UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE AGRONOMÍA

TEMA:

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO DE

MICROORGANISMOS (PDA)

INTEGRANTES:

CESAR LOPEZ, FRANCISCO CARDENAS, GEOVANNY DURÁN

CÁTEDRA:

MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA

DOCENTE:

ING. PATRICIO CASTRO Ph.D.

CICLO:

CUARTO “B”

PRÁCTICA:

2
Preparación y Esterilización de Medios de Cultivo de Microorganismos (PDA)

1. Introducción
Los medios de cultivo muy importantes dentro del campo de la microbiología,
proporcionando el ambiente adecuado para el crecimiento, desarrollo y estudio de
microorganismos. Uno de los medios de cultivo utilizados es el medio PDA (Papa,
Dextrosa, Agar) es utilizado por su fácil elaboración y eficacia en el fomento del
crecimiento microbiano. Dentro de este medio tenemos varios componentes, la papa sirve
como una fuente rica en nutrientes, incluyendo carbohidratos, proteínas y sales minerales,
esenciales para el metabolismo microbiano. La dextrosa, o glucosa, actúa como fuente
adicional de energía, mientras que el agar proporciona la estructura sólida necesaria para el
crecimiento de colonias de microorganismos. El proceso de preparación del medio PDA
requiere una importante atención a la esterilidad para evitar que el medio de contamine y no
sirva. Para la preparación del medio las papas se pelan y cortan en trozos se hierven en agua
destilada para extraer los nutrientes. Después de la ebullición, el extracto de papa se filtra
para eliminar los sólidos y obtener un líquido claro y nutritivo. Se añade entonces la
dextrosa, que se disuelve en el extracto, seguida del agar, que se mezcla con el preparado.
La mezcla se calienta suavemente y se coloca un imán dentro del recipiente hasta que el
agar haya disuelto completamente, evitando la formación de grumos. Para evitar la
contaminación, todo el proceso se lleva a cabo en condiciones estériles, donde se usa una
cabina de flujo laminar con e fin de evitar una contaminación externa. Una vez preparado el
medio, se siembra con la muestra microbiana. Luego se monitorea el desarrollo de colonias
para observar y registrar características como color, tamaño y forma del cultivo.
2. Objetivos
 Preparar y esterilizar medio PDA
 Sembrar bacterias fitopatógenas en medio PDA
3. Revisión Literaria
Los medios de cultivo son sustancias complejas o mezclas elaboradas y formuladas
previamente, utilizadas en microbiología y biotecnología con el objetivo de proporcionar
los nutrientes, metabolitos y las condiciones físicas adecuadas para el desarrollo óptimo y
saludable de los microorganismos seleccionados. Gracias a estos medios, es posible crear
un ambiente controlado y óptimo en el laboratorio para la propagación y el mantenimiento
de bacterias, hongos, levaduras y otros organismos, lo que permite su estudio detallado, la
investigación de sus características y el análisis de su comportamiento (Caycedo,
Constanza, & Trujillo, 2021).
Al proporcionar los nutrientes esenciales y las condiciones adecuadas, los medios de
cultivo juegan un papel fundamental en la siembra de microorganismos y en la obtención
de resultados confiables. Su utilización adecuada y el conocimiento de sus propiedades son
esenciales para garantizar la viabilidad y el crecimiento saludable de los microorganismos,
lo que a su vez contribuye al avance científico y al desarrollo de nuevas tecnologías y
aplicaciones. Los medios de cultivo son herramientas indispensables en microbiología que
permiten el estudio y análisis de los microorganismos en un ambiente controlado y
favorable, proporcionando las condiciones óptimas para su crecimiento y desarrollo
(Caycedo, Constanza, & Trujillo, 2021).
Además de su función nutricional, los medios de cultivo también pueden contener
agentes selectivos o indicadores que ayudan a identificar y distinguir diferentes tipos de
microorganismos presentes en la muestra en estudio (Bonnet, Lagier, Raoult, & Khelaifia,
2019).
Los medios de cultivo utilizados en microbiología son variados y adaptados a las
necesidades específicas de cada organismo, brindando un equilibrio perfecto de nutrientes y
condiciones físicas para su adecuado crecimiento y desarrollo. Los medios de cultivo son
herramientas esenciales en el análisis y estudio de los microorganismos, proporcionando el
entorno adecuado para su realización y otorgando un camino vital para la exploración y
comprensión del reino microbiano (Gentilini, Reinoso, Echeverría, Leardini, & Copes,
2007).
Estos medios pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos, y su composición puede
variar dependiendo de las necesidades específicas de cada microorganismo o del tipo de
estudio que se esté realizando. Los componentes comunes de los medios de cultivo
incluyen fuentes de carbono, nitrógeno, minerales, vitaminas, aminoácidos, así como
reguladores de pH y ácidos orgánicos para mantener las condiciones óptimas (Apella &
Araujo, 2005).
Los medios de cultivo sólidos son aquellos que presentan una consistencia firme,
como las agarosas, agar-agar, gelatinas y jaleas, lo que permite el crecimiento de colonias
microbianas en su superficie. Por otro lado, los medios de cultivo líquidos son aquellos que
se encuentran en estado fluido, como los caldos de cultivo, sueros y medios líquidos
esterilizados, los cuales son utilizados para la propagación de microorganismos. Los
medios de cultivo semisólidos, por su parte, presentan una consistencia intermedia entre los
sólidos y los líquidos, como las agarosas al 1%, los cuales permiten observar la movilidad
de las bacterias y otros microorganismos (Díaz, Rodríguez, & Zhurbenko, 2013).
La variedad de medios de cultivo disponibles, tanto en términos de composición
como de función, brinda a los investigadores una amplia variedad de herramientas para
identificar y caracterizar microorganismos en diversos entornos y aplicaciones (Medina, y
otros, 2023).
Los medios de cultivo PDA, conocidos como Papa, Dextrosa-Agar, son un tipo
específico de medio de cultivo utilizado para el crecimiento y desarrollo de
microorganismos. Este medio de cultivo se compone principalmente de papa que es un
componente principal, proporciona carbohidratos, minerales y vitaminas necesarias para el
crecimiento microbiano, dextrosa (azúcar) es una fuente de energía fácilmente utilizable
por los microorganismos y agar que es una sustancia derivada de algas marinas, funciona
como agente solidificante y permite la formación de un medio de cultivo en forma de gel
(Díaz, Rodríguez, & Zhurbenko, 2013)
 El medio de cultivo PDA ofrece diversas ventajas que lo convierten en una opción
popular en el campo de la microbiología. En primer lugar, tiene un amplio rango de
aplicaciones, lo que significa que puede utilizarse para cultivar una gran variedad de
microorganismos, como bacterias, hongos y levaduras. Además, su preparación es bastante
sencilla y los ingredientes necesarios para su elaboración son fácilmente accesibles. Esto
facilita su uso en laboratorios de diferentes niveles (Casallas & Oscar, 2023). Por último, el
medio PDA permite un crecimiento rápido de microorganismos, lo que acelera los tiempos
de cultivo y permite obtener resultados en un periodo de tiempo relativamente corto.

