UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

“Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra Independencia, y de la
conmemoración de las heroicas batallas de Junín y Ayacucho”

ELECTROFORESIS DE GELES DE AGAROSA - ANÁLISIS

DE ADN GENÓMICO DE BACTERIAS

PRÁCTICA DE LABORATORIO

DOCENTE:
Blgo. SOTO GONZALES, HEBERT HERNAN

ESTUDIANTES:
CATACORA FLORES, FIORELLA LESLIE - 2021205085
CHURASACARI CCAMA, YISSEL ALEYDA - 2021205116
DÍAZ CABRERA, GERALDINE ADRIANA - 2021205072

CURSO:
BIOTECNOLOGÍA

CICLO:
VII

ILO – MOQUEGUA - PERÚ

2024
 1. INTRODUCCIÓN
La electroforesis en gel de agarosa es una técnica fundamental en biología molecular que
permite la separación y análisis de fragmentos de ADN, ARN y proteínas. Esta técnica se basa
en el principio de que las moléculas cargadas, como el ADN, migran a través de un gel en
respuesta a un campo eléctrico, permitiendo la resolución de fragmentos según su tamaño. La
agarosa, un polisacárido extraído de algas marinas, es el material más comúnmente utilizado
para la preparación de geles debido a su capacidad para formar redes porosas que permiten el
paso selectivo de diferentes tamaños de moléculas. (Sambrook & Russell, 2001)

El análisis de ADN genómico de bacterias es crucial para diversas aplicaciones en

microbiología, biotecnología y genética. Esta técnica permite la identificación de especies
bacterianas, el estudio de sus relaciones filogenéticas y la caracterización de sus genes. Al aislar
y amplificar fragmentos específicos del ADN genómico, se pueden obtener perfiles genéticos
que revelan información sobre la diversidad genética, la resistencia a antibióticos y la presencia
de genes de virulencia. (Brock et al., 2014).

En este contexto, la electroforesis en gel de agarosa se convierte en una herramienta poderosa

para visualizar y cuantificar el ADN amplificado mediante técnicas como la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR). La interpretación de los patrones de bandas en el gel proporciona
información valiosa sobre la integridad y el tamaño de los fragmentos de ADN, lo que es
esencial para la caracterización de los microorganismos en estudio.

Este trabajo se centrará en la aplicación de la electroforesis en gel de agarosa para el análisis

del ADN genómico de diferentes especies de bacterias, destacando su importancia en la
identificación bacteriana y la evaluación de la variabilidad genética.

2. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
● Utilizar la técnica de electroforesis de geles agarosa
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
● Observar la electroforesis de ADN en el gel de agarosa.
● Observar mediante el foto documentador de geles la muestra de gel de
electroforesis.

3. METODOLOGÍA
3.1. Electroforesis en gel de agarosa
Es una técnica para separar las moléculas de ADN, ARN y proteínas de acuerdo con su
tamaño y carga mediante una corriente eléctrica Cuando un gel se tiñe con un pigmento
que se une al ADN, los fragmentos de ADN pueden verse como bandas, las cuales

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 representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño. Los fragmentos tienen
carga negativa, por lo que se mueven hacia el electrodo positivo. Puesto que todos los
fragmentos de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa, los fragmentos
pequeños atraviesan el gel más rápido que los grandes.

Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa. Debido a
esto, la electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN únicamente por su tamaño.
La electroforesis nos permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN están presentes
en una muestra y cuán grandes son unos con respecto a otros. También podemos
determinar el tamaño absoluto de un fragmento de ADN examinándose junto a una
"escala" estándar de fragmentos de tamaño conocido.

3.2. Aplicaciones
❖ Investigación Genética y Molecular:
La electroforesis se utiliza para identificar mutaciones genéticas, analizar
patrones de expresión génica, y estudiar la estructura y función de las proteínas.
❖ Diagnóstico Clínico: En el ámbito clínico, la electroforesis se emplea para
diagnosticar enfermedades genéticas, infecciosas y algunas condiciones
crónicas, como trastornos sanguíneos.
❖ Medicina Forense: La electroforesis de ADN es una herramienta clave en la
medicina forense para la identificación de individuos en investigaciones
criminales y análisis de paternidad.
❖ Investigación Ambiental y de Alimentos: Se aplica en la detección de
contaminantes en muestras ambientales y en la identificación de organismos
genéticamente modificados (OGM) en alimentos.

4. MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES
- Agarosa
- Guantes de nitrilo
- Agua destilada
- Probeta de plástico de 1000 ml
- Tris-Acetate-EDTA (TAE)
- Botella de vidrio
- Muestras de ADN
- Micropipeta
- Cinta PARAFILM
- Puntas para micropipetas 10 μL
- Soporte
- Colorante glicerol

EQUIPOS
- Balanza

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 - Microcentrífuga MiniSpin
- Microondas
- Fuente de Alimentación de Electroforesis de Alta Corriente BIO-RAD
- Fotodocumentador de geles

5. PROCEDIMIENTO
Paso 1: Pesado de Agarosa
Se utilizó la balanza de precisión Solis para medir el peso de Agarosa. Para esto, se empezó
tarando el matraz de plástico en donde iría el producto, luego se pesó 2 g de Agarosa.

