4

CAPÍTULO

Estructura y función de la
membrana plasmática

GAS NERVIOSO

El 20 de marzo de 1995 durante la hora pico de la mañana

en el sistema del metro de Tokio, uno de los más activos del
mundo, un culto religioso lanzó al aire una sustancia química
llamada sarín. El ataque fue coordinado entre varias estacio-
nes de metro, y en poco tiempo miles de personas encontra-
ban dificultades para respirar. Aunque solo ocho personas
murieron en el ataque, cientos resultaron gravemente heri-
das. El sarín es un tipo de gas nervioso —un arma química
producida por los nazis— diseñada para interferir con el siste-
ma nervioso. Tras la Segunda Guerra Mundial tanto Estados
Unidos como la Unión Soviética produjeron enormes cantida-
des de sarín y otros gases nerviosos, y aunque estas armas
no se usaron a escala global, las fuerzas armadas iraquíes uti-
lizaron el gas nervioso en un ataque contra la ciudad kurda
de Halabja en 1988, así como en la guerra entre Irán e Irak. La
molécula de sarín es pequeña pero mortal; funciona median-
te el envenenamiento de una enzima que degrada las seña-
les químicas usadas por los nervios para activar las células
musculares. Las víctimas de sarín mueren porque los múscu-
los utilizados para respirar se paralizan. En este capítulo
aprenderemos cómo las proteínas en la membrana celular
convierten las señales químicas en las señales eléctricas que
se requieren para muchas actividades fisiológicas.

FUENTE: © Peter Turnley / Corbis Images.

BOSQUEJO DEL CAPÍTULO

4.1 Introducción a la membrana plas- 4.8 El glóbulo rojo: un ejemplo de es- 4.15 PERSPECTIVA HUMANA:
mática tructura de membrana plasmática Defectos en los canales iónicos y
4.2 Composición lipídica de las mem- 4.9 Movimiento de solutos a través transportadores como causa de
branas de las membranas celulares enfermedades hereditarias
4.3 Carbohidratos de membrana 4.10 Difusión a través de la bicapa lipí- 4.16 Potenciales de membrana
4.4 Proteínas de membrana dica 4.17 Propagación de los potenciales
4.5 Estudio de la estructura y propie- 4.11 La difusión de iones a través de de acción como impulso
dades de las proteínas integrales membranas 4.18 Neurotransmisión: el salto de la
de membrana 4.12 VÍAS EXPERIMENTALES: hendidura sináptica
4.6 Lípidos de membrana y fluidez de El receptor acetilcolina
la membrana 4.13 Difusión facilitada
4.7 Naturaleza dinámica de la mem- 4.14 Transporte activo
brana plasmática
 grafías electrónicas desencadenaron un debate vigoroso sobre la 115
4.1 Introducción a la membrana composición molecular de las diversas capas de una membrana,
plasmática un argumento que fue al corazón del tema de la estructura de la
membrana y su función. Como se verá en breve, las membranas

4.1 ӝ Introducción a la membrana plasmática

Las paredes exteriores de una casa o un automóvil proporcionan celulares contienen una bicapa de lípidos, y las dos capas de tin-
una barrera fuerte e inflexible que protege a sus habitantes de un ción oscura en las micrografías electrónicas de la figura 4-1 co-
mundo externo rudo e impredecible. Es de esperar que el límite rresponden principalmente a las superficies polares interna y
exterior de una célula viva se construya con una barrera igual- externa de la bicapa. Volveremos a la estructura de las membra-
mente resistente e impenetrable, ya que también debe proteger nas a continuación, pero primero examinaremos algunas de las
sus delicados contenidos internos de un entorno no vivo, y con principales funciones de las membranas en la vida de una célula
frecuencia inhóspito. Sin embargo, las células están separadas del (véase FIGURA 4-2).
mundo externo por una estructura delgada y frágil llamada mem-
brana plasmática o membrana celular, de solo 5 a 10 nm de Descripción general de las funciones
ancho. Se necesitarían alrededor de 5 000 membranas apiladas
una encima de la otra para igualar el grosor de una sola página de
de la membrana
este libro. 1. Compartimentación. Las membranas son láminas continuas
Debido a que es tan delgada, no se detecta ningún indicio de e ininterrumpidas y, como tales, inevitablemente encierran
la membrana plasmática cuando se examina la sección de una compartimientos. La membrana plasmática encierra el conte-
célula bajo un microscopio óptico. De hecho, no fue sino hasta nido de la célula completa, mientras que las membranas nu-
finales de la década de 1950 que las técnicas para preparar y teñir cleares y citoplásmicas encierran diversos espacios intracelu-
tejidos progresaron hasta el punto en que la membrana plasmáti- lares. Los diversos compartimientos de una célula unidos a la
ca se pudo estudiar al detalle en el microscopio electrónico. Estas membrana poseen contenidos marcadamente diferentes. La
primeras micrografías electrónicas, como las tomadas por J. D. compartimentación de la membrana permite que las activida-
Robertson de la Universidad de Duke (véase FIGURA 4-1a), retra- des especializadas continúen sin interferencia externa, y per-
taban la membrana plasmática como una estructura de dos capas mite la regulación independiente de las actividades celulares.
oscuras, interior y exterior, y una capa media ligeramente teñida. 2. Plataforma para actividades bioquímicas. Las membranas no
Todas las membranas que se examinaron de cerca —ya fueran solo encierran compartimientos, sino que ellas mismas son
plasmáticas, nucleares o de citoplasma (consúltese figura 4-1b)— o también un compartimiento diferente. Para los reactivos que
tomadas de plantas, animales o microorganismos, mostraron esta flotan libremente en disolución, las interacciones dependen
misma ultraestructura. Además de proporcionar una imagen vi- de colisiones aleatorias. Por el contrario, los componentes que
sual de esta estructura celular de importancia crítica, estas micro- están incrustados en una membrana ya no flotan libremente,
y se pueden ordenar para una interacción efectiva.
3. Proporcionar una barrera permeable selectiva. Las membra-
nas evitan el intercambio irrestricto de moléculas de un lado
a otro. Al mismo tiempo, las membranas proporcionan los
medios de comunicación entre los compartimientos que sepa-
ran. La membrana plasmática que rodea a una célula se puede
comparar con un foso alrededor de un castillo: ambos sirven
como una barrera general, pero ambos tienen “puentes” con
compuertas que promueven el movimiento de elementos se-
lectos dentro y fuera del espacio vital encerrado.

FIGURA 4-1 Apariencia trilaminar de las membranas. a) Microfotografía

electrónica que muestra la estructura de tres capas (trilaminar) de la mem-
brana plasmática de un eritrocito después de teñir el tejido con el metal
pesado osmio. El osmio se une preferentemente a los grupos cabeza po-
lar de la bicapa lipídica, produciendo el patrón trilaminar. Las flechas deno-
tan los bordes interno y externo de la membrana. b) El borde externo de
una célula muscular diferenciada crecida en un cultivo muestra la estructu-
ra trilaminar similar, tanto de la membrana plasmática (PM, plasma mem-
brane) como de la membrana del retículo sarcoplásmico (SR, sarcoplasmic
reticulum), un compartimiento que almacena calcio del citoplasma.
FUENTE: a) Cortesía de J D Robertson; b) De Andrew R Marks, et al. J Cell
Biol 1991;114:305. Reproducida con permiso de la Rockefeller University
a) 50 nm Press.

PM
SR

b)
 116 (5) las. La membrana plasmática también puede transportar io-
Hormona nes específicos, estableciendo así gradientes iónicos a través
de sí misma. Esta capacidad es especialmente crítica para las
células nerviosas y musculares.
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

5. Respuesta a estímulos externos. La membrana plasmática

desempeña un papel crítico en la respuesta de una célula a
estímulos externos, un proceso conocido como transducción
IP3
de señales. Las membranas poseen receptores que se com-
(4) binan con moléculas específicas (ligandos) o responden a
Ca2+
H+ otros tipos de estímulos, como la luz o la tensión mecánica.
(2) Diferentes tipos de células tienen membranas con diferentes
CO2 receptores, y por tanto son capaces de reconocer y responder
+ a diferentes estímulos ambientales. La interacción de un re-
RuBP
ceptor de membrana plasmática con un estímulo externo pue-
PGA de provocar que la membrana genere una señal que estimule
o inhiba las actividades internas. Por ejemplo, las señales ge-
neradas en la membrana plasmática pueden decirle a una cé-
(3) lula que fabrique más glucógeno, se prepare para la división
H2O celular, se mueva hacia una concentración mayor de un com-
puesto particular, libere calcio de las reservas internas, o po-
(6) Hidrolasas ácidas
siblemente que se suicide.
6. Interacción intercelular. Situada en el borde exterior de cada
célula viva, la membrana plasmática de los organismos multi-
celulares media las interacciones entre una célula y sus veci-
nos. La membrana plasmática permite a las células reconocer-
se y señalizarse entre sí, adherirse cuando sea apropiado, e
ADP intercambiar materiales e información. Las proteínas dentro
de la membrana plasmática también pueden facilitar la inte-
ATP (7) racción entre los materiales extracelulares y el citoesqueleto
intracelular.
7. Transformación de energía. Las membranas están íntima-
mente involucradas en los procesos mediante los cuales un
tipo de energía se convierte en otro (transformación de ener-
FIGURA 4-2 Un resumen de las funciones de membrana en una célula gía). La transformación de energía más básica ocurre durante
vegetal. 1) Ejemplo de compartimentación de la membrana en el que las la fotosíntesis, cuando los pigmentos unidos a la membrana
enzimas hidrolíticas (hidrolasas ácidas) son secuestradas dentro de la va- absorben la energía de la luz solar, esta se convierte en ener-
cuola limitada por la membrana. 2) Ejemplo del papel de las membranas gía química y se almacena en los carbohidratos. Las membra-
citoplasmáticas como un sitio de localización de enzimas. Una enzima que nas también están involucradas en la transferencia de energía
está asociada con la superficie externa de las membranas tilacoides de
química de carbohidratos y grasas al ATP. En las eucariotas, la
los cloroplastos cataliza la fijación de CO2 por la célula de la planta. 3)
Ejemplo del papel de las membranas como barrera selectivamente per- maquinaria para estas conversiones de energía está contenida
meable. Las moléculas de agua pueden penetrar rápidamente a través de en las membranas de cloroplastos y mitocondrias.
la membrana plasmática, lo que hace que la célula de la planta llene el es-
pacio disponible y ejerza presión sobre su pared celular. 4) Ejemplo de En este capítulo nos concentraremos en la estructura y las funcio-
transporte de solutos. Los iones de hidrógeno, que se producen mediante nes de la membrana plasmática, pero hay que recordar que los
diversos procesos metabólicos en el citoplasma, se bombean desde las principios discutidos aquí son comunes a todas las membranas
células vegetales al espacio extracelular mediante una proteína de trans-
celulares. Los aspectos especializados de la estructura y funciones
porte ubicada en la membrana plasmática. 5) Ejemplo de la participación
de una membrana en la transferencia de información de un lado a otro de las membranas mitocondriales, cloroplastos, citoplasmáticas,
(transducción de señales). En este caso, una hormona —por ejemplo, áci- y nucleares, se analizarán en los capítulos 5, 6, 8 y 12, respectiva-
do abscísico— se une a la superficie externa de la membrana plasmática y mente.
desencadena la liberación de un mensaje químico en el citoplasma (como
el inositol trifosfato, IP3). En este caso el IP3 induce la liberación de iones
Ca2+ desde un almacén citoplásmico. 6) Ejemplo de la función de las
Breve historia de los estudios sobre la
membranas en la comunicación célula-célula. Las aberturas entre las célu- estructura de la membrana plasmática
las vegetales adyacentes, llamadas plasmodesmos, permiten que los ma-
teriales se muevan directamente del citoplasma de una célula a sus veci- Las primeras ideas sobre la naturaleza química de la capa límite
nos. 7) Ejemplo del papel de las membranas en la transducción de externa de una célula fueron obtenidas por Ernst Overton, de la
energía. La conversión de difosfato de adenosina (ADP, adenosine diphos- Universidad de Zürich, durante la década de 1890. Overton sabía
phate) a trifosfato de adenosina (ATP, adenosine triphosphate) se produce que los solutos no polares se disolvían más fácilmente en disol-
en estrecha asociación con la membrana interna de la mitocondria.
ventes no polares que en disolventes polares, y que los solutos
polares tenían una solubilidad opuesta. Overton razonó que una
sustancia que ingresa a una célula desde el medio externo tendría
4. Transporte de solutos. La membrana plasmática contiene la que disolverse primero en la capa límite externa de esa célula.
maquinaria para transportar físicamente sustancias desde un Para probar la permeabilidad de la capa límite externa, Overton
lado a otro de ella, a menudo desde una región donde el solu- colocó pelos de raíz de plantas en cientos de soluciones diferentes
to se envía a baja concentración a una región donde ese soluto que contenían una gran variedad de solutos. Descubrió que cuan-
está presente a una concentración mucho mayor. La maquina- to más lipidosoluble era el soluto, más rápido entraría en las célu-
ria de transporte de la membrana permite que una célula acu- las de los pelos radiculares. Llegó a la conclusión de que el poder
mule sustancias como azúcares y aminoácidos, necesarias de disolución de la capa límite externa de la célula era igual al de
para alimentar su metabolismo y construir sus macromolécu- un aceite graso.
 R
117
–
O P O
O
HCH H

4.1 ӝ Introducción a la membrana plasmática

HC CH
O O
C O C O
HCH HCH
HCH HCH
HCH HCH
b)
HCH HCH
HCH HCH
HCH HCH
Barrera Barrera HCH HCH
estacionaria móvil CH
Lípidos HCH
CH
HCH
HCH
HCH
HCH
HCH HCH
HCH HCH
HCH HCH
HCH HCH
H H
a) c)

FIGURA 4-3 La membrana plasmática contiene una bicapa lipídica. a) Cálculo del área de superficie de una preparación de lípidos. Cuando una mues-
tra de fosfolípidos se disuelve en un disolvente orgánico como el hexano y se extiende sobre una superficie acuosa, las moléculas de fosfolípidos forman
una capa sobre el agua que tiene una sola molécula de espesor: una capa monomolecular. Las moléculas en la capa están orientadas con sus grupos hi-
drofílicos unidos a la superficie del agua, y sus cadenas hidrofóbicas dirigidas al aire. Para estimar el área superficial que cubrirían los lípidos si fueran
parte de una membrana, las moléculas de lípidos se pueden comprimir en el área más pequeña posible mediante barreras móviles. Utilizando este tipo
de aparato, que se llama pesebre de Langmuir por su inventor, Gorter y Grendel concluyeron que los glóbulos rojos contenían suficiente lípido para for-
mar una capa sobre su superficie que tenía dos moléculas de grosor: una bicapa. b) Como Gorter y Grendel propusieron por primera vez, el núcleo de
una membrana contiene una capa bimolecular de fosfolípidos orientados con sus grupos cabeza solubles en agua que miran hacia las superficies
externas, y sus colas de ácidos grasos hidrófobos que miran hacia el interior. Las estructuras de los grupos cabeza se muestran en la figura 4-6a).
c) Simulación de una bicapa de lípidos completamente hidratada compuesta del fosfolípido fosfatidilcolina. Los grupos cabeza de fosfolípidos son mora-
dos, las moléculas de agua son azules, las cadenas de ácidos grasos son verdes.
FUENTE: c) Simulación de una bicapa lipídica completamente hidratada. Los grupos cabeza de fosfolípidos se muestran en azul y naranja, las moléculas
de agua en rojo y blanco, y las cadenas de ácido graso son verdes.

La primera propuesta de que las membranas celulares po- En los años 1920 y 1930 los fisiólogos celulares obtuvieron
drían contener una bicapa lipídica fue realizada en 1925 por dos evidencias de que debe haber más en la estructura de las mem-
científicos holandeses, E. Gorter y F. Grendel. Estos investigado- branas que simplemente una bicapa lipídica. Se encontró, por
res extrajeron los lípidos de los glóbulos rojos humanos, y midie- ejemplo, que la solubilidad de los lípidos no era el único factor
ron la cantidad de área superficial que cubrían los lípidos cuando para determinar si una sustancia podía penetrar en la membrana
se extendían sobre la superficie del agua (consúltese FIGURA 4-3a). plasmática. De manera similar se calculó que las tensiones super-
Como los glóbulos rojos de mamíferos maduros carecen tanto de ficiales de las membranas son mucho más bajas que las de las
núcleos como de organelos citoplásmicos, la membrana plasmáti- estructuras lipídicas puras. Esta disminución en la tensión super-
ca es la única estructura que contiene lípidos en la célula. En ficial podría explicarse por la presencia de proteínas en la mem-
consecuencia, se podía suponer que todos los lípidos extraídos de brana.
las células residían en las membranas plasmáticas de las células. Estas proteínas están presentes en forma de moléculas indivi-
La relación entre el área superficial de agua cubierta por el lípido duales de proteína, y complejos proteicos que penetran en una
extraído, y el área superficial calculada para los glóbulos rojos de bicapa lipídica fluida (véase FIGURA 4-4a), y se extienden hacia el
los que se extrajo el lípido varió de 1.8 a 1 y de 2.2 a 1. Gorter y entorno acuoso circundante (véase figura 4-4b). Debido a la flui-
Grendel especularon que la proporción real era 2:1 y concluyeron dez de los lípidos, las membranas celulares de la capa son estruc-
que la membrana plasmática contenía una capa bimolecular de turas dinámicas en las que los componentes son móviles, y capa-
lípidos, es decir, una bicapa lipídica (obsérvese figura 4-3b). ces de unirse para participar en diversos tipos de interacciones
También sugirieron que los grupos polares de cada capa (u hoja) transitorias o semipermanentes.
individual se dirigían hacia afuera, hacia el entorno acuoso, como
se muestra en la figura 4-3b), c). Esta sería la disposición termodi-
námicamente preferida, porque los grupos de cabeza polar de los REPASO
lípidos podrían interactuar con las moléculas de agua circundan- 1. Describa algunas de las tareas importantes de las membranas
tes, del mismo modo que las cadenas de acilo graso hidrofóbicas en la vida de una célula eucariótica. ¿Cuál cree usted que po-
estarían protegidas del contacto con el medio acuoso (véase figu- dría ser el efecto de una membrana incapaz de realizar una u
ra 4-3c). De aquí que los grupos de cabeza polar se enfrentarían otra de estas funciones?
al citoplasma en un borde, y al plasma sanguíneo en el otro. A 2. Resuma algunos de los principales pasos que conducen al
pesar de que Gorter y Grendel cometieron varios errores experi- modelo actual de la estructura de la membrana. ¿Cómo con-
mentales (que fortuitamente se cancelaron entre sí), llegaron a la serva cada nuevo modelo ciertos principios básicos de los
conclusión correcta de que las membranas contienen una bicapa modelos anteriores?
lipídica.
 118
Oligosacárido Glucoproteínas
Glucolípido
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Proteínas
Hélice integrales Fosfolípido
α hidrofóbica Colesterol
Proteína
periférica

b)
a)
FIGURA 4-4 La membrana plasmática como lípidos más proteínas. a) Representación de la membrana plasmática que muestra la organización de las
proteínas incrustadas en la bicapa lipídica. La superficie externa de la mayoría de las proteínas de membrana, así como un pequeño porcentaje de los
fosfolípidos, contienen cadenas cortas de azúcares, lo que las convierte en glucoproteínas y glucolípidos. Esas porciones de las cadenas polipeptídicas
que se extienden a través de la bicapa lipídica suelen producirse como hélices α compuestas de aminoácidos hidrófobos. Las dos hojas de la bicapa
contienen diferentes tipos de lípidos, según lo indicado por los grupos cabeza de diferentes colores. b) Modelo molecular de la membrana de una vesícu-
la sináptica construida con estructuras conocidas de varias proteínas, junto con información sobre sus números relativos obtenidos a partir del análisis de
vesículas sinápticas purificadas. Es evidente la alta densidad proteica de la membrana. La mayoría de las proteínas en esta membrana son necesarias pa-
+
ra la interacción de la vesícula con la membrana plasmática. La gran proteína azul en la parte inferior derecha bombea iones H hacia la vesícula.
FUENTE: b) De Shigeo Takamori, et al. Cortesía de Reinhard Jahn, Cell 2006;127:841, reimpreso con permiso de Elsevier.

4.2 Composición lipídica

de las membranas
Las membranas son ensambles de lípidos y proteínas en las que
los componentes se mantienen unidos en una lámina delgada
mediante enlaces no covalentes. Como se observa en la página
117, el núcleo de la membrana consiste en una lámina de lípidos
dispuesta en una capa bimolecular (véase figura 4-3b), c). La bica-
pa lipídica sirve principalmente como columna estructural de la
Vaina de
membrana, y proporciona una barrera que evita los movimientos mielina
aleatorios de los materiales solubles en agua hacia dentro y fuera
de la célula. Las proteínas de la membrana, por otro lado, llevan
a cabo la mayoría de las funciones específicas resumidas en la fi-
gura 4-2. Cada tipo de célula diferenciada contiene un comple-
mento único de proteínas de membrana, que contribuye a las Axón
actividades especializadas de ese tipo de célula [véase figura
4-32d) para un ejemplo].
La relación de lípido a proteína en una membrana varía, en
dependencia del tipo de membrana celular (plasma vs. retículo
endoplasmático vs. Golgi), el tipo de organismo (bacteria vs.
planta vs. animal) y el tipo de célula (cartílago) vs. músculo vs.
hígado). Por ejemplo, la membrana mitocondrial interna tiene
una proporción muy alta de proteína/lípido en comparación con
la membrana plasmática de glóbulos rojos, que es alta en compa-
ración con las membranas de la vaina de mielina que forma una
envoltura de múltiples capas alrededor de una célula nerviosa
(véase FIGURA 4-5). En gran medida, estas diferencias se pueden
correlacionar con las funciones básicas de estas membranas. La FIGURA 4-5 Vaina de mielina. Microfotografía electrónica de un axón de
membrana mitocondrial interna contiene los portadores de pro- células nerviosas rodeado por una vaina de mielina, que consiste en ca-
teína de la cadena de transporte de electrones, y en relación con pas concéntricas de membrana plasmática con una relación proteína/lípi-
otras membranas los lípidos disminuyen. En contraste, la vaina do extremadamente baja. La vaina de mielina aísla la célula nerviosa del
de mielina actúa principalmente como aislamiento eléctrico para entorno circundante, lo que aumenta la velocidad a la que pueden viajar
los impulsos a lo largo del axón (se trata en la página 162). El espacio per-
la célula nerviosa que encierra, una función que se lleva a cabo
fecto entre las capas se mantiene mediante moléculas de proteínas entre-
mejor mediante una capa lipídica espesa de alta resistencia eléc- lazadas (llamadas P0) que se proyectan desde cada membrana.
trica, con un contenido mínimo de proteína. Las membranas FUENTE: De Leonard Napolitano, Francis LeBaron y Jospeh Scaletti. J Cell
también contienen carbohidratos, que están unidos a los lípidos Biol 1967;34:820. Reproducida con permiso de la Rockefeller University
y las proteínas como se indica en la figura 4-4a). Press.
Lípidos de membrana 119

Las membranas contienen una gran diversidad de lípidos, todos

ellos anfipáticos; es decir, contienen regiones hidrofílicas e hi-

4.2 ӝ Composición lipídica de las membranas

drofóbicas. Existen tres tipos principales de lípidos de membra-
na: fosfoglicéridos, esfingolípidos y colesterol.

FOSFOGLICÉRIDOS La mayoría de los lípidos de la

O
membrana contienen un grupo fosfato, que los convierte en fos- H2C O C (CH2)7CH=CH(CH2)7CH3
folípidos. Debido a que la mayor parte de los fosfolípidos de O
membrana se basan en un esqueleto de glicerol, se denominan HC O C (CH2)7CH=CH(CH2)7CH3
O
fosfoglicéridos (consúltese FIGURA 4-6a). A diferencia de los –
Ácido dioleoil O P O CH2
triglicéridos, que tienen tres ácidos grasos (página 46) y no son fosfatídico O
–

anfipáticos, los glicéridos de membrana son diglicéridos; solo dos

de los grupos hidroxilo del glicerol están esterificados a ácidos Ácido fosfatídico
H
grasos, el tercero está esterificado a un grupo fosfato hidrófilo.
Sin ninguna sustitución adicional más allá del fosfato y las dos +
O
cadenas de acilo graso, la molécula se llama ácido fosfatídico, que Fosfatidilcolina (CH3)3N CH2 CH2 H2C O C R
(lecitina) O
prácticamente no existe en la mayoría de las membranas. En cam- HC O C R'
+
bio, los fosfoglicéridos de membrana tienen un grupo adicional Fosfatidil serina H3N CH CH2 O
–
relacionado con el fosfato, por lo común de colina (que forma COO O P O CH2

fosfatidilcolina [PC, phosphatidylcholine]), etanolamina (que forma O–

Fosfatidil
fosfatidiletanolamina [PE, phosphatidylethanolamine]), serina (que etanolamina
+
H3N CH2 CH2
forma fosfatidilserina [PS, phosphatidylserine]) o inositol (que for- (cefalina)
ma fosfatidilinositol, [PI, phosphatidylinositol]). Cada uno de estos OH OH
grupos es pequeño e hidrofílico, y junto con el fosfato cargado Fosfatidil inositol H
H H
negativamente al que está unido forma un dominio altamente HO
OH H
H
soluble en agua en un extremo de la molécula, llamado grupo H OH
cabeza. En el pH fisiológico, los grupos cabeza de PS y PI tienen
una carga negativa general, mientras que los de PC y PE son neu- O
H2C O C R
tros. Por el contrario, las cadenas de acilo graso son hidrocarbu- O
ros hidrofóbicos no ramificados de aproximadamente 16 a 22 HC O C R'
carbonos de longitud (consúltese figura 4-6a). Un ácido graso de O
CH2 O P O CH2
membrana puede estar completamente saturado (es decir, no po-
Difosfatidil O–
seer enlaces dobles), ser monoinsaturado (es decir, tener un do- glicerol
HO C H
O–
ble enlace) o ser poliinsaturado (poseer más de un doble enlace). (cardiolipina) CH2 O P O CH2
Los fosfoglicéridos a menudo contienen una cadena de ácido gra- O
HC O C R''
so insaturado y una de ácido graso saturado. Intereses recientes
O
se han centrado en los aparentes beneficios para la salud de dos C O C R'''
H2
ácidos grasos altamente insaturados (ácido icosapentaenoico a) O
[EPA, eicosapentaenoic acid] y ácido docosahexaenoico [DHA, do-
cosahexaenoic acid]), que se encuentran en altas concentraciones H H
en el aceite de pescado. El EPA y el DHA contienen cinco y seis Esfingosina HO CH2 C C CH CH (CH2)12CH3
dobles enlaces respectivamente, y se incorporan sobre todo en las NH3 OH
+

moléculas de PE y PC de ciertas membranas, en especial en el

H H
cerebro y la retina. El EPA y el DHA se describen como ácidos
grasos omega-3 debido a que su último doble enlace está situado Ceramida HO CH2 C C CH CH (CH2)12CH3
NH OH
a tres carbonos del extremo omega (CH3) de la cadena de acilo O C R
graso. Con las cadenas de ácidos grasos en un extremo de la mo-
lécula y un grupo de cabeza polar en el otro extremo, todos los +
O H H
fosfoglicéridos muestran un definido carácter anfipático. Esfingomielina (CH3)3N CH2 CH2 O P O CH2 C C CH CH (CH2)12CH3
–
O NH OH
O C R
ESFINGOLÍPIDOS Una clase menos abundante de lípi-
dos de membrana llamados esfingolípidos se derivan de la esfin-
gosina, un aminoalcohol que contiene una larga cadena de hidro- Cerebrósido Gal Ceramida

carburos (véase figura 4-6b). Los esfingolípidos consisten en

esfingosina unida a un ácido graso por su grupo amino (R en fi-
gura 4-6b). Esta molécula es una ceramida. Los diversos lípidos Gangliósido GalNAc Gal Glu Ceramida
(GM2)
con base en la esfingosina tienen grupos adicionales esterificados
SiA
al alcohol terminal del resto esfingosina. Si la sustitución es fos- b)
forilcolina, la molécula es esfingomielina, único fosfolípido de la
membrana que no está construido con una cadena principal de FIGURA 4-6 Estructura química de los lípidos de la membrana.
glicerol. Si la sustitución es un hidrato de carbono, la molécula es a) Estructuras de los fosfoglicéridos (véase también figura 2-22).
un glucolípido. Si el carbohidrato es un azúcar simple, el glucolípi- b) Estructuras de los esfingolípidos. La esfingomielina es un fosfolípido;
los cerebrósidos y los gangliósidos son glucolípidos. Un tercer lípido de
do se llama cerebrósido; si se trata de un pequeño grupo de membrana es el colesterol, que se muestra en la siguiente figura. (R = ca-
azúcares que incluye ácido siálico, el glucolípido se llama gan- dena de acilo graso). [La porción verde de cada lípido, que representa
gliósido. Cientos de diferentes gangliósidos han sido identifica- la(s) cola(s) hidrofóbica(s) de la molécula, es en realidad mucho más larga
dos por las diferencias en sus cadenas de carbohidratos. Como que el grupo de cabeza hidrofílico (véase figura 4-23)].
 120 todos los esfingolípidos tienen dos largas cadenas de hidrocarbu- Naturaleza e importancia
ros hidrofóbicas en un extremo y una región hidrofílica en el otro,
de la bicapa lipídica
también son anfipáticos y básicamente similares en estructura
general a los fosfoglicéridos. Sin embargo, las cadenas de acilo Cada tipo de membrana celular tiene su propia composición lipí-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

