INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL
1. Revisión de conceptos:
•Técnica: Medio utilizado que proporciona información sobre el analito.
• Método: Conjunto de técnicas y operaciones precisas para el análisis
de la muestra.
• Muestra: Parte representativa del material objeto del análisis.
• Analito: Componente a determinar o identificar.
• Matriz: La combinación de todos los componentes de la muestra
excepto el analito.
• Interferencia: Error que se produce en la determinación del analito
debido a la presencia de otros componentes en la muestra
• Determinación: Medida de la concentración de uno o varios
componentes de una muestra.
• Identificación: Reconocimiento de los tipos de especies, compuestos o
elementos presentes en la muestra a analizar.
• Selectividad: Grado de ausencia de interferencias.
• Especificidad: Capacidad de responder a un único analito.
• Sensibilidad: Grado de respuesta a cambios en la concentración.
• Límite de detección: Mínima cantidad del analito que genera una
señal significativamente distinta de la que genera un blanco.
• Componente mayoritario: Analito cuya concentración es mayor o igual
al 1% en peso de la muestra.
• Componente minoritario: Analito cuya concentración está entre el
0,01% y el 1% en peso de muestra.
• Componente traza: Analito cuya concentración es inferior al 0,01%
en peso de muestra.
2. Tipos de análisis
“¿Qué es esto? ¿Qué componentes contiene esta muestra?”
IDENTIFICACIÓN o CARACTERIZACIÓN
Simple reconocimiento de los tipos de especies o
elementos presentes en una muestra
ANÁLISIS CUALITATIVO
“¿Cuánto hay de cada componente en la muestra?”
DETERMINACIÓN
Medida Cuantitativa de un componente en una muestra
ANÁLISIS CUANTITATIVO
• Cuando se hace un análisis cualitativo éste se efectúa sobre toda la
muestra disponible o bien sobre una porción aleatoria de la misma.
• Si el análisis es cuantitativo, es necesario conocer exactamente la
cantidad inicial de muestra. Si es sólida, se pesa exactamente una
cantidad, se disuelve, hasta un volumen conocido y de él se toman
partes alícuotas para las determinaciones. Si la muestra es líquida es
necesario tener un volumen de referencia.
3. Clasificación de métodos analíticos
Los métodos analíticos se pueden dividir en principalmente en métodos
químicos o clásicos y métodos instrumentales.
• Los métodos químicos están basados en interacciones materia–materia,
(reacciones químicas). Estos métodos fueron durante un gran
periodo de tiempo esencialmente empíricos, implicando, en la mayoría de
los casos, una gran destreza experimental. Actualmente, se utilizan
conceptos, fenómenos y propiedades que han contribuido a aumentar y
consolidar la base sobre la que se asientan los antiguos métodos
empíricos, así como a desarrollar otros nuevos.
• Los métodos instrumentales, basados en interacciones materia-energía,
que emplean algún aparato distinto de la balanza y la bureta para realizar
la medida y para los cuales esencial el concurso de una reacción química.
Un método analítico se considera físico cuando no incluye reacción química
alguna y la operación de medida no modifica la composición química del
sistema. Sin embargo, en muchas ocasiones, simultáneamente con la
medida de la propiedad física elegida, es necesario emplear reacciones
químicas. Por ello, a veces, se utiliza el término de métodos físico
químicos de análisis.
4. Comparación entre métodos químicos e instrumentales.
• Precisión
Para describir la precisión se utiliza fundamentalmente la desviación
estándar, si bien también se usa la desviación estándar relativa de la
media, el coeficiente de variación y la varianza.
Los métodos químicos suelen ser más precisos en términos absolutos
que los métodos instrumentales.
• Exactitud
Se puede determinar por comparación con muestras patrón y por
comparación con un método patrón.
Los métodos químicos son más exactos para altas concentraciones,
aumentando el error de estos métodos a medida que la concentración
disminuye, condiciones en las que los métodos instrumentales son más
exactos.
• Límite de detección y sensibilidad
El límite de detección en los métodos instrumentales suele ser mucho
menor que en los químicos.
Los métodos instrumentales son apropiados para determinar analitos
minoritarios y trazas y los químicos para determinar minoritarios y
mayoritarios.
• Selectividad
La selectividad de los métodos instrumentales es muy diversa,
existiendo algunos muy selectivos, en especial, algunos métodos ópticos.
• Rapidez
Los métodos instrumentales son más rápidos para determinaciones en
serie o de rutina. Requieren un tiempo de puesta a punto, pero luego
suelen ser rápidos. Además, suelen ser fácilmente automatizables, ya
que muchos dan respuestas rápidas y continuas.
• Coste
Los métodos químicos son más económicos que los instrumentales en
cuanto, al material, pero en relación con el tiempo necesario para
llevarlos a la práctica y en relación con el personal, son más caros. Esto
hace que los métodos instrumentales puedan ser rentables para
trabajos en serie.