Una de las desventajas del medio de cultivo PDA es que no es selectivo. Esto
significa que no permite inhibir el crecimiento de ciertos microorganismos, lo que puede
resultar en una competencia desigual entre diferentes especies presentes en la muestra. Esto
puede dificultar la identificación precisa de los microorganismos de interés. el medio de
cultivo PDA presenta varias desventajas que deben ser consideradas al utilizarlo. Aunque
puede ser útil en ciertos contextos y experimentos específicos, es importante estar
consciente de sus limitaciones y considerar alternativas más adecuadas si los resultados o
objetivos del estudio así lo requieren. La selección del medio de cultivo adecuado es crucial
para garantizar la calidad y confiabilidad de los datos obtenidos.

4. Materiales y Métodos
4.1. Materiales
Materiales biológicos
 Bacterias
 20g de dextrosa
 200g de papas
Materiales inertes
 15g de agar
 Balanza
 Hornilla
 Cuchillos
 Colador
 Vaso de precipitación
 Erlenmeyer
 Papel aluminio
 Guantes de látex
 Cajas Petri
 Agua destilada

4.2. Metodología
 Preparación de la papa:
a) Se pelo 200g de papa y se lavó cuidadosamente para eliminar cualquier
suciedad.
b) Posteriormente se cocinó la papa con agua destilada por aproximadamente 45
minutos. Luego, se dejó enfriar.
c) Se filtró el extracto de papa para eliminar los sólidos y obtener un líquido claro.
d) Se midió la cantidad de un litro de extracto de papa obtenida.
e) Se agregó 15 gramos de agar y 20 gramos de dextrosa para un litro de medio de
cultivo.
f) Se mezcló bien la solución para asegurarte de que el agar y la dextrosa estén
completamente disueltos en el medio de cultivo.
Esterilización del medio de cultivo
a) La esterilización es fundamental para eliminar cualquier microorganismo no
deseado del medio de cultivo. Se realizó con la ayuda de la autoclave.
Inoculación del medio de cultivo
a) Una vez esterilizado y enfriado el medio de cultivo, se llevó a la cámara de flujo
laminar.
b) Posteriormente se colocó alrededor de 20 ml del medio de cultivo en cada una de
las cajas Petri.
c) Con la ayuda de una varilla de vidrio esterilizada se transfirió las bacterias al
medio de cultivo sólido en las cajas Petri.
d) Se extendió las colonias de manera de zigzag sobre el medio de cultivo en las
cajas Petri con cuidado de no lastimar el medio sólido.
e) Finalmente se etiqueto cada caja Petri con el nombre de cada uno de los
integrantes. Se dejó en el laboratorio por una semana para su posterior
observación.