graso de los esfingolípidos tienden a ser más largas y más alta- dica característica, y se diferencian unas de las otras en los tipos
mente saturadas que las de los fosfoglicéridos. de lípidos, la naturaleza de los grupos cabeza y las especies parti-
Los glucolípidos son componentes de membrana interesan- culares de la(s) cadena(s) de acilo graso. Por esta variabilidad es-
tes. Se sabe relativamente poco acerca de ellos sin embargo, han tructural, se estima que algunas membranas biológicas contienen
surgido sugerentes indicios sobre su desempeño crucial en la fun- cientos de especies químicas diferentes de fosfolípidos, que pue-
ción celular. El sistema nervioso es particularmente rico en gluco- den catalogarse mediante espectrometría de masas. La importan-
lípidos. La vaina de mielina representada en la figura 4-5 contie- cia biológica de esta notable diversidad de especies de lípidos si-
ne un alto contenido de un glucolípido particular, llamado gue siendo objeto de interés y especulación.
galactocerebrósido (que se muestra en la figura 4-6b), que se for- En la tabla 4-1 aparecen los porcentajes de algunos de los
ma cuando se agrega una galactosa a la ceramida. Los ratones que principales tipos de lípidos de una variedad de membranas. Los
carecen de la enzima que lleva a cabo esta reacción presentan lípidos de una membrana son más que simples elementos estruc-
temblores musculares severos y eventual parálisis. Del mismo turales; pueden tener importantes efectos sobre las propiedades
modo, los seres humanos que no pueden sintetizar un gangliósi- biológicas de una membrana. La composición lipídica puede de-
do particular (GM3) sufren de una enfermedad neurológica agu- terminar el estado físico de la membrana (consúltese página 131),
da, caracterizada por convulsiones graves y ceguera. Los glucolí- e influir en la actividad de las proteínas de membrana particula-
pidos también desempeñan un papel en ciertas enfermedades res. Los lípidos de membrana también proporcionan los precur-
infecciosas; las toxinas que causan el cólera y el botulismo ingre- sores de mensajeros químicos altamente activos que regulan la
san a su célula objetivo uniéndose primero a los ganglios de la función celular (consúltese sección 15.6).
superficie celular, como lo hace el virus de la influenza. Varios tipos de mediciones indican que las cadenas de acilo
graso combinadas de ambas cubiertas de la bicapa lipídica abar-
COLESTEROL Otro componente lipídico de ciertas mem- can un ancho de aproximadamente 30 Å, y que cada fila de gru-
branas es el esterol colesterol (véase figura 2-21), que en ciertas pos cabeza (con su corteza adyacente de moléculas de agua) agre-
células animales puede constituir hasta 50% de las moléculas de ga otros 15 Å. Por tanto, toda la bicapa lipídica tiene un espesor
lípidos en la membrana plasmática. Las células vegetales contie- de solo 60 Å (6 nm). La presencia en las membranas de esta pelí-
nen esteroles similares al colesterol, pero los biólogos no están de cula delgada de moléculas de lípidos anfipáticos tiene consecuen-
acuerdo en si carecen completamente de colesterol. Las molécu- cias notables para la estructura y la función de la célula. Por razo-
las de colesterol están orientadas con su pequeño grupo hidroxilo nes termodinámicas, las cadenas hidrocarbonadas de la bicapa
hidrofílico hacia la superficie de la membrana, y el resto de la lipídica nunca se exponen a la solución acuosa circundante. En
molécula incrustada en la bicapa lipídica (consúltese FIGURA 4-7). consecuencia, nunca se ha visto que las membranas tengan un
Los anillos hidrofóbicos de una molécula de colesterol son planos borde libre; ellos son siempre estructuras continuas e ininterrum-
y rígidos, e interfieren con los movimientos de las colas de ácidos pidas. Como resultado, las membranas forman redes interconec-
grasos de los fosfolípidos (consúltese página 131). tadas extensas dentro de la célula. Debido a la flexibilidad de la
bicapa lipídica, las membranas son deformables y su forma gene-
ral puede cambiar, como ocurre durante la locomoción (obsérve-
se FIGURA 4-8a), o la división celular (véase figura 4-8b). Se cree
que la bicapa lipídica facilita la fusión regulada o la gemación de
las membranas. Por ejemplo, los eventos de secreción, en los cua-
les las vesículas citoplásmicas se fusionan con la membrana plas-
mática (véase figura 4-8c), o de la fertilización, donde dos células
se fusionan para formar una sola célula, involucran procesos en
los que dos membranas separadas se unen para convertirse
en una sola superficie continua (véase figura 8-32). A lo largo de
este capítulo, y en los siguientes, se hará evidente la importancia
de la bicapa lipídica en el mantenimiento de la composición in-
terna adecuada de una célula, en la separación de cargas eléctri-
cas a través de la membrana plasmática, y en muchas otras activi-
dades celulares.
Otra característica significativa de la bicapa lipídica es su ca-
pacidad de autoensamblarse, lo que se puede demostrar con ma-
yor facilidad dentro de un tubo de ensayo que una célula viva. Por
ejemplo, si se dispersa una pequeña cantidad de fosfatidilcolina
en una solución acuosa, las moléculas de fosfolípidos se ensam-
blan espontáneamente para formar las paredes de las vesículas
esféricas llenas de líquido, llamadas liposomas. Las paredes de
FIGURA 4-7 Las moléculas de colesterol (mostradas en verde) de una bi- estos liposomas consisten en una bicapa lipídica continua que se
capa lipídica están orientadas con su pequeño extremo hidrofílico dirigido organiza de la misma manera que la de la bicapa lipídica de una
hacia la superficie externa de la bicapa, y el grueso de su estructura está membrana natural. Los liposomas han demostrado ser inaprecia-
empaquetado entre las colas de ácidos grasos de los fosfolípidos. La co- bles en la investigación de membranas. Las proteínas de membra-
locación de las moléculas de colesterol interfiere con la flexibilidad de las na pueden insertarse en los liposomas, y su función se puede
cadenas de hidrocarburos lipídicos, lo que tiende a endurecer la bicapa
mientras mantiene su fluidez general. A diferencia de otros lípidos de la
estudiar en un entorno mucho más simple que en el de una mem-
membrana, el colesterol a menudo se distribuye bastante uniformemente brana natural. Los liposomas también se han desarrollado como
entre las dos capas u hojas. vehículos para administrar fármacos o moléculas de DNA dentro
FUENTE: De HL Scott. Curr Opin Struc Biol 2002;12:499, figura 3. ©2002, del cuerpo. Los fármacos o el DNA se pueden unir a la pared del
con permiso de Elsevier. liposoma, o contener una alta concentración dentro de su lumen
TABLA 4-1 Composición lipídica de algunas membranas biológicas* 121

Lípido Eritrocito humano Mielina humana Mitocondria de corazón bovino E. coli

Ácido fosfatídico 1.5 0.5 0 0

4.2 ӝ Composición lipídica de las membranas

Fosfatidilcolina 19 10 39 0
Fosfatidil-etanolamina 18 20 27 65
Fosfatidilglicerol 0 0 0 18
Fosfatidilserina 8.5 8.5 0.5 0
Cardiolipina 0 0 22.5 12
Esfingomielina 17.5 8.5 0 0
Glucolípidos 10 26 0 0
Colesterol 25 26 3 0

* Los valores dados son el porcentaje en peso de los lípidos totales.

Fuente: C. Tanford. The Hydrophobic Effect, p. 109, copyright 1980, John Wiley & Sons, Inc. Reproducida con permiso de John Wiley & Sons, Inc.

a) b) c)
FIGURA 4-8 Propiedades dinámicas de la membrana plasmática. a) El borde de ataque de una célula en movimiento a menudo contiene sitios donde la
membrana plasmática muestra volantes ondulantes. b) La división de una célula va acompañada de la deformación de la membrana plasmática mientras
se atrae hacia el centro de la célula. A diferencia de la mayoría de las células en división, el surco de escisión de este huevo ctenóforo en división co-
mienza en un polo y se mueve unidireccionalmente a través del huevo. c) Las membranas son capaces de fusionarse con otras membranas. Esta micro-
grafía electrónica muestra un gránulo secretor que descarga su contenido después de la fusión con la membrana plasmática superpuesta (flechas).
FUENTE: a) cortesía de Jean Paul Revel; b) cortesía de Gary Freeman; c) cortesía de Susan Jo Burwen.

(véase figura 4-9). En estos estudios las paredes de los liposomas

están construidas para contener proteínas específicas (como anti-
Capa protectora
cuerpos u hormonas), que permiten que los liposomas se unan de polietilenglicol Anticuerpo
selectivamente a las superficies de la célula blanco particular a la
que se destina el fármaco o el DNA. La mayoría de los primeros
estudios clínicos con liposomas no dieron frutos, porque las vesí-
culas inyectadas fueron eliminadas rápidamente por las células
fagocíticas del sistema inmune. Este obstáculo se ha superado con
el desarrollo de los llamados liposomas sigilosos, que contienen
un recubrimiento externo de un polímero sintético que protege a
los liposomas de la destrucción inmune (consúltese FIGURA 4-9).
Un ejemplo importante es el Caelyx, un liposoma sigiloso que
contiene el fármaco de quimioterapia doxorrubicina. El Caelyx es
ahora una terapia aceptada para el tratamiento del cáncer de ma-
ma metastásico.
Fármaco Fármaco
Asimetría de los lípidos de la membrana cristalizado en liposoluble
el fluido acuoso Bicapa lipídica en la bicapa
La bicapa lipídica consiste en dos hojas distintas, que tienen una
composición lipídica claramente diferente. Un conjunto de expe-
rimentos que ha llevado a esta conclusión aprovecha el hecho de FIGURA 4-9 Liposomas. Un diagrama esquemático de un liposoma oculto
que contiene un polímero hidrofílico (como polietilenglicol) para protegerlo
que las enzimas que digieren lípidos no pueden penetrar en la de la destrucción por las células inmunes; moléculas de anticuerpos que
membrana plasmática, y en consecuencia solo pueden digerir lí- lo dirigen a tejidos corporales específicos; un fármaco soluble en agua en-
pidos que residen en la capa externa de la bicapa. Si los glóbulos cerrado en la cámara interior llena de líquido, y un fármaco liposoluble en
rojos humanos intactos se tratan con una fosfolipasa digestiva de la bicapa.
 122 Exoplásmico
25
4.3 Carbohidratos de membrana
SM PC PS PE PI Cl
Las membranas plasmáticas de las células eucariotas también
contienen carbohidratos. En dependencia de la especie y del tipo

% total de lípidos en membrana

CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

de célula, el contenido de carbohidratos de la membrana plasmá-

tica oscila entre 2 y 10% en peso. Más de 90% de los carbohidratos
de la membrana se unen en forma covalente a las proteínas para
formar glucoproteínas; el carbohidrato restante está ligado en for-
0 ma covalente a los lípidos para formar glucolípidos, lo cual se
discutió en la página 119. Como se indica en la figura 4-4c), todos
los carbohidratos de la membrana plasmática miran hacia afuera
1
en el espacio extracelular. El carbohidrato de las membranas ce-
lulares internas también se orienta hacia fuera del citosol (la base
para esta orientación se ilustra en la figura 8-14).
La modificación de proteínas se discutió brevemente en la
25 Citosólico página 50. La adición de carbohidratos, o glucosilación, es
la más compleja de estas modificaciones. El carbohidrato de las
FIGURA 4-10 Distribución asimétrica de los fosfolípidos (y el colesterol) glucoproteínas está presente como oligosacáridos hidrofílicos
en la membrana plasmática de los eritrocitos humanos. (SM: esfingomie- cortos ramificados, que es usual posean menos de unos 15 azúca-
lina, PC: fosfatidilcolina, PS: fosfatidilserina, PE: fosfatidiletanolamina, PI: res por cadena. A diferencia de la mayoría de los carbohidratos de
fosfatidilinositol, Cl: colesterol).
alto peso molecular (como el glucógeno, almidón o celulosa), que
son polímeros de un solo azúcar, los oligosacáridos unidos a las
proteínas de membrana y a los lípidos pueden mostrar una gran
lípidos, aproximadamente 80% de la fosfatidilcolina (PC) de la variabilidad en la composición y estructura. Incluso la misma pro-
membrana se hidroliza, pero solo alrededor de 20% de la fosfati- teína puede mostrar diferentes cadenas de azúcares en distintas
diletanolamina (PE) de la membrana y menos de 10% de su fosfa- células y tejidos. Los oligosacáridos se pueden unir a varios ami-
tidilserina (PS) son atacados. Estos datos indican que, en compa- noácidos diferentes mediante dos tipos principales de enlaces
ración con la capa interna, la capa externa tiene una concentración (consúltese FIGURA 4-11). Estas proyecciones de carbohidratos
relativamente alta de PC (y esfingomielina) y baja concentra- realizan un papel importante en la mediación de las interacciones
ción de PE y PS (consúltese FIGURA 4-10). De esto se deduce que de una célula con su entorno (véase capítulo 7), y en la clasifica-
se puede pensar que la bicapa lipídica está compuesta de dos ción de proteínas de membrana en diferentes compartimientos
monocapas independientes más o menos estables, que tienen di- celulares (consúltese capítulo 8). Los carbohidratos de los glucolí-
ferentes propiedades físicas y químicas. pidos en la membrana plasmática de los glóbulos rojos determi-
Las diferentes clases de lípidos en la figura 4-10 exhiben pro- nan si el tipo de sangre de una persona es A, B, AB u O (obsérve-
piedades distintas. Todos los glucolípidos de la membrana plas- se FIGURA 4-12). Una persona que tiene sangre tipo A tiene una
mática se encuentran en la capa externa, donde a menudo sirven enzima que agrega N-acetilgalactosamina al final de la cadena,
como receptores para ligandos extracelulares. La fosfatidiletano-
lamina, que se concentra en la capa interna, tiende a promover la 1
Se debe notar que aunque el fosfatidilinositol contiene un grupo de azúcar
curvatura de la membrana, lo que es importante en la gemación (véase figura 4-6), en esta discusión no se considera que sea parte de la
y la fusión de la membrana. La fosfatidilserina, que se concentra porción de carbohidrato de la membrana.
en la capa interna, tiene una carga neta negativa a pH fisiológico,
lo que la hace candidata para unirse a residuos de lisina y argini- Asparagina

na cargados positivamente, como los adyacentes a la hélice α de

membrana de la glucoforina A en la figura 4-18. La aparición
de PS en la superficie externa de los linfocitos envejecidos marca CH2OH
O NH
las células para que los macrófagos las destruyan, mientras que su H O H
H N C CH2 CH
aparición en la superficie externa de las plaquetas conduce a la
coagulación de la sangre. El fosfatidilinositol (PI), que se concen- OH H C O
O H
tra en la capa interna, se puede fosforilar en diferentes sitios en Columna vertebral
polipétido
del polipéptido
el anillo de inositol, que convierte el lípido en un fosfoinosítido. H NHCOCH3
Como se discutió en el capítulo 15, los fosfoinosítidos desempe- N-acetilgalactosamina
ñan un papel clave en la transferencia de estímulos de la membra-
na plasmática al citoplasma (consúltese sección 15.6) y en el re- Serina (X=H)
Treonina (X=CH3)
clutamiento de proteínas en la cara citosólica de la membrana
plasmática.
CH2OH
X NH
O
REPASO O O CH CH
1. Dibuje la estructura básica de los principales tipos de lípidos OH C O
que se encuentran en las membranas celulares. ¿Cómo difie- H H
ren los esfingolípidos de los glicerolípidos? ¿Cuáles lípidos son H NHCOCH3
fosfolípidos? ¿Cuáles son glucolípidos? ¿Cómo se organizan
estos lípidos en una bicapa? ¿Qué importancia tiene la bicapa N-acetilglucosamina
para las actividades de la membrana?
FIGURA 4-11 Dos tipos de enlaces que unen azúcares a una cadena po-
2. ¿Qué es un liposoma? ¿Cómo se usan los liposomas en las te- lipeptídica. El enlace N-glucosídico entre la asparagina y N-acetilglucosa-
rapias médicas? mina es más común que el enlace O-glucosídico entre la serina o treonina
y N-acetilgalactosamina.
 123
Gal GlcNAc Gal Glu

Fuc

4.4 ӝ Proteínas de membrana

O antígeno

GalNAc Gal GlcNAc Gal Glu

Fuc

A antígeno

Proteínas integrales
Gal Gal GlcNAc Gal Glu a) de membrana

Fuc

B antígeno Proteína de membrana periférica

FIGURA 4-12 Antígenos de los grupos sanguíneos. Que una persona

tenga sangre de tipo A, B, AB u O está determinado por una cadena corta
de azúcares unida en forma covalente a lípidos y proteínas de membra-
na de los glóbulos rojos. Aquí se muestran los oligosacáridos unidos a los
lípidos de membrana (que forman un gangliósido) que producen los tipos
de sangre A, B y O. Una persona con sangre tipo AB tiene ganglios con
las estructuras A y B. (Gal: galactosa; GlcNAc: N-acetilglucosamina; Glu:
glucosa; Fuc: fucosa; GalNAc: N-acetilgalactosamina).

mientras que una persona con sangre tipo B tiene una enzima
que añade galactosa al final de la cadena. Versiones alternas del
mismo gen codifican estas dos enzimas, aunque ellas reconocen
sustratos diferentes. Las personas con el grupo sanguíneo AB po-
seen ambas enzimas, mientras que aquellos con el grupo sanguí-
neo O carecen de enzimas capaces de enlazar cualquiera de los Proteínas de
azúcares terminales. Las modificaciones ABO de los carbohidra- b) membrana
tos se encuentran en muchos otros tejidos además de la sangre, y periférica
la variación genética en el gen AB es un fuerte predictor de riesgo
para el cáncer de páncreas, la enfermedad cardiaca y la infección Etn
viral, pero la función bioquímica de los antígenos de los grupos Proteína anclada a GPI
P

sanguíneos ABO permanece en el misterio. I

Man GlcNAc
0 0
REPASO 0 Man 0 P
Man
C Etn P 0
1. ¿Qué es un oligosacárido? ¿Cómo están ligados a las proteí-
P
nas de membrana? ¿Cómo están relacionados con los grupos Etn
sanguíneos humanos?

4.4 Proteínas de membrana

En dependencia del tipo de célula y el organelo particular dentro
de esa célula, una membrana puede contener cientos de proteí-
nas diferentes. Cada proteína de membrana tiene una orienta-
ción definida relativa al citoplasma, de modo que las propiedades Citoplasma
de una superficie de membrana son muy diferentes a las de la
otra superficie (como en la figura 4-4a). Esta asimetría se conoce Proteína anclada a lípidos
como “lateralidad” de la membrana. En la membrana plasmática,
por ejemplo, aquellas partes de las proteínas de membrana que c)
interactúan con otras células o con sustancias extracelulares están
FIGURA 4-13 Tres clases de proteína de membrana. a) Las proteínas inte-
expuestas al espacio extracelular, mientras que aquellas partes de grales por lo general contienen una o más hélices transmembrana (véase
proteínas de membrana que interactúan con las moléculas cito- figura 5-4 para una excepción). b) Las proteínas periféricas están unidas
plasmáticas están expuestas al citosol. Las proteínas de membra- en forma no covalente a los grupos cabeza polar de la bicapa lipídica y/o
na pueden agruparse en tres clases diferentes que se distinguen a una proteína integral de membrana. c) Las proteínas ancladas a lípidos
por la intimidad de su relación con la bicapa lipídica (véase se unen en forma covalente a un grupo de lípidos que residen dentro de
la membrana. El lípido puede ser fosfatidilinositol, un ácido graso, o un
FIGURA 4-13). Estas son:
grupo prenilo (un hidrocarburo de cadena larga construido a partir de uni-
dades isoprenoides de cinco carbonos). I: inositol; GlcNAc:
1. Proteínas integrales (consúltese figura 4-13a) que penetran N-acetilglucosamina; Man: manosa; Etn: etanolamina; GPI; glicosilfosfatidili-
en la bicapa lipídica. Las proteínas integrales son proteínas nositol.
 124 transmembrana; es decir, traspasan totalmente la bicapa lipí-
dica, y por ello tienen dominios que sobresalen de los lados
extracelular y citoplásmico de la membrana. Algunas proteínas
integrales tienen un solo segmento abarcador de membrana,
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

mientras que otras son multiabarcadoras. Los estudios de se-

cuenciación del genoma sugieren que las proteínas integrales
constituyen 25-30% de todas las proteínas codificadas, y alre-
dedor de 60% de todos los objetivos farmacológicos actuales.
2. Proteínas periféricas (véase figura 4-13b) que se localizan
completamente fuera de la bicapa lipídica, ya sea en el lado
citoplásmico o extracelular, aunque asociadas con la superfi-
cie de la membrana por enlaces no covalentes.
3. Proteínas ancladas a lípidos (véase figura 4-13c) que se lo-
calizan fuera de la bicapa lipídica, ya sea en la superficie ex-
tracelular o citoplásmica, pero unidas en forma covalente a
una molécula de lípido que se encuentra dentro de la bicapa.

Proteínas integrales de membrana

La mayoría de las proteínas integrales de membrana funcionan en
las siguientes capacidades: como receptoras que unen sustancias
específicas en la superficie de la membrana, como canales o trans-
portadores involucrados en el movimiento de iones y solutos a
a)
través de la membrana, o como agentes que transfieren electrones
durante los procesos de fotosíntesis y respiración. Al igual que los
fosfolípidos de la bicapa, las proteínas integrales de membrana
también son anfipáticas, y tienen porciones hidrofílicas e hidrofó-
bicas. Como se analiza a continuación, aquellas porciones de una
Bicapa
proteína de membrana integral que residen dentro de la bicapa lipídica
lipídica —los dominios transmembrana— tienden a tener un carác-
ter hidrofóbico. Los residuos de aminoácidos en los dominios
transmembrana forman interacciones de Van der Waals con las
cadenas de acilo graso de la bicapa, que sella la proteína en la
“pared” lipídica de la membrana. Como resultado, la barrera de
permeabilidad de la membrana se conserva, la proteína se ancla b)
dentro de la bicapa y se pone en contacto directo con las molécu-
FIGURA 4-14 Interacciones entre proteínas y lípidos de membrana. a) La
las de lípidos circundantes (consúltese FIGURA 4-14a). Según el
acuaporina es una proteína de membrana que contiene cuatro subunida-
consenso actual, la mayoría de las moléculas de lípidos que entran des (coloreadas de forma diferente en la ilustración), y cada subunidad
en contacto con un dominio transmembrana, como las que se contiene un canal acuoso. El análisis de la estructura de la proteína reveló
muestran en la figura 4-14a), son simplemente espectadores pasi- la presencia de una capa circundante de moléculas lipídicas unidas. En
vos y se intercambian rápidamente con otras moléculas de lípidos este caso esas moléculas de lípidos probablemente no desempeñan un
en la bicapa. Sin embargo, cada vez hay más pruebas de que cier- papel en la función de la acuaporina, porque la proteína conserva su fun-
ción como un canal de agua en bicapas que contienen lípidos no nativos.
tos sitios en la superficie de muchas proteínas de membrana sí
b) Dos vistas de otra proteína de membrana tetramérica, en este caso el
forman importantes interacciones funcionales con moléculas es- +
canal K bacteriano, KcsA. Las moléculas de fosfatidilglicerol aniónico (ro-
pecíficas de lípidos. Un ejemplo de esto se muestra en la figura jo/gris) se ven en cada hendidura entre las subunidades, y se cree que
14-4b), donde se observa que las moléculas lipídicas aniónicas se son necesarias para la función del canal normal. Se ve un ion K+ (esfera
unen en la grieta en las interfaces entre las subunidades de un púrpura) en tránsito a través del poro.
+
canal K KcsA tetramérico. El canal normalmente no se abre en FUENTE: a) De Carola Hunte y Sebastian Richers, Curr Opin Struct Biol
una bicapa que carezca de estas moléculas lipídicas específicas. 18:407, © 2008, con permiso de Elsevier Science; b) De Anthony G. Lee,
Aquellas porciones de una proteína de membrana integral que Trends Biochem Sci 36:497, © 2011, con permiso de Elsevier Science.
se proyectan hacia el citoplasma, o hacia el espacio extracelular,
tienden a ser más parecidas a las proteínas globulares discutidas
en la sección 2.10. Estos dominios no incrustados tienden a tener
superficies hidrofílicas que interactúan con sustancias solubles en
agua en el borde de la membrana (sustratos de bajo peso molecu- capa, se derivó principalmente de los resultados de una técnica
lar, hormonas y otras proteínas). En algunas proteínas de membra- llamada replicación fractura por congelación (véase sección
na, los dominios transmembrana están esencialmente desprovis- 18.5). En este procedimiento el tejido se congela y luego se golpea
tos de moléculas de agua, mientras que otros permiten que el con una cuchilla, lo que fractura el bloque en dos partes. Cuando
disolvente acuoso penetre profundamente en las regiones de la esto ocurre, el plano de fractura a menudo toma un camino entre
proteína incrustada en la membrana. Varias grandes familias de las dos capas de la bicapa lipídica (consúltese FIGURA 4-15a). Una
proteínas de membrana contienen un canal interior que propor- vez que las membranas se dividen de esta manera, se depositan
ciona un conducto acuoso a través de la bicapa lipídica. Los reves- metales en las superficies expuestas para formar una réplica som-
timientos de estos canales suelen contener residuos hidrofílicos breada que se ve en el microscopio electrónico (véase figura 18-
clave en lugares estratégicos. Como se discutirá más adelante, las 20). Como se muestra en la figura 4-15b), la réplica se asemeja a
proteínas integrales no necesitan ser estructuras fijas, sino que se una carretera sembrada de guijarros, denominados partículas aso-
pueden mover lateralmente dentro de la membrana. ciadas a la membrana. Como el plano de fractura pasa por el centro
El concepto de que las proteínas penetran a través de las de la bicapa, la mayoría de estas partículas corresponden a pro-
membranas, en lugar de simplemente permanecer fuera de la bi- teínas integrales de la membrana, que se extienden al menos has-
 125
Exterior
P

4.4 ӝ Proteínas de membrana

Cara de fractura E
b)
Cara de fractura P

FIGURA 4-15 Fractura por congelación: una técnica para investigar la

estructura de la membrana celular. a) Cuando un bloque de tejido con-
gelado se golpea con una cuchilla, un plano de fractura atraviesa el tejido,
a menudo siguiendo un camino que lo lleva por el centro de la bicapa lipí-
Citoplasma dica. El plano de fractura rodea las proteínas en lugar de romperlas por la
a) mitad, que se segregan junto a una de las dos mitades de la bicapa. Las
caras expuestas dentro del centro de la bicapa se pueden cubrir con un
depósito de metal para formar una réplica metálica. Estas caras expuestas
se conocen como E, o cara ectoplásmica, y P, o cara protoplásmica. b)
Réplica de un eritrocito humano fracturado por congelación. La cara de
fractura P se ve cubierta con partículas de aproximadamente 8 nm de diá-
metro. Una pequeña cresta (flecha) marca la unión de la cara de la partí-
cula con el hielo circundante. c) Esta micrografía muestra la superficie de
un eritrocito que se congeló y luego se fracturó, pero en lugar de prepa-
rar una réplica la célula se descongeló, se fijó, y se marcó con un marca-
dor para los grupos de carbohidratos que se proyectan desde la superfi-
cie externa de la proteína incrustada glicoforina (véase figura 4-18). Las
secciones delgadas de la célula fracturada y etiquetada revelan que las
moléculas de glicoforina (partículas negras) se han segregado con prefe-
rencia en la mitad externa de la membrana. La línea roja muestra la ruta
Citoplasma del plano de fractura.
FUENTE: b) De Thomas W. Tillack y Vincent T. Marchesi. J Cell Biol
1970;45:649, reproducida con permiso de The Rockefeller University
Press; c) De Pedro Pinto Da Silva y Maria R. Torrisi. J Cell Biol 1982;93:467,
c) reproducida con permiso de The Rockefeller University Press.

