ENSAYO PARA PROTEÍNAS

Medina Vega Maida Johanna, Jersson Ferney Rincón Pan, Gisselle Valentina Porras Ureña, Javier
Pérez Parada, Herly López ATencio; Wilmer Alexis Leal Duran.
Curso Bioquímica, Grupo D, Departamento de Biología, Universidad de Pamplona

RESUMEN:

Este laboratorio se enfocó en detectar la presencia de proteínas y aminoácidos específicos en una muestra de clara
de huevo mediante varias pruebas cualitativas. Los resultados obtenidos confirmaron la existencia de aminoácidos
y proteínas, además de ciertos grupos funcionales. La prueba de ninhidrina dio un resultado positivo, revelando la
presencia de aminoácidos a través de un cambio de color característico. La reacción xantoproteica, que detecta
aminoácidos con anillos aromáticos, también fue positiva, mostrando una transición de color de amarillo en medio
ácido a naranja en medio básico, lo que sugiere la presencia de estos grupos aromáticos en la clara de [Link]
reacción de Millon, específica para tirosina, generó un color ladrillo distintivo, confirmando la presencia de este
aminoácido en la muestra. La prueba del nitroprusiato fue negativa, lo que indica la ausencia de grupos sulfhidrilo
como los de la cisteína. La prueba de Biuret, que confirma la existencia de enlaces peptídicos, resultó positiva,
corroborando la presencia de proteínas en la muestra. Finalmente, la prueba de Sakaguchi, utilizada para detectar
arginina, resultó negativa, señalando la ausencia de este aminoácido en la clara de [Link] conjunto de
resultados permite una identificación detallada de los componentes presentes en la clara de huevo mediante la
reacción de distintos grupos funcionales en sus aminoácidos y proteínas.

Palabras Claves: aminoácidos, estructuras, positivo, estabilidad, reactivos

ABSTRACT:

This laboratory focused on detecting the presence of proteins and specific amino acids in an egg white sample
using various qualitative tests. The results confirmed the presence of amino acids and proteins, along with certain
functional groups. The ninhydrin test was positive, indicating amino acids in the sample through a characteristic
color change. The xanthoproteic reaction, which detects amino acids with aromatic rings, was also positive,
showing a color shift from yellow in acidic medium to orange in basic medium, suggesting the presence of these
aromatic groups in the egg [Link] Millon reaction, specific to tyrosine, produced a distinctive brick-red color,
confirming the presence of this amino acid in the sample. The nitroprusside test was negative, indicating the
absence of sulfhydryl groups like those in cysteine. The Biuret test, which confirms the presence of peptide bonds,
yielded a positive result, corroborating the presence of proteins in the sample. Finally, the Sakaguchi test, used to
detect arginine, was negative, indicating the absence of this amino acid in the egg [Link] set of results provides
a detailed identification of the components present in egg white by detecting various functional groups in its amino
acids and proteins.

