BBL Modifier Thayer-Martin (MTM II) Agar

 
L007392 • Rev. 12 • junio 2017
PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD (Opcionales)
I. INTRODUCCION
BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar (agar Thayer-Martin modificado) es un medio enriquecido para el aislamiento y cultivo
selectivos de las especies Neisseria.
II. REALIZACION DEL PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
1. Inocular muestras representativas con los cultivos enumerados a continuación.
a. Añadir 0,1 mL de dilución con una concentración de 30–300 UFC/0,1 mL a cada placa e inocular mediante extensión con un
esparcidor de vidrio estéril.
b. Incubar las placas a una temperatura de 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia con dióxido de carbono.
c. Incluir placas de agar Chocolate II como controles no selectivos para todos los organismos.
2. Examinar las placas después de 18–24 y 48 h para comprobar la extensión del crecimiento, el tamaño de las colonias y la selectividad.
3. Resultados previstos
Organismos de control CLSI cepas ATCC Recuperación
*Neisseria gonorrhoeae 43069 Crecimiento
*Proteus mirabilis 43071 Inhibición (parcial)
*Staphylococcus epidermidis 12228 Inhibición (parcial)
Neisseria meningitidis 13090 Crecimiento
Neisseria sicca 9913 Inhibición (parcial)
Candida albicans 60193 Inhibición (parcial)
Escherichia coli 25922 Inhibición (parcial)
Επιπλέον στελέχη που χρησιμοποιούντα
Neisseria gonorrhoeae (2 cepas) 43070 Colonias pequeñas, opacas, de color de blanco grisáceo
35201 a incoloras, elevadas, brillantes y lisas.

* Cepa de organismo recomendada para control de calidad del usuario.

NOTA: En conformidad con CLSI M22-A3, se recomienda encarecidamente que el usuario realice pruebas de control de calidad de los
medios exentos, utilizados para N. gonorrhoeae.
III. CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL
1. Examinar las placas como se describe en la sección “Deterioro del producto”.
2. Examinar visualmente las placas representativas para asegurarse de que los defectos físicos existentes no interfieran con el uso.
3. Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para verificar el cumplimiento de la especificación de 7,2 ± 0,2.
4. Tomar en cuenta la firmeza de las placas durante el procedimiento de inoculación.
5. Incubar las placas representativas sin inocular a 35 ± 2 °C durante 72 h y examinar para detectar contaminación microbiana.

INFORMACION DEL PRODUCTO

IV. USO PREVISTO
BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar se utiliza para el aislamiento de la Neisseria patógena a partir de muestras con flora
mixta de bacterias y hongos.
V. RESUMEN Y EXPLICACION
Carpenter y Morton describieron un medio mejorado para el aislamiento de los gonococos en 24 h1. La eficacia de este medio, agar GC
suplementado con hemoglobina y concentrado de levadura, se demostró en un estudio de doce medios utilizados en aquel momento
para el aislamiento de este organismo2. El medio se mejoró reemplazando el concentrado de levadura con BD BBL IsoVitaleX
Enrichment, un suplemento con definición química y desarrollado específicamente para favorecer el crecimiento de gonococos, aunque
tiene una amplia aplicación para otros microorganismos, por ejemplo, Haemophilus3-5.
El agar selectivo Thayer-Martin fue desarrollado para el aislamiento primario de N. gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de muestras
con flora mixta extraídas de la garganta, vagina, recto y uretra4,6,7. Compuesto por agar Chocolate II con vancomicina, colistina
y nistatina, está formulado para minimizar el crecimiento de los contaminantes de manera que no superen al de los gonococos y
meningococos, para suprimir el crecimiento de las especies Neisseria saprofitas y para favorecer el crecimiento de la Neisseria patógena.
Martin et al modificaron el agar selectivo Thayer-Martin añadiendo trimetoprima para producir el agar BD BBL Thayer-Martin
modificado8. Se informó un número significativamente mayor de aislados gonocócicos positivos a partir de muestras clínicas, en
comparación con el agar selectivo Thayer-Martin, debido a la inhibición de la proliferación de las especies Proteus8-10. Por su mejor
rendimiento, se lo recomienda en lugar de las fórmulas anteriores para el aislamiento de N. gonorrhoeae11,12. La fórmula original
contenía 20 g/L de agar y 1,5 g/L de dextrosa (además de la dextrosa en el BD BBL IsoVitaleX Enrichment). La concentración de agar
se modificó a aproximadamente 12 g/L; el 1,5 g/L de dextrosa adicional se eliminó, dado que se determinó que el menor contenido
de dextrosa mejoraba el crecimiento de N. gonorrhoeae. BD BBL MTM II fue desarrollado mediante la cuidadosa selección y análisis
previo de las materias primas para mejorar el crecimiento de los gonococos y la inhibición de las especies Candida.

