“Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra Independencia, y de la
conmemoración de las heroicas batallas de Junín y Arequipa”
UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN
Facultad de Medicina Humana
Escuela Profesional de Enfermería
Asignatura:
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Docente: Biol. Francisco Castillo More
Alumna: Mora Dulanto Anne Mariel
CICLO II
TEMA: TINCIÓN DE GRAM
HUACHO – PERÚ
2024
ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN: ................................................................................................... 3
II. OBJETIVOS: ............................................................................................................ 4
III. MARCO TEÓRICO .............................................................................................. 5
3.1 ¿Qué es la tinción de Gram? .............................................................................. 5
3.2 Características principales: ................................................................................ 5
3.3 Importancia de la técnica ................................................................................... 7
3.4 Importancia en la Enfermería: ........................................................................... 7
IV. MATERIALES: ......................................................................................................... 9
V. PROCEDIMIENTOS: ............................................................................................. 10
VI. RESULTADOS: ................................................................................................... 14
VII. CONCLUSIÓN: .................................................................................................. 16
VIII. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................. 17
I. INTRODUCCIÓN:
La tinción de Gram es una técnica microbiológica fundamental utilizada para la
clasificación y diferenciación de bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y
Gram negativas. Se basa en las diferencias estructurales de la pared celular bacteriana,
lo que permite distinguir entre ambas categorías mediante el uso de colorantes
específicos.
Esta diferenciación se basa en las características estructurales de la pared celular
de los microorganismos, lo que permite orientar de manera preliminar su identificación y
posible tratamiento en casos clínicos. Por su simplicidad y eficiencia, esta técnica es
ampliamente utilizada tanto en entornos de investigación como en diagnósticos
microbiológicos. A través del procedimiento de tinción, se logra observar bajo el
microscopio las bacterias teñidas de diferentes colores, lo que facilita su clasificación
inicial.
En el presente informe se detallarán los pasos realizados durante la práctica, así
como los resultados obtenidos y su interpretación, destacando la importancia de esta
técnica en el campo de la microbiología.
II. OBJETIVOS:
• Objetivo general:
Aplicar la técnica de tinción de Gram para diferenciar bacterias según las
características de su pared celular y reconocer su importancia en la identificación
preliminar de microorganismos.
• Objetivos específicos:
1. Describir los materiales, reactivos y pasos necesarios para realizar la
tinción de Gram de manera correcta.
2. Identificar las diferencias microscópicas entre bacterias Gram positivas y
Gram negativas mediante la observación de sus colores característicos.
3. Analizar los resultados obtenidos para comprender la relevancia de la
tinción de Gram en microbiología clínica y su aplicación en el diagnóstico
de infecciones.
III. MARCO TEÓRICO
3.1 ¿Qué es la tinción de Gram?
La tinción de Gram es una técnica microbiológica fundamental que permite
diferenciar las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas,
según las características estructurales de su pared celular. Fue desarrollada en 1884 por el
bacteriólogo danés Hans Christian Gram, quien buscaba un método para hacer más
visible la presencia de bacterias en tejidos humanos. Desde entonces, esta técnica ha sido
ampliamente utilizada en microbiología clínica y de investigación, al ser una herramienta
sencilla, rápida y eficiente para la clasificación preliminar de microorganismos.
El principio de la tinción de Gram radica en las diferencias en la composición de
la pared celular. Las bacterias Gram positivas poseen una pared gruesa con varias capas
de peptidoglicano, que retiene el colorante primario cristal violeta, presentando un color
púrpura o violeta al ser observadas bajo el microscopio. En contraste, las bacterias Gram
negativas tienen una pared delgada de peptidoglicano y una membrana externa compuesta
por lipopolisacáridos. Durante el proceso de tinción, estas bacterias pierden el colorante
cristal violeta tras ser sometidas a un decolorante (generalmente alcohol o acetona) y
adquieren un color rosado o rojo al ser teñidas con el colorante secundario, safranina.
3.2 Características principales:
1. Diferenciación por pared celular:
• Las Gram positivas retienen el color violeta debido a su gruesa capa de
peptidoglicano (20-80 nm), que impide que el decolorante (etanol o
acetona) elimine el colorante inicial.
• Las Gram negativas tienen una pared más compleja, con una delgada capa
de peptidoglicano (2 nm) rodeada de una membrana externa rica en
lipopolisacáridos. Esto permite que el colorante violeta se elimine con el
decolorante, siendo luego teñidas de rosa por la safranina.
