico Mortal: Tiempo mínimo necesario para matar todas las bacterias en una
suspensión a una temperatura específica. → varía según el tipo de material, la concentración de
azúcares, proteínas o grasas, la concentración de sales, etc. Permite elegir la temperatura que
altera menos las cualidades del material a conservar, pero permite eliminar los microorganismos
indeseados.
● Punto Térmico Mortal: Temperatura mínima que mata todas las bacterias en un tiempo
determinado (generalmente 10 minutos).

Es importante tener claro que, dependiendo de la temperatura y el tiempo a que sometamos un

material a tratamiento térmico, lograremos la inactivación parcial de la población microbiana (es
decir, queda una fracción de células viables) o bien esterilización (inactivación total).

Calor Húmedo o Esterilización a Vapor

El calor húmedo es más eficaz que el calor seco debido a la presencia de vapor, que facilita la
desnaturalización de proteínas y la fusión de lípidos de membrana *.

*debido a la ruptura de enlaces débiles, en especial los puentes de hidrógeno entre grupos C=O y H-N.
Estos enlaces se rompen más fácilmente por calor húmedo (en atmósfera saturada de vapor de agua),
debido a que las moléculas de agua pueden desplazar a los puentes de hidrógeno. En consecuencia, la
inactivación por calor húmedo requiere menores temperaturas que la que se realiza en ausencia de
agua.

● Equipo → autoclave: aparato que permite calentar muestras a temperaturas superiores a la

ebullición del agua mediante presión (sin que ésta hierva) → El autoclave permite elevar la
presión una o dos atmósferas sobre la presión atmosférica, elevándose con ello la temperatura
de ebullición del agua que se encuentra en su interior, es por esta razón que durante el
funcionamiento del autoclave el agua en su interior se encuentra a una temperatura
superior a los 100°C y sin entrar en ebullición.
 ● Parámetros de esterilización comunes: 121°C durante 15-20 minutos ( vienen fijados por la
resistencia de las esporas de especies saprófitas, que son las formas de vida que más resisten
el calor sin perder viabilidad. O sea que, al eliminar las esporas resistentes, estamos seguros de
haber eliminado toda forma de vida.)

Materiales aptos Materiales no aptos

● Textiles (gasas, apósitos, ropa) ● Instrumentos electrónicos

● Instrumentos quirúrgicos de acero ● Instrumental de cirugía sin tratamiento
inoxidable (el vapor puede hacer que anticorrosivo
metales se oxiden) ● Soluciones oleosas y grasas
● Vidrio y cristal (aunque la esterilización ● Plásticos sensibles a la temperatura como
por calor seco es preferible) placas de Petri de plástico descartables.
● Líquidos (agua destilada, medios de ● Instrumental cromado o niquelado.
cultivo y soluciones farmacológica-llenado
del recipiente no debe sobrepasar los 2/3
de su capacidad total.-)
● Gomas y plásticos termorresistentes

Ventajas Desventajas

○ Rápido tiempo de acción ○ No apto para materiales

○ Efectiva penetración del vapor cromados o niquelados
○ Destruye microorganismos más ○ No adecuado para sustancias
termorresistentes pulverulentas o oleosas
○ No deja residuos tóxicos ○ Puede dañar plásticos
○ Económico y fácil de obtener sensibles
○ Compatible con la mayoría de los ○ El material sale húmedo
materiales

Tratamientos térmicos en la industria alimentaria:

● Pasteurización (en horno Pasteur): implica un tratamiento térmico en el que se elimina

microorganismos patógenos sin esterilizar completamente. Se utiliza para leche y bebidas, pero
también se emplea para la inactivación por calor de microorganismos para la preparación de
vacunas, resultando en una reducción de microorganismos del 97-99%. La leche pasteurizada
debe ser consumida en un corto periodo de tiempo y se conserva en frío.
● Uperización (leche UHT): se lleva a cabo en líquidos para el consumo humano y consiste en la
exposición a 130-150°C durante 2-5 segundos, seguido de un enfriamiento rápido. Permite una
conservación de hasta 6 meses a temperatura ambiente. No es una esterilización completa, sino
comercial, que elimina formas de resistencia de microorganismos como Clostridium botulinum
(la esterilidad absoluta podría degradar de manera innecesaria la calidad del alimento).
Calor Seco