ta la mitad del núcleo lipídico. Cuando el plano de fractura alcan- como factores que transmiten señales transmembrana (véase fi-
za una partícula dada, gira alrededor de ella en lugar de partirla gura 15-19). Es típico que las proteínas periféricas tengan una
a la mitad. En consecuencia, cada proteína (partícula) se separa relación dinámica con la membrana, sean reclutadas por la mem-
con la mitad de la membrana plasmática (obsérvese figura 4-15c), brana o liberadas de esta, en dependencia de las condiciones pre-
deja un orificio correspondiente en la otra mitad (véase figura valecientes.
7-27c). Uno de los grandes valores de la técnica de fractura por
congelación es que permite una investigación de la microhetero- Proteínas de membrana ancladas a lípidos
geneidad de la membrana. Las diferencias localizadas en las par-
tes de la membrana se destacan en estas réplicas y se pueden Se pueden distinguir varios tipos de proteínas de membrana an-
identificar (como se ilustra en la réplica de una unión gap que se cladas a lípidos. Numerosas proteínas presentes en la cara exter-
muestra en la figura 7-30d). Los análisis bioquímicos, en cambio, na de la membrana plasmática están unidas a la membrana por
promedian esas diferencias. un oligosacárido pequeño y complejo, unido a una molécula de
fosfatidilinositol que está incrustada en la capa externa de la bica-
Proteínas periféricas de membrana pa lipídica (consúltese figura 4-13c). Las proteínas de membrana
periférica que contienen este tipo de enlace de glucosilfosfatidili-
Las proteínas periféricas están asociadas a la membrana por en- nositol GPI se llaman proteínas ancladas a GPI. Fueron descu-
laces electrostáticos débiles (consúltese figura 4-13b). Por lo gene- biertas cuando se demostró que ciertas proteínas de membrana
ral, las proteínas periféricas se pueden solubilizar mediante ex- podían ser liberadas por una fosfolipasa, que reconocía con espe-
tracción con soluciones salinas de alta concentración, que cificidad y segmentaba fosfolípidos que contenían inositol. La
C
debilitan los enlaces electrostáticos que asocian las proteínas pe- proteína priónica celular normal PrP (página 63) es una molécu-
riféricas a la membrana. En realidad, la distinción entre proteínas la unida a GPI, al igual que varios receptores, enzimas y proteínas
integrales y periféricas es borrosa, porque muchas proteínas inte- de adhesión celular. Un tipo raro de anemia, la hemoglobinuria
grales de membrana contienen varios polipéptidos; algunos pe- paroxística nocturna, es el resultado de una deficiencia en la sín-
netran en la bicapa lipídica y otros permanecen en la periferia. tesis de GPI que hace que los glóbulos rojos sean susceptibles a la
Las proteínas periféricas mejor estudiadas se encuentran en lisis.
la superficie interna (citosólica) de la membrana plasmática, don- Otro grupo de proteínas presentes en el lado citoplasmático de
de forman una red fibrilar que actúa como un “esqueleto” de la membrana plasmática está anclado a la membrana por una o
membrana (véase figura 4-32d). Estas proteínas proporcionan so- más cadenas largas de hidrocarburo, incrustadas en la capa inter-
porte mecánico para la membrana, y funcionan como un ancla na de la bicapa lipídica [consúltese figura 4-13c) y leyenda que lo
para proteínas integrales de membrana. Otras proteínas periféri- acompaña]. Al menos dos proteínas asociadas de esta manera
cas en la superficie interna de la membrana plasmática funcionan con la membrana plasmática (Src y Ras) han sido implicadas en
como enzimas, como capas especializadas (véase figura 8-24), o la transformación de una célula normal a un estado maligno.
 2
126 representan proteínas integrales de membrana. Además, la ma-
REPASO
yoría de estas estructuras representan versiones procarióticas de
1. ¿Qué significa la afirmación de que las proteínas de una mem- una proteína particular, que a menudo son más pequeñas que sus
brana se distribuyen asimétricamente? ¿Esto también es cierto homólogos eucarióticos y más fáciles de obtener en gran canti-
para los carbohidratos de membrana?
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

dad. Una vez que se determina la estructura de un miembro de

2. Describa las propiedades de las tres clases de proteínas de
una familia de proteínas de membrana, por lo general los investi-
membrana (integral, periférica y anclada a lípidos), cómo se di-
gadores pueden aplicar una estrategia, llamada modelado de homo-
ferencian unas de otras, y cómo varían entre ellas.
logía, para aprender sobre la estructura y la actividad de otros
miembros de la familia. Por ejemplo, la solución de la estructura
+
del canal bacteriano de K KcsA (que se muestra en la figura 4-39)
proporcionó una gran cantidad de datos que podrían aplicarse a
4.5 Estudio de la estructura y +
la estructura y mecanismo de acción de los canales de K eucarió-
propiedades de las proteínas ticos, mucho más complejos (obsérvese figura 4-42).
integrales de membrana En la FIGURA 4-17a) se muestra una de las primeras proteínas
de membrana cuya estructura tridimensional completa se deter-
Debido a sus dominios hidrofóbicos transmembrana, las proteí- minó mediante cristalografía de rayos X. Esta proteína, el centro
nas integrales de membrana son difíciles de aislar en forma solu- de reacción de fotosíntesis bacteriana, consta de tres subunidades
ble. La eliminación de estas proteínas de membrana suele reque- que contienen 11 hélices a través de la membrana. La mayoría de
rir el uso de un detergente, como el detergente iónico (cargado) las proteínas de membrana no han sido tan aptas para la cristali-
SDS (que desnaturaliza las proteínas), o el detergente no iónico zación como el centro de reacción de fotosíntesis. Entre los obs-
(sin carga) Tritón X-100 (que por lo general no altera la estructura táculos, muchas proteínas de membrana 1) están presentes en
terciaria de la proteína) números bajos por célula, 2) son inestables en las disoluciones
que contienen el detergente necesario para su extracción, 3) son
CH3 (CH2)11 OSO3–Na+
2
Sodio dodecilsulfato (SDS) Muchas proteínas integrales de membrana tienen una porción sustancial
presente en el citoplasma o el espacio extracelular. En muchos casos esta
CH3 CH3 porción soluble se ha escindido de su dominio transmembrana, ha cristali-
zado y se ha determinado su estructura terciaria. Si bien este enfoque pro-
CH3 C CH2 C (O CH2 CH2)10 OH porciona datos valiosos sobre la proteína, no proporciona información sobre
la orientación de la proteína dentro de la membrana.
CH3 CH3
Tritón X-100

Al igual que los lípidos de membrana, los detergentes son anfipá-

ticos y se componen de un extremo polar y una cadena de hidro-
carburo no polar (véase figura 2-20). Debido a su estructura, los
detergentes pueden sustituir a los fosfolípidos en la estabilización
de las proteínas integrales, al tiempo que los hacen solubles en
solución acuosa (consúltese FIGURA 4-16). Una vez que el deter-
gente ha solubilizado las proteínas, se pueden llevar a cabo diver-
sos análisis para determinar la composición de aminoácidos de la
proteína, la masa molecular, la secuencia de aminoácidos, y así
sucesivamente.
Los investigadores han tenido grandes dificultades para obte-
ner cristales de la mayoría de las proteínas integrales de membra-
na para su uso en la cristalografía de rayos X. De hecho, menos a)
de 1% de las estructuras de proteínas de alta resolución conocidas

Bicapa Solución
lipídica acuosa

Detergente
no iónico
b) c)
FIGURA 4-17 Estructura de proteínas incrustadas. a) Estructura terciaria
del centro de reacción de fotosíntesis de una bacteria, determinada por
Proteína de Proteína solubilizada cristalografía de rayos X. La proteína contiene tres polipéptidos diferentes
membrana en detergente que se extienden por la membrana, mostrados en amarillo, azul claro y
azul oscuro. La naturaleza helicoidal de cada uno de los segmentos trans-
FIGURA 4-16 Solubilización de proteínas de membrana con detergen- membrana es evidente. b) Imágenes de microscopia electrónica de alta
tes. Los extremos no polares de las moléculas de detergente se asocian resolución del canal de iones TRPV, reconstruidas promediando muchas
con los residuos no polares de la proteína, que previamente habían esta- micrografías electrónicas individuales de proteínas congeladas en hielo a
do en contacto con las cadenas de acilo graso de la bicapa lipídica. Por el bajas temperaturas (microscopia crioelectrónica). c) Estructura del canal
contrario, los extremos polares de las moléculas de detergente interac- TRPV determinado por microscopia electrónica.
túan con las moléculas de agua circundantes, lo que mantiene la proteína FUENTE: a) De G Feher, JP Allen, MY Okamura, DC Rees. Ature 339:113,
en solución. Como se muestra aquí, los detergentes no iónicos solubilizan © 1989; reimpreso con permiso de Macmillan Publishers Ltd; b, c) De
las proteínas de membrana sin alterar su estructura. Maofu Liao et al. Nature 2013;504:107.
propensas a la agregación y 4) están muy modificadas por gluco- mentos de proteína incrustados dentro de la membrana, que se 127
silación y no se pueden expresar como proteínas recombinantes describen como los dominios transmembrana, tienen una es-
en otros tipos de células. Algunas de las dificultades técnicas en tructura simple; consisten en una cadena de aproximadamente 20
la preparación de cristales de proteínas de membrana se han su- aminoácidos de predominio no polar, que abarcan el núcleo de la

4.5 ӝ Estudio de la estructura y propiedades de las proteínas integrales de membrana

3
perado con nuevas metodologías y laboriosos esfuerzos. Por bicapa lipídica como una hélice. La estructura química de una
ejemplo, en un estudio los investigadores lograron obtener crista- única hélice transmembrana se muestra en la FIGURA 4-18, que
les de alta calidad de un transportador bacteriano después de representa la estructura bidimensional de la glicoforina A, la prin-
probar y refinar más de 95 000 condiciones diferentes de cristali- cipal proteína integral de la membrana plasmática eritrocítica. De
zación. En algunos casos se encuentra que las versiones mutantes los 20 aminoácidos que componen la única hélice α de un monó-
de una proteína de membrana son más adecuadas para formar las mero de glicoforina (aminoácidos 73 a 92 de la figura 4-18), todos
matrices ordenadas de moléculas que forman una red cristalina. menos tres tienen cadenas laterales hidrofóbicas (o un átomo de
En muchos otros casos la cristalización se ha logrado uniendo en H en el caso de los residuos de glicina). Las excepciones son serina
forma covalente la proteína de membrana a otras moléculas, a y treonina, que son residuos polares no cargados (véase figura
menudo pequeñas proteínas solubles. Recientes avances en la 2-26). La FIGURA 4-19a) muestra una porción de una hélice trans-
tecnología de microscopia electrónica han permitido determinar membrana con un residuo de treonina, no diferente al de la glico-
la estructura de la proteína de la membrana a alta resolución, al forina A. El grupo hidroxilo de la cadena lateral del residuo puede
generar imágenes de grandes cantidades de proteínas idénticas a formar un enlace de hidrógeno con uno de los átomos de oxígeno
temperaturas muy bajas —para reducir el ruido de las imágenes— de la estructura peptídica. Los residuos completamente cargados
y luego promediar sus imágenes (véase figura 4-17b). Debido a también pueden aparecer en las hélices transmembrana, pero
que la microscopia se realiza a temperaturas muy bajas, se le co- tienden a estar cerca de uno de los extremos de la hélice, y se de-
noce como microscopia citoelectrónica (consúltese el video experi- ben acomodar en formas que les permitan encajar en su entorno
mental tutorial para este capítulo: “Cómo resolver estructuras protei- hidrofóbico. Esto se ilustra en las hélices transmembrana modelo
cas usando crio-EM”). Mediante este enfoque ahora es posible ver que se muestran en las figuras 4-19b) y c). Cada una de las hélices
cadenas laterales de aminoácidos individuales, y reconstruir com- en estas figuras contiene un par de residuos cargados, cuyas cade-
pletamente una estructura molecular a partir de la información nas laterales son capaces de alcanzar e interactuar con las regiones
de la microscopia electrónica (obsérvese figura 4-17c). polares más internas de la membrana, incluso si se requiere distor-
A pesar del creciente éxito en la cristalización de proteínas y sionar la hélice para hacerlo. La figura 4-19d) muestra dos residuos
de los rápidos avances en microscopia crioelectrónica, los investi- de tirosina con sus cadenas laterales aromáticas hidrofóbicas; cada
gadores todavía dependen en gran medida de los enfoques indi- anillo aromático está orientado en paralelo a las cadenas hidrocar-
rectos para determinar la organización tridimensional de la ma- bonadas de la bicapa con la que se ha integrado.
yoría de las proteínas de membrana. Examinaremos algunos de 3
estos enfoques en los siguientes párrafos. Se observó en la página 54 que la hélice α es una conformación favorecida,
porque permite que se forme un número máximo de enlaces de hidrógeno
entre los átomos de la cadena principal del polipéptido, y se crea así una
Identificación de dominios transmembrana configuración altamente estable (baja energía). Esto es particularmente im-
Se puede aprender mucho sobre la estructura de una proteína de portante para un polipéptido que abarca la membrana, rodeado por cadenas
membrana, y su orientación dentro de la bicapa lipídica, a partir de acilo graso, y que por tanto no puede formar enlaces de hidrógeno con
un disolvente acuoso. Las hélices transmembrana tienen al menos 20 ami-
de un análisis basado en computadoras (computacional) de su se-
noácidos de longitud, porque este es el tramo mínimo de polipéptido capaz
cuencia de aminoácidos, que se deduce fácilmente a partir de la de atravesar el núcleo de hidrocarburo de una bicapa lipídica de 30 Å de
secuencia de nucleótidos de un gen aislado. La primera pregunta ancho. Se ha encontrado que algunas proteínas integrales de membrana
que uno se podría hacer es: ¿Qué segmentos de la cadena polipep- contienen bucles o hélices que penetran la bicapa, pero no la abarcan. Un
tídica están realmente incrustados en la bicapa lipídica? Esos seg- ejemplo es la hélice P en la figura 4-39.

Superficie exterior

Thr IIe

Leu Ile

Phe IIe
Gly
FIGURA 4-18 La glicoforina A, una proteína integral con
Val 80 un único dominio transmembrana. La única hélice α que
Met pasa a través de la membrana consiste de manera predo-
Ala
Bicapa minante en residuos hidrofóbicos (círculos de color ma-
Gly Val
rrón). Los cuatro residuos de aminoácidos cargados positi-
Ile vamente del dominio citoplasmático de la proteína de
Gly
membrana forman enlaces iónicos con grupos cabeza de
Thr lípidos cargados negativamente. Los carbohidratos están
Ile
unidos a varios residuos de aminoácidos en la superficie
90 Leu Leu externa de la proteína (mostrado en el recuadro). Todos
lle
menos uno de los 16 oligosacáridos son pequeñas cade-
Ser nas con enlaces O (la excepción es un oligosacárido ma-
yor unido al residuo de asparagina en la posición 26). Las
moléculas de glicoforina están presentes como homodí-
meros dentro de la membrana de eritrocitos (véase figura
–
+ – – – 4-32d). Las dos hélices del dímero se cruzan una sobre
+ + +
Lys Lys Arg Superficie interior otra en la región entre los residuos 79 y 83. Esta secuen-
Pro Ser Leu Arg (citosol) cia Gly-X-X-X-Gly se encuentra por lo común donde las hé-
Ile
lices transmembrana se acercan mucho.
 128
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

a) b) c) d)
FIGURA 4-19 El acomodo de varios residuos de aminoácidos dentro de las hélices transmembrana. a) En esta imagen de una pequeña porción de una
hélice transmembrana, el grupo hidroxilo de la cadena lateral de treonina (flecha) es capaz de formar un enlace de hidrógeno (compartido) con un oxíge-
no de cadena principal dentro de la bicapa lipídica. Los enlaces de hidrógeno están indicados por las líneas punteadas y sus distancias se muestran en
angstroms. b) Las cadenas laterales de los dos residuos de lisina de esta hélice transmembrana son largas y flexibles, lo suficiente como para formar en-
laces con los grupos cabeza y las moléculas de agua de la cara polar de la bicapa lipídica. c) Las cadenas laterales de los dos residuos de ácido aspárti-
co de esta hélice transmembrana también pueden alcanzar la cara polar de la bicapa, pero introducen distorsión en la hélice al hacerlo. d) Las cadenas
laterales aromáticas de los dos residuos de tirosina de esta hélice transmembrana están orientadas perpendicularmente al eje de la membrana, y parale-
las a las cadenas de acilo graso con las que interactúan.
FUENTE: a-d) de Anna CV Johansson y Erik Lindahl. Biophys J 2006;91:4459-4453, © 2006, con permiso de Elsevier.

Si se conoce la secuencia de aminoácidos de una proteína in- transmembrana tienden a estar más cargadas positivamente que
tegral de membrana, usualmente es posible identificar los seg- aquellas en el flanco extracelular.
mentos transmembrana usando un gráfico de hidropatía, donde a No todas las proteínas integrales de membrana contienen hé-
cada sitio a lo largo de un polipéptido se le asigna un valor que lices α transmembrana. Varias proteínas de membrana contienen
da una medida de la hidrofobicidad del aminoácido en ese sitio, así un canal relativamente grande colocado dentro de un círculo de
como en el de sus vecinos. Este enfoque proporciona un “prome- cadenas β que se extienden por la membrana organizadas en un
dio de dirección” de la hidrofobicidad en secciones cortas del po- barril, como se ilustra en la figura 5-4. Hasta la fecha, los canales
lipéptido, y garantiza que uno o unos pocos aminoácidos polares acuosos construidos de barriles β solo se han encontrado en las
en una secuencia no alteren el perfil de todo el estiramiento. La membranas externas de bacterias, mitocondrias y cloroplastos.
hidrofobicidad de aminoácidos se puede determinar usando di-
versos criterios, como su solubilidad en lípidos, o la energía que Enfoques experimentales para identificar
se requeriría para transferirlos de un medio no polar a un medio cambios de conformación dentro de una
acuoso. En la FIGURA 4-20 se muestra un gráfico hidropático pa-
proteína integral de membrana
ra la glicoforina A. Los segmentos transmembrana por lo general
se identifican como un pico irregular que se extiende bien aden- Supongamos que se ha aislado un gen para una proteína de mem-
tro del lado hidrofóbico del espectro. Una predicción confiable, brana integral, y basándose en su secuencia de nucleótidos se ha
concerniente a la orientación del segmento transmembrana den- determinado que contiene 12 aparentes hélices α que se extiende
tro de la bicapa, se puede hacer de manera habitual al examinar a lo largo de la membrana. Es posible que se desee saber qué sitios
los residuos de aminoácidos de los flancos. En la mayoría de los dentro de estos dominios transmembrana son accesibles para el
casos, como se ilustra en la glicoforina en la figura 4-18, esas par- ambiente acuoso, y cómo esto cambia a medida que la proteína
tes del polipéptido en el flanco citoplásmico de un segmento cumple su función. Este tipo de información es de particular im-
portancia cuando se trabaja con un canal de membrana, o un
transportador que funciona en el movimiento de sustancias hidró-
filas a través de la membrana. Aunque estas determinaciones son
difíciles de realizar sin modelos estructurales detallados, se puede
obtener una visión considerable mediante la mutagénesis dirigida
Hidrofobicidad
+ΔG

al sitio, es decir, al introducir cambios específicos en el gen que

0 codifica la proteína (consúltese sección 18.25). En la FIGURA 4-21
se muestra un experimento de este tipo realizado con lactosa per-
–ΔG

measa, una proteína transportadora de azúcar en las membranas

celulares bacterianas. En este experimento los investigadores pre-
pararon diferentes versiones de la permeasa en las que casi todos
los aminoácidos individuales de la proteína fueron reemplazados,
uno a la vez, por un residuo de cisteína. Después cada proteína de
50 100 membrana mutada se incubó con un reactivo soluble en agua
Residuo de aminoácido # (NEM), capaz de añadir un grupo alquilo a la cadena lateral de
cisteína, siempre que tenga acceso a esa cadena lateral. Las incu-
Terminal N Terminal C baciones con NEM se llevaron a cabo en dos condiciones diferen-
FIGURA 4-20 Gráfico de hidropatía para la glicoforina A, una proteína tes: o bien en presencia del azúcar a transportar, o en su ausencia.
simple que se extiende a lo largo de la membrana. La hidrofobicidad se La imagen de la figura 4-21a) muestra los residuos de la proteína
mide por la energía libre requerida para transferir cada segmento del poli- alquilada por NEM en ausencia del azúcar (representados como es-
péptido desde un disolvente no polar a un medio acuoso. Los valores por
encima de la línea 0 requieren energía (+ΔG), lo que indica cadenas late-
feras rojas). Se cree que muchos de estos residuos accesibles se
rales de predominio no polar. Los picos que se proyectan por encima de alinean en una cavidad hidrofílica, orientada hacia adentro en la
la línea roja indican tramos continuos de aminoácidos en su mayoría no permeasa que está abierta al citoplasma. Se presume que los res-
polares, y se interpretan como dominios transmembrana. tos de cisteína que no están marcados —más notorio en las hélices
 129
A
Citoplasma

4.5 ӝ Estudio de la estructura y propiedades de las proteínas integrales de membrana

+
Lactosa H

+
Lactosa H
Medio externo
(periplasma)

a) b) c)

FIGURA 4-21 Un experimento que emplea mutagénesis dirigida al sitio para aprender sobre los cambios dinámicos en la conformación de una proteí-
na de membrana a medida que lleva a cabo su actividad. La estrategia práctica del experimento y sus resultados se discuten en el texto. La superficie
citoplásmica de la proteína (lactosa permeasa) está en la parte superior. a) Las esferas rojas indican los residuos de la proteína de membrana que reac-
cionó con el agente alquilante NEM en ausencia de un azúcar para ser transportado. b) Las esferas doradas denotan los residuos que son mucho más
accesibles para el agente alquilante cuando la proteína se incuba con el azúcar. Las esferas doradas en b) se agrupan en una porción de la proteína cer-
ca del medio externo (el periplasma en las bacterias). Los autores concluyeron que las esferas doradas corresponden a residuos que recubren una cavi-
dad orientada hacia afuera, es decir, una que está abierta al medio externo. Los resultados apoyan un modelo de acceso alterno al medio como se mues-
tra en la parte c). (Nótese que la estructura que se representa en las partes a-b) es de la conformación dirigida hacia adentro, según lo determinado por
la cristalografía de rayos X).
FUENTE: a, b) de H. Ronald Kaback, et al. PNAS 2007;104:492, © 2007 National Academy of Sciences, Estados Unidos; c) Reimpreso de Current Opinion
in Structural Biology 2004;14:414, fig. 1 por HR Kaback, con permiso de Elsevier.

+
VI y XII— se enfrentan a las cadenas de acilo graso de los fosfolípi- bacteriano de K , es un tetrámero compuesto de cuatro subunida-
dos, o se localizan en regiones fuertemente empaquetadas de la des idénticas. La apertura citoplásmica al canal está limitada por
molécula, haciéndolos inaccesibles al NEM. cuatro hélices transmembrana, una de cada subunidad de la pro-
La imagen en la figura 4-21b) muestra los residuos (represen- teína. La figura 4-22a) muestra los espectros de EPR obtenidos
tados como esferas doradas) con un aumento significativo de la cuando se introdujo un nitróxido cerca del extremo citoplásmico
reactividad al NEM cuando la permeasa se incuba con el azúcar de cada hélice transmembrana. La línea roja muestra el espectro
que se va a transportar. La diferencia en la reactividad NEM de obtenido a pH 6.5 cuando el canal está en el estado cerrado, y la
los residuos entre las proteínas en ausencia del azúcar a) y la pre- línea azul muestra el espectro a pH 3.5 cuando el canal está abier-
sencia del azúcar b) indica que las diferentes partes de la proteína to. La forma de cada línea depende de la proximidad de los ni-
son accesibles al medio acuoso en estas dos condiciones. En otras tróxidos entre sí. El espectro es más amplio a pH 6.5 porque los
palabras, los resultados sugieren que la adición del azúcar induce grupos nitróxido en las cuatro subunidades están más juntos para
un cambio conformacional en la permeasa. El análisis cuidadoso este pH, lo que disminuye la intensidad de sus señales EPR. Estos
de las posiciones de los residuos que se etiquetan en estas dos resultados indican que la activación del canal se acompaña de una
conformaciones respalda el modelo que se muestra en la figura mayor separación entre los residuos marcados de las cuatro subu-
4-21c). De acuerdo con este modelo de acceso alterno, el sitio de nidades (obsérvese figura 4-22b). Un aumento en el diámetro de la
unión al azúcar está abierto al citoplasma de la célula bacteriana apertura del canal permite que los iones en el citoplasma lleguen
en una conformación, y al espacio extracelular en la otra. La al- a la vía de permeación real dentro del canal (que se muestra en
+
ternancia entre las dos conformaciones provoca el transporte de rojo), lo que permite solo el paso de iones K (explicado en la pá-
azúcar a través de la membrana. Este tipo de sistema de transpor- gina 144). En la figura 18-8 se ilustra una técnica alternativa llama-
te impulsado por iones se trata más adelante en la página 155. da FRET, que también se puede usar para medir los cambios en la
La determinación de las relaciones espaciales entre aminoáci- distancia entre los grupos etiquetados dentro de una proteína.
dos específicos en una proteína de membrana es otro enfoque Como se discutió en el capítulo 2, la espectroscopia de MNR es
para aprender sobre los eventos dinámicos que ocurren cuando otra técnica que proporciona información sobre distancias entre
una proteína lleva a cabo su función. Una forma de aprender so- átomos en una estructura proteica, y recientemente la MNR se ha
bre la distancia entre los residuos seleccionados en una proteína convertido cada vez más en el método de elección para estudiar la
es introducir grupos químicos cuyas propiedades sean sensibles a dinámica de las proteínas de membrana.
la distancia que los separa. Los nitróxidos son grupos químicos que
contienen un electrón no pareado, que produce un espectro carac- REPASO
terístico cuando se analiza mediante una técnica llamada espectros- 1. ¿Por qué son necesarios los detergentes para solubilizar las
copia de resonancia paramagnética electrónica (EPR, electron para- proteínas de membrana? ¿Cómo se puede determinar la diver-
magnetic resonance). Se puede introducir un grupo nitróxido en sidad de las proteínas integrales que residen en una fracción
cualquier sitio en una proteína al mutar primero ese sitio a una de membrana purificada?
cisteína y unir luego el nitróxido al grupo —SH del residuo de 2. ¿Cómo se puede determinar: 1) la ubicación de los segmentos
cisteína. La figura 4-22 muestra cómo se utilizó esta técnica para transmembrana en la secuencia de aminoácidos o 2) las ubi-
descubrir los cambios conformacionales que ocurren en una pro- caciones relativas de las hélices transmembrana con acceso
teína de membrana, a medida que su canal se abre en respuesta a al medio externo?
los cambios en el pH del medio. La proteína en cuestión, un canal
 130 Medio externo
Iones K+
Vía de deshidratados
penetración
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Membrana
plasmática

Residuo de cisteína
marcado con nitróxido

pH 3.5 Cerrado Ion de K+ Abierto

pH 6.5 hidratado
Citoplasma

a) b)

FIGURA 4-22 Uso de la espectroscopia EPR para registrar los cambios en la conformación de un canal de iones K+ bacteriano a medida que se abre
y se cierra. a) Espectros EPR de nitróxidos que se han unido a residuos de cisteína cerca del extremo citoplásmico de las cuatro hélices transmembrana
que recubren el canal. El residuo de cisteína en cada hélice reemplaza un residuo de glicina que normalmente está en esa posición. Las formas de los
espectros dependen de las distancias entre electrones no pareados en los nitróxidos en las diferentes subunidades. (Los nitróxidos se describen como
“etiquetas de espín”, y esta técnica se conoce como etiquetado de espín dirigido al sitio). b) Un modelo altamente esquemático del canal de iones en los
estados abierto y cerrado con base en los datos de la parte a). La apertura del canal va acompañada del movimiento de los cuatro grupos de nitróxido
separados uno del otro.
FUENTE: a) Reimpreso con permiso de Macmillan Publishers Ltd: de E Perozo, et al. Nature Struct Biol 1998;5:468.

temperatura de la bicapa se mantiene relativamente caliente (p.

