REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
DAVID JOSE ROCHA GAMEZ
(DJROCHA@[Link])
FABIAN ANDRES CAÑIZARES LEIVA
(FCANIZARES@[Link])
DIOMEDES FUENTES SEPULVEDA
(DAFUENTES@[Link])
DOCENTE:
LUZ KARINE PEINADO MEJIA
LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION
AMBIENTAL
UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR
VALLEDUPAR-CESAR
2022
OBJETIVOS. fisiológicas como patológicas. Es
por ello que una de las formas
• Conocer el fundamento de la recientes para detectar y cuantificar
Reacción en Cadena de la a los ácidos nucleicos es a través
Polimerasa de la PCR en tiempo real, la cual es
• Identificar la técnica de una modalidad de la PCR
Reacción en Cadena de la considerada como una técnica
Polimerasa (PCR) como cuantitativa.
proceso molecular
• Realizar la técnica de Cada ciclo de la reacción en cadena
Reacción en Cadena de la se divide en 3 partes: La primera
Polimerasa (PCR) con etapa es la desnaturalización, en
amebas. donde el ADN molde doble cadena
se desnaturaliza y sus hebras se
INTRODUCCIÓN. separan. Esto se logra aumentando
La reacción en cadena de la la temperatura de la reacción, en
polimerasa (PCR) es una técnica de general a 94°C para asegurar que
laboratorio que permite la todas las moléculas se encuentran
producción (amplificación) rápida de en simple hebra y permitir que
millones a miles de millones de un ocurra el segundo paso.
segmento específico de ADN, que La siguiente etapa es el Anillado o
así se podrá estudiar en mayor Annealing, consiste en que la
detalle. La PCR implica el uso de temperatura de la reacción
fragmentos cortos de ADN sintético, disminuye para permitir que los
denominados cebadores, para oligonucleótidos cebadores que
seleccionar un segmento del delimitan el fragmento que se desea
genoma que se amplificará, y luego amplificar se unan a su región
múltiples sesiones de síntesis de blanco. La temperatura de unión de
ADN para amplificar ese segmento. los cebadores dependerá de la
composición de bases de los
PCR, o la reacción en cadena de la mismos. Finalmente, la tercera
polimerasa, es una reacción etapa denominada Extensión, la
química que los biólogos temperatura de la reacción es
moleculares utilizan para amplificar aquella que permite la actividad
(crear copias) fragmentos de ADN. óptima de la enzima polimerasa
Esta reacción permite que unos presente en la reacción.
pocos fragmentos de ADN se
repliquen en millones o miles de
millones de copias. La amplificación
del ADN nos permite estudiar la
molécula del ADN en detalle en el
laboratorio.
El progreso de esta técnica ha sido
muy notable y ha ido en paralelo
con los nuevos retos para estudiar y
comprender mejor el rol de los
genes, tanto en condiciones
Las etapas se muestran en la 5X My Taq Reaction Buffer, 4
siguiente imagen: micro litros por muestra.
Molde de ADN, 1 micro litro
por muestra.
Primers 20 uM, 1 micro litro
por muestra.
My Taq DNA polymerase, 1
micro litro por muestra.
Agua miliq, 9 micro litro por
muestra.
Descripción del proceso de PCR en
los primeros 3 ciclos de reacción.
METODOLOGIA:
MATERIALES Y REACTIVOS.
Para la realización de la Reacción
en Cadena de la Polimerasa (PCR)
de ADN de ameba se emplearon los
siguientes materiales:
Puntas Amarillas
Puntas Blancas pequeñas
Gradilla para tubos de PCR
Micro pipetas de 5-50 micro
litros, de 0.2 a 10 micro litros
y de 10-100 micro litros
Sharpie.
Termociclador.
Cabina de Flujo laminar.
PROCEDIMIENTO.
RESULTADOS POSIBLES. que implicaron una
recopilación de aquellos
Para poder confirmar que la conceptos tan importantes
práctica fue realizada con como lo son el ADN, procesos
éxito debe ser vista en la de replicación, extremos 5’ y
técnica denominada 3’, entre otros.
electroforesis, en la PCR, no
se logra ver como tales
DISCUSIÓN DE LOS
sustancias intermedias
durante el procedimiento, RESULTADOS
únicamente al agregar la
enzima Taq polymerase a los Este procedimiento realizado se
8 tubos en el paso número 6 resume como utilidad en que los
se admira una leve turbidez, desarrollos científicos y tecnológicos
aun así, los resultados solo se de la biología molecular, la genómica
pueden comprobar mediante y actualmente el influjo de otros
la misma técnica de estudios, han permeado
electroforesis. constantemente la práctica médica;
poco a poco son muchas las
Cuando en el paso número 6 aplicaciones que dan resultados
a los 8 tubos se agregó la tangibles desde el mejoramiento en el
enzima Taq polymerasa, se diagnóstico de las enfermedades, la
notó una pequeña turbidez en identificación de factores de riesgo
el tubo 1, es decir, en el tubo genético, la generación y la
donde la enzima se administración de medicamentos
encontraba sola. basadas en información molecular, el
Este resultado se podría uso de la terapia génica para el
explicar porque la enzima Taq tratamiento de algunas
polymerasa necesita también enfermedades, entre otros
de una sustancia acercamientos que han dado un salto
Intermediaria llamada dATP, de inmensas proporciones y han
al estar sola, no puede permitido el ingreso de la biología
producirla y aunque no se molecular a la medicina y con ella a la
observó en ese momento, a vida cotidiana. (Campuzano-Maya &
los 20 minutos de incubación Castro-Álvarez, 2014) Por ejemplo la
se podría ver a simple vista técnica de PCR tiene aplicaciones
como pequeños cristales en la variables e ilimitadas, ejemplo de ello,
solución. es la posibilidad de realizar estudios
de expresión genética, secuenciación
Los resultados obtenidos de directa de secuencias amplificadas,
esta práctica de laboratorio detección de mutaciones, seguimiento
consisten en la identificación de la efectividad de tratamiento de
de métodos como enfermedades, diagnósticos de
procedimiento de biología enfermedades genéticas e infecciosas
molecular, su fundamento y y en ciencia forense en la
los materiales implicados, así identificación de restos biológicos,
mismo, se integró determinación de paternidad y
conocimientos de genética pruebas periciales en criminalística.
(Angarita Merchán, Torres Caicedo &
Díaz Torres, 2018).
CONCLUSION
Para concluir, en esta práctica de
laboratorio pudimos realizar con
éxito la tecina PCR (reacción en
cadena polimerasa) con ADN de
amebas, realizamos todo este
proceso molecular, todo esto fue
realizado gracias a aplicaciones muy
variadas en la diferenciación del
ADN para su conocimiento y estudio.
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