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VI. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar se basa en el agar Chocolate II, que contiene una base de agar GC mejorada,
hemoglobina bovina e BD BBL IsoVitaleX Enrichment. La base GC contiene nutrientes nitrogenados en forma de caseína y peptonas
de carne, tampón de fosfato para mantener el pH y almidón de maíz, que neutraliza los ácidos grasos tóxicos que pueden estar
presentes en el agar. La hemoglobina proporciona el factor X (hemina) para las especies Haemophilus. BD BBL IsoVitaleX Enrichment
es un suplemento definido que proporciona el factor V (nicotinamida adenina dinucleótido, NAD) para las especies Haemophilus y
vitaminas, aminoácidos, coenzimas, dextrosa, iones férricos y otros factores que favorecen el crecimiento de la Neisseria patógena.
El medio selectivo contiene los agentes antimicrobianos, vancomicina, colistina, nistatina (inhibidor V-C-N) y trimetoprima para
suprimir la flora normal. La vancomicina es activa principalmente contra las bacterias gram positivas. La colistina inhibe las bacterias
gram negativos, incluida las especies Pseudomonas, pero no es activa contra las especies Proteus. La nistatina inhibe los hongos.
La trimetoprima inhibe las especies Proteus.
VII. REACTIVOS
BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína............................................7,5 g Agar ...................................................................................12,0 g
Peptona de carne seleccionada.............................................7,5 g Hemoglobina .....................................................................10,0 g
Almidón de maíz.....................................................................1,0 g BD BBL IsoVitaleX Enrichment .......................................10,0 mL
Fosfato dipotásico .................................................................4,0 g Inhibidor V-C-N ..................................................................10,0 mL
Fosfato monopotásico ...........................................................1,0 g Lactato de trimetopima ........................................................5,0 mg
Cloruro sódico .......................................................................5,0 g
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

BD BBL IsoVitaleX Enrichment

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Vitamina B12………………………………………………….....0,01 g Pirofosfato de tiamina...........................................................0,1 g
L-glutamina...........................................................................10,0 g Nitrato férrico......................................................................0,02 g
Adenina..................................................................................1,0 g Clorhidrato de tiamina......................................................0,003 g
Clorhidrato de guanina.........................................................0,03 g Clorhidrato de L-cisteína....................................................25,9 g
Acido p-aminobenzoico......................................................0,013 g L-cistina................................................................................1,1 g
Dinucleótido de nicotinamida adenina..................................0,25 g Dextrosa...........................................................................100,0 g
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

Inhibidor V-C-N
Fórmula aproximada* por milímetro de solución restaurada
Vancomicina................................................................... 300 µg
Colistina.......................................................................... 750 µg
Nistatina............................................................................. 1.250 unidades
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Si se observa humedad en exceso, invertir la parte inferior sobre una tapa desplazada y permitir que se seque al aire para impedir que
se forme una barrera estanca entre la parte superior y la inferior de la placa durante la incubación.
En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus de la inmunodeficiencia
humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otros líquidos corporales deben seguirse las
“Precauciones estándar” 17-20 y las directrices del centro. Después de su uso, las placas preparadas, los recipientes de muestra y otros
materiales contaminados deben esterilizarse en autoclave antes de ser desechados.
Instrucciones para el almacenamiento
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a 2–8 °C. No congelar ni sobrecalentar. No abrir hasta que vayan a utilizarse.
Reducir al mínimo la exposición a la luz. Las placas preparadas almacenadas en su envase original a una temperatura de 2–8 °C hasta
momentos antes de su utilización pueden inocularse hasta su fecha de caducidad e incubarse durante los períodos de incubación
recomendados. Permitir que el medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación.
Deterioro del producto
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación o cualquier otro signo de deterioro.
VIII. RECOGIDA Y MANIPULACION DE LAS MUESTRAS
Se han diseñado diversos recipientes y torundas para recolectar las muestras. Las muestras deben obtenerse antes de administrar
el tratamiento antimicrobiano. Deben adoptarse las medidas necesarias para un transporte inmediato al laboratorio. Se han diseñado
varios medios de conservación o sistemas de transporte, tales como los productos de recogida y transporte de muestras BBL, para
prolongar la supervivencia de los microorganismos cuando se prevé una demora significativa entre la recogida y el cultivo definitivo.
Consultar los textos correspondientes para conocer los detalles relativos a los procedimientos de recogida y manipulación
de muestras21,22.