Key Words: amino acids, structures, positive, stability, reagents

1. Introducción forma en que los aminoácidos se organizan en las

proteínas, incluyendo la forma en que la estructura 1
El siguiente informe se centrará en la estructura de las primaria se pliega para formar estructuras secundarias
proteínas, describiendo los distintos niveles de como la alfa-hélice y la hoja plegada Beta. Además,
organización estructural, desde la estructura primaria se describe la importancia de las proteínas globulares
hasta la estructura tridimensional. Se explorará la y fibrosas en la estructura y función de las proteínas.
1
El informe también detalla algunas de las pruebas grupos tioles reaccionan con el nitroprusiato de sodio
químicas utilizadas para identificar y cuantificar las en presencia de amoníaco, produciendo un cambio de
proteínas, incluyendo la reacción de ninhidrina, la color a rojo. Esta prueba se basa en la capacidad de
reacción xantoproteica, la reacción de Millón, la los grupos tioles de reaccionar con el nitroprusiato y
prueba del nitroprusiato y la prueba de Biuret para formar un complejo coloreado.
enlaces peptídicos.(¿Qué Son las Proteínas y Qué Es
Lo Que Hacen?: MedlinePlus Genetics, s. f.). La prueba de Biuret es un ensayo utilizado para
cuantificar la cantidad de enlaces peptídicos presentes
en una muestra de proteína. El sulfato alcalino de
cobre reacciona con compuestos que tienen dos o más
Los ensayos para proteínas son herramientas enlaces peptídicos, produciendo un complejo
fundamentales utilizadas en el laboratorio para coloración violeta. La intensidad del color obtenido
identificar, cuantificar y caracterizar estas moléculas en esta prueba es proporcional a la cantidad de
biológicas importantes. Estos ensayos se basan en enlaces peptídicos presentes, lo que permite una
principios químicos y bioquímicos para detectar la estimación cuantitativa de la concentración de
presencia de proteínas, determinar su concentración y proteínas.(Alves, s. f.).
analizar su estructura.
Uno de los ensayos más comunes para la detección de
proteínas es la reacción de ninhidrina. La ninhidrina Es importante destacar que, aunque estos ensayos
es un agente oxidante potente que reacciona con los son muy utilizados en el laboratorio, cada uno tiene
aminoácidos alfa para dar un compuesto de color sus limitaciones y especificidades. Además, es crucial
púrpura. Este ensayo se basa en la propiedad de la tener en cuenta que los resultados de estos ensayos
ninhidrina de reacción con el grupo amino de los deben ser interpretados en conjunto con otras técnicas
aminoácidos para formar un producto coloreado, lo y análisis para obtener una imagen completa de las
que permite la detección cualitativa de la presencia de proteínas bajo [Link] resumen, los ensayos para
proteínas.(Proteína, s. f.). proteínas son herramientas valiosas en el laboratorio
para identificar, cuantificar y caracterizar estas
moléculas esenciales.
Otro ensayo utilizado es la reacción xantoproteica. 2. Materiales y reactivos
Este ensayo se basa en la capacidad de los
aminoácidos que contienen un núcleo aromático para Materiales:
derivados formar de color amarillo cuando se
calientan con ácido nítrico concentrado. Estos En la práctica de laboratorio sobre ensayo de
derivados pueden ser visualmente detectados, y su proteínas se trabajó con los siguientes materiales:
intensidad de color puede proporcionar una pipeta graduada de 1 mL, pipeta graduada de 5 mL,
estimación cualitativa de la cantidad de proteínas vidrio reloj, pipeteador, beaker de 500 mL, frasco
presentes.(colaboradores de Wikipedia, 2024). lavador, beaker de 50 mL, termómetro, espátula,
balón aforado de 50 mL, balanza analítica, bureta de
La reacción de Millón es otro ensayo utilizado para mL, soporte universal con aro, malla y 2 pinzas para
la identificación de proteínas. Esta prueba se basa en bureta, tubos de ensayo y gradilla.
la reacción de compuestos que contienen el radical
hidroxibenceno con el reactivo de Millón, formando Reactivos:
compuestos rojos. Sin embargo, es importante tener En el laboratorio se dispone de los siguientes
en cuenta que esta reacción es específica solo para reactivos: NaOH en lentejas, HCl concentrado, KCl,
aminoácidos fenólicos, como la tirosina y sus etanol, cloroformo, HNO₃ concentrado, ninhidrina al
derivados.(Reactivo de Millon, Para la Detección de 0,2 %, reactivo de Millon, nitrito de sodio al 1 % p/v,
Tirosina, Thermo Scientific Chemicals | Fisher ácido pícrico al 2 %, CuSO₄·5H₂O, ácido
Scientific, s. f.). tricloroacético al 20 %, nitroprusiato de sodio al 2 %
La prueba del nitroprusiato se utiliza para detectar la p/v, hidróxido de amonio, solución de albúmina y
presencia de grupos tioles en las proteínas. Los soluciones buffer patrón. Se manejaron los reactivos
siguiendo las normas de bioseguridad pertinentes a
2
cada uno de los reactivos utilizados durante el Parte V. prueba de Biuret para enlaces peptídicos
desarrolló de la práctica.
A 2 mL de muestra se le agregó 5 gotas de la solución
de sulfato de cobre al 10% m/v y luego 2 mL de
hidróxido de sodio 10 M; y se mezcló vigorosamente
3. Metodología y observar.
La metodología trabajada durante el desarrolló de la Parte VI. Reactivo de Sakaguchi para la arginina.
práctica sobre ensayo de proteínas fue la siguiente: Se colocó 2 mL de una muestra de proteína en un
En primer lugar se preparó la muestra de la albúmina tubo de ensayo, a lo cuál se le adiciona 1 mL de
para que sea nuestra solución base para cada una de hidróxido de sodio 2 N, se mezcló bien y luego
las seis pruebas trabajadas durante el desarrolló de la agregarle 2 gotas de reactivo de Sakaguchi.
práctica, para ello se extrajo de un huevo la clara del
huevo ( que es la que presenta la albúmina); de la
Yema. Posteriormente se realizó un filtrado de esta
clara de huevo con papel filtrador, y se añadio la 4. Resultados y Análisis
cantidad pertinente a cada uno de los tubos de - Resultados.
ensayos y se procedió a la realización de las