5. Clasificación de los métodos instrumentales.
Los métodos instrumentales se pueden clasificar principalmente en tres
categorías:
• Métodos espectroscópicos, en los que se estudia el efecto de la
radiación electromagnética en la materia objeto de estudio
• Métodos cromatográficos, que son métodos de separación,
normalmente con un sistema de detección que permite identificar y
cuantificar las diferentes fracciones separadas.
• Métodos electroanalíticos, en los que se utilizan las propiedades
eléctricas de los materiales y la interacción de la electricidad con la
materia para estudiarla.
Además, se podría añadir un cuarto grupo que incluye aquellas técnicas
que no encajan exactamente en estas tres categorías y que
habitualmente miden propiedades físicas ligadas a la concentración: el
análisis térmico, propiedades ópticas, radioquímica...
6. Componentes de un instrumento analítico.
Un instrumento analítico es un dispositivo que convierte una señal, que no
suele ser detectable directamente por el ser humano, en una forma que sí
lo es. Un instrumento analítico típico consta de cuatro componentes.
• El generador de señales produce una señal directamente relacionada
con la presencia (y también, frecuentemente con la concentración) del
analito.
• El detector, también llamado transductor de entrada es un dispositivo
que convierte un tipo de señal en otro.
• La señal procedente del detector, se modifica en el procesador de
señales, adaptándose al dispositivo de lectura. En muchas ocasiones se
produce simplemente una amplificación, si bien, a menudo,
simultáneamente las señales se filtran para reducir el ruido de fondo.
• Finalmente, el dispositivo de lectura transforma la señal procesada
en otra señal inteligible para el observador.
7. Calibración de los métodos instrumentales de análisis
• Los métodos químicos cuantitativos tienen carácter absoluto. En ellos,
la propiedad medida es función directa de la concentración de acuerdo
con una relación de proporcionalidad, P=KC, donde P representa la
magnitud de la propiedad medida, y C es la concentración o la cantidad.
Además, la constante, K, es única, y tiene un valor perfectamente
definido, deducible de las leyes estequiométricas. En estos métodos,
basta una simple medida para efectuar la determinación.
• Los métodos instrumentales tienen carácter relativo. También se basan
en la medida de una propiedad, P, (normalmente física), que es función de
la concentración, P=KC. Sin embargo, la constante de proporcionalidad no
es única, al depender de las condiciones experimentales. Por ello, la
concentración de la muestra se determina preferentemente por
comparación con muestras patrón.
• En principio, puede utilizarse un solo patrón, llevando a cabo una medida,
P1, sobre una muestra de concentración conocida, C1, con lo que se obtiene
el valor de K. A continuación, manteniendo constantes las condiciones
experimentales se realiza la medida de la propiedad, P, sobre la muestra
Con lo que tenemos la siguiente expresión:
P/P1= C/C1
• C se deduce por comparación con C1, la cual se conoce exactamente, o se
puede determinar con un método químico absoluto. De aquí, la importancia
de estos métodos en la puesta a punto de los métodos instrumentales.
•Sin embargo, operando con una sola muestra patrón se tiene el
inconveniente de que el resultado estará afectado del error
indeterminado propio de la medida de ese patrón. Por ello, resulta más
conveniente comparar respecto a varias muestras patrón incluidas en un
calibrado. Estos calibrados minimizan el efecto de los errores
indeterminados propios de la medida con un patrón único.
8. Tipos de calibrado
• Existen tres métodos de calibrado por comparación con patrones: las
curvas de calibrado mediante series de patrones, el método de adiciones
estándar y el método del patrón interno. De ellos el más utilizado es el
calibrado por series de patrones.
• Las ventajas de utilizar este tipo de calibrados son: los resultados
obtenidos a partir de varios patrones son más fiables desde el punto de
vista estadístico y si la curva es una línea recta el valor de K será una
constante para el intervalo de concentraciones utilizado. Si una parte de
la curva es lineal esta porción se puede utilizar para determinar la
concentración desconocida. A pesar de estas ventajas, aún es posible
incurrir en error experimental con estos procedimientos (al preparar las
disoluciones y al registrar las señales de equipo, por ejemplo).
• En el calibrado mediante series de patrones se mide la propiedad
analítica de interés, P1, P2, P3, etc. en una serie de muestras de
composición conocida, C1, C2, C3, etc. y preparadas todas ellas en las
mismas condiciones.
• El calibrado se usa para determinar la cantidad o concentración en una
muestra desconocida midiendo la magnitud de P en idénticas condiciones
que los patrones. C se calcula por interpolación.
• La curva de calibrado se representa siempre con la respuesta del
instrumento en el eje de ordenadas y las concentraciones en el de abscisas. –C1
• El método de adiciones estándar consiste en añadir sobre una serie de
alícuotas, cantidades conocidas del componente a determinar, y medir la
magnitud de la propiedad analítica tras las diferentes adiciones.
• Normalmente, se toman volúmenes iguales de disolución problema, y se
añaden cantidades conocidas y diferentes de analito a todas las muestras,
excepto a una, diluyendo, finalmente, todas al mismo volumen.