4.6 Lípidos de membrana y fluidez ej., 37 °C), el lípido existe en un estado relativamente fluido (véa-
de la membrana se FIGURA 4-23a).
A esta temperatura la bicapa lipídica se describe mejor como
El estado físico del lípido de una membrana se describe por su un cristal líquido bidimensional. Como en un cristal, las molécu-
4
fluidez (o viscosidad). Considere la posibilidad de una bicapa las aún conservan una orientación específica; en este caso los ejes
artificial simple compuesta de fosfatidilcolina y fosfatidiletanola- largos de las moléculas tienden hacia una disposición paralela,
mina, cuyos ácidos grasos son en gran parte insaturados. Si la aunque los fosfolípidos individuales pueden rotar alrededor de su
eje o moverse lateralmente dentro del plano de la bicapa. Si la
4 temperatura baja lentamente se llega a un punto en el que la bi-
La fluidez y la viscosidad están inversamente relacionadas; la fluidez es
una medida de la facilidad de flujo, y la viscosidad es una medida de la re- capa cambia bruscamente (véase figura 4-23b). El lípido se con-
sistencia al flujo. vierte de una fase cristalina líquida en un gel cristalino congela-

a) b)

FIGURA 4-23 La estructura de la bicapa lipídica depende de la temperatura. La bicapa que se muestra aquí está compuesta de dos fosfolípidos: fosfati-
dilcolina y fosfatidiletanolamina. a) Por encima de la temperatura de transición, las moléculas de lípidos y sus colas hidrofóbicas son libres de moverse en
ciertas direcciones, a pesar de que conservan un grado considerable de orden. b) Por debajo de la temperatura de transición, el movimiento de las molé-
culas está muy restringido, y toda la bicapa se puede describir como un gel cristalino.
FUENTE: a, b) RN Robertson. The Lively Membranes, Cambridge University Press; 1983, reimpreso con permiso de Cambridge University Press.
do, donde el movimiento de las cadenas de ácidos grasos de branas solo surgen a partir de membranas preexistentes, y su 131
fosfolípidos está muy restringido. La temperatura a la que se pro- crecimiento se logra mediante la inserción de lípidos y proteínas
duce este cambio se denomina temperatura de transición. en la matriz fluida de la lámina membranosa. Muchos de los pro-
La temperatura de transición de una bicapa particular depen- cesos celulares más básicos, incluyendo el movimiento celular,

4.6 ӝ Lípidos de membrana y fluidez de la membrana

de de la capacidad de las moléculas de lípidos para ser empaque- crecimiento celular, división celular, formación de uniones inter-
tadas juntas, lo que depende a su vez de los lípidos particulares de celulares, secreción y endocitosis, dependen del movimiento de
los que se construye. Los ácidos grasos saturados tienen la forma los componentes de la membrana, y probablemente no serían
de una barra recta y flexible. Los ácidos grasos insaturados cis, por posibles si las membranas fueran estructuras rígidas y no fluidas.
otro lado, tienen dobleces en la cadena, en los sitios de un doble
enlace (consúltese figuras 2-19 y 4-23). En consecuencia, los fosfo- Mantenimiento de la fluidez de la membrana
lípidos con cadenas saturadas se juntan más apretadamente que
La temperatura interna de la mayoría de los organismos (excepto
aquellos que contienen cadenas insaturadas. Cuanto mayor sea el
las aves y los mamíferos) fluctúa con la temperatura del ambiente
grado de insaturación de los ácidos grasos de la bicapa, menor será
externo. Debido a que es esencial para muchas actividades que
la temperatura antes que la bicapa gelifique. La introducción de
las membranas de una célula permanezcan en un estado flui-
un doble enlace en una molécula de ácido esteárico reduce la tem-
5 do, las células responden a las condiciones cambiantes al alterar
peratura de fusión a casi 60 °C (véase tabla 4-2). Otro factor que
los tipos de fosfolípidos de los que están hechas. El mantenimien-
influye en la fluidez de la bicapa es la longitud de la cadena de
to de la fluidez de la membrana es un ejemplo de homeostasis a
ácido graso. Cuanto más cortas sean las cadenas de acilo graso
nivel celular, y se puede demostrar de varias maneras. Por ejem-
de un fosfolípido, menor será su temperatura de fusión. El estado
plo, si la temperatura de un cultivo de células se reduce, las célu-
físico de la membrana también se ve afectado por el colesterol.
las responden metabólicamente. La respuesta inicial de “emer-
Debido a su orientación dentro de la bicapa (véase figura 4-7), las
gencia” está mediada por enzimas que remodelan las membranas,
moléculas de colesterol interrumpen el cierre de las cadenas de
que hacen que la célula sea más resistente al frío. La remodela-
acilo graso e interfieren con su movilidad. La presencia de coles-
ción se logra 1) desaturando enlaces simples en cadenas de acilo
terol tiende a abolir las temperaturas precisas de transición y crea
graso para formar dobles enlaces, y 2) reorganizando las cadenas
una condición de fluidez intermedia. En términos fisiológicos, el
entre diferentes moléculas de fosfolípidos para producir unos que
colesterol tiende a aumentar la durabilidad al tiempo que disminu-
contienen dos ácidos grasos insaturados, lo que reduce en gran
ye la permeabilidad de la membrana.
medida la temperatura de fusión de la bicapa. Las enzimas llama-
das desaturasas catalizan la desaturación de enlaces simples para
Importancia de la fluidez de la membrana formar dobles enlaces. Las fosfolipasas llevan a cabo la reorgani-
¿Qué efecto tiene el estado físico de la bicapa lipídica en las pro- zación, al separar el ácido graso de la columna de glicerol; asimis-
piedades biológicas de la membrana? La fluidez de la membrana mo, las aciltransferasas, transfieren ácidos grasos entre los fosfolí-
proporciona un compromiso perfecto entre una estructura rígida pidos. Además, la célula cambia los tipos de fosfolípidos que se
y ordenada en la que la movilidad estaría ausente, y un líquido sintetizan a favor de los que contienen más ácidos grasos insatu-
fluido por completo, no viscoso, en el que los componentes de la rados. Como resultado de las actividades de estas diversas enzi-
membrana no se podrían orientar y la organización estructural y mas, las propiedades físicas de las membranas celulares se corres-
el soporte mecánico serían insuficientes. Además, la fluidez per- ponden con las condiciones ambientales predominantes. Se ha
mite que las interacciones tengan lugar dentro de la membrana. demostrado el mantenimiento de las membranas fluidas median-
Por ejemplo, la fluidez de la membrana hace posible que grupos te ajustes en la composición del acilo graso en una variedad de
de proteínas de membrana se ensamblen en sitios particulares organismos, incluidos los mamíferos hibernantes, los peces que
dentro de la membrana, y formen estructuras especializadas co- habitan en estanques cuya temperatura corporal cambia marca-
mo uniones intercelulares, complejos de fotosíntesis captadores damente del día a la noche, las plantas resistentes al frío y las
de luz, y sinapsis. Debido a la fluidez de la membrana las molé- bacterias que viven en aguas termales. Las células procariotas que
culas que interactúan se pueden unir, llevar a cabo la reacción viven a temperaturas muy altas tienen membranas plasmáticas
necesaria y separarse. que contienen lípidos altamente inusuales.
La fluidez también desempeña un papel clave en el ensambla-
je de la membrana, un tema discutido en el capítulo 8. Las mem- Balsas lipídicas
De cuando en cuando surge un problema que divide la comuni-
dad de biología celular en creyentes y no creyentes. El problema
TABLA 4-2 Puntos de fusión de los ácidos grasos comunes de las balsas lipídicas cae en esta categoría. Cuando los lípidos de
de carbono 18 membrana se extraen de las células y se usan para preparar bica-
Punto de fu- pas lipídicas artificiales, el colesterol y los esfingolípidos tienden a
Ácido graso Doble enlace cis sión (ºC) autoensamblarse en microdominios que están más gelificados y
ordenados que las regiones circundantes, y consisten principal-
Ácido esteárico 0 70
Ácido oleico 1 13
mente en fosfoglicéridos. Debido a sus propiedades físicas distin-
Ácido linoleico 2 −9 tivas, tales microdominios tienden a flotar dentro del entorno más
Ácido linolénico 3 −17 fluido y alterado de la bicapa artificial (consúltese FIGURA 4-24a).
Ácido eicosapentaenoico 5 −54 Como resultado, estos parches de colesterol y esfingolípidos se
(EPA)* conocen como balsas lipídicas. Ciertas proteínas tienden a con-
centrarse en las balsas lipídicas cuando se agregan a las bicapas
* El EPA tiene 20 carbonos. artificiales, mientras que otras tienden a permanecer fuera de sus
5 límites. Las proteínas ancladas al GPI muestran un particular ape-
El efecto de la saturación de los ácidos grasos sobre la temperatura de fu-
go por las regiones ordenadas de la bicapa (véase FIGURA 4-24a).
sión se ilustra con productos alimenticios conocidos. Los aceites vegetales
permanecen líquidos en el refrigerador, mientras que la margarina es sólida. La controversia surge sobre si existen tipos similares de balsas
Los aceites vegetales contienen ácidos grasos poliinsaturados, mientras que de lípidos ricas en esfingolípidos y colesterol, como la que se ilus-
los ácidos grasos de la margarina se han saturado mediante un proceso quí- tra en la figura 4-24b), en existencia dentro de las células vivas. La
mico que hidrogena los dobles enlaces de los aceites vegetales utilizados mayoría de las pruebas a favor de las balsas lipídicas se derivan de
como material de partida. estudios que emplean tratamientos no naturales como la extrac-
 132
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Proteína anclada
a GPI

Proteína señalizadora
a) b)

FIGURA 4-24 Balsas de lípidos. a) Imagen de la superficie superior de una bicapa lipídica artificial que contiene fosfatidilcolina, que aparece como el fon-
do negro, y moléculas de esfingomielina que se organizan espontáneamente en las balsas de color naranja. Los picos amarillos muestran las posiciones
de una proteína anclada al GPI, que está asociada casi exclusivamente a la balsa. Esta imagen es proporcionada por un microscopio de fuerza atómica,
que mide la altura de varias partes de la muestra a nivel molecular. b) Modelo esquemático de una balsa de lípidos dentro de una célula. La capa exterior
de la balsa está compuesta sobre todo por colesterol (amarillo) y esfingolípidos (grupos cabeza rojos). Las moléculas de fosfatidilcolina (grupos cabeza
azules), con ácidos grasos saturados largos, también tienden a concentrarse en esta región. Se piensa que las proteínas ancladas al GPI se concentran
en las balsas lipídicas. Los lípidos en la capa exterior de la balsa tienen un efecto organizador sobre los lípidos de la capa interna. Como resultado, los lí-
pidos de la capa interna de la balsa consisten principalmente en colesterol y glicerofosfolípidos, con largas colas de acilo graso saturados. La capa inter-
na tiende a concentrar las proteínas ancladas en lípidos —como la Src quinasa— que están implicadas en la señalización celular. (La controversia sobre la
existencia de las balsas lipídicas se discute en Nature Revs Mol Cell Biol 2010;11:688, y Science 2011;334:1046).
FUENTE: a) Tomada de DE Saslowsky, et al. J. Biol. Chem. 2002 July 26;277, cover of #30, b) Cortesía de J Michael Edwardson © 2002 The American
Society for Biochemistry and Molecular Biology.

ción de detergente, la reducción del colesterol o la reticulación de

proteínas de membrana. La naturaleza artificial de estos trata- 4.7 Naturaleza dinámica
mientos hace que los resultados sean difíciles de interpretar. Los de la membrana plasmática
intentos de demostrar la presencia de balsas lipídicas en células
vivas por lo general no han tenido éxito, lo que puede significar Es evidente a partir de la discusión previa que la bicapa lipídica
que tales balsas no existen, o son tan pequeñas (de 5 a 25 nm de puede existir en un estado relativamente fluido. Como resultado,
diámetro) y de corta vida como para ser difíciles de detectar con un fosfolípido se puede mover lateralmente dentro de la misma
las técnicas actuales. El concepto de balsas lipídicas es muy atrac- hoja o capa individual con considerable facilidad. La movilidad de
tivo, porque proporciona un medio para introducir orden en un las moléculas de lípidos individuales dentro de la bicapa de la
mar aparentemente aleatorio de moléculas de lípidos. Se postula membrana plasmática se puede observar directamente bajo el mi-
que las balsas lipídicas sirven como plataformas flotantes para croscopio, al unir las cabezas polares de los lípidos a partículas de
concentrar proteínas específicas, lo cual organiza la membrana en oro o compuestos fluorescentes (véase figura 4-29). Se estima que
compartimientos funcionales (obsérvese figura 4-24b). Por ejem- un fosfolípido se puede difundir desde un extremo de una bacteria
plo, se cree que las balsas lipídicas proporcionan un entorno local hasta el otro extremo en uno o dos segundos. Por el contrario, una
favorable para que los receptores de la superficie celular interac- molécula de fosfolípidos tarda una cuestión de horas o días en
túen con otras proteínas de membrana, que transmiten señales pasar a la otra hoja de la membrana. Por tanto, de todos los movi-
desde el espacio extracelular hasta el interior de la célula. mientos posibles que puede realizar un fosfolípido, su voltereta al
otro lado de la membrana es el más restringido (véase FIGURA 4-25).
Este hallazgo no es sorprendente. Para que ocurra la voltereta el
grupo cabeza hidrofílico del lípido debe pasar a través de la lámina
REPASO hidrofóbica interna de la membrana, que es termodinámicamente
1. ¿Cuál es la importancia de la insaturación de ácidos grasos desfavorable. Sin embargo, las células contienen enzimas que
para la fluidez de la membrana? ¿Cuál es la de las enzimas mueven activamente ciertos fosfolípidos de una capa a la otra.
que son capaces de desaturar ácidos grasos? Estas enzimas, conocidas como flipasas, desempeñan un papel en
2. ¿Qué significa la temperatura de transición de una membrana, el establecimiento de la asimetría de los lípidos.
y cómo se ve afectada por el grado de saturación o la longi- Debido a que los lípidos proporcionan la matriz en la que
tud de las cadenas de acilo graso? ¿Cuál es la importancia de están contenidas las proteínas integrales de una membrana, el
estas propiedades en la formación de balsas lipídicas? estado físico del lípido es un determinante importante de la mo-
3. ¿Por qué la fluidez de la membrana es importante para una vilidad de las proteínas integrales. La demostración de que las
célula? proteínas integrales se pueden mover dentro del plano de la
4. ¿Cómo es posible que las dos caras de una bicapa lipídica membrana fue una piedra angular en la formulación del modelo
tengan diferentes cargas iónicas? del mosaico fluido. Las propiedades dinámicas de las proteínas
de membrana se han revelado de varias formas.
 Universidad Johns Hopkins, lo informaron en 1970. En sus expe- 133
Exterior de célula
rimentos se fusionaron células de ratón y humanas, y se siguió la
Difusión transversal (flip-flop o voltereta)
5 ubicación de proteínas específicas de la membrana plasmática
(~10 s)
una vez que las dos membranas se volvieron continuas. Para se-

4.7 ӝ Naturaleza dinámica de la membrana plasmática

guir la distribución de las proteínas de membrana de ratón, o las
proteínas de membrana humana en diferentes momentos des-
pués de la fusión, se prepararon anticuerpos para uno u otro tipo
de proteínas y se unieron en forma covalente a colorantes fluores-
Flexionar (~10-- 9s)
centes. Los anticuerpos contra las proteínas del ratón se unieron
en complejos con un pigmento de fluorescencia verde y los anti-
cuerpos contra las proteínas humanas con uno de fluorescencia
roja. Cuando los anticuerpos se añadieron a las células fusiona-
das se unieron a las proteínas humanas o de ratón, y pudieron
Desplazamiento lateral
-- 6
(~10 s)
localizarse bajo un microscopio óptico de fluorescencia (consúlte-
Citosol se figura 4-26a). En el momento de la fusión la membrana plas-
mática parecía mitad humana y mitad ratón; es decir, los dos ti-
FIGURA 4-25 Posibles movimientos de los fosfolípidos en una membra-
pos de proteínas permanecieron segregados en su propia esfera
na. Tipos de movimientos en los que pueden participar los fosfolípidos de (paso 3, véase figura 4-26a), b). A medida que aumentaba el tiem-
membrana y escalas temporales aproximadas en las que ocurren. Mientras po después de la fusión, se observó que las proteínas de membra-
que los fosfolípidos se mueven de una capa a otra a un ritmo muy lento, na se movían lateralmente dentro de la membrana hacia el hemis-
se difunden lateralmente dentro de una capa con rapidez. Los lípidos que ferio opuesto. En aproximadamente 40 minutos, las proteínas de
carecen de grupos polares, como el colesterol, se pueden mover a través cada especie se distribuyeron uniformemente alrededor de la
de la bicapa con bastante rapidez.
membrana celular híbrida completa (paso 4, véase figura 4-26a).
Si el mismo experimento se realizaba a temperatura más baja, la
viscosidad de la bicapa lipídica aumentaba, y la movilidad de las
proteínas de la membrana disminuía. Estos primeros experimen-
Difusión de las proteínas de membrana tos de fusión celular dieron la impresión de que las proteínas
tras la fusión celular integrales de la membrana eran capaces de movimientos virtual-
mente ilimitados. Como veremos en breve, los estudios posterio-
La fusión celular es una técnica mediante la cual dos tipos dife- res pusieron de manifiesto que la dinámica de la membrana era
rentes de células, o células de dos especies diferentes, se pueden un tema mucho más complejo de lo que se había previsto inicial-
fusionar para producir una célula con un citoplasma común y una mente.
sola membrana plasmática continua. Se induce a las células a fu-
sionarse al hacer que su superficie exterior sea “pegajosa”, de Restricciones sobre la proteína
modo que sus membranas plasmáticas se adhieran entre ellas. Se y la movilidad de los lípidos
puede inducir la fusión de las células mediante la adición de cier-
tos virus inactivos que se adhieren a la membrana de la superfi- Varias técnicas permiten a los investigadores seguir los movi-
cie, mediante la adición polietilenglicol compuesto, o mediante mientos de las moléculas en las membranas de las células vivas
una descarga eléctrica leve. La fusión celular ha desempeñado un utilizando el microscopio óptico. En una técnica llamada recu-
papel importante en la biología celular, y en la actualidad se usa peración de fluorescencia después del fotoblanqueado
en una técnica muy útil para preparar anticuerpos específicos (FRAP, fluorescence recovery after photobleaching) ilustrada en
(véase sección 18.26). la FIGURA 4-27a), los componentes integrales de membrana en
Los primeros experimentos para demostrar que las proteínas células cultivadas se marcan primero mediante la unión a un
de la membrana se podían mover dentro del plano de la membra- colorante fluorescente. Una proteína particular de membrana se
na utilizaban la fusión celular; Larry Frye y Michael Edidin, de la puede marcar con una sonda específica, como un anticuerpo

1 2 3 4
Célula humana
Adición de 40
virus minutos
(fusionado)
sendai

Célula de ratón
a) b)
FIGURA 4-26 El uso de la fusión celular para revelar la movilidad de las proteínas de membrana. a) Esquema del experimento en el que se fusionaron
células humanas y de ratón (pasos 1-2), y en los híbridos se siguió la distribución de las proteínas en la superficie de cada célula a lo largo del tiempo
(etapas 3-4). Las proteínas de la membrana del ratón se indican por círculos de color entero; las proteínas de la membrana humana por círculos claros.
Las localizaciones de las proteínas humanas y de ratón en las membranas plasmáticas de las células híbridas se controlaron por interacción con anticuer-
pos fluorescentes rojos y verdes, respectivamente. b) Micrografía que muestra una célula fusionada donde las proteínas humanas y de ratón aún están
en sus respectivos hemisferios (equivalentes al híbrido en el paso 3 de la parte a).
FUENTE: b) De LD Frye y Michael Edidin, J Cell Science 1970;7:328-334, con permiso de la compañía Biologists, Ltd. Cortesía de Michael Edidin,
Universidad Johns Hopkins. http://jcs.biologists.org/content/7/2/319 full.pdf+html?sid=d93ae648-abca-4f5d-90a6- a6d9726d7d30.
 134 velocidad de recuperación de la fluorescencia (véase figura
4-27b) proporciona una medida directa de la velocidad de difu-
sión (expresada como coeficiente de difusión, D) de las molécu-
las móviles. El grado de recuperación de la fluorescencia (expre-
CAPÍTULO 4 • Estructura y función de la membrana plasmática

sado como porcentaje de la intensidad original) proporciona una

medida del porcentaje de las moléculas marcadas que se difun-
den libremente.
Proteínas de marcaje
1
con tintura flourescente Los primeros estudios que utilizaron la FRAP sugirieron que
1) las proteínas de membrana se movían mucho más lentamente
en la membrana plasmática de las células vivas que en una bicapa
lipídica pura y 2) una fracción significativa de proteínas de mem-
brana (30 a 70%) no estaba libre para difundir de regreso al círcu-
lo irradiado. Pero la técnica FRAP tiene sus inconvenientes. La
FRAP solo puede seguir el movimiento promedio de un número
relativamente grande de moléculas marcadas (de cientos a miles)
Mancha de fotoblanqueado a medida que se difunden a una distancia relativamente grande
2
con rayo láser (p. ej., 1 μm). Como resultado, los investigadores que usan FRAP
no pueden distinguir entre las proteínas que son realmente inmó-
viles y las que solo pueden difundirse a una distancia limitada en
el tiempo permitido. Para evitar estas limitaciones, se han desa-
rrollado técnicas alternativas que les permiten a los investigado-
res observar movimientos de las moléculas de proteínas indivi-
duales en distancias muy cortas, y determinar cómo podrían ser
sujetadas.
En el rastreo de partículas individuales (SPT, single-par-
3 Recuperación
ticle tracking), las moléculas individuales de proteína de mem-
brana están marcadas, por lo general, con etiquetas moleculares
fluorescentes que emiten luz bajo un microscopio. Los movimien-
tos de las moléculas marcadas se siguen con un tipo de microsco-
pia conocida como TIRF (fluorescencia de reflexión total interna)
que está especializada en obtener imágenes de moléculas fluores-
centes en la superficie de las células. Los resultados de estos es-
a) tudios dependen a menudo de la proteína particular que se está
investigando. Por ejemplo,
●● Algunas proteínas de membrana se mueven aleatoriamente a
Iluminar través de la membrana (obsérvese figura 4-28, proteína A),
aunque por lo general a velocidades considerablemente me-
nores que las que se medirían en una bicapa lipídica artificial.
(Si la movilidad proteica se basara estrictamente en paráme-
Fluorescencia

tros físicos como la viscosidad lipídica y el tamaño de proteí-

na, se esperaría que las proteínas migraran con coeficientes
–8 –9 2
de difusión de aproximadamente 10 a 10 cm /s en lugar de
–10 –12 2
10 a 10 cm /s, como se observa en las moléculas de este
grupo). Han sido objeto de debate las razones para el coefi-
ciente de difusión reducido.
Tiempo ●● Algunas proteínas de membrana no se mueven y se conside-
b)
ran inmovilizadas (consúltese figura 4-28, proteína B).
●● En algunos casos se encuentra que una proteína se mueve de
FIGURA 4.27 Medición de las velocidades de difusión de las proteínas una manera altamente direccionada (es decir, no aleatoria)
de membrana por recuperación de fluorescencia después de fotoblan- hacia una parte u otra de la célula (véase figura 4-28, proteína
queado (FRAP). a) En esta técnica, un componente particular de la mem-
brana se marca primero con un colorante fluorescente (fase 1). Luego se
C). Por ejemplo, una proteína de membrana particular puede
radia una pequeña región de la superficie para blanquear las moléculas tender a moverse hacia el borde anterior o posterior de una
de colorante (fase 2) y después de un tiempo, se recupera la fluorescen- célula en movimiento.
cia en la región blanqueada (fase 3). b) La velocidad de recuperación de ●● En casi todos los estudios, la mayor parte de las especies de
la fluorescencia en la mancha iluminada varía según la(s) proteína(s) que proteínas muestra un movimiento aleatorio (browniano) den-
se siga(n). La velocidad de recuperación está relacionada con el coeficien- tro de la membrana, a velocidades compatibles con la difusión
te de difusión de la proteína con marca fluorescente.e. –9
libre (coeficientes de difusión de aproximadamente 5 3 10
2
cm /s), pero las moléculas no pueden migrar libremente por
más de algunas décimas de micrómetro. La difusión de largo
fluorescente. Una vez marcadas, las células se colocan bajo el alcance ocurre, pero a velocidades más lentas, aparentemente
microscopio y se irradian mediante un rayo láser enfocado, que debido a la presencia de un sistema de barreras. Estas barre-
blanquea las moléculas fluorescentes en su trayectoria y deja una ras se discuten en las siguientes secciones.
mancha circular desprovista de fluorescencia (de aproximada-
mente 1 μm de diámetro típico) en la superficie de la célula. Si CONTROL DE LA MOVILIDAD DE LA PROTEÍNA
las proteínas etiquetadas en la membrana son móviles, los movi- DE MEMBRANA Es evidente que las proteínas de la mem-
mientos aleatorios de estas moléculas deberían producir una re- brana plasmática no son totalmente libres para vagar al azar en el
aparición gradual de fluorescencia en el círculo irradiado. La “mar” lipídico. En cambio, esta clase de proteínas está sujeta a
 cho mayores que sus contrapartes intactas, lo que indica que las 135
barreras residen en el lado citoplásmico de la membrana. Estos
hallazgos sugieren que el esqueleto subyacente de la membrana
A forma una red de “vallas” alrededor de las porciones de la mem-

4.7 ӝ Naturaleza dinámica de la membrana plasmática

D brana, que crea compartimientos que restringen la distancia que
E puede recorrer una proteína integral (véase figura 4-28, proteína
B
E). Las proteínas se mueven a través de los límites de un compar-
timiento a otro por interrupciones en las vallas. Se piensa que
tales aberturas aparecen y desaparecen junto con el desmontaje
dinámico y el montaje de partes de la valla. Los compartimientos
de membrana pueden mantener combinaciones específicas de
C proteínas lo bastante cerca como para facilitar su interacción.
Las proteínas integrales que carecen de la porción que nor-
malmente se proyectaría en el espacio extracelular se mueven a
una velocidad mucho mayor que la versión de la proteína tipo sal-
F
vaje. Este hallazgo sugiere que el movimiento de una proteína
transmembrana a través de la bicapa se ralentiza con materiales
extracelulares, que pueden enredar la porción externa de la mo-
lécula de proteína (véase figura 4-28, proteína F).

FIGURA 4-28 Patrones de movimiento de proteínas integrales de mem-

MOVILIDAD DE LOS LÍPIDOS DE MEMBRA-
brana. En dependencia del tipo de célula y las condiciones, las proteínas
integrales de membrana pueden exhibir varios tipos diferentes de movili- NA Las proteínas son moléculas grandes, por lo que no es sor-
dad. La proteína A es capaz de difundirse aleatoriamente por toda la prendente que su movimiento dentro de la bicapa lipídica se vea
membrana, aunque su velocidad de movimiento puede ser limitada; la restringido. En comparación, los fosfolípidos son moléculas pe-
proteína B se inmoviliza como resultado de su interacción con el esquele- queñas que conforman el propio tejido de la bicapa lipídica.
to de la membrana subyacente; la proteína C se mueve en una dirección Podría esperarse que sus movimientos fueran completamente li-
particular como resultado de su interacción con una proteína motora en la
bres; sin embargo, varios estudios han sugerido que la difusión
superficie citoplásmica de la membrana; el movimiento de la proteína D
está restringido por otras proteínas integrales de membrana; el movimien- de fosfolípidos también está restringida. Cuando las moléculas de
to de la proteína E está restringido por vallas formadas por proteínas del
esqueleto de la membrana, pero puede saltar a compartimientos adya-
centes a través de aberturas transitorias en una valla; el movimiento de la
proteína F está restringido por materiales extracelulares.

diversas influencias que afectan su movilidad, y al hacerlo pro- Meta

Meta
mueven la organización intramembrana. Algunas membranas
están llenas de proteínas, por lo que los movimientos aleatorios
de una molécula se pueden ver impedidos por sus vecinos (véase
FIGURA 4-28, proteína D). Arrancada
Se cree que las influencias más fuertes sobre una proteína de
membrana integral se ejercen justo debajo de la membrana sobre
su cara citoplásmica. Las membranas plasmáticas de muchas cé-
lulas poseen una red fibrilar, o “esqueleto de membrana”, que
consiste en proteínas periféricas situadas en la superficie citoplás-
mica de la membrana. Una cierta proporción de moléculas de
proteínas integrales de membrana están unidas al esqueleto de la
membrana (consúltese figura 4-28, proteína B) o están restringi- Arrancada
das por este.
La información concerniente a la presencia de barreras de a) b)
membrana se ha obtenido mediante una técnica innovadora, que
FIGURA 4-29 Demostración experimental de que la difusión de fosfolípi-
permite a los investigadores atrapar proteínas integrales y arras- dos dentro de la membrana plasmática está confinada. a) Se sigue la tra-
trarlas a través de la membrana plasmática con una fuerza deter- yectoria de un único fosfolípido insaturado marcado durante 56 ms, a me-
minada. Esta técnica, que utiliza un aparato conocido como pinzas dida que se difunde dentro de la membrana plasmática de un fibroblasto
ópticas, aprovecha las pequeñas fuerzas ópticas que se generan de rata. Los fosfolípidos se difunden libremente dentro de un comparti-
mediante un rayo láser enfocado. Las proteínas integrales que se miento confinado antes de saltar a un compartimiento vecino. La velocidad
estudiarán se etiquetan con cuentas recubiertas de anticuerpos, de difusión dentro de un compartimiento es tan rápida como la esperada
por el movimiento browniano sin impedimentos. Sin embargo, la tasa glo-
que sirven como asas que pueden ser agarradas por el rayo láser. bal de difusión del fosfolípido parece disminuir, debido a que la molécula
En general, se encuentra que las pinzas ópticas pueden arrastrar debe saltar una barrera para continuar su movimiento. El movimiento del
una proteína integral durante una distancia limitada, antes de que fosfolípido dentro de cada compartimiento está representado por un solo
la proteína encuentre una barrera que haga que se libere del aga- color. b) El mismo experimento que se muestra en a) se lleva a cabo duran-
rre del láser. A medida que se libera la proteína normalmente re- te 33 ms en una bicapa artificial, que carece de las “cercas de estacas”
trocede, lo que sugiere que las barreras son estructuras elásticas. presentes en una membrana celular. La trayectoria mucho más abierta y
extendida del fosfolípido se puede explicar ahora por un movimiento brow-
Un enfoque para estudiar los factores que afectan la movili- niano simple e ilimitado. En aras de la comparación, los compartimientos
dad de la proteína de la membrana es modificar genéticamente falsos se asignaron en b) y se indicaron con diferentes colores.
las células para que produzcan proteínas de membrana alteradas. FUENTE: De Takahiro Fujiwara, et al. Cortesía de Akihiro Kusumi, Nagoya, J
Las proteínas integrales cuyas porciones citoplásmicas han sido Cell Biol 2002;157:1073; reproducida con permiso de The Rockefeller
genéticamente eliminadas, a menudo se mueven distancias mu- University Press.
 136 fosfolípidos individuales de una membrana plasmática son mar- cal, que absorbe selectivamente sustancias del lumen, posee enzi-
cadas y seguidas bajo el microscopio, mediante cámaras de velo- mas diferentes a las de la membrana plasmática lateral, que inte-
cidad ultra alta, se las ve confinadas por periodos muy breves y ractúa con las células epiteliales vecinas, o la membrana basal,
luego saltan de un área confinada a otra. La FIGURA 4-29a) mues- que se adhiere a un sustrato extracelular subyacente (una membra-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

tra el camino tomado por un fosfolípido individual dentro de la na de cimentación). En otros ejemplos, los receptores para sustan-
membrana plasmática, durante un periodo de 56 milisegundos. cias neurotransmisoras se concentran en regiones de la membra-
El análisis por computadora indica que el fosfolípido se difunde na plasmática ubicadas dentro de las sinapsis (obsérvese figura
libremente dentro de un compartimiento (sombreado en púrpu- 4-57), y los receptores para lipoproteínas de baja densidad se
ra) antes de saltar la “valla” hacia un compartimiento vecino concentran en parches de la membrana plasmática especializados
(sombreado en azul), y luego sobre otra cerca en un comparti- para facilitar su internalización (obsérvese figura 8-38).
miento adyacente (sombreado en verde), y así sucesivamente. El De todos los diversos tipos de células de mamíferos, los esper-
tratamiento de la membrana con agentes que interrumpen el es- matozoides pueden tener la estructura más altamente diferencia-
queleto de membrana subyacente elimina algunas de las vallas da. Un espermatozoide maduro se puede dividir en cabeza, pieza
que restringen la difusión de fosfolípidos. Pero si el esqueleto de intermedia y cola, cada una con sus propias funciones especiali-
la membrana se encuentra debajo de la bicapa lipídica, ¿cómo zadas. Aunque está dividido en varias partes distintas, un esper-
puede interferir con el movimiento de los fosfolípidos? Los auto- matozoide está cubierto por una membrana plasmática continua,
res de estos estudios especulan que las vallas están construidas que según revelan numerosas técnicas consiste en un mosaico de
con hileras de proteínas integrales de membrana, cuyos dominios diferentes tipos de dominios localizados. Por ejemplo, cuando los
citoplásmicos están unidos al esqueleto de la membrana. Esto no espermatozoides se tratan con una variedad de anticuerpos, cada
es diferente al confinamiento de caballos o vacas por una valla de anticuerpo se combina con la superficie de la célula en un patrón
estacas cuyos postes están incrustados en el suelo subyacente. topográfico único, que refleja la distribución dentro de la mem-
brana plasmática del antígeno de proteína particular reconocido
DOMINIOS DE MEMBRANA Y POLARIDAD CE- por ese anticuerpo (véase FIGURA 4-31).
LULAR En su mayor parte los estudios de la dinámica de la
membrana —como los discutidos anteriormente— se llevan a cabo
en la membrana plasmática, relativamente homogénea, situa-
da en la superficie superior o inferior de una célula que reside en REPASO
un plato de cultivo. Sin embargo, la mayoría de las membranas 1. Describa dos técnicas para medir las velocidades de difusión
exhiben variaciones en la composición y movilidad de las proteí- de una proteína de membrana específica.
nas, especialmente en células cuyas diversas superficies exhiben 2. Compare y contraste los tipos de movilidad de proteínas re-
diferentes funciones. Por ejemplo, las células epiteliales que recu- presentados en la figura 4-28.
bren la pared intestinal, o constituyen los túbulos microscópicos 3. Compare la velocidad de difusión lateral de un lípido con el
del neonato, son células altamente polarizadas cuyas diferentes flip-flop (voltereta). ¿Cuál es el motivo de la diferencia?
superficies llevan a cabo distintas funciones (consúltese FIGU-
RA 4-30). Los estudios indican que la membrana plasmática api-