diferentes pruebas siendo: PRUEBA RESULTADOS
Parte I. reacción de ninhidrina: Reacción de ninhidrina + Color
Se colocó 1 mL de solución de aminoácido en un púrpura
tubo de ensayo y se ajustó el pH cercano a 7, se le
agregó 5 gotas de la solución de ninhidrina y dejo Reacción xantoproteica + Amarilló
hervir por 2 min.
Reacción de Millon + Rojo
Parte II. Reacción Xantoproteica: Prueba del nitroprusiato -
Se agregaron volúmenes iguales de ácido nítrico a Prueba de Biuret para enlaces + Azul -
aproximadamente 0.5mL de solución de aminoácido, peptídicos violeta
luego se dejó enfriar y se observó el cambio de
color. Se agregó suficiente hidróxido de sodio hasta Reactivo de Sakaguchi para la -
que la solución alcanzó alcalinidad. El cambio de arginina
color amarillo en solución acida a naranja brillante
Tabla 1. Resultados obtenidos en laboratorio.
en solución básica, constituye un resultado positivo.
ANÁLISIS DE RESULTADOS.
Parte III. Reacción de Millon.
- Reacción de ninhidrina: La aparición de un
A 1 mL de la muestra se le agregó 5 gotas de reactivo color púrpura intenso confirma que la
de Millon y calentó en baño de agua hirviendo por albúmina reaccionó con la ninhidrina, lo que
10 min se dejó enfriar a temperatura ambiente y indica la presencia de grupos amino accesibles
agregarle 5 gotas de nitrito de sodio al 1%. La en la proteína. Este cambio de color es el
aparición de un color ladrillo da un resultado resultado de la formación del complejo de
positivo. Ruhemann, producto de la interacción de la
ninhidrina con los grupos amino, que libera
amoníaco y da lugar a un color característico
Parte IV. Reacción de Nitroprusiato de Sodio de púrpura. La albúmina contiene múltiples
Se mezclaron 2 mL de la muestra con 0,5 mL de grupos amino, presentes tanto en los extremos
nitroprusiato de sodio al 1%. Se añadieron 40 gotas de sus cadenas polipeptídicas como en las
de hidróxido de amonio y se observó la reacción. cadenas laterales de aminoácidos específicos
(como lisina), lo cual explica el resultado
positivo.
3
 producen un cambio de color al reaccionar. La
- Reacción xantoproteica: La reacción clara de huevo está compuesta principalmente
xantoproteica es un método que se puede de albúmina, una proteína en la que la
utilizar para determinar la presencia de mayoría de los grupos sulfhidrilo están
proteínas solubles en una solución, empleando enlazados en forma de enlaces disulfuro. Esto
ácido nítrico concentrado. La prueba da impide que los sulfhidrilos estén disponibles
resultado positivo en aquellas proteínas con para reaccionar con el nitroprusiato, por lo
aminoácidos portadores de grupos aromáticos. que no se observa la reacción colorimétrica
Si una vez realizada la prueba se neutraliza esperada.
con un álcali, se torna color amarillo oscuro.
Esta reacción se debe a la formación de un - Prueba de Biuret para enlaces peptídicos: Al
compuesto aromático nitrado de color realizar la prueba de Biuret, se observó un
amarillo, cuando las proteínas son tratadas resultado positivo ya que se obtuvo un intenso
con ácido nítrico concentrado. Generalmente, color azul-violeta en la muestra, lo que indica
se forma primero un precipitado blanco que la presencia de enlaces peptídicos. La reacción
cambia a amarillo al calentarlo. El color se basa en la interacción entre los iones
empieza a tornarse anaranjado cuando la cúpricos (Cu²⁺) y los enlaces peptídicos
solución se vuelve básica. La prueba da presentes en las proteínas. En un medio
resultado positivo en aquellas proteínas con básico, los iones de cobre forman complejos
aminoácidos portadores de grupos bencénicos, con los átomos de nitrógeno y oxígeno de los
tirosina, fenilalanina y triptófano, enlaces peptídicos, generando un complejo
obteniéndose nitrocompuestos de color cúprico. Este complejo es responsable del
amarillo, que se vuelven anaranjados en color azul-violeta observado; el color se
medio fuertemente alcalino (formación del produce por la transición de electrones en los
ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba iones cúpricos, que absorben luz en ciertas
se produce la nitración del anillo bencénico longitudes de onda. La intensidad del color
presente en dichos aminoácidos. En medio azul-violeta no solo confirma la existencia de
ácido, la solución presenta un color amarillo, proteínas, sino que también permite estimar su
mientras que al convertirse en básico, el color concentración en la muestra.
cambia a un naranja brillante. Este cambio es
indicativo de un resultado positivo en la - Reactivo de Sakaguchi para la arginina: No
prueba xantoproteica. se observó el cambio de color rojo esperado,
- Reacción de Millon: lo que indica que la muestra analizada no
La reacción de Millon detecta la presencia de contiene arginina o que la concentración de
tirosina en proteínas al utilizar un reactivo que arginina está por debajo del límite de
contiene nitrato de mercurio en ácido nítrico detección de la prueba. La ausencia de
diluido. En la prueba, el grupo fenol de la cambio de color sugiere que la muestra
tirosina se oxida y se une al ion mercurio, analizada probablemente no contiene arginina,
formando un complejo colorido . Este enlace o esta se encuentra en concentraciones
provoca un cambio a un color rojo extremadamente bajas. También podría haber
característico al calentar la mezcla, interferencias, por lo que es esencial asegurar
confirmando la presencia de tirosina en la que el pH de la solución y la frescura de los
muestra. La prueba es específica para tirosina reactivos sean adecuados para evitar falsos
debido a la reacción única del grupo fenol negativos. El resultado negativo obtenido con
oxidado con el mercurio.(Biochemistry) el Reactivo de Sakaguchi para la arginina
puede indicar una ausencia de este
- Prueba del nitroprusiato: En esta prueba, el aminoácido en la muestra.
resultado fue negativo porque la reacción con
el nitroprusiato depende de la presencia de
grupos sulfhidrilo libres o cetonas, los cuales