El calor seco requiere temperaturas más altas y tiempos más largos que el calor húmedo, debido a la
ausencia de humedad, la rotura de puentes de hidrógeno y la desnaturalización de proteínas, así como
la fusión de membranas, demandan de mayores energías. Se utiliza para materiales que no pueden
soportar la humedad.

● Equipo → Horno Pasteur: la esterilización en este se realiza a 170°C durante 3 horas.

Materiales aptos Materiales no aptos

● Instrumentos cortantes y de acero ● Material de plástico (se derrite).

inoxidable (tijeras, espátulas y pinzas). ● Soluciones (se evaporan).
● Agujas, jeringas de cristal, tubos, pipetas ● Material textil
de vidrio, placas de Petri de vidrio.
● Sustancias oleosas e hidrófugas (aceites,
silicona, parafina, vaselina, cremas y
polvos de talco).

Ventajas Desventajas

○ No deja residuos tóxicos ○ No apto para materiales

○ No corroe metales cromados o niquelados
○ Esteriliza sustancias oleosas y grasas ○ No adecuado para sustancias
○ El material no sale húmedo pulverulentas o oleosas
○ Puede dañar plásticos
sensibles
2.1.2 Radiaciones

Radiaciones ionizantes:

● Incluyen rayos X y rayos gamma → Penetran profundamente en materiales sólidos y

líquidos.

Materiales aptos

● alimentos
● medicamentos
● material sanitario.

Ventajas Desventajas

○ Excelente ○ Requiere instalaciones específicas

capacidad de ○ Tecnología no portátil
penetración ○ Realizada por profesionales altamente
○ No deja residuos especializados.
tóxicos ○ Los efectos de las radiaciones ionizantes pueden
○ No aumenta la ser letales, tanto directos como indirectos, o
temperatura mutagénicos. Los efectos letales directos se logran
significativamente a altas dosis de radiación, mientras que los letales
○ No corroe indirectos y mutagénicos se consiguen a menores
metales dosis.

Radiaciones no ionizantes (UV):

● La radiación UV tiene un efecto letal y mutagénico, que depende de su longitud de onda. Tanto
las proteínas como los ácidos nucleicos son afectados por la radiación UV.
● Materiales aptos para esterilizar con luz UV → superficies y aire en ambientes cerrados, como
salas de hospitales.
2.1.3. FILTRACIÓN

La filtración es el paso de un fluido (líquido o gas) a través de un material filtrante, con poros lo
suficientemente pequeños como para retener células microbianas.

Sustancias que pueden esterilizarse por filtración:

- Líquidos sensibles al calor como soluciones de antibióticos, enzimas y vacunas.

- Gases

[Link]

Esterilización rápida mediante flameado: Utilizada para asas de siembra y bocas de frascos mediante
exposición directa a una llama.

Esterilización por incineración: Utilizada para material sanitario desechable contaminado.

2.2 ESTERILIZACIÓN POR MÉTODOS QUÍMICOS

La esterilización química es un proceso utilizado para eliminar microorganismos de materiales que no

pueden soportar métodos físicos como el calor. Existen dos principales enfoques en la esterilización
química: tratamientos químicos gaseosos y tratamientos químicos líquidos.

2.2.1 Tratamientos Químicos Gaseosos

Óxido de Etileno:

● Mecanismo de Acción:
○ El óxido de etileno actúa como un agente alquilante. Reemplaza los átomos de hidrógeno
en los grupos funcionales de las moléculas orgánicas por grupos alquilantes (como OH-,
COOH). Esto provoca modificaciones irreversibles en las proteínas, ácidos nucleicos y
otras biomoléculas, inactivando los microorganismos al interferir con la estructura de sus
componentes esenciales.
○ Reacciona con grupos amino y sulfhidrilo en proteínas, y con grupos fosfato y anillos
nitrogenados en ácidos nucleicos.