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IX. PROCEDIMIENTO
Material suministrado
BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar
Materiales necesarios pero no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para el control de calidad y el equipo de laboratorio que se requiera.
Procedimiento de análisis
La superficie del agar debe estar lisa y húmeda, pero sin humedad en exceso.
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. Asimismo, si el material se ha de cultivar
directamente de una torunda, realizar lo especificado a continuación23:
1. Hacer girar la torunda directamente en el medio haciendo una “Z” grande para suministrar exposición adecuada de la torunda al
medio para la transferencia de organismos.
2. Realizar una extensión cruzada en la “Z” dibujada mediante un asa con guía estéril, preferentemente en la clínica. Si no se ha hecho
con anterioridad, dicho proceso debe llevarse a cabo en el laboratorio.
3. Colocar el cultivo tan pronto como sea posible en atmósfera aerobia enriquecida con dióxido de carbono.
4. Incubar a 35 ± 2 °C y examinar la incubación al día siguiente y otra vez después de aproximadamente 48 h.
5. El subcultivo para identificación de N. gonorrhoeae debe realizarse dentro de las
18–24 h. Si se envía después de la incubación, las colonias deben subcultivarse antes de realizar las pruebas de identificación
bioquímica con el fin de lograr una viabilidad adecuada.
Control de calidad del usuario
Cada lote de medios se ha probado con los microorganismos de control de calidad adecuados mediante una prueba que cumple las
especificaciones del producto y los criterios aplicables del CLSI. Como siempre, las pruebas de control de calidad se deben llevar a
cabo conforme a la normativa local, estatal, federal o nacional aplicable, a los requisitos de los organismos de acreditación y/o a los
procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio.
X. RESULTADOS
La morfología característica de las colonias en BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar es la siguiente:
Neisseria gonorrhoeae....................... Pequeñas, de color blanco grisáceo a incoloro, mucoides
Neisseria meningitidis........................ Medianas a grandes, gris azulado, mucoides
Se pueden seleccionar colonias para tinción de Gram, subcultivo u otro procedimiento de diagnóstico.
XI. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Es posible que medios selectivos para la Neisseria patógena inhiban otras bacterias patógenas; por ejemplo, Haemophilus.
Se ha reseñado la existencia de cepas de N. gonorrhoeae inhibidas por los componentes del inhibidor V-C-N y lactato de
trimetoprima25, 26.
Algunas cepas de la especie Capnocytophaga pueden crecer en este medio selectivo cuando se inocula con muestras orofaríngeas27.
XII. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
En un estudio clínico realizado en una clínica de enfermedades de transmisión sexual, se comparó BD BBL Modified Thayer Martin
Agar con un nuevo medio selectivo BD BBL. Se recuperó Neisseria gonorrhoeae en uno o ambos medios de 175 (29%) de las
607 muestras genitales, 3 (3%) de 88 muestras orales y 6 (29%) de 21 muestras rectales. Un total de 166 cultivos dieron resultado
positivo en MTM, con una sensibilidad general de 90% (166/184)27.
XIII. DISPONIBILIDAD
Nº de cat. Descripción
221567 BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar, pqt. de 20 placas
221568 BD BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Agar, caja de 100 placas

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XIV. REFERENCIAS
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