5. Resultados
Cajas 1 2 3 4 5 6 7
Color Amarillo Blanco Amarill Blanco Blanco - Crema Blanco
o amarillento
Forma Alargada Alargada Circular Ovoidal Alargada Alargada Alargada
Hongos NO NO NO NO NO SI NO

Tabla 1. Resultados de las siete colonias de bacterias que se cultivaron.

 Figura 1. Medios de Cultivo con colonias bacterianas
5.1. Discusión
El medio de cultivo PDA es muy eficiente para la nutrición de la bacteria Alternaría
utilizado en esta investigación, indicando diferencias significativas en su crecimiento en el
medio

El Agar Dextrosa y Papa puede ser suplementados con antibióticos o ácidos para inhibir
el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado también para realizar recuentos para
el cultivo de hongos y bacterias de importancia en el campo agrícola (Nuñez,2006).

6. Conclusión
Se constató que la bacteria Alternaria es capaz de crecer y cambiar su morfología
vigorosamente en el medio de cultivo PDA. Esto nos lleva a concluir que el PDA esta
formulado para proporcionar los nutrientes y las condiciones adecuadas para el
crecimiento y desarrollo.
7. Bibliografía

Apella, C., & Araujo, P. (2005). Microbiología de agua. Conceptos básicos. Tecnologías
solares para la desinfección y descontaminación del agua. SOLAR SAFE WATER.
Obtenido de
[Link]
[Link]?1506443741=&response-content-disposition=inline%3B+filename
%3DLeccion_4_02_Capitulo.pdf&Expires=1713498597&Signature=BRnFWK7LR
3w7Mi5QBwl~0elytBNuLbqFLw~pQMFFcp4X5Ghns7ze6Puh
Bonnet, M., Lagier, J., Raoult, D., & Khelaifia, S. (2019). Bacterial culture through
selective and non-selective conditions: the evolution of culture media in clinical
microbiology. Marseillle: National Library of Medicine.
doi:10.1016/[Link].2019.100622
Casallas, p., & Oscar, F. (2023). Estudio de métodos de inmovilización alternativos y de
bajo costo del hongo Trichoderma sp, para la degradación de compuestos
fenólicos. Bogotá: Universidad Antonio Nariño. Obtenido de
[Link]
Caycedo, L., Constanza, L., & Trujillo, D. (2021). Las bacterias, su nutrición y
crecimiento. Nova. Obtenido de [Link]
Díaz, M., Rodríguez, C., & Zhurbenko, R. (2013). Enterococcus, medios de cultivo
convencionales y cromogénicos. La Habana : Revista cubana de higiene y
epidemiología. Obtenido de [Link]
30032013000100010&script=sci_arttext&tlng=en
Gentilini, E., Reinoso, E., Echeverría, M., Leardini, N., & Copes, J. (2007). Microbiología
veterinaria . Buenos Aires: Inter-médica. Obtenido de
[Link]
[Link]?1575785592=&response-content-
disposition=inline%3B+filename
%3DMicrobiologia_Veterinaria_XXI_2010_Bueno.pdf&Expires=1713497117&Sig
nature=S
Medina, B., De La Rosa, K., García, V. B., Andrea, N., Arce, D., & Hernández, L. (2023).
Evaluación de medios de cultivos para el crecimiento de bacterias acido lácticas
probióticas y su potencial uso en alimentación de aves de corral. Bogotá:
Publicaciones e Investigación,. Obtenido de
[Link]
8. Anexos

Figura 2: Pelado y cortado de las papas.

Figura 3: Medición precisa de 15g de Agar utilizando una balanza.

Figura 4: Medición precisa de 20g de Dextrosa utilizando una balanza digital

Figura 5: Separación entre los sólidos y el líquido en la papa cocinada.

Figura 6: Aforando a 1litro.

Figura 7: Desinfección de la mezcla en el Autoclave.

Figura 8: Reposo del medio de cultivo en la cámara de flujo laminar.

Figura 9: Toma de una muestra de bacteria Alternaria para la posterior siembra.

Figura 10: sembrado de microrganismo en el medio de cultivo PDA.