USOS → materiales sensibles al calor como plásticos (ej. placas de Petri desechables), drogas, ciertos
productos biológicos y equipos electrónicos.

● Limitaciones:
○ No se utiliza para líquidos, ropa, aceites, ni materiales que se puedan esterilizar con calor
seco o húmedo.
 Ventajas Desventajas

○ Adecuado para materiales ○ Proceso lento.

que no soportan altas ○ Residuos tóxicos que requieren aireación
temperaturas. posterior.
○ Alta penetración y ○ Inflamable y explosivo, con riesgos para
capacidad de difusión, útil la salud (mutagénico y carcinógeno).
para materiales complejos y ○ Costoso y puede modificar químicamente
sensibles al calor. los materiales tratados.

CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN

Control de calidad: Para que un producto sea considerado estéril, se requiere verificar que todas las
etapas que conforman el proceso de esterilización se hayan realizado correctamente.

Para los distintos tipos de esterilización se definen unas variables críticas establecidas (SV) y que
debemos controlar:

● Vapor de Agua: Temperatura, presión y tiempo.

● Calor Seco: Temperatura y tiempo.
● Óxido de Etileno: Temperatura, tiempo, humedad relativa y concentración.

Indicadores Físicos:

Son elementos que ya vienen incluidos en el equipo, como termómetros, termocuplas,

manómetros, sensores de carga y cronómetros. Controlan parámetros como temperatura, tiempo,
presión y registran el desarrollo del proceso. Están diseñados para supervisar el funcionamiento de los
equipos de esterilización y mostrar si los ciclos llegaron a los valores preestablecidos.

Indicadores Químicos:

Son sustancias utilizadas para verificar uno o más parámetros del proceso de esterilización, pero no
confirman la esterilidad completa del dispositivo. Estos indicadores proporcionan una indicación inicial
de si las condiciones del proceso se han cumplido, ayudando a detectar problemas como el mal
funcionamiento del equipo o errores en la colocación de los materiales.
 ○ Interpretación de Resultados:
■ Prueba Positiva: Cambio uniforme de color (de amarillo a negro), indicando
buena penetración del vapor y eliminación adecuada del aire.
■ Prueba Negativa: Cambio de color no uniforme, indicando problemas con la
eliminación del aire o fallas en el esterilizador.

Indicadores biológicos:

Son herramientas fundamentales para evaluar la efectividad de los procesos de esterilización. Estos
indicadores contienen esporas de microorganismos altamente resistentes que se procesan junto con el
material a esterilizar. Posteriormente, se cultivan en medios de cultivo para determinar si el proceso de
esterilización fue exitoso. Si las esporas no crecen, significa que el proceso de esterilización fue
efectivo.

3. DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS

Los desinfectantes y antisépticos son sustancias utilizadas para eliminar o reducir la cantidad de
microorganismos en superficies (desinfectantes) o tejidos(antisépticos) → NO ESTERILIZAN. Su
efectividad depende de varios factores y mecanismos de acción. A continuación se detallan los aspectos
clave relacionados con estos agentes.