4
 colaboradores de Wikipedia. (2024, 21 mayo).
5. Conclusiones
Reacción xantoproteica. Wikipedia, la Enciclopedia
Libre.
[Link]
Tras realizar las diferentes pruebas concluimos que la
identificación de proteínas y aminoácidos mediante proteica#:~:text=La%20reacci%C3%B3n%20xantopr
reactivos químicos específicos no solo revela la oteica%20se%20puede,reacci%C3%B3n%20cualitati
composición de las muestras, sino que también
destaca la sensibilidad de las estructuras proteicas a va%2C%20mas%20no%20cuantitativa.
condiciones físicas y químicas. La reactividad Reactivo de Millon, para la detección de tirosina,
observada en la prueba de Biuret y la prueba
xantoproteica indica que las proteínas pueden Thermo Scientific Chemicals | Fisher Scientific. (s.f.).
presentar cambios en su estructura con variaciones en
[Link]
el pH, lo que afecta su funcionalidad. La ausencia de
reactividad en la prueba del nitroprusiato sugiere que nt-the-detection-tyrosine-thermo-scientific/15550574
ciertos grupos funcionales, como los tioles, están
ausentes, lo que puede influir en la actividad Alves, B. /. O. /. O.-. M. (s. f.). DECS.
biológica de las proteínas presentes. Asimismo, los [Link]
resultados de la prueba de Sakaguchi indican la
relevancia de los aminoácidos en el diseño y (S/f). [Link]. Recuperado el 30 de octubre
funcionalidad de las proteínas. En conjunto, estas de 2024, de
pruebas destacan la importancia de considerar no solo [Link]
la identificación de las biomoléculas presentes en las uploads/2013/11/bioquc3admica_stryer.pdf
proteínas, sino también los factores ambientales que
pueden alterar su estructura y, por ende, su función en
procesos biológicos. Además destacar los cambios de
coloración para la determinación de resultados
positivos para cada uno de las pruebas desarrolladas
en base a estas se determinó la positividad o 7. Anexos
negatividad de las pruebas para la proteína de la
albúmina. 1. Haga la diferencia entre un L-aminoácido, un
péptido y una proteína. Cite un ejemplo de
6. Referencias Bibliográficas cada uno.
- L-aminoácido: Los L-aminoácidos son las
¿Qué son las proteínas y qué es lo que hacen?:
unidades básicas de construcción de las proteínas.
MedlinePlus Genetics. (s. f.). Existen en dos formas isoméricas (L y D), pero
solo los L-aminoácidos son utilizados en la
[Link]
mayoría de los seres vivos para formar proteínas.
mofuncionangenes/proteina/#:~:text=Las%20prote% Ejemplo: La L-alanina es un L-aminoácido común
en el cuerpo humano y uno de los 20 aminoácidos
C3%ADnas%20son%20mol%C3%A9culas%20grand
que forman proteínas.
es,tejidos%20y%20%C3%B3rganos%20del%20cuerp - Péptido: Los péptidos son cadenas cortas de
aminoácidos, generalmente entre 2 y 50
o.
aminoácidos. Actúan en diversas funciones
Proteína. (s. f.). [Link]. biológicas, como señales químicas y reguladores
en el organismo. Ejemplo: La oxitocina es un
[Link]
péptido compuesto de nueve aminoácidos y tiene
a un papel importante en el parto y la lactancia.

