Facultad de Medicina Humana
Laboratorio Clínico
Diseño de pruebas moleculares.
Real time PCR.
Clase práctica
Priscila Nayu Lope Pari, MSc
priscila.18_2044@[Link]
PCR
• Fragmentos de ADN de interés
• Taq Polimerasa
• Cebadores
• Cofactores: Catión divalente Mg++ (MgCl2)
• Desoxirribonucleótidos
• Solución amortiguadora y sales
• Agua libre de nuecleasas
• Termociclador
Cebadores
• Secuencias cortas de DNA (18-25 nt) que sirven como punto de inicio a la
replicación del DNA
• Moléculas lineales con un grupos hidroxilo en el extremo 3`.
• Son complementarias al DNA blanco
• Se unen al DNA molde de acuerdo a las reglas de complementariedad de
bases.
• % C+G = 40-60%
• No formar estructuras secundarias
• R y F = Tm similar Tm=(2x(A+T) + 4X(G+C))-5
• Ta = gradiente de temperatura (aprox. Tm - 5º)
• Especificidad
Agente
• EPI_ISL_19182659
• A/Thailand/8/2022
• HA
> A/Thailand/8/2022
ATGAAGGCTATCATTGCTTTGAGCAACATTCTATGTCTTGTTTTCGCTCAAAAAATACCTGGAAATGACAATAGCACGGCAACGCTGTGCCTTGGGCACCATGCAGTACCAAACG
GAACGATAGTGAAAACAATCACAAATGACCGAATTGAAGTTACTAATGCTACTGAGTTGGTTCAGAATTCATCAATAGGTAAAATATGCAACAGTCCTCATCAGATCCTTGATGG
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DELTA G: ΔG ([Link]-1)
-10,…, -7, …, -2, -1, 0, 1 ΔG ([Link]-1)
• Homodímeros
• Heterodímeros
• Harpin
• Video:
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Artículo