Factores que Afectan la Potencia de un Desinfectante

1. Concentración del Agente y Tiempo de Actuación:

○ Concentración: La eficacia de un desinfectante varía con su concentración. Algunas
concentraciones pueden ser más efectivas que otras dependiendo del tipo de
desinfectante y del microorganismo objetivo.
○ Tiempo de Actuación: El tiempo durante el cual el desinfectante está en contacto con el
microorganismo también influye en su efectividad. Un tiempo de exposición insuficiente
puede resultar en una desinfección incompleta.
2. pH:
○ El pH afecta la ionización del desinfectante y la carga superficial de los microorganismos.
Los agentes aniónicos suelen ser más efectivos en ambientes ácidos, mientras que los
catiónicos funcionan mejor en condiciones alcalinas.
3. Temperatura:
○ Generalmente, un aumento en la temperatura mejora la eficacia de los desinfectantes. Un
incremento de 10 grados Celsius puede duplicar la tasa de muerte microbiana.
4. Naturaleza del Microorganismo y Otros Factores Asociados:
○ La resistencia de los microorganismos varía. Esporas bacterianas y microorganismos con
cápsulas suelen ser más resistentes. También se considera la fase de cultivo y el número
inicial de microorganismos.
 5. Presencia de Materiales Extraños:
○ La presencia de materia orgánica, como sangre o suero, puede disminuir la efectividad
de algunos desinfectantes, especialmente los oxidantes y desnaturalizantes de proteínas.

EJEMPLOS DE DESINFECTANTES → DETERGENTES, AGENTES OXIDANTES (HIPOCLORITO)

EJEMPLOS DE ANTISÉPTICOS → JABONES, ETANOL

[Link] DE CULTIVO
Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado
de gel) en la que están presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un(os)
determinado(s) microorganismo(s).

Clasificación Según Composición Química

Medios Complejos (Indefinidos) Medios

Sintéticos
(Definidos)

● Composición química exacta desconocida; derivada de infusiones ● Composición

y extractos de materiales naturales (NO SE CUANTO TENGO DE química
UN AA EN ESPECÍFICO TENGO POR EJ → SON conocida; se
GENERALISTAS) Ejemplos: preparan
● disolviendo
- Extracto de Carne: Contiene proteínas, aminoácidos, bases sustancias
nitrogenadas, y glúcidos. químicas puras.
- Extractos de Levadura: Contiene vitaminas.
- Peptonas: Productos de hidrólisis parcial de proteínas.

● Uso: Permiten
un control
● Uso: Ideales para crecimiento general, pero sin control preciso de preciso de
nutrientes. nutrientes,
● Ejemplo de Medio Complejo: LB (Lysogeny Broth) → contiene adaptados a
peptona de caseína (10 g/l) y extracto de levadura (5g/l) que bacterias con
proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo capacidades
óptimo de la mayoría de los microorganismos, y además cloruro biosintéticas
de sodio (5g/l) que ayuda a mantener el equilibrio osmótico. específicas.
Clasificación Según Consistencia

● Medios Líquidos: Sin gelificante.

● Medios Sólidos: Contienen un gelificante que solidifica la solución nutritiva (ej. agar-agar).
● Medios Semisólidos: Contienen una menor cantidad de gelificante que los medios sólidos.

Gelificante Más Usado:

● Agar-Agar: Derivado de algas rojas; se utiliza en concentraciones superiores al 1% para medios

sólidos y menores para medios semisólidos (habitualmente 0,3-0,7 % p/v).

3.3 Clasificación Según Propósito

● Medios Selectivos: permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de microorganismos (ej.
con antibióticos→ bacterias sensibles a dicho antibiótico no podrán crecer en dichos medios o
medio con violeta cristal → inhiben el crecimiento de bacterias Gram-positiva).
● Medios Diferenciales: Permiten distinguir a simple vista dos o más tipos de bacterias en función
de su distinto comportamiento respecto de algún nutriente del medio. (ej. cambio de color).

Ejemplos de Medios:

● Caldo Tioglicolato: Diferencial para requisitos de oxígeno.

El medio llamado caldo tioglicolato permite diferenciar microorganismos en base a su

requerimiento de oxígeno. Es el medio de enriquecimiento más utilizado en Microbiología. Contiene
0,075 % de agar para evitar que las corrientes de convección transporten el oxígeno de la superficie a
toda la masa del caldo. El ácido tioglicólico actúa como agente reductor, disminuyendo aún más el
potencial de óxido-reducción del medio. La presencia de una importante variedad de nutrientes
(caseína, extractos de levadura y carne, vitaminas, etc.) en el medio permite el desarrollo de la mayor
parte de las bacterias. El crecimiento en los tubos se distingue por la presencia de turbidez a distintas
profundidades: se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior,
mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del
medio.
 ● Medio SIM: Diferencial para producción de sulfuro, indol, y movilidad.