Glucosa   

Membrana plasmática Na+
apical

  


 




  

 

  
   +

 
   a) b)

Cabeza anterior
Membrana plasmática Cabeza posterior
lateral

 

 





  

Cola posterior

Membrana
basal

 
 c) d)




  

   
FIGURA 4-31 Diferenciación de la membrana plasmática del espermato-



 
zoide de mamífero revelada por anticuerpos fluorescentes. a-c) Tres pa-
res de micrografías, cada una de las cuales muestra la distribución de una
proteína particular en la superficie celular, como se revela por un anticuer-
FIGURA 4-30 Funciones diferenciadas de la membrana plasmática de po fluorescente unido. Las tres proteínas están localizadas en diferentes
una célula epitelial. La superficie apical de esta célula epitelial intestinal partes de la membrana espermática continua. Cada par de fotografías
contiene proteínas integrales que funcionan en el transporte de iones y la muestra el patrón de fluorescencia del anticuerpo unido, y una micrografía
hidrólisis de disacáridos como la sacarosa y lactosa; la superficie lateral de contraste de fase de la misma célula. d) Diagrama que resume la distri-
contiene proteínas integrales que funcionan en la interacción intercelular, bución de las proteínas.
y la superficie basal contiene proteínas integrales que funcionan en la FUENTE: a-c) de Diana G. Myles, Paul Primakoff y Anthony R. Bellvé. Cell
asociación de la célula con la membrana basal subyacente. 1981;23:434, © con permiso de Elsevier.
 Los iones de bicarbonato (HCO3–) entran en el eritrocito en 137
4.8 El glóbulo rojo: un ejemplo de intercambio con iones cloruro, que salen de la célula. En los pul-
estructura de membrana plasmática mones —donde se libera el dióxido de carbono— la reacción se
invierte, y los iones de bicarbonato salen del eritrocito a cambio

4.8 ӝ El glóbulo rojo: un ejemplo de estructura de membrana plasmática

De todos los diversos tipos de membranas, la membrana plasmá- – –
de iones cloruro. El movimiento recíproco del HCO3 y el Cl tie-
tica del eritrocito humano (glóbulo rojo) es la más estudiada y ne lugar a través de un canal en el centro de cada dímero de la
mejor entendida (véase FIGURA 4-32a). Hay varias razones para banda 3.
la popularidad de esta membrana. Estas células son económicas La glicoforina A fue la primera proteína de membrana en te-
de obtener y están disponibles en grandes cantidades a partir de ner determinada su secuencia de aminoácidos. La disposición de
la sangre completa. Ya están presentes como células individuales la cadena polipeptídica de la glicoforina A dentro de la membrana
y no necesitan disociarse de un tejido complejo. Las células son plasmática se muestra en la figura 4-18. (Otras glicoforinas relacio-
simples en comparación con otros tipos de células, y carecen de nadas, B, C, D y E, también están presentes en la membrana, a
membranas nucleares y citoplásmicas que inevitablemente conta- concentraciones mucho más bajas). Al igual que la banda 3, la
minan las preparaciones de la membrana plasmática de otras cé- glicoforina A también está presente en la membrana como un dí-
lulas. Además, pueden obtenerse membranas plasmáticas de eri- mero. A diferencia de la banda 3, cada subunidad de glicoforina A
trocito purificadas, intactas tan solo con colocar las células en una atraviesa la membrana solo una vez, y contiene una cubierta espe-
solución salina diluida (hipotónica). Las células responden a este sa de carbohidratos que consiste en 16 cadenas oligosacáridas, que
choque osmótico absorbiendo agua y expandiéndose, un fenóme- juntas representan aproximadamente 60% del peso de la molécu-
no denominado hemólisis. A medida que aumenta el área de su- la. Se cree que la función principal de la glicoforina proviene del
perficie de cada célula, la célula pierde agua y el contenido, com- gran número de cargas negativas que se producen en el ácido
puesto casi por completo de hemoglobina disuelta, fluye fuera de siálico, el residuo de azúcar al final de cada cadena de carbohidra-
la célula y deja una membrana plasmática “fantasma” (consúltese tos. Debido a estas cargas, los glóbulos rojos se repelen entre sí, lo
figura 4-32b). que impide que las células se agrupen a medida que circulan a
Una vez aisladas las membranas plasmáticas de los eritroci- través de los pequeños vasos del cuerpo. Es digno de mención que
tos, las proteínas se pueden solubilizar y separarse unas de otras las personas que carecen tanto de glicoforina A como de B en sus
(fraccionarse), lo que proporciona una mejor idea de la diversidad glóbulos rojos no muestran efectos negativos de su ausencia. Al
de proteínas dentro de la membrana. El fraccionamiento de las mismo tiempo, las proteínas de la banda 3 en estos individuos
proteínas de membrana se puede llevar a cabo mediante electro- están más fuertemente glucosiladas, lo que aparentemente com-
foresis en gel de poliacrilamida (PAGE, polyacrylamide gel electro- pensa las cargas negativas que de otro modo faltaban para evitar
phoresis), en presencia del detergente iónico dodecilsulfato de la interacción célula-célula. La glicoforina también es el receptor
sodio (SDS, sodium dodecyl sulfate). (La técnica de SDS-PAGE se utilizado por el protozoo que causa la malaria, al proporcionar un
trata en la sección 18.13). La SDS mantiene las proteínas integra- camino para la entrada a la célula sanguínea. En consecuencia, se
les solubles, y además agrega un gran número de cargas negati- cree que los individuos cuyos eritrocitos carecen de glicoforina A
vas a las proteínas con las que se asocia. Debido a que el número y B están protegidos contra la malaria.
de moléculas de SDS cargadas por unidad de peso de proteína
tiende a ser relativamente constante, las moléculas se separan
unas de otras de acuerdo con su peso molecular. Las proteínas
El esqueleto de la membrana del eritrocito
más grandes se mueven más lentamente a través del tamiz mole- La membrana plasmática de los eritrocitos está soportada por un
cular del gel. Las principales proteínas de la membrana de eritro- esqueleto fibrilar compuesto de proteínas periféricas de membra-
citos se separan por SDS-PAGE en aproximadamente una docena na (véase figura 4-32d, e), que desempeña un papel principal en
de bandas llamativas (véase figura 4-32c). Entre las proteínas hay la determinación de la forma bicóncava del eritrocito. Como se
una variedad de enzimas (que incluyen gliceraldehído 3-fosfato discutió en la página 135, el esqueleto de membrana puede esta-
deshidrogenasa, una de las enzimas de la glucólisis), proteínas de blecer, dentro de esta, dominios que encierran grupos particula-
transporte (para iones y azúcares) y proteínas esqueléticas (p. ej., res de proteínas de membrana, y puede restringir en gran medida
la espectrina). el movimiento de estas proteínas. El componente principal del
esqueleto es una proteína fibrosa alargada, llamada espectrina. La
Proteínas integrales de la espectrina es un heterodímero de aproximadamente 100 nm de
membrana de eritrocitos longitud que consta de subunidades a y b, curvadas una alrede-
dor de la otra. Dos de estas moléculas diméricas están unidas en
En la figura 4-32d) se observa un modelo de membrana plasmáti- sus extremos superiores para formar un filamento de 200 nm que
ca de eritrocitos que muestra sus principales proteínas. Las pro- es tan flexible como elástico. La espectrina se une a la superficie
teínas integrales más abundantes de esta membrana son un par interna de la membrana —mediante enlaces no covalentes— a otra
de proteínas que atraviesan la membrana y que contienen carbo- proteína periférica, la anquirina (las esferas verdes de la figura
hidratos, llamadas banda 3 y glicoforina A. La alta densidad de 4-32), que a su vez está unida en forma no covalente al dominio
estas proteínas dentro de la membrana se aprecia en las micro- citoplásmico de una molécula de la banda 3. Como es evidente en
grafías de fractura por congelación de la figura 4-15. La banda 3, las figuras 4-32d y e), los filamentos de espectrina están organiza-
que recibe su nombre de su posición en un gel electroforético dos en matrices hexagonales o pentagonales. Esta red bidimen-
(obsérvese figura 4-32c), está presente como un dímero compues- sional se construye uniendo ambos extremos de cada filamento
to por dos subunidades idénticas (un homodímero). Cada subuni- de espectrina a un grupo de proteínas que incluye filamentos
dad abarca la membrana al menos una docena de veces, y contie- cortos de actina y tropomiosina, proteínas que suelen participar en
ne una cantidad relativamente pequeña de carbohidratos (6-8% actividades contráctiles (véase capítulo 9). Varias enfermedades
en peso de la molécula). La proteína banda 3 sirve como un canal genéticas (anemias hemolíticas) caracterizadas por eritrocitos frági-
para el intercambio pasivo de aniones a través de la membrana. les y de forma anormal se han remontado a mutaciones en anqui-
A medida que la sangre circula por los tejidos, el dióxido de car- rina o espectrina.
bono se disuelve en el líquido del torrente sanguíneo (el plasma) Si las proteínas periféricas se eliminan del “fantasma de eri-
y se somete a la siguiente reacción: trocito”, la membrana se fragmenta en vesículas pequeñas, lo que
indica que la red interna de proteínas es necesaria para mantener
H2O + CO2 y H2CO3 y HCO–3 + H
+
la integridad de la membrana. Los eritrocitos son células circulan-
 138 PERIFÉRICO INTEGRAL

Mayor Menor
Espectrina
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Anquirina
ATPasa
Banda 3 AChe
Banda 4.1 Glicoforina A
Banda 4.2

a) b)
Actina
G3PD

Banda 7

Anquirina c)
Banda 4.1

Actina

Banda 4.1
Tropomiosina

Espectrina
α
β

Banda 3
d) Glicoforina A

FIGURA 4-32 Membrana plasmática del eritrocito humano. a) Micrografía electrónica de ba-
rrido de eritrocitos humanos. b) Micrografía que muestra los “fantasmas de membrana” en el
plasma, que se aislaron al permitir que los eritrocitos se hinchen y se hemolicen como se des-
cribe en el texto. c) Resultados de la electroforesis en el gel de la SDS-poliacrilamida (SDS-
PAGE) utilizada para fraccionar las proteínas de membrana de eritrocitos, que se identifican a
los lados del gel. d) Un modelo de la membrana plasmática de los eritrocitos visto desde la su-
perficie interna, que muestra las proteínas integrales impregnadas en la bicapa lipídica y la dis-
posición de las proteínas periféricas que conforman el esqueleto interno de la membrana. El
dímero de banda 3 que se muestra aquí está simplificado. La proteína de la banda 4.1 estabili-
za los complejos actina-espectrina. e) Microfotografía electrónica que muestra la disposición
de las proteínas del esqueleto de la membrana interna.
FUENTE: a) Cortesía de François M. M. Morel, Richard F. Baker y Harold Wayland, reproducida
con permiso de The Rockefeller University Press; b) Cortesía de Joseph F. Hoffman; c) De V. T.
Marchesi, H. Furthmayr, y M. Tomita. Annu Rev Biochem vol. 45; © 1976 por Annual Reviews
Inc; d) Por D. Voet y J. G. Voet, Biochemistry, 2ª ed.; Copyright ©1995, John Wiley & Sons, Inc.;
e) De Shih-Chun Liu, Laura H. Derick, y Jiri Palek, J Cell Biol 1987;104:527, reproducido con
e) permiso de The Rockefeller University Press.
tes que se comprimen bajo presión a través de capilares micros- Pasivo Activo 139
cópicos, cuyo diámetro es considerablemente menor que el de los
propios eritrocitos. Para atravesar estos pasillos angostos, y para No mediado Mediado por transportador
hacerlo día tras día, los glóbulos rojos deben ser altamente defor-

4.9 ӝ Movimiento de solutos a través de las membranas celulares

mables, duraderos y capaces de resistir las fuerzas en cizalla que A B C D
tienden a romperlo. La red actuante de actina-espectrina propor-
ciona a la célula la fuerza, la elasticidad y la flexibilidad necesa-
rias para llevar a cabo su exigente función.
Cuando se descubrió por primera vez, se pensó que el esque-
leto de la membrana del eritrocito era una estructura única, ade- ATP ADP
cuada a la forma única y las necesidades mecánicas de este tipo +
A B C D Pi
de célula. Sin embargo, a medida que se examinaron otras célu- a) b) c) d)
las, se han descubierto tipos similares de esqueletos de membra-
na que contienen miembros de las familias de espectrina y anqui-
rina, lo que indica que los esqueletos de la membrana interna O2 Na+ Glucosa Na+ K+
están muy extendidos. La distrofina, por ejemplo, es un miembro
de la familia de espectrinas que se encuentra en el esqueleto de
membrana de las células musculares. Las mutaciones en la distro-
fina son responsables de causar la distrofia muscular, una enfer-
medad devastadora que paraliza y mata a los niños. Las mutacio- ATP ADP+Pi
nes más debilitantes son las que conducen a una ausencia O2 Na+ Glucosa Na+ K+
completa de la proteína en la célula. Las membranas plasmáticas e)
de las células musculares que carecen de distrofina al parecer se FIGURA 4-33 Cuatro mecanismos básicos por los cuales las moléculas
destruyen como consecuencia del estrés mecánico ejercido sobre de soluto se mueven a través de las membranas. Los tamaños relativos
ellas a medida que el músculo se contrae. Como resultado, las de las letras indican las direcciones de los gradientes de concentración. a)
células musculares mueren, y finalmente ya no se reemplazan. Difusión simple a través de la bicapa, que siempre procede de una con-
centración alta a una baja. b) Difusión simple a través de un canal acuoso
formado dentro de una proteína de membrana integral, o un grupo de ta-
REPASO les proteínas. Como en a), el movimiento siempre es hacia abajo de un
gradiente de concentración. c) Difusión facilitada en la que las moléculas
1. Comente dos funciones principales de las proteínas integrales
de soluto se unen específicamente a un portador de proteína de membra-
y periféricas de la membrana eritrocítica. na (un transportador facilitador). Como en a) y b), el movimiento siempre
es de la alta a la baja concentración. d) Transporte activo por medio de un
transportador de proteínas, con un sitio de enlace específico que experi-
4.9 Movimiento de solutos a través menta un cambio en afinidad, potenciado por la energía liberada en un
proceso exergónico como la hidrólisis del ATP. El movimiento ocurre con-
de las membranas celulares tra el gradiente de concentración. e) Ejemplos de cada tipo de mecanismo
como ocurre en la membrana de un eritrocito.
Debido a que los contenidos de una célula están completamente
rodeados por su membrana plasmática, toda la comunicación en-
tre la célula y el medio extracelular debe estar mediada por esta
estructura. La membrana plasmática es una barrera que retiene baja concentración, hasta que al final se elimina la diferencia de
los materiales disueltos de la célula para que no se filtren al medio concentración entre las dos regiones. Como se discutió en el ca-
ambiente; sin embargo, debe permitir el intercambio de materia- pítulo 3, la difusión depende del movimiento térmico continuo
les necesarios dentro y fuera de la célula. La bicapa de lípidos de de los solutos, y es un proceso exergónico impulsado por un au-
la membrana es ideal para evitar la pérdida de solutos cargados y mento en la entropía. Las moléculas difusoras individuales no
polares de una célula. En consecuencia, se debe hacer alguna pro- “saben” en qué dirección moverse: una molécula individual ten-
visión especial para permitir el movimiento de nutrientes, iones, drá la misma probabilidad de moverse hacia una región de ma-
productos de desecho y otros compuestos, dentro y fuera de la yor o menor concentración. Pero debido a que hay más molécu-
célula. Básicamente, existen dos medios para el movimiento de las en un volumen dado de una región de alta concentración que
sustancias a través de una membrana: pasivamente por difusión, en una región de baja concentración, en promedio más molécu-
o activamente por un proceso de transporte acoplado a la ener- las se moverán de regiones de concentración más altas a regio-
gía. Ambos tipos de movimientos conducen al flujo neto de un nes de concentración más bajas que a la inversa. Restringiremos
ion o compuesto en particular. El término flujo neto indica que el la siguiente discusión a la difusión de sustancias a través de las
movimiento de la sustancia hacia la célula (afluencia) y fuera de la membranas.
célula (eflujo) no está equilibrado, sino que uno excede al otro. Para comprender la energía de la difusión, recordemos que el
Se conocen cuatro procesos diferentes por los cuales las sus- ΔG depende de qué tan lejos está un estado del equilibrio. En la
tancias se mueven a través de las membranas: difusión simple a difusión el equilibrio se alcanza cuando la concentración es igual
través de la bicapa lipídica; difusión simple a través de un canal a ambos lados de la membrana. El cambio de energía libre cuan-
acuoso revestido de proteína; difusión facilitada por un transpor- do un soluto sin carga eléctrica (un no electrólito) se difunde a
tador de proteínas, y el transporte activo, que requiere una “bom- través de una membrana depende de cuán diferente es la con-
ba” de proteínas, impulsadas por energía, capaz de mover sustan- centración en los dos lados de la membrana. Esta diferencia se
cias contra el gradiente de concentración (véase FIGURA 4-33). conoce como gradiente de concentración. La siguiente relación
Consideraremos cada uno a su vez, pero primero discutiremos la describe el movimiento de un no electrólito hacia adentro de la
energía del movimiento de solutos. célula:
[Ci]
Energética del movimiento de solutos ΔG = RT ln
[Co]
La difusión es un proceso espontáneo en el que una sustancia se [Ci]
ΔG = 2.303 RT log10
mueve desde una región de alta concentración a una región de [Co]
 140 donde ΔG es el cambio de energía libre (consúltese sección 3.2), Por tanto, bajo estas condiciones la diferencia de concentración y
R la constante de los gases, T la temperatura absoluta y [Ci]/[Co] el potencial eléctrico hacen contribuciones similares al almacena-
la relación de la concentración del soluto en las superficies inter- miento de energía libre a través de la membrana.
nas (i) y externas (o) de la membrana. A 25 °C, La interacción entre la concentración y las diferencias de po-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

+
tencial se observa en la difusión de iones de potasio (K ) fuera de
[C1] una célula. El eflujo del ion se ve favorecido por el gradiente de
ΔG


LDBMNPM
p
MPH10
[Co] concentración de K+, que tiene una mayor concentración de K+
dentro de la célula, pero obstaculizada por el gradiente eléctrico
que crea su difusión, lo que deja una carga negativa más alta den-
Resulta claro que si las concentraciones dentro y fuera son igua-
tro de la célula. Discutiremos más sobre este tema cuando consi-
les, ΔG = 0 y el sistema está en equilibrio. Si la relación [Ci]/[Co]
deremos el tema de los potenciales de membrana y los impulsos
es menor que 1.0 el logaritmo de la relación será negativo, ΔG es
nerviosos en la sección 4.16.
negativo, y la afluencia neta de soluto se favorece termodinámi-
camente (exergónica). Por ejemplo, si la concentración externa de
soluto es 10 veces la concentración interna, ΔG = –1.4 kcal/mol.
Por tanto, mantener un gradiente de concentración de 10 repre-
senta un almacenamiento de 1.4 kcal/mol. A medida que el solu-
REPASO
to se mueve dentro de la célula el gradiente de concentración
disminuye, la energía almacenada se disipa y el ΔG disminuye 1. Compare y correlacione las cuatro formas básicamente dife-
hasta que en el equilibrio ΔG = 0. (Para calcular el ΔG en el movi- rentes en que una sustancia se puede mover a través de la
membrana plasmática (como se indica en la figura 4-33).
miento de un soluto hacia fuera de la célula, el término de la re-
2. Contraste la diferencia energética entre la difusión de un elec-
lación de concentraciones se convierte en [Co]/[Ci]).
trólito frente a un no electrólito a través de la membrana.

Formación de un gradiente
electroquímico
Si el soluto es un electrólito (una especie cargada), también se 4.10 Difusión a través de la
debe considerar la diferencia de carga global entre los dos com-
partimientos. Como resultado de la repulsión mutua de iones de
bicapa lipídica
cargas similares, es termodinámicamente desfavorable que un La membrana plasmática es una barrera permeable selectiva que
electrólito se mueva a través de una membrana de un comparti- permite el paso de soluto por varios mecanismos, incluida la di-
miento a otro que tenga una carga neta del mismo signo. Por el fusión simple a través de la bicapa lipídica. La difusión es un pro-
contrario, si la carga del electrólito es opuesta en signo a la del ceso independiente de la energía en el que un soluto desciende
compartimiento en que se está moviendo, el proceso se favorece un gradiente electroquímico, y disipa la energía libre almacenada
termodinámicamente. Cuanto mayor sea la diferencia de carga (la en el gradiente. Los solutos inorgánicos pequeños como el O2,
diferencia de potencial o voltaje) entre los dos compartimientos, CO2 y H2O penetran fácilmente en la bicapa lipídica, al igual que
mayor será la diferencia en la energía libre. Por tanto, la tenden- los solutos con alta solubilidad en lípidos. Los iones y las solucio-
cia de un electrólito a difundirse entre dos compartimientos de- nes orgánicas polares, como azúcares y aminoácidos, requieren
pende de dos gradientes: un gradiente químico, determinado por transportadores especiales para entrar o salir de la célula.
la diferencia de concentración de la sustancia entre los dos com-
partimientos, y el gradiente de potencial eléctrico, determinado
por la diferencia de carga. Juntas, estas diferencias se combinan Difusión de sustancias a través
para formar un gradiente electroquímico. El cambio de energía de membranas
libre para la difusión de un electrólito en la célula es
Se deben cumplir dos requisitos antes de que un no electrólito se
[Ci] pueda difundir pasivamente a través de una membrana plasmá-
ΔG = RT ln + zPΔEm
[Co] tica. La sustancia debe estar presente a mayor concentración en
un lado de la membrana que el otro, y la membrana debe ser
donde z es la carga eléctrica del soluto, F la constante de Faraday permeable a la sustancia. Una membrana puede ser permeable a
(23.06 kcal/V · equivalente, donde un equivalente es la cantidad un soluto dado, ya sea 1) porque ese soluto puede pasar directa-
de electrólito que tiene un mol de carga eléctrica) y ΔEm la dife- mente a través de la bicapa lipídica, o 2) porque ese soluto puede
rencia de potencial (en volts) entre los dos compartimientos. atravesar un poro acuoso que abarca la membrana. Comencemos
Vimos en el ejemplo anterior que una diferencia de 10 veces en la por considerar la ruta anterior, en la que una sustancia debe di-
concentración de un no electrólito a través de una membrana a solverse en la bicapa lipídica en su camino a través de la mem-
25 °C genera un ΔG de –1.4 kcal/mol. Supongamos que el gra- brana.
+
diente de concentración consiste en iones de Na , que estaban La discusión de la difusión simple nos lleva a considerar la
presentes en una concentración 10 veces mayor fuera de la célula polaridad de un soluto. Una medida simple de la polaridad (o no
que en el citoplasma. Debido a que el voltaje típico a través de la polaridad) de una sustancia es su coeficiente de partición, que
membrana de una célula es de alrededor de –70 mV (página 159), es la relación de su solubilidad en un disolvente no polar, como
el cambio de energía libre para el movimiento de 1 mol de iones el octanol o un aceite vegetal, a la del agua, en condiciones en que
+
de Na en la célula bajo estas condiciones sería el disolvente no polar y el agua están mezclados. La FIGURA 4-34
muestra la relación entre el coeficiente de partición y la permea-
∆G = –1.4 kcal/mol + zF∆Em bilidad de la membrana de una variedad de sustancias químicas
y fármacos. Se hace evidente que cuanto mayor es la solubilidad
∆G = –1.4 kcal/mol + (1)(23.06 kcal/V · mol)(–0.07V) de los lípidos más rápida es la penetración.
Otro factor que determina la tasa de penetración de un com-
∆G = –3.1 kcal/mol puesto a través de una membrana es su tamaño. Si dos moléculas
 10–3 nas celulares. En consecuencia, las membranas son altamente 141
permeables a moléculas inorgánicas pequeñas, como el O2, CO2,
Permeabilidad cerebrovascular (cm/seg) NO y H2O, que se cree se deslizan entre fosfolípidos adyacentes.
10–4 Z
~ * Por el contrario, las moléculas polares más grandes, como azúca-

4.10 ӝ Difusión a través de la bicapa lipídica

Y
res, aminoácidos e intermedios fosforilados, exhiben una pobre
W X capacidad de penetración de la membrana. Como resultado, la
T
10–5 U V
S bicapa lipídica de la membrana plasmática proporciona una ba-
R rrera efectiva que evita que estos metabolitos esenciales se difun-
P Q O
10–6
N dan fuera de la célula. Algunas de estas moléculas (p. ej., azúcares
M
K y aminoácidos) deben ingresar a las células del torrente sanguí-
I L
J
E
H
F
G neo, pero no pueden hacerlo por simple difusión. En su lugar,
C
10–7 D deben existir mecanismos especiales para mediar en su penetra-
B
ción a través de la membrana plasmática. El uso de tales mecanis-
A
mos permite que una célula regule el movimiento de sustancias a
–8
10 través de su barrera de superficie. Más adelante volveremos a
10–4 10–3 10–2 10–1 1 10 100 1 000
esta característica de las membranas.
Coeficiente de partición octanol-agua
A. Sacarosa J. Vinblastina S. Misonidazol Difusión del agua a través
B. Epipodofilotoxina K. Curare T. Propilenglicol
C. Manitol L. Tiourea U. Metronidazol de las membranas
D. Arabinosa M. Dianhidrogalacticol V. Mostaza de espirohidantoína
E. N-metil nicotinamida N. Glicerol W. Procarbazina Las moléculas de agua se mueven mucho más rápido a través de
F. Metotrexato O. 5-FU X. PCNU
G. Vincristina P. Etilenglicol Y. Antipirina una membrana celular que los iones disueltos o pequeños solutos
H. Urea Q. Acetamida Z. Cafeína orgánicos polares, que son esencialmente no penetrantes. Debido
I. Formamida R. Ftorafur ~. BCNU
*. CCNU
a esta diferencia en la capacidad de penetración del agua frente a
los solutos se dice que las membranas son semipermeables. El
FIGURA 4-34 Relación entre el coeficiente de partición y la permeabili- agua se mueve fácilmente a través de una membrana semiper-
dad de la membrana. En este caso se realizaron mediciones de la pe- meable desde una región de menor concentración de soluto a una
netración de varias sustancias químicas y fármacos a través de las mem- región de mayor concentración de soluto. Este proceso se llama
branas plasmáticas de las células que recubren los capilares del cerebro. ósmosis, y se demuestra de inmediato al colocar una célula en
Las sustancias penetran estas células por un paso a través de la bicapa li-
una solución que contenga un soluto no penetrante a una con-
pídica. El coeficiente de partición se expresa como la relación entre la so-
lubilidad de un soluto en octanol y su solubilidad en agua. La permeabili- centración diferente a la presente dentro de la célula.
dad se expresa como penetrancia (P) en cm/s. Para todos, excepto unos Cuando dos compartimientos de diferente concentración de
pocos compuestos como la vinblastina y vincristina, la penetrancia es di- soluto están separados por una membrana semipermeable, se
rectamente proporcional a la solubilidad de los lípidos. dice que el compartimiento con la concentración de soluto más
FUENTE: De N. J. Abbott e I. A. Romero, Molec Med Today 1996;2:110; alta es hipertónico (o hiperosmótico) en relación con el com-
Copyright 1996, con permiso de Elsevier Science. partimiento de menor concentración de soluto, que se describe
como hipotónico (o hipoosmótico). Cuando se coloca una cé-
lula en una solución hipotónica, la célula gana agua rápidamente
tienen coeficientes de partición aproximadamente equivalentes, por ósmosis y se expande (véase FIGURA 4-35a). Por el contrario,
la molécula más pequeña tiende a penetrar la bicapa lipídica de una célula colocada en una solución hipertónica pierde agua rá-
una membrana más rápido que la mayor. Las moléculas muy pe- pidamente por ósmosis y se contrae (consúltese figura 4-35b).
queñas y sin carga penetran muy rápido a través de las membra- Estas simples observaciones muestran que el volumen de una