5
- Proteína: Las proteínas son cadenas largas de ARN viral para protegerlo y facilitar su
aminoácidos (más de 50) que adoptan una replicación. Esta estructura conjugada les permite
estructura tridimensional específica y compleja, cumplir funciones clave en el manejo,
permitiéndoles realizar diversas funciones en el empaquetamiento y regulación del material
cuerpo, como la catálisis, el transporte. Y la genético.
señalización celular. Ejemplo: La hemoglobina es
una proteína que transporta oxígeno en la sangre y 4. Consulte la relación que existe entre las
está compuesta por cuatro cadenas polipeptídicas. proteínas con el DNA, RNA.
Cada uno de estos compuestos tiene una Las proteínas tienen una relación fundamental con
complejidad y función distintas en los sistemas el ADN y el ARN, ya que participan en la
biológicos. regulación, expresión y protección del material
2. Ilustre la formación de un enlace peptídico a partir genético. Las proteínas de unión al ADN , como
de dos aminoácidos diferentes. las histonas, organizan y compactan el ADN en la
cromatina dentro del núcleo celular, facilitando la
regulación de los genes. Otras proteínas, como las
enzimas de replicación y transcripción ,
interactúan con el ADN para copiar su
información o transcribirla a ARN. A su vez, el
ARN interactúa con proteínas en varios procesos
clave, como en la síntesis de proteínas, donde los
ribosomas (complejos de ARN y proteínas)
traducen el ARN mensajero en secuencias de
aminoácidos, y en el splicing , donde proteínas y
ARN regulan. La maduración del ARN mensajero.
Figura 1 : Formación de péptido a partir de dos En conjunto, estas interacciones entre proteínas,
aminoácidos. Tomado. Guerra, J. J. M. (s/f). ADN y ARN son esenciales para el control de la
Formación del enlace peptídico. [Link]. expresión génica y el flujo de información
Recuperado el 30 de octubre de 2024, de genética en las células.
[Link]
minoacidos-y/[Link] 5. Dibuje las distintas estructuras de las proteínas.
ml
3. ¿Es la nucleoproteína una proteína
conjugada? ¿Por Qué? Consulte la estructura.

La nucleoproteína es una proteína conjugada

porque está compuesta de una proteína unida a un
grupo prostético no proteico, que en este caso es
un ácido nucleico (ADN o ARN). En las
Figura 2. Estructuras de las proteínas.
nucleoproteínas, el ácido nucleico se enlaza con la
proteína mediante interacciones específicas,
formando un complejo funcional. La estructura de
las nucleoproteínas suele consistir en proteínas
asociadas con el material genético en empaques
específicos; por ejemplo, en las histonas , las
proteínas se combinan con el ADN para formar los
nucleosomas en la cromatina, mientras que en los
virus (como el virus de la gripe), las
nucleoproteínas se asocian estrechamente con el
6
 Figura 3. Fotografía de los resultados obtenidos en el
laboratorio.

Figura 4. Fotografía solución de clara de huevo con agua

destilada

Figura 5. Calentamiento de las pruebas a baño María.