El medio SIM (Sulfuro, Indol, Movilidad) es un medio semisólido utilizado en microbiología para
diferenciar bacterias según tres características principales:

1. Producción de Sulfuro de Hidrógeno (H2S):

○ Proceso: Las bacterias que producen H2S convierten el tiosulfato de sodio presente en
el medio en sulfuro de hidrógeno, que luego reacciona con el citrato férrico, formando
sulfuro ferroso (FeS).
○ Resultado: La presencia de sulfuro ferroso se indica por un precipitado negro en el
medio. Las bacterias que no producen H2S dejan el medio del color original (beige).
2. Formación de Indol:
○ Proceso: El medio contiene tripteína, rica en triptófano, que es degradado por la enzima
triptofanasa en indol, ácido pirúvico y amonio. Para detectar indol, se agrega un reactivo
(Ehrlich o Kovac 's).
○ Resultado: La reacción del indol con el reactivo produce un anillo rojo-fucsia en la
superficie del medio. La presencia del anillo indica una prueba positiva para la formación
de indol, mientras que la ausencia de anillo indica una prueba negativa.
3. Movilidad:
○ Proceso: El medio es semisólido para permitir observar la movilidad bacteriana. Las
bacterias móviles difunden el medio alrededor del inóculo, causando turbidez en la zona
de crecimiento.
○ Resultado: La presencia de turbidez más allá del trayecto del inóculo indica movilidad
(prueba positiva), mientras que la falta de turbidez más allá del inóculo indica falta de
movilidad (prueba negativa).

● Agar MacConkey: Selectivo para Gram-negativas y diferencial para fermentación de lactosa.

El medio Agar de MacConkey, de color rosado y transparente, posee, entre otras sustancias, lactosa,
peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal.

Debido a la presencia de Violeta Cristal en su composición, este medio es selectivo contra todas las
bacterias Gram-positivas, además debido a las Sales Biliares también es selectivo contra muchas
Gram- negativas. En cambio, las Enterobacterias (Gram-negativas) están evolutivamente adaptadas a
soportar sales biliares en su hábitat natural (el intestino de vertebrados superiores) y pueden crecer en
este medio. Este medio permite aislar patógenos entéricos a partir de muestras clínicas, agua o
alimentos

En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de Enterobacterias
según que puedan o no fermentar la lactosa. Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al
medio gran cantidad de ácidos orgánicos, lo que provoca que sus colonias y sus alrededores aparezcan
de color rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro en pH acido; además, se forma un halo turbio
alrededor de estas colonias, fenómeno ocasionado por la precipitación de las sales biliares inducida por
la acidez. En cambio, las bacterias Lac- , al no poder usar la lactosa, recurren como fuente de carbono a
las peptonas, al no poder usar la lactosa, recurren como fuente de carbono a las peptonas, a las que
desaminan, incorporan el esqueleto carbonado y excretan iones NH4+ , que alcalinizan el medio de
cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro vire a amarillo o ámbar .
 ● Lac+ / Lac-: Indica si una bacteria puede fermentar lactosa.
○ Lac+: Fermentadora de lactosa (colonias rojas o rosas en Agar de MacConkey).
○ Lac-: No fermentadora de lactosa (colonias incoloras o transparentes en Agar de
MacConkey).
● Met+ / Met-: Indica la capacidad de utilizar metionina o realizar ciertos procesos metabólicos
relacionados con ella.
○ Met+: Capaz de utilizar metionina o realizar procesos metabólicos asociados.
○ Met-: Incapaz de utilizar metionina o realizar los procesos metabólicos relacionados.

*Met es metionina, pero se extiende a cualquier AA