1. Secuencia de reactivos: La técnica implica el uso de varios reactivos
en un orden específico:
- Cristal violeta (tinte primario)
- Lugol (mordiente que fija el tinte primario)
- Etanol o acetona (decolorante)
- Safranina (colorante de contraste que tiñe las bacterias Gram
negativas)
2. Interpretación de resultados: Las bacterias que se observan moradas
al microscopio son Gram positivas, mientras que las rosadas son Gram
negativas. Esta diferenciación no solo permite identificarlas sino
también orientar decisiones clínicas, dado que estos dos tipos de
bacterias suelen responder de manera diferente a los antibióticos.
3. Precisión del procedimiento: La frescura del cultivo es esencial para
obtener resultados fiables, ya que bacterias envejecidas o tratamientos
inadecuados pueden alterar la tinción. Además, errores en la aplicación
del decolorante (como dejarlo más tiempo del debido) pueden dar lugar
Limitaciones
• No todas las bacterias responden bien a esta tinción (como las
micobacterias, que requieren tinciones especiales).
• Bacterias viejas o dañadas pueden perder la capacidad de retener
el cristal violeta, dando resultados ambiguos.
• Algunos microorganismos, como los archeas y virus, no pueden
ser clasificados mediante esta técnica.
Requiere cuidado en la manipulación
• La técnica es relativamente sencilla, pero errores en la
aplicación de los reactivos, especialmente en el tiempo de
decoloración, pueden afectar los resultados y conducir a una
interpretación errónea.a interpretaciones incorrectas.
3.3 Importancia de la técnica
La tinción de Gram tiene un papel crucial en microbiología clínica porque permite
identificar rápidamente el tipo de bacteria presente en una muestra, lo que facilita la
elección del tratamiento antibiótico adecuado. Por ejemplo, las bacterias Gram positivas
y Gram negativas responden de manera diferente a ciertos fármacos antimicrobianos, por
lo que su correcta identificación puede influir en el éxito del tratamiento. Además, esta
técnica proporciona una orientación preliminar que puede complementarse
posteriormente con otras pruebas más específicas, como cultivos o técnicas moleculares.
3.4 Importancia en la Enfermería:
• Diagnóstico rápido y preciso
Los profesionales de enfermería, en colaboración con el personal de laboratorio,
pueden ayudar en la recolección de muestras para tinción de Gram, permitiendo que los
médicos determinen si la infección es causada por bacterias Gram positivas o Gram
negativas. Esto acelera el inicio de tratamientos antibióticos empíricos antes de obtener
cultivos más detallados.
• Selección del tratamiento adecuado
La distinción entre bacterias Gram positivas y Gram negativas es fundamental
para orientar el uso racional de antibióticos, evitando la prescripción de medicamentos
ineficaces. Por ejemplo, las bacterias Gram negativas, como Escherichia coli, suelen ser
más resistentes a los antibióticos β-lactámicos, lo que requiere tratamientos específicos.
• Prevención de infecciones nosocomiales
Enfermeras desempeñan un papel clave en la prevención de infecciones
hospitalarias mediante la vigilancia y control de bacterias. La tinción de Gram ayuda a
identificar agentes causantes de infecciones nosocomiales, como Staphylococcus aureus
resistente a la meticilina (MRSA) o Klebsiella pneumoniae, permitiendo implementar
medidas de aislamiento y protocolos de desinfección adecuados.
IV. MATERIALES:
- Microscopio.
- 5ml Cristal Violeta
- 5ml Lugol
- 5ml Alcohol cetona o alcohol
- 5ml Safranina
- Portaobjeto
- Mondadientes
- Agua Destilada
MATERIALES BIOLÓGICOS
- Zarro bucal.
EQUIPOS DE BIOSEGURIDAD:
- Guantes.
- Mascarilla.
- Guardapolvo.
V. PROCEDIMIENTOS:
EXPERIENCIA 1: PREPARACIÓN Y OBSERVACIÓN DE LA TINCIÓN DE GRAM
PASO 1: Colocamos una gota de agua destilada en el portaobjeto.
PASO 2: Con ayuda del mondadientes, hacemos la recolección de la muestra (zarro
bucal) y lo mezclamos con la gota de agua del portaobjeto.
