# 11 PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PARA
ENTEROBACTERIAS
Objetivo.- Identificar a las Enterobacerias
Introducción.-
Son bacilos Gram negativos no esporulados, anaerobios facultativos, móviles o inmóviles,
fermentan glucosa, catalasa positiva, oxidasa negativos. Están presentes en agua, tierra,
plantas, tracto gastrointestinal del hombre y animales, algunas son ubicuas y otras son
patógenas y patógenas facultativas.
Clasificación.-Los géneros de importancia medica son;
Escherichia coli enteropatógeno, Shigella, Salmonella, Yersinia Citrobacter, Klebsiella, Serratia,
Proteus, Hafnia, Edwardsiella, Providencia, Morganella
Las pruebas que se usan para identificar a las enterobacerias que más se usan son;
Triple azúcar-hierro TSI
Se fundamenta en la capacidad que tienen las eterobacterías de fermentar glucosa, sacarosa
y lactosa o solo 1 o 2 de estos azúcares, también de formar H2S a partir de la reducción
del tío sulfato y también del producir gas o no gas y sin existirán reacciones de
acidificación alcalinizada.
El medio TSI contiene lo siguiente Lactosa
Glucosa
Sacarosa
El indicador de Ph es: Rojo fenol
Podemos ver los siguientes cambios:
* Si solo fermentara glucosa : por la pequeña cantidad de ácido, se torna amarillo, luego se
torna alcalino y cambia de color a un color rojo en la parte inclinada y el fondo inalterable,
sino altera el color original del medio del cultivo .
* Si fermenta lactosa y sacarosa: Se produce ácido tanto en el medio inclinado y el fondo
permanecerán de color amarillo
* Gas: Medio de cultivo suspendido, en el fondo un sector de gas.
* H2S. (+) Ennegrecimiento
(..) No hay ennegrecimiento
Alc = Alcalino
Ac = Ácido
+/- = Variable
Inalt. = Inalterable
Agar lisina Hierro (LIA)
Se basa en la capacidad que tienen algunos microorganismos de descarboxilar la lisina,
desanimación de la fenilalanina y la consecuente formación de sulfuro de hidrogeno.
Este medio contiene: Glucosa
Lisina
Citrato de Hierro
Amoníaco
Tíosulfato de Sodio
El indicador Ph es : Púrpura de Bromocresol
Podemos ver los siguientes cambios:
Los microorganismos son inoxidables: como en el medio KIA. Después de incubarse a
35 ºC durante 18 horas con cepa floja.
* Se observa la formación de un precipitado negro en el fondo del tubo indica producción
de las (reacción anaeróbia)
* Fermentar pequeñas cantidades de glucosa produciendo ácidos que harán vibrar el
indicador a color amarillo pudiendo visualizarse aún en presencia de un precipitado negro si
el tubo se coloca delante de una frente de luz
Se pueden estudiar los siguientes aspectos:
El medio LIA se emplea con frecuencia para una selección preliminar que permite detectar
patógenas fecales ya que incorpora varios parámetros en un solo medio.
Bacterias que dan positivo: Edwarsiella, Proteus, Providencia, Marganella, y Salmonella a
excepción de la salmoenlla parattyphi A
Caldo Urea .-
Se basa en la capacidad que tienen algunos microorganismos para hidrolizar la urea y dar
agua, amoniaco a través de una enzima llamada ureasa.
Este medio contiene: Agar urea de christensen o caldo con urea:
Peptona
Glucosa
Cloruro de Sodio
RH2PO+
El indicador de PH es: Rojo fenol
Podemos ver los siguientes cambios:
* Cuando la prueba es positiva (+) del medio cambia de color amarilla a color rosado e
inalterable cuando la prueba es negativa.
* Se observa que los microorganismos que son fuertemente uresas positivos comenzaran a
producir sustancias alcalinas en pocos minutos, lo que se traduce por el viraje del indicador
rojo fenol del color rojo al púrpura.
* Cuanto mas abundante haya sido el inóculo, más rápidamente se observaran los
resultados positivos.
* Los medios de cultivo pueden ser observados a los 10´ ,30´ , 1 hora y varias horas
después de la inoculación. Esta prueba también podemos realizarla en papel filtro.
Se pueden estudiar los siguientes aspectos:
* Esta prueba es útil para la identificación de proteus y providencia. Esta prueba para ureasa
se emplea para diferenciar especies de brucilla entre si, para identificar hongos capsulados
y como prueba adicional para la identificación de cientos cocobacilos gran negativos
bacterias que dan positivo : Proteus Vulgaris, proteus mirabilis, proteus mortganii proteus
rettgeri.
Citrato de Simmons.-
Se basa en la capacidad algunas enterobacterias de utilizar el citrato de simmons como
única fuente de carbono metabolizando el citrato fosfato de amonio como única fuente de
fosfato liberando iones amonio, esta liberación junto con la eliminación de citratos (ácido )
generara fuerte alcalinización del medio que será aparente por el cambio de color del
indicador de Ph. De verde a azul
Este medio contiene:
Buffe
Fosfato de amoniaco
Cationes
Citrato
El indicador de Ph es: Azul de bromotimol
Podemos observar los siguientes cambios:
* El medio se incuba a 35 – 37º C. durante 24 horas hasta máximo 4 días con la tapa roja
el desarrollo de los microorganismos de la superficie con pico de flauta con viraje de color
verde a azul o azul turquesa, indica que el organismo a utilizado el sustrato sin producir
acetato u otra sal alcalina carboxilada.
* Pueden encontrarse algunos microorganismos raros capaces de utilizar el sustrato sin
producir ninguna reacción alcalina que modifique el color del indicador . El desarrollo
abundante en el pico de flauta sin aparición de color azul puede indicar un resultado positivo
, pero la prueba se repetirá con un calculo mínimo
SIM Sulfuro indol motilidad.-
Esta prueba se basa en la capacidad de algunos microorganismos de producir indol por
degradación del triptófano.- También producen sulfuro de hierro por reducción del
tiosulfato al H2S, que reacciona con la sal ferrica.
Este medio contiene:
Tristona con cloruro de sodio al 0.5%
Agar – soja – triptícasa
Agar – triptosa o agar- brucillas
Podemos observar los siguientes cambios
* Se observa un anillo amarillo con la adición del reactivo de kovacks cuando la prueba es
positiva.
* Se observa un precipitado negro lo cual indica producción de H2S.
* Se puede observar la existencia o ausencia de movilidad bacteriana.
Interpretación.-
Una vez realizada la siembra en todos los tubos luego de la incubación se hace la interpretación
en base a tablas
Evaluación de la práctica.-
Se recibirá una evaluación previa de la parte teórica de la práctica
Se evaluara durante la práctica
Se presentara un informe al finalizar la práctica