Ganancia neta de agua Pérdida neta de agua Sin pérdida o

La célula se expande La célula se encoge ganancia neta

H2O
H2O H2O H2O H2O
H2O H 2O
H2O

H2O

H2O H2O H2O H2O H2O H2O

H2O

a) Solución hipotónica b) Solución hipertónica c) Solución isotónica

FIGURA 4-35 Efectos de la diferencia en la concentración de solutos en lados opuestos de la membrana plasmática. a) Una célula colocada en una
solución hipotónica (una que tiene una concentración de soluto más baja que la célula) se expande debido a una ganancia neta de agua por ósmosis.
b) Una célula en una solución hipertónica se contrae debido a una pérdida neta de agua por ósmosis. c) Una célula colocada en una solución isotónica
mantiene un volumen constante, porque el flujo de agua hacia el interior es igual al flujo hacia afuera.
 142 célula está controlado por la diferencia entre la concentración de
soluto dentro de ella y la del medio extracelular. Por lo general, Hipotónico:
la expansión y contracción de las células en medios ligeramente presión de
hipotónicos e hipertónicos son solo eventos temporales. En unos turgencia normal
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

minutos, las células se recuperan y vuelven a su volumen origi-

nal. En un medio hipotónico la recuperación ocurre cuando las
células pierden iones, lo que reduce su presión osmótica interna.
En un medio hipertónico, la recuperación ocurre cuando las cé-
lulas obtienen iones del medio. Una vez que la concentración
interna de soluto —que incluye una alta concentración de proteí-
nas disueltas— es igual a la concentración externa de soluto, los
fluidos internos y externos son isotónicos (o isosmóticos) y no
se produce movimiento neto de agua hacia o desde las células
(véase figura 4-35c).
La ósmosis es un factor importante en una multitud de fun-
ciones corporales. Nuestro tracto digestivo, por ejemplo, secreta

Plasmólisis
varios litros de líquido diariamente, que las células que recubren
el intestino reabsorben osmóticamente. Si este líquido no se reab-
a)
sorbe, como ocurre en los casos de diarrea extrema, nos enfren- H 20
taríamos a la perspectiva de una deshidratación rápida. De he-
cho, la enfermedad bacteriana del cólera mata a más de 100 000
personas cada año, en lo esencial debido a la pérdida de agua en
los intestinos, impulsada por la ósmosis. Las plantas utilizan la
ósmosis de diferentes maneras. A diferencia de las células anima-
les, que por lo general son isotónicas con el medio en el que se
sumergen, las células vegetales usualmente son hipertónicas en
comparación con su entorno fluido. Como resultado hay una ten-
dencia a que el agua ingrese a la célula, lo que provoca que desa-
rrolle una presión interna (turgencia) que la empuja contra la pa-
red circundante (obsérvese la FIGURA 4-36a). La presión de
turgencia proporciona soporte para plantas no leñosas y para las
partes no leñosas de los árboles, como las hojas. Si una célula
vegetal se coloca en un medio hipertónico, su volumen se reduce Hipertónico:
a medida que la membrana plasmática se aleja de la pared celular sin presión
circundante, un proceso llamado plasmólisis (véase la figura de turgencia
4-36b). La pérdida de agua debido a la plasmólisis hace que las
plantas pierdan su soporte y se marchiten.
No todas las células son igualmente permeables al agua. De
hecho, muchas células son mucho más permeables al agua de lo b)
que se puede explicar por simple difusión a través de la bicapa
lipídica. Una familia de pequeñas proteínas integrales, llamadas FIGURA 4-36 Efectos de la ósmosis en una célula vegetal. a) Las plantas
acuáticas que viven en agua dulce están rodeadas por un entorno hipotó-
acuaporinas, permite el movimiento pasivo de agua de un lado de nico. Por tanto, el agua tiende a fluir hacia las células, creando presión de
la membrana plasmática al otro. Cada subunidad de acuaporina turgencia. b) Si la planta se coloca en una solución hipertónica como el
(en la proteína de cuatro subunidades) contiene un canal central, agua de mar, la célula pierde agua y la membrana plasmática se separa
que está alineado principalmente con residuos de aminoácidos de la pared celular.
hidrofóbicos y es altamente específico para las moléculas de agua. FUENTE: Ed Reschke.
Alrededor de mil millones o tanto de moléculas de agua pueden
pasar por segundo —en solo una línea— a través de cada canal. Al
+
mismo tiempo los iones H , que normalmente saltan a lo largo de
una cadena de moléculas de agua, no pueden penetrar estos po- paso del agua desempeña un papel crucial en las actividades fi-
ros abiertos. Una combinación de estudios cristalográficos de ra- siológicas del tejido. La hormona vasopresina, que estimula la
yos X ha sugerido el aparente mecanismo por el cual estos canales retención de agua por los conductos colectores del riñón, actúa
son capaces de excluir protones, ha revelado la estructura de la por medio de una de estas proteínas (AQP2). Algunos casos del
proteína, y simulaciones de dinámica molecular (página 58) que trastorno hereditario diabetes insípida nefrogénica congénita se ori-
han puesto esta estructura proteica en operación. Un modelo con ginan a partir de mutaciones en este canal de acuaporina. Las
base en tales simulaciones se muestra en la FIGURA 4-37a). Muy personas que padecen esta enfermedad excretan grandes canti-
cerca de su punto más estrecho, la pared de un canal de acuapo- dades de orina, porque sus riñones no responden a la vasopre-
rina contiene un par de cargas eléctricas positivas posicionadas sina.
con precisión (residuos N203 y N68 en la figura 4-37b) que atraen
el átomo de oxígeno de cada molécula de agua a medida que
avanza a través de la constricción de la proteína. Esta interacción
REPASO
reorienta la molécula de agua central en una posición que le im-
pide mantener los enlaces de hidrógeno que normalmente la 1. Describa la relación entre el coeficiente de partición y el tama-
unen a las vecinas moléculas de agua. Esto elimina el puente que ño molecular con respecto a la permeabilidad de la membra-
na.
normalmente permitiría que los protones se muevan de una mo-
2. Explique los efectos de poner una célula en un medio hipotó-
lécula de agua a otra.
nico, hipertónico o isotónico.
Las acuaporinas son particularmente prominentes en células
como las de un túbulo renal o la raíz de una planta, donde el
FIGURA 4-37 El paso de moléculas 143
de agua a través de un canal de
acuaporina. a) Instantánea de una si-
mulación de dinámica molecular de
una corriente de moléculas de agua

4.11 ӝ La difusión de iones a través de membranas

(esferas rojas y blancas) que pasan en
una sola fila a través del canal de una
de las subunidades de una molécu-
la de acuaporina, que reside dentro
de una membrana. b) Modelo que
describe el mecanismo por el cual las
moléculas de agua pasan a través de
un canal de acuaporina con la exclu-
sión simultánea de protones. Se
muestra que nueve moléculas de
agua están alineadas en una sola fila
a lo largo de la pared del canal. Cada
molécula de agua se representa co-
mo un átomo O circular rojo con dos
H asociados. En este modelo las cua-
tro moléculas de agua en la parte su-
perior e inferior del canal están orien-
tadas, como resultado de su
interacción con los grupos carbonilo
(C“O) de la cadena principal de la
proteína (página 49), con sus átomos
de H apuntando lejos del centro del a)
canal. Estas moléculas de agua pue-
den formar enlaces de hidrógeno (líneas discontinuas) con sus vecinos. Por el contrario, la única molécula de
agua en el centro del canal está orientada en una posición que evita que forme enlaces de hidrógeno con otras
moléculas de agua, lo que tiene el efecto de interrumpir el flujo de protones a través del canal. Las animaciones
de los canales de acuaporina se pueden encontrar en www.nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laurea- b)
tes/2003/animations.html
FUENTE: a) De Benoit Roux y Klaus Schulten. Structure 2004;12:1344, con permiso de Elsevier; b) De R. M. Stroud
et al. Curr Opin Struct Biol 13:428, © 2003, con permiso de Elsevier.

4.11 La difusión de iones a través na que son permeables a iones específicos. La prueba directa de la
de membranas existencia de canales iónicos surgió a través del trabajo de Bert
Sakmann y Erwin Neher en el Instituto Max-Planck en Alemania,
La bicapa lipídica que constituye el núcleo de las membranas bio- a fines de la década de 1970 y principios de la década de 1980,
lógicas es altamente impermeable a las sustancias cargadas, in- quienes desarrollaron técnicas para monitorear la corriente iónica
+ + + –
cluidos los iones pequeños como Na , K , Ca2 y Cl . Sin embar- que pasa a través de un único canal de iones. Esto se logra con
go, el movimiento rápido (conductancia) de estos iones a través microelectrodos en una pipeta muy fina, hechos de vidrio pulido,
de las membranas realiza un papel crítico en muchas actividades que se colocan en la superficie externa de la célula y se sellan a la
celulares, que comprenden la formación y propagación de un im- membrana mediante succión. El voltaje a través de la membrana
pulso nervioso, secreción de sustancias en el espacio extracelular, se puede mantener (ajustar) a cualquier valor particular, y se pue-
contracción muscular, regulación del volumen celular, y la aper- de medir la corriente originada en el pequeño parche de membra-
tura de los poros estomáticos en las hojas de las plantas. na rodeado por la pipeta (véase FIGURA 4-38). Estos estudios his-
En 1955, Alan Hodgkin y Richard Keynes de la Universidad de tóricos marcaron las primeras investigaciones exitosas sobre las
Cambridge propusieron por primera vez que las membranas celu- actividades de las moléculas de proteínas individuales. En la ac-
lares contienen canales iónicos; es decir, aberturas en la membra- tualidad los biólogos han identificado una variedad desconcertan-

FIGURA 4-38 Medición de la conductancia del

canal iónico mediante registro con pinza y par-
che. Técnica de fijación de membrana (patch-
clamp). a) En esta técnica se coloca una micropi-
peta de vidrio altamente pulida contra una parte
de la superficie externa de una célula y se aplica
succión para sellar el borde de la pipeta contra la
membrana plasmática. Como la pipeta está ca-
bleada como un electrodo (un microelectrodo) es
posible aplicar un voltaje a través del parche de
membrana encerrado por la pipeta, y medir el flu-
jo de respuesta de los iones a través de los ca-
nales de la membrana. Como se indica en la figu-
ra, la micropipeta puede encerrar un parche de
membrana que contiene un solo canal de iones,
lo que permite a los investigadores controlar la
apertura y el cierre de un único canal con com-
puerta, así como su conductancia a diferentes
voltajes aplicados. b) La micrografía muestra re-
a) b) 35
gistros con pinza y parche realizadas a partir
de una única célula fotorreceptora de la retina de una salamandra. Una parte de la célula se aspira en una micropipeta de vidrio por succión, mientras
que una segunda micropipeta-electrodo (abajo a la derecha) se sella contra un pequeño parche de la membrana plasmática en otra porción de la célula.
FUENTE: b) De T. D. Lamb, H. R. Matthews, V. Torre. J. Physiology 1986;372:319. © 1986, reproducida con permiso de John Wiley & Sons.
 144 te de canales iónicos, cada uno formado por proteínas integrales vestimiento de un filtro de selectividad estrecho, llamado así por su
+
de membrana que encierran un poro acuoso central. Como era de función de permitir solo el paso de iones K .
esperar, las mutaciones en los genes que codifican los canales ió- El revestimiento del filtro de selectividad contiene un penta-
nicos pueden conducir a muchas enfermedades graves (consúltese péptido —Gly-Tyr-Gly-Val-Thr altamente conservado— (o GYGVT
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

tabla 1 de “La perspectiva humana”, página 158). en la nomenclatura de una sola letra). La estructura cristalina de
La mayoría de los canales de iones son altamente selectivos, rayos X del canal KcsA muestra que los grupos carbonilo de la
al permitir que solo un tipo particular de iones pase a través del columna (C=O) del pentapéptido conservado (véase la estructura
poro. Como ocurre con la fusión pasiva de otros tipos de solutos de la columna en la página 49) crean cinco anillos sucesivos de
a través de las membranas, la difusión de iones a través de un átomos de oxígeno (cuatro anillos están formados por oxígenos
canal siempre es descendente; es decir, desde un estado de ener- de carbonilo de la estructura polipeptídica, y un anillo consta de
gía superior a un estado de energía inferior. La mayoría de los átomos de oxígeno de la cadena lateral de treonina). Cada anillo
canales iónicos que se han identificado pueden existir en una contiene cuatro átomos de oxígeno (uno de cada subunidad) y
configuración abierta o cerrada; se dice que dichos canales son de tiene un diámetro de aproximadamente 3 Å, que es ligeramente
+
compuerta. La apertura y el cierre de las compuertas están suje- mayor que el diámetro de 2.7 Å de un ion K que ha perdido su
tos a una regulación fisiológica compleja y se pueden inducir por caparazón de hidratación normal. En consecuencia, los átomos
una variedad de factores, en dependencia del canal particular. Se
distinguen tres categorías principales de canales con compuerta:
1. Canales activados por voltaje, cuyo estado conformacional G O O G
K+
depende de la diferencia en la carga iónica en ambos lados de Y O O Y
la membrana. G O O G
2. Canales activados por ligandos, cuyo estado conformacio- K+
nal depende del enlace de una molécula específica (el ligando), V O O V
que normalmente no es el soluto que pasa a través del canal. T O O T
Algunos canales activados por ligandos se abren (o se cierran) +
K
después de la unión de una molécula a la superficie externa
del canal; otros se abren (o se cierran) después de la unión de
un ligando a la superficie interna del canal. Por ejemplo, los Filtro
neurotransmisores, como la acetilcolina, actúan sobre la super- selectivo
ficie externa de ciertos canales de cationes, mientras que los
nucleótidos cíclicos, como el cAMP, actúan sobre la superficie
interna de ciertos canales de iones de calcio.
3. Canales de compuerta mecánica cuyo estado conformacio- P
nal depende de las fuerzas mecánicas (p. ej., tensión de esti-
ramiento) que se aplican a la membrana. Por ejemplo, los
miembros de una familia de canales de cationes se abren me-
diante los movimientos de los estereocilios (véase figura 9-46)
Iones
en las células ciliadas del oído interno, en respuesta al sonido +
K
o los movimientos de la cabeza.
En la siguiente discusión nos centraremos en la estructura y fun-
ción de los canales de iones de potasio que dependen del voltaje,
porque estos son los mejores comprendidos.
En 1998 Roderick MacKinnon y sus colegas de la Universidad
Rockefeller proporcionaron la primera imagen de resolución ató-
mica de una proteína de canal iónico; en este caso, un canal de
+
ion K bacteriano llamado KcsA. La relación entre estructura y
función es evidente dondequiera en el mundo biológico, pero se- Hélice Hélice
+ M1
ría difícil encontrar un mejor ejemplo que el canal de iones K M2
representado en la FIGURA 4-39. Como se verá en breve, la for-
mulación de esta estructura condujo directamente a la compren-
sión del mecanismo por el cual estas notables máquinas molecu-
+
lares pueden seleccionar abrumadoramente los iones K sobre los FIGURA 4-39 Estructura tridimensional del canal bacteriano KcsA y la
+
iones Na , pero al mismo tiempo permiten una conductancia + +
selección de iones K . Este canal de iones K consta de cuatro subunida-
+
increíblemente rápida de iones K a través de la membrana. des, dos de las cuales se muestran aquí. Cada subunidad está compuesta
También se verá que los mecanismos de selectividad iónica y con- de hélices M1 y M2 unidas por un segmento P (poro) que consiste en una
ductancia en este canal bacteriano son prácticamente idénticos a hélice corta y una porción no helicoidal, que recubre el canal a través del
los que operan en los canales de mamíferos mucho mayores. cual pasan los iones. Una porción de cada segmento P contiene un penta-
péptido conservado (GYGVT) cuyos residuos recubren el filtro de selectivi-
Resulta evidente que los desafíos básicos en el funcionamiento de +
dad que filtra los iones K . Los átomos de oxígeno de los grupos carbonilo
un canal iónico se resolvieron relativamente temprano en la evo- de estos residuos se proyectan en el canal donde pueden interactuar se-
lución, aunque muchos refinamientos aparecieron en los siguien- +
lectivamente con los iones K (indicados por los objetos de malla roja)
tes uno o dos mil millones de años. dentro del filtro. Como se indica en el recuadro superior, el filtro de selec-
El canal KcsA consta de cuatro subunidades, dos de las cuales tividad contiene cuatro anillos de átomos de carbonilo O y un anillo de
se muestran en la figura 4-39. Se considera que cada subunidad átomos de treonilo O; cada uno de estos cinco anillos contiene cuatro áto-
mos de O, uno donado por cada subunidad. El diámetro de los anillos es
de la figura 4-39 contiene dos hélices que abarcan la membrana bastante grande para que ocho átomos de O puedan coordinar un único
(M1 y M2) y una región de poro (P) en el extremo extracelular del +
ion K , reemplazando su agua de hidratación normal. Aunque se muestran
canal. La P consiste en una hélice de poro corto que se extiende +
cuatro sitios de unión K , solo dos están ocupados a la vez.
aproximadamente un tercio del ancho del canal, y un bucle no FUENTE: De Roderick MacKinnon, Nature Med 5:1108, © 1999, reimpreso
helicoidal (color marrón claro en la figura 4-39) que forma el re- con permiso de Macmillan Publishers Ltd.
de O electronegativos que recubren el filtro de selectividad pue- 145
den sustituir la cubierta de las moléculas de agua, que se despla-
+
zan a medida que cada ion K ingresa al poro. En este modelo el
filtro de selectividad contiene cuatro posibles sitios de unión de

4.11 ӝ La difusión de iones a través de membranas

+
iones K . Como se indica en el recuadro superior de la figura
4-39, un ion K+ unido a cualquiera de estos cuatro sitios ocuparía
el centro de una “caja” que tiene cuatro átomos de O en un plano
por encima del ion, y cuatro átomos de O en un plano por debajo
+
del átomo. Como resultado, cada ion K en uno de estos sitios se
podría coordinar con ocho átomos de O del filtro de selectividad.
Mientras que el filtro de selectividad es un ajuste preciso para un
+
ion K deshidratado, es mucho más grande que el diámetro de
un ion Na+ deshidratado (1.9 Å). En consecuencia, un ion Na+ no
puede interactuar de manera óptima con los ocho átomos de oxí-
geno necesarios para estabilizarlo en el poro. Como resultado, los
+
iones Na más pequeños no pueden superar la barrera de energía
más alta requerida para penetrar en el poro.
+
Aunque hay cuatro sitios potenciales de unión de iones K ,
solo dos están ocupados en un momento dado. Se cree que los
iones de potasio se mueven de dos en dos, desde los sitios 1 y 3
hasta los sitios 2 y 4, como se indica en el recuadro superior de la FIGURA 4-40 Ilustración esquemática del modelo de flexión en bisagra
+ para la apertura del canal KcsA. Las hélices M2 de cada subunidad se
figura 4-39. La entrada de un tercer ion K en el filtro de selecti-
vidad crea una repulsión electrostática, que expulsa el ion unido curvan hacia afuera en un residuo de glicina específico, que abre la com-
+
puerta en el extremo intracelular del canal a los iones K .
en el extremo opuesto de la línea. Los estudios indican que prác-
FUENTE: Serdar Uysal, et al. Mechanism of activation gating in the full-eng-
ticamente no hay barrera de energía para que un ion se mueva de
th KcsA K+ channel. Proc Natl Acad Sci USA 2011;108:11896-9.
un sitio de unión al siguiente, lo que explica el flujo extremada-
mente rápido de iones a través de la membrana. En conjunto, KcsA, las cuatro hélices S6 recubren gran parte del poro, y su
estas conclusiones sobre la selectividad y la conductancia del ion configuración determina si la compuerta del canal está abierta
+
K proporcionan un excelente ejemplo de cuánto se puede apren- o cerrada.
der sobre la función biológica a través de la comprensión de la 2. Un dominio sensor de voltaje que consiste en hélices S1-S4
estructura molecular. que detectan el voltaje a través de la membrana plasmática
El canal KcsA representado en la figura 4-39 tiene una com- (como se explica más adelante).
puerta igual a la de los canales eucarióticos. La apertura de la com-
puerta del canal KcsA en respuesta a un pH muy bajo se ilustra en La estructura cristalina tridimensional de un canal de Kv eu-
la figura 4-22. La estructura del KcsA que se muestra en la figura cariótico completo purificado a partir de cerebro de rata se mues-
4-39 es en realidad la conformación cerrada de la proteína (a pesar tra en la FIGURA 4-42a). La determinación de esta estructura se
de que contiene iones en su canal). La comparación de las estruc- hizo posible mediante el uso de una mezcla de detergente y lípido
turas abierta y cerrada del KcsA sugiere fuertemente que la activa- durante todo el proceso de purificación y cristalización. Se cree
ción de estas moléculas se lleva a cabo mediante cambios confor- que es importante la presencia de fosfolípidos cargados negativa-
macionales de los extremos citoplasmáticos de las hélices internas mente para mantener la estructura nativa de la proteína de mem-
(M2). En la conformación cerrada, como se ve en la figura 4-39 y brana, y promover su función como un canal controlado por vol-
en la FIGURA 4-40 en azul, las hélices M2 son rectas y se cruzan taje. Al igual que el canal KcsA, un único canal Kv eucariótico
entre sí para formar un “ haz helicoidal” que sella la cara citoplás- consta de cuatro subunidades homólogas dispuestas simétrica-
mica del poro. En el modelo que se muestra en la figura 4-40, el mente alrededor del poro central conductor de iones (véase figura
canal se abre cuando las hélices M2 se doblan en un punto espe- 4-42b). El filtro de selectividad, y por tanto el mecanismo que se
cífico de bisagra, donde está localizado un residuo de glicina. +
presume para la selección de iones K , es virtualmente idéntico en
Ahora que hemos visto cómo operan estos canales procarió- las proteínas KcsA procarióticas y Kv eucarióticas. La compuerta
+
ticos de K , estamos en una mejor posición para entender la es- que conduce a un canal Kv está formada por los extremos internos
tructura y la función de las versiones eucarióticas más complejas, de las hélices S6, y se piensa que se abre y se cierra de una mane-
que se cree que tienen formas similares. Se han aislado genes que ra aproximadamente similar a la de las hélices M2 del canal bacte-
+
codifican una variedad de canales de K (o Kv) dependientes de riano (que se muestra en la figura 4-40). La proteína representada
la edad, y se investigó la anatomía molecular de sus proteínas. en la figura 4-42 muestra el estado abierto del canal.
6
Los canales Kv de las plantas desempeñan un papel importante La hélice S4, que contiene varios residuos de aminoácidos
en el equilibrio de la sal y el agua, y en la regulación del volumen cargados positivamente espaciados a lo largo de la cadena poli-
celular. Los canales Kv de animales son mejor conocidos por su peptídica (recuadro de la figura 4-41), actúa como el elemento
papel en la función muscular y nerviosa, que se explora al final clave del detector de voltaje. Se ve que el dominio de detección
del capítulo. Las subunidades de los canales de Kv eucariotas de voltaje está conectado al dominio poro mediante una hélice
contienen seis hélices asociadas a la membrana llamadas S1-S6, corta enlazadora, designada como S4-S5 en el modelo de la figura
que se muestran en dos dimensiones en la figura 4-41. Estas seis 4-42b). En condiciones de reposo, el potencial negativo a través
hélices se pueden agrupar en dos dominios funcionales distintos: de la membrana (página 159) mantiene la compuerta cerrada. Un
cambio en el potencial a un valor más positivo (una despolariza-
1. Un dominio poro, que tiene la misma arquitectura básica que
ción, página 160) ejerce una fuerza eléctrica sobre la hélice S4. Se
la del canal bacteriano completo ilustrado en la figura 4-39, y
contiene un filtro de selectividad que permite el paso selectivo 6 +
Otros estudios sugieren fuertemente que los canales de K son controlados
+
de iones K . Las hélices M1 y M2 y el segmento P del canal por dos mecanismos distintos: uno que involucra la apertura y el cierre del
KcsA de la figura 4-39 son homólogos de las hélices S5 y S6 y paquete de hélice interna como se describe aquí, y otro que involucra el
del segmento P del canal eucariótico activado por voltaje, ilus- filtro de selectividad que no se discute (véase PNAS 2010;107:7623, y Nature
trado en la FIGURA 4-41. Al igual que las cuatro hélices M2 de 2010;466:203).
 146 FIGURA 4-41. Estructura de una subuni- Segmento I
+
dad de un canal K eucariótico, activado
S4+ L
por voltaje. Un retrato bidimensional de R
+
una subunidad de canal de K que mues- V
tra sus seis hélices transmembrana y una +
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

I
porción del polipéptido (llamada hélice de Dominio de detección R
L
poro o P) que se sumerge en la proteína de voltaje Dominio de poro
para formar parte de la pared del canal. El
Exterior de V
+
la célula R
recuadro muestra la secuencia de aminoá- V
cidos de la hélice S4 con carga positiva + F +
del canal de iones Drosophila K+ Shaker, + P R

que sirve como un detector de voltaje. Las S1 S2 S3 S4 S5 S6 I

cadenas laterales cargadas positivamente

+ F
+ K
están situadas en cada tercer residuo a lo +
largo de la hélice hidrofóbica. Este miem-
Interior de L
+ S
la célula
bro de la familia Kv se llama canal Shaker R
H
porque las moscas con ciertas mutaciones
N S
en la proteína se agitan vigorosamente C +
K
cuando se anestesian con éter. El canal
+ G
Shaker fue el primer canal K identificado
L
y clonado en 1987.

a) b) c)
+
FIGURA 4-42 Estructura tridmensional del canal K de mamíferos activado por voltaje. a) Estructura cristalizada de todo el conducto tetramérico Kv1.2,
+
un miembro de la familia Shaker de canales iónicos para K , que se encuentra en las células nerviosas del cerebro. La porción transmembrana aparece
en rojo y la citoplásmica en azul. Los sitios para unión con el ion potasio se indican en verde. b) Modelo de listón del mismo canal mostrado en a), apare-
cen las cuatro subunidades que conforman el canal en colores diferentes. Si se centra la atención en la subunidad en rojo, se verá 1) la separación espa-
cial entre el dominio sensor de voltaje y el dominio poro de la subunidad y 2) la manera en la cual el dominio sensor de voltaje de cada se encuentra en
el margen externo del dominio poro de la subunidad vecina. La porción citoplásmica de este canal particular consiste en el dominio T1, el cual es parte
del canal polipeptídico mismo y un polipéptido β aparte. c) Modelo tipo listón de una subunidad individual que muestra la orientación espacial de seis hé-
lices que cruzan la membrana (S1-S6), así como la presencia de las hélices de unión S4-S5, que conecta los dominios sensor de voltaje y de poro. Estas
hélices de unión transmiten la señal del sensor de voltaje S4 que abre el canal. La superficie interna del canal por debajo del dominio poro está cubierta
por la hélice S6 (más o menos similar a la hélice M2 del canal bacteriano que aparece en la figura 4-39). El canal que se muestra aquí se presenta en la
configuración abierta con su hélice S6 curvada hacia fuera (compárese con figura 4-40) en el sitio marcado PVP (que significa Pro-Val-Pro, la secuencia
probable de aminoácidos de la “bisagra”).
FUENTE: a-c) De Stephen B Long, et al. Science 2005;309:867, 899, cortesía de Roderick Mackinnon; © 2005, reimpreso con permiso de AAAS.

cree que esta fuerza hace que la hélice S4 transmembrana se mue- formacionales dentro de la proteína, que abre la compuerta en el
va de manera tal que sus residuos, cargados positivamente, cam- extremo citoplásmico del canal.
bien de una posición en la que estuvieron expuestos al citoplasma Una vez abierto el canal, más de 10 millones de iones de po-
a una nueva posición donde están expuestos al exterior de la cé- tasio pueden pasar por segundo, que es casi la velocidad que al-
lula. La detección de voltaje es un proceso dinámico cuyo meca- canzaría la difusión libre en la solución. Debido al gran flujo de
nismo no se puede resolver con una única vista estática de la iones, la apertura de un número relativamente pequeño de cana-
+
proteína, como la que se muestra en la figura 4-42. De hecho, les de K tiene un impacto significativo en las propiedades eléc-
actualmente se debaten varios modelos en competencia, que des- tricas de la membrana. Después que el canal está abierto durante
+
criben el mecanismo de acción del detector de voltaje. No obstan- unos pocos milisegundos, el movimiento de iones K se detiene
te, ocurre que el movimiento de la hélice S4 en respuesta a la “automáticamente” mediante un proceso conocido como inacti-
despolarización de la membrana inicia una serie de cambios con- vación. Para comprender la inactivación del canal tenemos que
 Poro 147

Exterior de la célula
Cavidad central

4.12 ӝ Vías experimentales

Reposo Abierto Inactivado
Membrana b)
celular

Interior de la célula FIGURA 4-43 Estados conformacionales de un canal de iones K+ acti-