PASO 3: Utilizando otro portaobjeto hacemos el frotis de la muestra. Esperamos 5
minutos a que se seque mientras lo agitamos.
PASO 4: Agregamos con ayuda del gotero entre 2 a 3 gotas de Cristal Violeta a la muestra
y dejamos secar por 1 minuto.
PASO 5: Transcurrido el tiempo indicado se procede a hacer el lavado.
Paso 6: Se seca agitando la muestra y empleando papel. Cuando quede totalmente seco
se agregan 2 a 3 gotas de Lugol y lo dejamos por 1 minuto.
PASO 7: Procedemos a lavarlo nuevamente, teniendo cuidado de no rosearle en la parte
donde esta la muestra.
PASO 8: Secamos la muestra y agregamos Alcohol cetona por 10 segundos.
PASO 9: Procedemos a lavar rápidamente para no dañar la muestra y secamos.
PASO 10: Se agrega entre 2 a 3 gotas de Safranina y lo dejamos actuar por 1 minuto.
PASO 11: Lavamos con agua destilada, secamos y llevamos a observar al microscopio
de menor a mayor aumento con ayuda del aceite de inmersión.
VI. RESULTADOS:
Muestra 1:
Con ayuda del lente 100x/1.25
Se pueden apreciar que en la primera
muestra la presencia de bacterias del tipo
cocos por su forma esférica.
Y por la coloración de la cual se tiñen es
de un color violeta por lo que se asume
que pertenece a los Gram positivo.
Muestra 2:
Observación con el lente 4x/0.10
En esta segunda muestra se observa
la tentación Gram de una violeta más
intensa, lo cual indica que pertenece
a un Gram positivo.
Por la forma de las bacterias
presentes son un tipo de cocos pero
que se agrupan de dos a dos, lo cual
se infiere que son del tipo
diplococos.
VII. CONCLUSIÓN:
La tinción de Gram es una técnica fundamental en microbiología que
permite clasificar las bacterias en dos grupos principales, Gram positivas y Gram
negativas, en función de su pared celular. Esta diferenciación no solo tiene
implicaciones en la identificación de microorganismos, sino que también influye
en el enfoque terapéutico que se adoptará para combatir infecciones bacterianas.
A lo largo del informe, se ha evidenciado que la correcta aplicación de la
tinción de Gram es crucial para obtener resultados precisos. Se discutieron los
pasos del procedimiento y se resaltó la importancia de trabajar con cultivos frescos
para evitar interpretaciones erróneas que puedan surgir de bacterias envejecidas o
de un uso inadecuado de los reactivos. La observación de los resultados, que
muestran bacterias moradas (Gram positivas) y rosadas (Gram negativas),
proporciona información valiosa que orienta la selección de antibióticos,
contribuyendo a un tratamiento más efectivo y a la reducción de complicaciones
asociadas a infecciones.
Desde la perspectiva de la enfermería, la tinción de Gram juega un papel
fundamental en la atención al paciente. Permite un diagnóstico rápido y un
tratamiento adecuado, lo que es esencial para mejorar la calidad de la atención y
minimizar el riesgo de infecciones nosocomiales. Además, la educación que
brinda el personal de enfermería a los pacientes sobre la naturaleza de las
infecciones y el tratamiento a seguir es vital para promover una recuperación
efectiva.
En conclusión, la tinción de Gram no solo es un método de laboratorio
esencial en microbiología, sino que también tiene un impacto significativo en la
práctica clínica y en la atención integral del paciente. Su relevancia continúa
siendo una herramienta indispensable en el arsenal de diagnóstico y tratamiento
de las infecciones bacterianas en el ámbito de la salud.
VIII. BIBLIOGRAFÍA
1. Tinción de gram. (s. f.). [Link]
laboratorio/tincion-de-gram/
2. Bush, L. M. (2024, 4 junio). Introducción a las bacterias gram negativas.
Manual MSD Versión Para Público General.
[Link]
bacterianas-bacterias-gramnegativas/introducci%C3%B3n-a-las-
bacterias-gram-negativas
3. Bush, L. M. (2023, 10 marzo). Introducción a las bacterias grampositivas.
Manual MSD Versión Para Público General.
[Link]
bacterianas-bacterias-grampositivas/introducci%C3%B3n-a-las-
bacterias-grampositivas