Fig. 1. Pesado de Agarosa en la balanza de precisión

Paso 2. Medición de tampón TAE en probeta.

A continuación, en una probeta de plástico de 1000 mL se midió 1 L de tampón formada por
Tris, acetato y EDTA, solución 50X

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Fig 2. Tampón formado por Tris, acetato y EDTA, solución 50X

Fig 3. Medición de 1 L del tampón TAE en el matraz de 1000 mL

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Paso 3. Juntar Agarosa + tampón TAE 50x para formar solución.
Se pasa el reactivo TAE 50x al matraz donde se encuentran los 2 g de Agarosa para formar una
solución.

Paso. 4. Rotulación de material.

Fig. Matraz rotulado

Paso 5. Calentado de la solución

Se calentó la solución en un microondas durante 12 minutos.

Fig. Calentado de solución en microondas

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Paso 6. Enfriamiento de la solución.
Para lograr enfriar la solución se usó el método baño María, y así poder verter la solución a la
cámara de electroforesis
Nota: No se vierte la solución caliente porque puede dañar el recipiente acrílico de la cámara
de electroforesis.

Fig. Enfriamiento de gel de agarosa en baño maría

Paso 7. Armado de la cámara de Electroforesis.

Una vez teniendo el equipo “cámara de electroforesis”, se procede a insertar los 02
moldeadores de acero en la cámara con la finalidad de establecer los límites donde se sembrará
la muestra.
Siguiente a ello, se coloca el peine de 1 mm en la cámara, el cuál forma los pozos en donde se
sembrará la muestra.

Fig. Armado de la cámara de electroforesis

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Paso 8. Vertido de solución a la cámara de electroforesis.
Se procede a verter la solución a la cámara de electroforesis y se retira el peine.

Fig. Vertimiento de solución a la cámara de electroforesis.

Fig. Gel de acarosa vertido en la cámara de electroforesis.

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Paso 9. Vertido de tampón TAE 1x a la cámara de electroforesis.
Como siguiente paso, se hace un llenado a la cámara de electroforesis con el reactivo tampón
TAE, llenando toda la cámara hasta el tope. Esto, con la finalidad de que no se pierdan
propiedades ni se estropee la estructura de la muestra.
Luego, se deja reposar a temperatura ambiente por un tiempo para que el estado de materia
cambie de líquido a sólido y se pueda formar el gel.

Fig. Vertido del reactivo Tampón TEA a la cámara de electroforesis

Paso 10. Conclusión de la primera etapa

Una vez terminada esta primera etapa, se cierra la cámara de electroforesis y se colocan los
electrodos (negativo y positivo) en sus lugares correspondientes.
Finalmente, se conecta el cable de poder a una fuente de alimentación para que la cámara
comience a hacer su trabajo.

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 Fig. Tapado de la cámara de electroforesis.

Fig. Conexión del cable de poder a una fuente de alimentación

Paso 11. Sembrado de muestra.

Para esta segunda etapa, se utilizarán puntas de pipeta de 20 uL y pipetas automáticas de 2-20
uL para el sembrado de escalera de ADN ( tinte de carga azul/naranja, 6X), y escalera LM111
de ADN (tinte ácido nucléico de la electroforesis) en las celdas del gel de agarosa.

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 Fig. Escalera de ADN, tinte de carga azul/naranja, 6X

Paso 12. Homogeneización de tintes

Antes de adicionar los tintes en el gel de agarosa, se debe poner la muestra en la mini centrífuga
Spin para homogeneizar los tintes.

Fig. Homogeneización de tintes

Paso 13. Adición de tintes en el gel de agarosa.

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 Fig. Adición de tintes en el gel de agarosa.

Paso 14. Final.

Con la fuente de poder instalada, se colocó el circuito de la electroforesis a 120V en un tiempo
estimado de 60 minutos. Después de que la electroforesis terminó, se sacó el gel de agarosa
cuidadosamente y se colocó en el fotodocumentador de geles.

6. RESULTADOS

Se prendió el fotodocumentador de geles y finalmente se observó el resultado de la

electroforesis de ADN en gel de agarosa.

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Fig. Muestra del gel de electroforesis en el fotodocumentador de geles

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 Fig. Muestra del gel de electroforesis en el fotodocumentador de geles (zoom aplicado)

Como se observa en el resultado final, las bandas aparecieron extendidas. Esto podría deberse
a unacceptable posible degradación del ADN, para lo cual se recomienda evitar la
contaminación con nucleasas. Otra causa posible es la desnaturalización del ADN, que se puede
prevenir evitando calentar las muestras antes de realizar la electroforesis.

7. CONCLUSIONES

Con ayuda del profesor logramos realizar la técnica de electroforesis de donde pesamos el agar
necesario para los grupos 4,5 y 6.

Observamos la electroforesis de ADN del vibrio en el gel de agarosa.

Con el fotodocumentador de geles identificamos la muestra de gel de electroforesis.

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BIBLIOGRAFÍA

Brock, T. D., Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J. (2014). Biology of Microorganisms
(14th ed.). Pearson.

Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed.).
Cold Spring Harbor Laboratory Press.

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