Ventana lateral +
vado por voltaje. a) Modelo tridimensional de un canal de iones K euca-
riótico. La inactivación de la actividad del canal se produce cuando uno
de los péptidos de inactivación, que cuelgan de la porción citoplásmica
del complejo, se ajusta a la apertura citoplásmica del canal. b)
+
Representación esquemática de una vista en un canal iónico K , perpen-
Péptido de dicular a la membrana desde el lado citoplásmico, que muestra el canal
Dominio inactivación en el estado cerrado (reposo), abierto e inactivado.
citoplasmático
FUENTE: b) Reimpreso de Neuron, vol. 20, C. M. Armstrong y B. Hille,
Voltage-Gated Ion Channels and Electrical Escitability, p. 377; copyright
1998, con permiso de Elsevier Science.
a)
+
considerar una porción adicional de un canal Kv, además de los rentes que codifican canales de K . Es evidente que una sola cé-
dos dominios transmembrana discutidos anteriormente. lula, ya sea en un nematodo, humano o planta, tiene probabilidad
+
Es típico que los canales Kv eucarióticos contengan una gran de poseer una variedad de canales de K diferentes que se abren
estructura citoplásmica, cuya composición varía entre los diferen- y cierran en respuesta a diferentes voltajes. Además, el voltaje
+
tes canales. Como se indica en la FIGURA 4-43a), la inactivación requerido para abrir o cerrar un canal de K particular puede
del canal se logra mediante el movimiento de un péptido de inac- variar en dependencia de si la proteína del canal está fosforilada,
tivación pequeño, que cuelga de la porción citoplásmica de la que a su vez está regulada por hormonas y otros factores. Es evi-
proteína. Se cree que el péptido de inactivación tiene acceso a la dente que la función del canal iónico está bajo el control de un
boca citoplásmica del poro, al serpentear a través de una de las conjunto diverso y complejo de agentes reguladores. La estructu-
cuatro “ventanas laterales” indicadas en la figura. Cuando uno de ra y función de un tipo muy diferente de canal de iones, el recep-
estos péptidos oscilantes se mueve hacia la boca del poro (obsér- tor de acetilcolina nicotínico dependiente de ligando, es el tema
vese figura 4-43a), el paso de los iones se bloquea y el canal se de la sección de “Vías experimentales”.
inactiva. En una etapa posterior del ciclo se libera el péptido de
inactivación y se cierra la compuerta del canal. De esta discusión
se deduce que el canal de potasio puede existir en tres estados REPASO
diferentes, abierto, inactivado y cerrado, lo que se ilustra en el
1. ¿Cuáles son los tres tipos diferentes de canales de compuer-
esquema de la figura 4-43b). ta?
Los canales de potasio vienen en muchas variedades. Es no- 2. Describa cómo un canal de potasio puede permitir el flujo de
table que el C. elegans, un gusano nematodo cuyo cuerpo consta iones de potasio, pero evitar que fluyan los iones de sodio.
de solo 1 000 células, contiene aproximadamente 80 genes dife-

4.12 VÍAS EXPERIMENTALES

El receptor acetilcolina
El descubrimiento del receptor acetilcolina ilustra el importante lado de plantas tropicales, y usado durante siglos por cazadores
papel que las toxinas naturales, y organismos inusuales, pueden nativos sudamericanos para hacer dardos venenosos. Bernard
desempeñar en la disección de un proceso bioquímico funda- descubrió que el curare paralizaba el músculo esquelético sin
mental, con una importancia central para la salud y la medicina. interferir con la capacidad de los nervios para transmitir impul-
La historia comienza en 1843, cuando el farmacéutico y aspirante sos a ese músculo, o la capacidad del músculo para contraerse
a dramaturgo Claude Bernard se mudó de una pequeña ciudad con la estimulación directa. Bernard concluyó que el curare de
francesa a París, donde planeaba seguir su carrera literaria. En alguna manera actuaba en la región de contacto entre el nervio
cambio, Bernard se inscribió en la escuela de medicina y se y el músculo.
convirtió en el fisiólogo más destacado del siglo XIX. Entre sus Esta conclusión fue confirmada y extendida por John
muchos intereses estaba el mecanismo por el cual los nervios Langley, un fisiólogo de la Universidad de Cambridge. Langley
estimulan la contracción de los músculos esqueléticos. Sus estu- estaba estudiando la capacidad de la nicotina, otra sustancia de-
dios incluyeron el uso de curare, un fármaco altamente tóxico ais- rivada de las plantas, para estimular la contracción de los múscu-
(continúa)
 148 los esqueléticos de las ranas aisladas, y el efecto del curare en la Raya eléctrica
inhibición de la acción de la nicotina. En 1906, Langley concluyó
que “el impulso nervioso no debe pasar de un nervio a otro por
una descarga eléctrica, sino por la secreción de una sustancia
1
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

especial en el extremo del nervio”. Langley propuso que este

“transmisor químico” era vinculante para una “sustancia recepti-
va” en la superficie de las células musculares, el mismo sitio que
une a la nicotina y al curare. Estas demostraron ser propuestas
con visión de futuro.
La propuesta de Langley de que el estímulo del nervio al
músculo era transmitido por una sustancia química se confirmó
en 1921, en un ingenioso experimento del fisiólogo nacido en Órganos eléctricos
Austria Otto Loewi, cuyo diseño le llegó a Loewi durante un sue- (electroplax)
ño. La frecuencia cardiaca de un vertebrado está regulada por
la entrada de dos nervios opuestos (antagonistas). Loewi aisló el
corazón de una rana con ambos nervios intactos. Cuando esti-
muló el nervio inhibidor (vago), se liberó un químico de la prepa- FIGURA 1 Los órganos eléctricos de Torpedo consisten en apilamien-
ración de corazón en una solución salina, que se dejó drenar en tos de uniones neuromusculares modificadas localizadas a cada lado
el medio que bañaba un segundo corazón aislado. La frecuencia del cuerpo.
del segundo corazón se redujo drásticamente, como si su propio FUENTE: De Z. W. Hall, An Introduction to Neurobiology, Sinauer
2
nervio inhibitorio se hubiera activado. Loewi llamó a la sustan- Associates, Inc., Sunderland, MA © 1992.
cia responsable de inhibir el corazón de la rana “Vagusstoff”. En
unos pocos años, Loewi había demostrado que las propiedades
químicas y fisiológicas del Vagusstoff eran idénticos a la acetil- te a esta proteína en particular. Tal compuesto fue descubier-
colina, y llegó a la conclusión de que la acetilcolina (ACh, ace- to en 1963 por Chen-Yuan Lee y sus colegas de la Universidad
tylcholine) era la sustancia liberada por las puntas de las células Nacional de Taiwán. El compuesto era la-bungarotoxina, una
nerviosas que formaban el nervio vago. sustancia presente en el veneno de una serpiente taiwanesa.
En 1937 David Nachmansohn, un neurofisiólogo de la La α-bungarotoxina causa parálisis al unirse estrechamente a las
Sorbona, visitaba la Feria Mundial de París donde observó varios nAChR en la membrana postsináptica de las células del músculo
peces eléctricos vivos que se exhibían, de la especie Torpedo 4
esquelético, lo que bloquea la respuesta del músculo a la ACh.
marmarota. Estas rayas tienen órganos eléctricos que producen Equipados con α-bungarotoxina marcada para utilizar en un
fuertes descargas (40-60 voltios) capaces de matar presas po- experimento, órganos eléctricos como fuente, y un detergente
tenciales. En ese momento, Nachmansohn estaba estudiando capaz de solubilizar proteínas de membrana, varios investiga-
la enzima acetilcolina esterasa, que actúa para destruir la ACh dores pudieron aislar los receptores de acetilcolina a principios
después de su liberación de las puntas de los nervios motores. 5
de los años setenta. En uno de estos estudios las membranas
Nachmansohn estaba al tanto de que los órganos eléctricos de que contenían nAChR se aislaron homogeneizando los órganos
estos peces se derivaban del tejido muscular esquelético modi- eléctricos en un mezclador, y se centrifugó la suspensión pa-
ficado (véase figura 1) y preguntó si podría tener un par de peces ra sedimentar los fragmentos de membrana. Las proteínas de
para estudiar, una vez que la feria hubiera terminado. Los resul- membrana se extrajeron de los fragmentos de membrana usan-
tados de la primera prueba mostraron que el órgano eléctrico do Tritón X-100 (página 126), y la mezcla se pasó a través de
3
era una fuente extraordinariamente rica de acetilcolinesterasa. una columna que contenía pequeñas perlas recubiertas con un
También era una fuente muy rica el receptor de acetilcolina nico- compuesto sintético, cuyo extremo tiene un parecido estructural
tínico (nAChR, nicotinic acetylcholine receptor),* presente en las con la ACh (véase FIGURA 2a). A medida que la mezcla de pro-
membranas postsinápticas de las células del músculo esqueléti- teínas disueltas pasaba a través de la columna, dos proteínas
co que enlaza las moléculas de ACh liberadas de las puntas de que tienen sitios de unión para la acetilcolina, la nAChR y la ace-
un nervio motor. Encontrar un sistema ideal puede ser inaprecia- tilcolinesterasa (AChE, acetylcholinesterase), se adhirieron a las
ble para el estudio de un aspecto particular de la estructura o perlas. 90 por ciento restante de la proteína en el extracto no se
función celular. Como se hará evidente a partir de esta discusión, unió a las perlas, y simplemente pasó a través de la columna y
los órganos eléctricos de los peces han sido virtualmente la úni- se recolectó (consúltese figura 2b). Una vez que este grupo de
ca fuente de material para el estudio de la nAChR. proteínas había pasado, se pasó una solución de 10-3 M de flaxe-
La nAChR es una proteína de membrana integral, y no fue dil a través de la columna, que eliminó selectivamente el nAChR
hasta la década de 1970 que se desarrollaron técnicas para el de las perlas y dejó atrás la AChE. Con este procedimiento el
aislamiento de tales proteínas. Como se discutió en el capítulo 18, receptor de acetilcolina medido por el enlace de bungarotoxina
la purificación de una proteína particular requiere un experimen- se purificó en más de 150 veces en un solo paso. Este tipo de
to adecuado para determinar la cantidad de esa proteína presen- procedimiento se conoce como cromatografía de afinidad, y su
te en cualquier fracción particular. El experimento ideal para la uso general se trata en la sección 18.11.
nAChR fue un compuesto que se unió selectiva y estrechamen- El siguiente paso fue determinar algo sobre la estructura del
receptor de acetilcolina. Los estudios en el laboratorio de Arthur
Karlin, en la Universidad de Columbia, determinaron que el
nAChR era un pentámero, una proteína que consta de cinco
* El receptor se describe como nicotínico porque puede ser activado tan-
subunidades. Cada receptor contenía dos copias de una su-
to por la nicotina como por la acetilcolina. Esto contrasta con los recep-
bunidad llamada α, y una copia de cada una de las otras tres
tores de acetilcolina muscarínicos de las sinapsis nerviosas parasimpáti-
cas, que pueden ser activados por la muscarina pero no por la nicotina;
subunidades. Las subunidades se pueden distinguir extrayendo
la atropina los inhibe, no así el curare. Los cuerpos de los fumadores se proteínas de membrana en Tritón X-100, purificando el nAChR
acostumbran a altos niveles de nicotina, y experimentan síntomas de abs- mediante cromatografía de afinidad, y luego sometiendo la pro-
tinencia cuando dejan de fumar porque las neuronas postsinápticas que teína purificada a electroforesis a través de un gel de poliacrila-
poseen nAChR ya no son estimuladas a su nivel habitual. El medicamen- mida (SDS-PAGE como se discute en la sección 18.13), que separa
to Chantix, que se comercializa como una ayuda para dejar de fumar, los polipéptidos individuales de acuerdo con el tamaño (véase
6
actúa uniéndose a la versión más común de la nAChR cerebral (una con FIGURA 3). Las cuatro subunidades diferentes demostraron ser
subunidades α4β2). Una vez unida la molécula de Chantix estimula par- homólogas entre sí, cada subunidad con cuatro hélices trans-
cialmente el receptor y evita la unión de la nicotina. membrana homólogas (M1-M4).
 C2H5 149
FIGURA 2 Pasos usados en el aislamiento CH2 CH2 N C2H5
del nAChR. a) Estructura del compuesto O C2H5
sintético CT5263, que se unió a perlas de O O
H H C2H5
sefarosa para formar una columna de afini-

4.12 ӝ Vías experimentales

NH(CH2)6 N C C CH2 CH2 S CH2 C N O CH2 CH2 N C2H5
dad. Los extremos del compuesto que H C2H5
sobresalen de las perlas se parecen a la NH
Sefarosa
acetilcolina, y hace que tanto la acetilcoli- O C
2B
nesterasa (AChE) como el receptor nicotíni- CH3
co de acetilcolina (nAChR) se unan a las a)
perlas. b) Cuando se pasó el extracto de
Tritón X-100 a través de la columna, ambas

(M x l–1 x 108)
proteínas de unión a la acetilcolina se adhi-

(ATCh x hr–1 x l–1)

[Proteínas]
rieron a las perlas, mientras que la proteína

(g x l–1)
[RACh]
disuelta restante (aproximadamente 90%

AChE
de la proteína total en el extracto) pasó di- 3
Flaxedil 10– M 1MNaCl
rectamente a través de la columna. El paso
–3
subsiguiente de una solución de 10 M de
flaxedil a través de la columna liberó el
1.5
nAChR unido sin alterar a la AChE unida
5
(que posteriormente se lavó con NaCl 1 M).
FUENTE: a) De R. W. Olsen, J. -C. Meunier y 1.0
J. -P. Changeux. FEBS Lett 1972;28:99. Proteínas Receptor ACh AChE
© 1972, con permiso de Elsevier. 1.0

0.5
0.5

0 0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Fracción núm. (2 mL)
b)

Otro hito importante en el estudio del nAChR fue la demos-

tración de que el receptor purificado actuaba como un sitio para
58 000 48 000 unir Ach y como un canal para el paso de cationes. Años atrás,
64 000 39 000 Jean-Pierre Changeux, del Instituto Pasteur en París, había pos-
tulado que la unión de ACh al receptor causaba un cambio con-
formacional que abría un canal iónico dentro de la proteína. El
+
flujo hacia dentro de los iones de Na a través del canal podría
conducir a una despolarización de la membrana, y a la activa-
ción de la célula muscular. Durante la última mitad de la década
de 1970, Changeux y sus colegas lograron incorporar moléculas
7
purificadas de nAChR en vesículas lipídicas artificiales. Usando
vesículas que contenían varias concentraciones de iones sodio y
potasio marcados, demostraron que la unión de ACh a los recep-
tores en la bicapa lipídica iniciaba un flujo de cationes a través de
la “membrana”. Resultó evidente que “la proteína pura de hecho
contiene todos los elementos estructurales necesarios para la
FIGURA 3 La porción superior de la figura muestra un gel de SDS- transmisión química de una señal eléctrica; es decir, un sitio de
poliacrilamida tras la electroforesis de una preparación de nAChR pu- unión de acetilcolina, un canal iónico y un mecanismo para aco-
rificado. El receptor consiste en cuatro subunidades diferentes cuyos plar su actividad”. La narración personal del trabajo inicial sobre
pesos moleculares están indicados. Antes de la electroforesis, la prepa- el nAChR se puede encontrar en la referencia 8.
ración del receptor purificado se incubó con un compuesto radioactivo A partir de ese momento, los investigadores se han centra-
(3H-MBTA) que se parece a la acetilcolina, y se une al sitio de unión a la do en determinar la estructura del nAChR y el mecanismo por
acetilcolina del nAChR. Después de la electroforesis, el gel se cortó en el cual la unión de la acetilcolina induce la apertura de la com-
secciones de 1 mm y se determinó la radioactividad de cada corte. Toda puerta de iones. El análisis de la estructura ha tomado varios
la radioactividad se enlazó a la subunidad de 39 000 dalton, lo que in-
caminos diferentes. En un enfoque los científicos han usado ge-
dica que esta subunidad contiene el sitio de unión a la ACh. La línea
punteada indica la absorbancia luminosa de cada fracción, que propor- nes purificados, determinación de secuencias de aminoácidos, y
ciona una medida de la cantidad total de proteína presente en esa frac- mutagénesis dirigida al sitio, para determinar las partes especí-
ción. Las alturas de los picos proporcionan una medida de las cantida- ficas de los polipéptidos que abarcan la membrana, o se unen
des relativas de cada una de las subunidades en la proteína. Todas las al neurotransmisor, o forman el canal iónico. Estos estudios no
subunidades están presentes en números iguales, excepto la subuni- cristalográficos sobre la anatomía molecular de una proteína son
dad más pequeña (la subunidad α, que contiene el sitio de unión de la similares en principio a los descritos en la sección 4.5.
ACh), que está presente en el doble del número de copias. Otro enfoque empleó el microscopio electrónico. Los pri-
FUENTE: De CL Weill, MG McNamee, y A Karlin, Biochem. Biophys Res meros destellos del nAChR se observaron en micrografías elec-
Commun 1974;61:1002, reproducido con permiso de Elsevier. trónicas de las membranas de los órganos eléctricos (consúltese

(continúa)
 150 9
FIGURA 4). Los receptores parecían tener forma de anillo, con
un diámetro de 8 nm y un canal central de 2 nm de diámetro,
y sobresalían de la bicapa lipídica hacia el espacio externo. Un
modelo cada vez más detallado del nAChR ha sido desarrollado
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

por Nigel Unwin y sus colegas del Medical Research Council of

10-14
England. Estos investigadores emplearon la técnica de la cris-
talografía electrónica (consúltese sección 18.16), que implica un
análisis matemático de grandes cantidades de micrografías elec-
trónicas de membranas congeladas que contienen las proteínas
que se estudian. Los órganos eléctricos son muy adecuados pa-
ra la cristalografía de electrones, porque contienen colecciones
altamente ordenadas (cristalinas) del nAChR dentro del plano de
la bicapa lipídica. Como resultado, Unwin pudo analizar la es-
tructura de nAChR tal como existe en su entorno lipídico nativo.
Describió la disposición de las cinco subunidades alrededor de
un canal central (consúltese FIGURA 5). El canal iónico consiste
en un poro estrecho alineado por una pared compuesta de cinco
hélices α internas (M2), una por cada una de las subunidades
circundantes. La compuerta hacia el poro se encuentra cerca del FIGURA 4 Micrografía electrónica de membranas teñidas negativa-
centro de la membrana, donde cada una de las α hélices M2 se mente y ricas en receptores del órgano eléctrico de un pez eléctrico,
dobla hacia adentro (en el vértice de las barras en forma de V que muestra la colección densa de moléculas nAChR. Cada molécula
en la figura 5a) para formar un pliegue en el receptor inactivado. receptora se ve como un pequeño círculo blanquecino con un peque-
La cadena lateral de un residuo de leucina se proyecta hacia ño punto negro en el centro; el punto corresponde al canal central,
adentro desde cada curvatura. En este modelo los residuos de que ha recogido el teñido denso en electrones.
leucina de las cinco hélices internas forman un anillo hidrofóbico FUENTE: De Werner Schiebler y Ferdinand Hucho. Eur J. Biochem
hermético, que evita que los iones crucen la membrana. La com- 1978;85:58, reimpreso con permiso John Wiley & Sons.
puerta se abre siguiendo la unión de dos moléculas ACh, una por
subunidad α. Cada ACh se une a un sitio ubicado dentro de una el cerrado, Unwin encontró que la unión de ACh generaba un
cavidad de una subunidad α (véase figura 5b). pequeño cambio conformacional en los dominios extracelulares
Para estudiar los cambios en el nAChR durante la aper- de las subunidades receptoras, cerca de los dos sitios de unión
tura del canal, Unwin llevó a cabo el siguiente experimento.12 a ACh. Este cambio conformacional se propaga por la proteína,
Se aplicaron preparaciones de membranas ricas en nAChR a lo que hace que las hélices M2 que recubren el poro de la con-
una rejilla de soporte que se dejó caer en un baño de etano ducción iónica se enderecen (véase FIGURA 6), ensanchando
líquido refrigerado con nitrógeno, que congela las membranas. el canal y exponiendo más residuos hidrofílicos, lo cual permi-
+ 13,14
Aproximadamente 5 ms antes de llegar a la superficie del baño te que los iones Na entren en la célula. Otros laboratorios
de congelación, las rejillas se rociaron con una solución de ACh, han propuesto otros modelos para la apertura del canal, y una
que se unió a los receptores y provocó el cambio conformacio- declaración más definida sobre el mecanismo de la activación
nal necesario para abrir el canal. Al comparar las micrografías probablemente requerirá una estructura cristalina de rayos X de
electrónicas de nAChR atrapadas en el estado abierto versus alta resolución de la proteína, tanto en el estado abierto como en

Iones
Cavidad
α γ Acetilcolina vinculante
ε ACh

β α

Ion de
sodio β α

Citosol
Membrana
celular Canal de ion

a) b)
FIGURA 5 a) Mapa de densidad electrónica de un corte a través del nAChR, obtenido mediante el análisis de micrografías electrónicas de crista-
les tubulares de membranas de Torpedo incrustadas en hielo. Estos análisis han permitido a los investigadores reconstruir la apariencia tridimen-
sional de una sola proteína nAChR como reside dentro de la membrana. Los contornos continuos indican líneas de similar densidad, mayor que la
del agua. Las dos líneas oscuras en forma de barra representan las hélices α que recubren el canal en su punto más estrecho. b) Diagrama es-
quemático del nAChR que muestra la disposición de las subunidades y una representación de la sección transversal de la proteína. Cada una de
las cinco subunidades contiene cuatro hélices que abarcan la membrana (M1-M4). De estas, solo la hélice interna (M2) recubre el poro y es el te-
ma del resto de la discusión.
FUENTE: De N Unwin, J Mol Biol 1993;229:1118; © 1993, con permiso de Elsevier.
 de Nachmansohn escrita en inglés puede ser encontrada en 151
su libro Chemical and Molecular Basis of Nerve Action, 2nd
ed., Academic Press; 1975).
4. Chang C. C., Lee C-Y. 1963. Isolation of the neurotoxins from

4.13 ӝ Difusión facilitada

the venom of Bungarus multicinctus and their modes of neuro-
muscular blocking action. Arch Int Pharmacodyn Ther 144:241-
257.
5. Olsen R. W., Meunier J. C., Changeux J. P. 1972. Progress in the
Cerrado Abierto purification of the cholinergic receptor protein from Electro-
FIGURA 6 Dibujos de cintas que ilustran los cambios que ocurren phorus electricus by affinity chromatography. FEBS Lett 28:96-
dentro del canal de conducción del nAChR al unirse a la acetilcolina. 100.
Solo se muestran las dos subunidades alfa del receptor. En el estado 6. Weill C. L., Mcnamee M. G., Karlin A. 1974. Affinity-labeling of
cerrado (izquierda), el poro está bloqueado (parche amarillo) por la yux- purified acetylcholine receptor from Torpedo californica. Bio-
taposición cerrada de un anillo de residuos hidrofóbicos. El diámetro chem Biophys Res Commun 61:997-1003.
del poro en su punto más estrecho es de aproximadamente 6 Å, insufi- 7. Popot J. L., Cartaud J., Changeux J. -P. 1981. Reconstitution of a
ciente para que pase un ion Na+ hidratado. Esta constricción surge por-
functional acetylcholine receptor. Eur J Biochem 118:203-214.
que las hélices transmembrana internas están ligeramente dobladas.
+
Aunque es suficientemente amplia como para pasar un ion Na deshi-
8. Changeux J. P. 2010. Allosteric receptors: From electric organ
dratado (esfera azul), la pared del canal carece de los grupos polares to cognition. Ann Rev Pharmacol Toxicol 50:1-38.
que se requerirían para sustituir el caparazón desplazado de las molé- 9. Schiebler W., Hucho F. 1978. Membranes rich in acetylcholine
+
culas de agua (como ocurre en el filtro de selectividad del canal K , véa- receptor: Characterization and reconstitution to excitable
se figura 4-39). Después de la unión del ligando, un cambio conforma- membranes from exogenous lipids. Eur J. Biochem 85:55-63.
cional en el dominio de unión del ligando de las subunidades alfa (no 10. Brisson A., Unwin N. 1984. Tubular crystals of acetylcholine
mostrado), hace que las hélices transmembrana internas de las subuni- receptor. J. Cell Biol 99:1202-1211.
dades (azul) se enderecen, se expande el diámetro del poro, lo que 11. Unwin N. 1993. Acetylcholine receptor at 9 Å resolution. J. Mol
permite el flujo de Na+ a través del canal abierto (derecha).
Biol 229:1101-1124.
FUENTE: De N. Unwin. Quart Rev Biophys 2013;46:283. 12. Unwin N. 1995. Acetylcholine receptor channel imaged in the
open state. Nature 373:37-43.
el cerrado. La discusión de varios modelos y las bases para ellos 13. Miyazawa A., Fujiyoshi Y., Unwin N. 2003. Structure and gating
se pueden encontrar en las referencias 15 a 17. mechanism of the acetylcholine receptor pore. Nature 423:
949-955.
14. Unwin N. 2005. Refined structure of the nicotinic acetylcholine
Referencias receptor at 4.0 Å resolution. J. Mol Biol 346:967-989.
15. Corry B. 2006. An energy-efficient gating mechanism in the
1. Langley J. N. On nerve endings and on special excitable subs- acetylcholine receptor channel suggested by molecular and
tances in cells. Proc R Soc London B Biol Sci 1906.;78:170-194. brownian dynamics. Biophys J. 90:799-810.
2. Loewi O. 1921. Uber humorale ubertragbarkeit der herzner- 16. Cymes G. D., Grosman C. 2008. Pore-opening mechanism of
venwirkung. Pfluger’s Arch 214:239-242. (Una reseña del tra- the nicotinic acetylcholine receptor evinced by proton trans-
bajo Loewi escrita por él en inglés puede ser encontrada en fer. Nature Struct Mol Biol 15:389-396.
Harvey Lect 1933;28:218-233). 17. Taly A., et al. 2009. Nicotinic receptors: Allosteric transitions
3. Marnay A. 1937. Cholinesterase dans l’organe électrique de la and therapeutic targets in the nervous system. Nature Revs
torpille. Compte Rend. 126:573-574. (Una reseña del trabajo Drug Disc 8:733-750.

4.13 Difusión facilitada nando entre los estereoisómeros D y L (página 43). Además, tan-
to las enzimas como los transportadores presentan una cinética
Las sustancias siempre se difunden a través de una membrana tipo saturación (consúltese FIGURA 4-45). A diferencia de los
desde una región de mayor concentración en un lado a una re- canales iónicos, que pueden transportar millones de iones por
gión de menor concentración en el otro, pero no siempre se di- segundo, la mayoría de los transportadores facilitadores pueden
funden a través de la bicapa lipídica o a través de un canal. En mover solo de cientos a miles de moléculas de soluto por segundo
muchos casos la sustancia difusora se une primero selectivamen- a través de la membrana, por lo que una vez que la concentración
te a una proteína que abarca toda la membrana, llamada trans- de iones es muy grande, la velocidad de transporte se nivela a
portador facilitador, que facilita el proceso de difusión. Se cree este máximo valor, y se dice que los transportadores están satura-
que la unión del soluto al transportador facilitador en un lado de dos. Otra característica importante de los transportadores facili-
la membrana desencadena un cambio conformacional en la pro- tadores es que, como las enzimas y los canales iónicos, su activi-
teína, exponiendo el soluto a la otra superficie de la membrana, dad puede regularse. La difusión facilitada es particularmente
desde donde puede difundirse por su gradiente de concentra- importante en la mediación de la entrada y salida de solutos po-
ción. Este mecanismo se ilustra en la FIGURA 4-44. Debido a que lares como azúcares y aminoácidos, que no penetran en la bicapa
operan pasivamente, es decir, sin estar acoplados a un sistema de lipídica. Esto se ilustra en la siguiente sección.
liberación de energía, los transportadores facilitadores pueden El transportador de glucosa es un ejemplo de difusión facili-
mediar el movimiento de los solutos igualmente bien en ambas tada. La glucosa es la principal fuente de energía directa del cuer-
direcciones. La dirección del flujo neto depende de la concentra- po, y la mayoría de las células de mamíferos contienen una pro-
ción relativa de la sustancia en ambos lados de la membrana. teína de membrana que facilita la difusión de glucosa del torrente
La difusión facilitada, como se llama este proceso, es similar sanguíneo a la célula (como se muestra en las figuras 4-44 y 4-49).
en muchos aspectos a una reacción catalizada por enzimas. Al Se mantiene un gradiente que favorece la difusión continua de
igual que las enzimas, los transportadores facilitadores son espe- glucosa en la célula mediante la fosforilación del azúcar después
cíficos para las moléculas que transportan; por ejemplo, discrimi- de que ingresa al citoplasma, disminuyendo así la concentración
 152 Glucosa forma común del transportador facilitador de glucosa, específica-
mente el GLUT4. Cuando los niveles de insulina son bajos, estas
células contienen relativamente pocos transportadores de gluco-
sa en su membrana plasmática. En cambio, los transportadores
Enlace
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

están presentes dentro de las membranas de las vesículas cito-

plasmáticas. Los niveles crecientes de insulina actúan sobre las
células objetivo para estimular la fusión de las vesículas citoplás-
micas a la membrana plasmática, lo que mueve los transportado-
res a la superficie celular, donde pueden llevar la glucosa a la cé-
lula (véase figura 15-26).

REPASO
1. Compare y correlacione los transportadores facilitadores con
Recuperación Transporte los canales.
2. Argumente por qué las enzimas y los transportadores mues-
tran una cinética de saturación.