• La señal medida se representa en el eje y, mientras que en el eje x, la escala se
expresa en términos de las cantidades de analito añadidas, ya sea como masa o
como concentración.
• Este método resulta especialmente útil para los casos en los que la
composición variable de las muestras desconocidas hace difícil la
preparación de patrones con la misma matriz de las muestras.
• En términos estadísticos, el principal inconveniente es que se trata de un
método de extrapolación. De hecho, el resultado se obtiene en una zona de
la gráfica donde no hay puntos experimentales, por lo que cualquier
variación en la pendiente de la recta por errores indeterminados se traduce
en una variación apreciable en el resultado. En este sentido, influye el
tamaño de la adición, pues hay que procurar que el tramo incierto no sea
demasiado grande. Por otra parte, el método de las adiciones estándar
puede ser difícil de automatizar, y suele necesitar cantidades de muestra
mayores que cuando se utilizan otros métodos.
• En el método del patrón interno, una sustancia pura, ausente en la
muestra, se añade en concentración fija y conocida a los patrones y a la
muestra. Se miden las respuestas del analito y del patrón interno, se
calculan los cocientes entre ambas respuestas y se representan frente a las
concentraciones de los patrones.
• La principal ventaja de este método es que con él se eliminan los problemas de
fluctuación instrumental, ya que tanto el analito como el patrón interno
experimentan las mismas variaciones.
• Para que una sustancia sea adecuada para usarla como patrón interno,
debe cumplir ciertos requisitos, basados en una analogía de comportamiento
con el elemento a determinar. Además, la concentración del patrón interno
deberá ser del mismo orden de magnitud que la del analito, con objeto de
minimizar el error al calcular los cocientes.
9. Patrones, blancos y controles
• Las disoluciones de patrones utilizadas para los diferentes tipos de
calibrado se pueden preparar de diversas maneras. La más común es
preparar una disolución madre en el laboratorio o bien comprar una
disolución patrón comercial. Normalmente es necesario que los testigos
preparados a partir de esta disolución madre contengan elementos que
permitan simular la matriz del analito en la muestra a analizar.
• Además de las soluciones patrón es necesario preparar otras disoluciones
para realizar el análisis instrumental.
• Los blancos son disoluciones que contienen todas las sustancias presentes
en los testigos excepto el analito. El blanco sirve para ajustar,
normalmente, la lectura del equipo cero.
• En ocasiones es necesario utilizar una muestra en blanco. Se trata de un
blanco sometido a todos los pasos analíticos previos a la medida a la que es
sometida la muestra a analizar.
• Un control es un testigo preparado de forma independiente con el fin de
comprobar el sistema de medida. Los resultados obtenidos se registran
habitualmente en un gráfico de control, de forma que se pueda visualizar el
historial de funcionamiento del método de medida.
10. Muestras
• La concentración obtenida a partir de la curva de calibrado raramente es
la respuesta buscada en un análisis instrumental. En la mayoría de los
procedimientos, la muestra es sometida a algún tipo de tratamiento
preanalítico antes de la medida. En algunos casos la muestra se diluye
antes de la medida. En otros casos es necesario añadir algún reactivo que
puede cambiar la concentración del analito. En otras ocasiones la muestra
es un sólido que debe ponerse en disolución o ser extraída antes de poder
realizar la medida.
• La concentración determinada a partir de la medida instrumental
corresponde a la concentración de la disolución medida en el equipo
instrumental y no necesariamente a la concentración de la muestra inicial
que se quiere caracterizar.
• Suele ser útil para realizar estos cálculos, aclarar primero qué tipo de
respuesta hay que dar y luego calcular hacia atrás, en función del tipo de
tratamiento dado a la muestra.
11. Procesado y tratamiento de los datos
• La señal instrumental de salida que obtenemos al hacer una analítica,
puede venir dada de diferentes formas: como un registro gráfico, ya sea
recogido en un ordenador o en papel, como un valor numérico o incluso
como una lectura de voltaje o intensidad eléctrica.
• Estas señales recogidas del instrumento han de relacionarse con la
concentración del analito en la muestra que es el objetivo del análisis. Para
ello es necesario realizar una serie de cálculos habitualmente sencillos.
• En muchos casos será necesario realizar una curva de calibrado con el fin
de determinar la concentración. Si trabajamos dentro del intervalo lineal
de respuesta del método, podremos utilizar la técnicas de regresión lineal
para encontrar el valor de la concentración.
• En cualquier caso, los resultados obtenidos siempre son objeto de
análisis estadístico, con el fin de evaluar la calidad del análisis en términos
de precisión y exactitud del método.
• El analista debe proporcionar alguna medida de la incertidumbre asociada
al cálculo de los resultados. Teniendo esto en cuenta, para expresar la
precisión y la exactitud:
- Los resultados rara vez se refieren a un solo análisis de una sola toma
de muestra.
- Lo habitual es que se analicen de 2 a 5 réplicas de la muestras y se
promedie el resultado final.
- La precisión se estima en términos de desviación estándar absoluta o
relativa o como intervalos de confianza o mediante análisis de la
varianza