4.14 Transporte activo

La vida no puede existir en condiciones de equilibrio (véase sec-
ción 3.4). En ningún lugar es esto más evidente que en el desequi-
Disociación librio de iones a través de la membrana plasmática. Las diferen-
cias en la concentración de los principales iones entre el exterior
y el interior de una célula de mamífero típica se muestran en la
tabla 4-3. La capacidad de una célula para generar tales gradien-
tes elevados de concentración a través de su membrana plasmáti-
FIGURA 4-44 Difusión facilitada. Un modelo esquemático para la difusión ca no se puede producir por difusión simple o facilitada. Por el
facilitada de la glucosa representa la conformación alternante de un trans-
portador, que expone el sitio de unión a la glucosa al interior o al exterior
contrario, estos gradientes deben generarse mediante transporte
de la membrana. activo.
FUENTE: Reimpreso de S. A. Baldwin y G. E. Lienhard, Trends Biochem Sci Al igual que la difusión facilitada, el transporte activo depen-
1981;6:210. Utilizado con permiso de Elsevier, Ltd. de de proteínas integrales de membrana que se unen selectiva-
mente a un soluto particular y lo mueven a través de la membrana
en un proceso impulsado por cambios en la conformación de la
proteína. Sin embargo, a diferencia de la difusión facilitada, el
Vmáx
movimiento de un soluto contra un gradiente requiere la entrada
Tasa de movimiento del soluto (v)

acoplada de energía. En consecuencia, el movimiento endergóni-

Transporte mediado por co de iones u otros solutos a través de la membrana contra un
proteína (difusión facilitada) gradiente de concentración se acopla a un proceso exergónico,
como la hidrólisis del ATP, la absorbancia de la luz, el transporte
de electrones, o el flujo de otras sustancias por sus gradientes.
Las proteínas que llevan a cabo el transporte activo a menudo se
denominan “bombas”.

Transporte activo primario: transporte de

Difusión simple acoplamiento a la hidrólisis del ATP
En 1957 el fisiólogo danés Jens Skou descubrió una enzima que
hidroliza el ATP de las células nerviosas del cangrejo, que solo
+ +
estaba activa en presencia de iones Na y K . Skou propuso —y
Concentración de soluto
correctamente— que esta enzima responsable de la hidrólisis de
FIGURA 4-45 Cinética de difusión facilitada en comparación con la de ATP era la misma proteína que estaba activa en el transporte
la difusión física simple.

de glucosa intracelular. Los humanos tienen al menos cinco pro- TABLA 4-3 Concentraciones de iones dentro y fuera de una célula
teínas relacionadas (isoformas) que actúan como transportadores típica de mamífero
facilitadores de glucosa. Estas isoformas, denominadas GLUT1 a
GLUT5, se distinguen por los tejidos en los que están ubicadas, Concentración Concentración Gradiente
extracelular intracelular iónico
así como por sus características cinéticas y reguladoras.
La insulina es una hormona, producida por las células endo- Na+ 150 mM 10 mM 15×
crinas del páncreas, que desempeña un papel clave en mantener K+ 5 mM 140 mM 28×
los niveles adecuados de azúcar en la sangre. Un aumento en los Cl– 120 mM 10 mM 12×
niveles de glucosa en sangre desencadena la secreción de insuli- Ca2+ 10–3 M 10–7 M 10 000×
H+ 10–7.4 M 10–7.2 M Alrededor de 2×
na, que estimula la absorción de glucosa en varias células blanco,
(pH 7.4) (pH 7.2)
sobre todo en células músculoesqueléticas y adiposas (adipoci-
tos). Las células que responden a la insulina comparten una iso- Las concentraciones de iones para el axón de calamar se dan en la página 167.
 153

Extracelular

4.14 ӝ Transporte activo

Membrana K
+
Na
+
plasmática Conformación E1 Ocluido
+
Na K
+

Na+ + P ATP
K ATP ATP ADP P ADP P P P ATP

Abierto Ocluido Conformación E2

1 2 3 4 5 6 7 8

Citosol

a)

FIGURA 4-46 La Na+/K+-ATPasa. a) Modelo esquemático simplificado del

Extracelular ciclo de transporte, como se describe en el texto. Obsérvese que la Na+/
K+-ATPasa real se compone de al menos dos subunidades diferentes que
Iones de rubidio abarcan la membrana: una subunidad α mayor, que lleva a cabo la activi-
dad de transporte, y una subunidad β más pequeña, que funciona princi-
palmente en la maduración y ensamblaje de la bomba dentro de la mem-
brana. Una tercera subunidad (ϒ) también puede estar presente. b) Un
Subunidad g modelo de la conformación E2 de la proteína con base en un estudio cris-
talográfico de rayos X. Los sitios de enlace de cationes están ubicados en
el interior del dominio transmembrana, que consta de 10 hélices que abar-
can la membrana. Los dos iones de rubidio se encuentran donde los io-
nes de potasio estarían enlazados normalmente.
FUENTE: b) De Ayako Takeuchi, cortesía de David C. Gadsby, Nature 2007;
450:958, © 2007 reimpreso con permiso de Macmillan Publishers Ltd.
Subunidad a

Fosfato mímico
+ +
beo, la Na /K -ATPasa es electrogénica, lo que significa que contri-
buye directamente a la separación de cargas a través la membra-
+ +
na. La Na /K -ATPasa es un ejemplo de bomba de iones tipo P. La
“P” significa fosforilación, lo que indica que durante el ciclo de
bombeo la hidrólisis del ATP conduce a la transferencia del grupo
Citosol fosfato liberado hacia un residuo de ácido aspártico de la proteína
de transporte. Como lo denota el nombre de la proteína, la propia
bomba cataliza esta reacción.
b) Considérese la actividad de la proteína. Debe recoger iones
de sodio o potasio de una región de baja concentración, lo que
significa que la proteína debe tener una afinidad relativamente
de esos dos iones; la enzima se llamó Na+/K+-ATPasa, o bomba de alta por los iones. Entonces la proteína debe liberar los iones en
sodio-potasio. el otro lado de la membrana, en una concentración mucho mayor
A diferencia del movimiento mediado por proteínas de un de cada ion. Para hacer esto, la afinidad de la proteína por ese ion
sistema de difusión facilitado, que transporta la sustancia igual- debe disminuir. De aquí que la afinidad por cada ion en los dos
mente bien en cualquier dirección, el transporte activo impulsa el lados de la membrana debe ser diferente. Esto se logra mediante
+ +
movimiento de iones en una sola dirección. La Na /K -ATPasa es la hidrólisis del ATP y la posterior liberación del ADP, que induce
+
la responsable del gran exceso de iones Na fuera de la célula y un gran cambio conformacional dentro de la molécula de proteí-
+
del gran exceso de iones K dentro de la célula. Las cargas positi- na. El cambio en la estructura de la proteína —entre las conforma-
vas portadas por estos dos cationes se equilibran mediante cargas ciones E1 y E2— también sirve para exponer alternativamente los
negativas portadas por diversos aniones, de modo que los com- sitios de unión de iones al lado opuesto de la membrana, como se
partimientos extracelular e intracelular son, en su mayor parte, analiza en el siguiente párrafo.
–
eléctricamente neutros. Los iones Cl están presentes a mayor En la figura 4-46a) se muestra un esquema propuesto para el
+ + +
concentración fuera de las células, donde equilibran los iones Na ciclo de bombeo de la Na /K -ATPasa, con base en las estructuras
+
extracelulares. La abundancia de iones K intracelulares se equi- cristalográficas de rayos X de bombas de iones del tipo P. En el
libra principalmente por el exceso de cargas negativas que portan paso 1, figura 4-46a), la bomba está en la conformación E1, y los
las proteínas y los ácidos nucleicos. sitios de unión de iones están accesibles al interior de la célula.
+ + + + +
La relación Na :K bombeada por la Na /K -ATPasa no es 1:1, En este paso la proteína ha unido tres iones Na y un ATP. En el
sino 3:2 (véase FIGURA 4-46). En otras palabras, por cada ATP paso 2 se ha cerrado una compuerta dentro de la proteína, se ha
hidrolizado, se bombean tres iones de sodio a medida que se desplazado la bomba a un estado E1 ocluido, en el que los iones
+
bombean dos iones de potasio. A causa de esta relación de bom- Na ya no pueden volver a fluir hacia el interior del citosol. La
 154 hidrólisis del ATP ligado (paso 2 y 3) y la liberación de ADP Otros sistemas primarios de transporte
(paso 3 y 4) provocan el cambio de la conformación E1 a E2. Al de iones
hacerlo, el sitio de unión se vuelve accesible para el comparti-
miento extracelular, y la proteína pierde su afinidad por los iones La bomba de tipo P mejor estudiada es la Ca2+-ATPasa, cuya es-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

+
Na , que luego se liberan fuera de la célula. Una vez que se han tructura tridimensional se ha determinado en varias etapas del
+ +
liberado los tres iones Na , la proteína capta dos iones K (paso ciclo de bombeo. La bomba de calcio está presente en las mem-
5). El cierre de otra compuerta dentro de la proteína desplaza la branas del retículo endoplásmico, donde transporta activamente
bomba a un estado ocluido (paso 6) y se impide el flujo de retorno los iones de calcio del citosol hacia la luz de este organelo. Las
+
de los iones K en el espacio extracelular. A la oclusión le sigue la células vegetales tienen una bomba de membrana plasmática tipo
+
desfosforilación (paso 6 y 7) y la unión a ATP (paso 8), que indu- P de transporte de H . En las plantas esta bomba de protones
ce el retorno de la proteína a la conformación E1 original. En este desempeña un papel clave en el transporte secundario de solutos
estado, el sitio de unión está abierto a la superficie interna de la (discutido más adelante), en el control del pH citosólico y posible-
+
membrana, y ha perdido su afinidad por los iones K , lo que lleva mente en el control del crecimiento celular por medio de la acidi-
a la liberación de estos iones en la célula. A continuación, se re- ficación de la pared celular de la planta.
pite el ciclo. En la figura 4-46b) se muestra un modelo de la estruc- El revestimiento epitelial del estómago también contiene una
+ + + +
tura cristalina de la estructura Na /K -ATPasa. Debido a que re- bomba de tipo P, la H /K -ATPasa, que secreta una solución de
quieren cambios conformacionales complejos, estas bombas de ácido concentrado (hasta 0.16 N HCl) en la cámara del estómago.
transporte activo mueven iones a través de las membranas a velo- En estado de reposo estas moléculas de bomba están situadas en
cidades que son varios órdenes de magnitud más bajas que su membranas citoplásmicas de las células parietales del revesti-
flujo a través de los canales iónicos. miento del estómago. y no son funcionales (consúltese FIGU-
La bomba de sodio-potasio se encuentra solo en las células RA 4-47). Cuando la comida ingresa al estómago se transmite un
animales. Se piensa que esta proteína evolucionó en los animales mensaje hormonal a las células parietales, que hace que las mem-
primitivos como medio principal de mantener el volumen celular, branas que contienen la bomba se desplacen a la superficie apical
y como mecanismo para generar los pronunciados gradientes de de la célula, donde se fusionan con la membrana plasmática y
+ +
Na y K que desempeñan un papel clave en la formación de im- comienzan a secretar ácido (véase figura 4-47). Además de funcio-
pulsos en las células nerviosas y musculares. Estos mismos gra- nar en la digestión, el ácido del estómago también puede condu-
dientes iónicos se usan en células no excitables para impulsar el cir a la acidez estomacal. El Prilosec y otros medicamentos rela-
movimiento de otros solutos, como se explica a continuación. La cionados son muy utilizados para prevenir la acidez gástrica al
+ +
importancia de la bomba de sodio-potasio se hace evidente cuan- inhibir la H /K -ATPasa del estómago. Otros medicamentos para
do se considera que consume aproximadamente un tercio de la la acidez estomacal que bloquean el ácido (p. ej., Zantac, Pepcid
+ +
energía producida por la mayoría de las células animales, y dos y Tagamet) no inhiben directamente la H /K -ATPasa, pero blo-
tercios de la energía producida por las células nerviosas. El digi- quean un receptor en la superficie de las células parietales, y así
tal, un esteroide obtenido de la planta digitalis purpurea que se ha impiden que las células se activen con la hormona.
utilizado durante 200 años como tratamiento para la enfermedad A diferencia de las bombas de tipo P, las bombas de tipo V
+ +
cardiaca congestiva, se enlaza a la Na /K -ATPasa. El digital re- utilizan la energía del ATP sin formar una proteína fosforilada
+ +
fuerza la contracción del corazón al inhibir la bomba Na /K , lo intermedia. Las bombas de tipo V transportan activamente iones
que conduce a una cadena de eventos que aumenta la disponibi- de hidrógeno a través de las paredes de los organelos y vacuolas
2+
lidad de Ca dentro de las células musculares del corazón. del citoplasma (de ahí la designación tipo V). Aparecen en las

Pozo + + + +
gástrico del H /K -ATPasa inactiva H /K -ATPasa activa Fármaco inhibidor
estómago de la bomba

Célula parietal
ATP
H+ H
+

Comida
K+
+
K

ADP+Pi

Citosol

Agentes
neutralizadores
de ácido (OH–)
Histamina Fármaco bloqueador Histamina
de ácido

FIGURA 4-47 Control de la secreción ácida en el estómago. En el estado de reposo, las moléculas la H+/K+-ATPasa están presentes en las paredes de
las vesículas citoplásmicas. La comida que ingresa al estómago desencadena una cascada de reacciones estimuladas por hormonas en la pared del es-
tómago que conducen a la liberación de histamina, la que se une a un receptor en la superficie de las células parietales que secretan ácido. La unión de
la histamina a su receptor estimula una respuesta que hace que las vesículas que contienen la H+/K+-ATPasa se fusionen a la membrana plasmática, for-
mando pliegues profundos o canalículos. Una vez en la superficie la proteína de transporte se activa, y bombea protones a la cavidad del estómago con-
tra un gradiente de concentración (indicado por el tamaño de las letras). Los medicamentos para la acidez estomacal Prilosec, Nexium y Prevacid blo-
quean la secreción de ácido al inhibir directamente la H+/K+-ATPasa, mientras que otros medicamentos bloqueadores de ácido interfieren con la
activación de las células parietales. Los medicamentos neutralizadores de ácido proporcionan aniones básicos que se combinan con los protones secre-
tados.
membranas que recubren los lisosomas, los gránulos secretores y anaeróbicas, las membranas plasmáticas de estas bacterias ad- 155
las vacuolas de las células vegetales, donde mantienen el bajo pH quieren un color púrpura debido a la presencia de una proteína
de los contenidos. También se han encontrado bombas de tipo V particular, la bacteriorodopsina, que actúa como una bomba de
en las membranas plasmáticas de una variedad de células. Por protones accionada por la luz. Como se muestra en la FIGURA 4-48,

4.14 ӝ Transporte activo

ejemplo, una bomba de tipo V en las membranas plasmáticas de la bacteriorodopsina contiene retinal, el mismo grupo prostético
los túbulos renales ayuda a mantener el equilibrio ácido-base del presente en la rodopsina, la proteína que absorbe la luz en los
cuerpo, al secretar protones en la orina en formación. Las bom- bastones de la retina de los vertebrados. La absorción de la ener-
bas de tipo V son grandes complejos de múltiples subunidades gía luminosa por parte del grupo retinal induce una serie de cam-
(se muestran en la figura 4-4d), y tienen una estructura similar a bios conformacionales en la proteína, que hacen que un protón se
la ATP sintasa mostrada en la figura 5-23. mueva desde el grupo retinal —a través de un canal en la proteí-
Otro grupo diverso de proteínas que transportan iones activa- na— hacia el exterior de la célula (véase figura 4-48). El protón
mente es el transportador de casete ATP-enlazante (ABC, ATP- donado por la retina fotoactivada se reemplaza por otro pro-
binding cassette), denominado así porque todos los miembros de tón transferido a la proteína del citoplasma. En total este proceso
esta superfamilia comparten un dominio homólogo ATP-enla- da como resultado la translocación de protones del citoplasma al
zante. El transportador ABC mejor estudiado se describe en la ambiente externo, lo cual genera un pronunciado gradiente de
+
“Perspectiva humana” adjunta. H a través de la membrana plasmática. Este gradiente se utiliza
más adelante por una enzima que sintetiza ATP para fosforilar el
El uso de la energía luminosa para transportar ADP, como se describe en el siguiente capítulo.
iones activamente
Transporte activo secundario (o cotransporte):
La Halobacterium salinarium (o H. halobium) es una arqueobacteria
que vive en ambientes extremadamente salados, como el que se acoplamiento del transporte activo con los
encuentra en el Gran Lago Salado. Cuando crece en condiciones gradientes iónicos existentes
El establecimiento de gradientes de concentración como los de
Na+, K+ y H+ proporciona un medio por el cual se puede almace-
nar energía libre en una célula. La energía potencial almacenada
en los gradientes iónicos es utilizada por una célula de diversas
maneras para realizar trabajo, incluido el transporte de otros so-
lutos. Considérese la actividad fisiológica del intestino. Dentro de
su lumen, las enzimas hidrolizan polisacáridos de alto peso mole-
cular en azúcares simples, que absorben las células epiteliales que
recubren el intestino. El movimiento de la glucosa a través de la
membrana plasmática apical de las células epiteliales, en contra
de un gradiente de concentración, se produce por cotransporte
con iones de sodio, como se ilustra en la FIGURA 4-49. La concen-
+
tración de Na se mantiene muy baja dentro de las células por
acción de un sistema de transporte activo primario (Na+/K+-
ATPasa), ubicado en la membrana plasmática basal y lateral, que
bombea iones de sodio fuera de la célula contra un gradiente de
concentración. La tendencia de los iones de sodio a difundirse
hacia atrás a través de la membrana plasmática apical —en favor
de su gradiente de concentración— es “conducida” ligeramente
por las células epiteliales para conducir el cotransporte de molé-
culas de glucosa hacia la célula en contra del gradiente de concen-
tración. Se dice que las moléculas de glucosa son impulsadas por
el transporte activo secundario. En este caso la proteína de trans-
+
porte, llamada cotransportador Na /glucosa, mueve dos iones de
sodio y una molécula de glucosa en cada ciclo. Una vez adentro
las moléculas de glucosa se difunden a través de la célula, y se
FIGURA 4-48 Bacteriorodopsina: una bomba de protones accionada por mueven a través de la membrana basal mediante difusión facilita-
luz. La proteína contiene siete hélices que abarcan toda la membrana y un da (página 152).
grupo retinal ubicado en el centro (que se muestra en color púrpura), que Para apreciar el poder de un gradiente de iones de acumular
sirve como elemento absorbente de la luz (cromóforo). La absorción de un
fotón causa un cambio en la estructura electrónica de la retina, lo que lle-
otros tipos de solutos en las células, podemos considerar breve-
+
+
va a la transferencia de un protón desde grupo —NH a un residuo de áci- mente la energética del cotransportador Na /glucosa. Recuérdese,
do aspártico estrechamente asociado, cargado negativamente (núm. 85) de la página 140, que el cambio de energía libre para el movi-
+
(paso 1). El protón se libera en el lado extracelular de la membrana (paso miento de 1 mol de iones Na en la célula es igual a –3.1 kcal/mol,
2) mediante un sistema de traspaso que consiste en varios residuos de +
y por tanto 6.2 kcal para dos moles de iones Na , que estarían
aminoácidos (Asp82, Glu204 y Glu194). Los espacios entre estos residuos disponibles para transportar 1 mol de glucosa cuesta arriba en la
están llenos de moléculas de agua ligadas al hidrógeno, que ayudan a
transportar protones a lo largo del camino. El retinal sin esos protones
célula. Recuérdese también, de la página 139, que la ecuación
vuelve a su estado original (paso 3) cuando acepta un protón de un resi- para el movimiento de un no electrólito —como la glucosa— a tra-
duo de ácido aspártico no asociado (Asp96), localizado cerca del lado ci- vés de la membrana es
+
toplásmico de la membrana. Después el Asp96 gana un protón por un H
del citoplasma (paso 4). Él pierde un protón (paso 5) antes de recibir un [Ci]
protón de la retina en el siguiente ciclo de bombeo. Como resultado de ΔG = RT ln
estos eventos, los protones se mueven desde el citoplasma al exterior de [Co]
la célula a través de un canal central en la proteína.
[Ci]
FUENTE: De Hartmut Luecke et al., cortesía de Janos K. Lanyi, Science ΔG = 2.303 RT log10
1999;286:255; © 1 999, reimpreso con permiso de AAAS. [Co]
 156 Las células vegetales dependen de sistemas secundarios de
transporte activo para absorber una variedad de nutrientes que
incluyen sacarosa, aminoácidos y nitrato. En las plantas la absor-
ción de estos compuestos se combina con el movimiento descen-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

+ +
Lumen dente hacia adentro de los iones H , en lugar de los iones Na . El
transporte secundario activo de glucosa a las células epiteliales
del intestino y el transporte de sacarosa a una célula vegetal son
ejemplos de simportadores, donde las dos especies transportadas
+ +
(Na y glucosa, o H y sacarosa) se mueven en la misma dirección.
2Na+ GL Se han aislado numerosos cotransportadores asociados a un an-
tiportador, donde las dos especies transportadas se mueven en
direcciones opuestas. Por ejemplo, a menudo las células mantie-
nen un pH citoplasmático adecuado al acoplar el movimiento
+
Cotranspor- hacia adentro y hacia abajo del Na con el movimiento hacia afue-
+
tador
+
ra del H . Los cotransportadores que median el antiporte son por
+ Na /glucosa
Na GL lo general llamados intercambiadores. En los últimos años se han
Transportador resuelto las estructuras tridimensionales de varios transportado-
de glucosa + +
Na+ Na
+ GL (GLUT2).
res secundarios y, como la Na /K -ATPasa, exhiben un ciclo de
Difusión transporte en el que los sitios de unión de la proteína obtienen un
K+
+
K facilitada de acceso alterno al citoplasma y al espacio extracelular. En la
glucosa
+ + Sangre
FIGURA 4-50 se muestra un modelo propuesto del ciclo de trans-
Na /K -ATPasa porte de una de las principales familias de transportadores secun-
GL darios.

FIGURA 4-49 Transporte secundario: uso de energía almacenada en un REPASO

gradiente iónico. La Na+/K+-ATPasa que reside en la membrana plasmática
1. Describa dos formas en que se utiliza la energía para mover
de la superficie lateral mantiene una concentración citosólica muy baja de
iones y solutos contra un gradiente de concentración.
Na+. El gradiente de Na+ a través de la membrana plasmática representa
un almacenamiento de energía que se puede aprovechar para realizar un 2. ¿Cómo ilustra la Na+/K+-ATPasa la asimetría de la membrana
trabajo, como el transporte de glucosa mediante un cotransportador Na /
+ plasmática?
glucosa localizado en la membrana plasmática apical. Una vez que se 3. ¿Cuál es el papel de la fosforilación en el mecanismo de ac-
+ +
transportan a través de la superficie apical hacia la célula, las moléculas ción de Na /K -ATPasa?
de glucosa se difunden a la superficie basal, donde son transportadas por 4. ¿Cuál es la relación estructural entre las partes del canal pro-
un transportador facilitador de glucosa fuera de la célula y hacia el torren- + +
cariótico KcsA K y el canal de K regulado por voltaje eucarió-
te sanguíneo. El tamaño relativo de las letras indica las direcciones de los tico? ¿Qué parte del canal está involucrada en la selectividad
respectivos gradientes de concentración. Cada molécula de glucosa trans-
iónica, qué parte en la activación del canal y qué parte en la
porta dos iones Na+; la Na+/glucosa 2:1 proporciona una fuerza motriz mu-
inactivación del canal? ¿Cómo ocurre cada uno de estos pro-
cho mayor para mover la glucosa a la célula que una relación 1:1.
cesos (selectividad iónica, activación e inactivación)?
+
5. Debido a su menor tamaño, se esperaría que los iones de Na
pudieran penetrar cualquier poro lo suficientemente grande
+ +
Usando esta ecuación, podemos calcular qué tan pronunciada es para un ion K . ¿Cómo selecciona el canal K este ion específi-
la concentración de glucosa (X) que este cotransportador puede co?
generar. A 25 °C,

–6.2 kcal/mol = 1.4 kcal/mol · log10X

log10 X = –4.43
1
X=
23 000
+
Este cálculo indica que el cotransportador Na /glucosa es capaz
de transportar glucosa a una célula contra un gradiente con con- Extracelular
centración 20 000 veces mayor. 1 2

Compuerta exterior

FIGURA 4-50 Modelo esquemático del ciclo de transporte de un Leu Na+

transportador secundario. Se muestran cuatro estados conformacio-
nales diferentes durante el ciclo de transporte de un simportador bac-
teriano de la familia LeuT. La proteína transporta activamente el ami-
noácido leucina a la célula utilizando el gradiente de iones Na+
establecido como fuente de energía. En el paso 1 la compuerta exter- Compuerta interior
na en la proteína está abierta, lo que permite que tanto el Na+ como la
leucina lleguen a sus sitios de enlace desde el espacio extracelular. En
el paso 2 la compuerta exterior se cierra y se ocluyen los sustratos
dentro de la proteína. En el paso 3 una segunda molécula de leucina
se une a otro sitio justo fuera de la compuerta exterior. En el paso 4 la
compuerta interior se abre y los sustratos se liberan en el citoplasma.
La proteína vuelve a su estado original cuando se cierra la compuerta
interior y se abre la compuerta exterior.
FUENTE: Reproducida con permiso de Macmillan Publishers Ltd: Nature
4 3
2010;465:171, por N. K. Karpowich y Da-Neng Wang (NYU School of
Medicine). Citoplasma
 157
4.15 PERSPECTIVA HUMANA

4.15 ӝ Perspectiva humana

Defectos en los canales iónicos y transportadores
como causa de enfermedades hereditarias
Varios trastornos hereditarios graves se han rastreado hasta mu- estimula la actividad de una familia de intercambiadores epite-
taciones en genes que codifican proteínas de canales iónicos liales de cloruro/bicarbonato. A medida que el papel del CFTR
(consúltese tabla 1). La mayoría de los trastornos enumerados en se ha vuelto más complejo, se ha vuelto difícil establecer con
la tabla 1 afectan el movimiento de iones a través de las membra- precisión cómo un defecto en esta proteína conduce al desarro-
nas plasmáticas de células excitables (es decir, músculos, nervios llo de infecciones pulmonares crónicas. Si bien existe un debate
y células sensoriales), lo que reduce la capacidad de estas cé- considerable, muchos investigadores estarían de acuerdo con
lulas para desarrollar o transmitir impulsos (página 160). En con- las siguientes declaraciones.
traste la fibrosis quística, el trastorno del canal iónico hereditario Debido a que el movimiento de agua de las células epite-
más estudiado y más común, es el resultado de un defecto en liales por ósmosis sigue el movimiento de las sales, las anoma-
los canales iónicos de las células epiteliales. lías en el flujo de Cl–, HCO3– y/o Na+ causadas por la deficiencia
En promedio, una de cada 25 personas provenientes del nor- de CFTR conducen a una disminución en el fluido que baña las
te de Europa portan una copia del gen mutante que puede causar células epiteliales de las vías respiratorias (consúltese figura 1).
fibrosis quística. Como no muestran síntomas del gen mutante, la Una reducción en el volumen del líquido superficial, y el aumento
mayoría de los heterocigotos desconocen que son portadores. resultante en la viscosidad del moco secretado, afecta la fun-
En consecuencia, aproximadamente uno de cada 2 500 niños de ción de los cilios que empujan el moco y las bacterias fuera del
esta población caucásica (1/25 ⫻ 1/25 ⫻ 1/4) es homocigoto rece- tracto respiratorio. A muchos pacientes con CF les ayuda inha-
sivo en ese locus y nace con fibrosis quística (CF, cystic fibrosis). lar un aerosol de solución salina hipertónica, que ayuda a atraer
Aunque la fibrosis quística afecta a órganos como el intestino, más agua hacia las vías respiratorias y reducir la viscosidad del
el páncreas, las glándulas sudoríparas y el tracto reproducti- moco. También se están llevando a cabo ensayos clínicos con
vo, el tracto respiratorio suele presentar los efectos más graves. compuestos que tienen el potencial de aumentar el volumen del
Las víctimas de CF producen una mucosidad espesa y pegajo- fluido superficial, al alterar los movimientos de los iones dentro y
sa, muy difícil de expulsar de las vías respiratorias. Las personas fuera de las células epiteliales (consúltese figura 1). Uno de estos
+
afectadas suelen padecer infecciones pulmonares crónicas e in- compuestos es el inhibidor del canal de Na EnaC denominado
flamación, que destruyen progresivamente la función pulmonar. GS-9411, que se esperaba ayudaría a tratar la CF al reducir la
+
El gen responsable de la fibrosis quística se aisló en 1989. absorción de iones Na del fluido de las vías respiratorias ha-
Una vez que se determinó la secuencia del gen CF y se dedujo cia el epitelio. Desafortunadamente, este fármaco causó niveles
la secuencia de aminoácidos del polipéptido correspondiente, elevados de potasio en la sangre y los ensayos clínicos tuvieron
era evidente que el polipéptido era un miembro de la superfa- que finalizar, lo que ilustra los desafíos de tratar una enfermedad
milia del transportador ABC. La proteína se nombró regulador con enfoque en canales iónicos con amplias funciones en la fi-
de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR, siología. De aquí que se esperó que una mejor comprensión de
cystic fibrosis transmembrane conductance regulator), un térmi- la genética de la CF pudiera conducir al desarrollo de fármacos
no ambiguo que reflejaba el hecho de que los investigadores dirigidos con mayor precisión, que pudieran tratar la CF sin cau-
no estaban seguros de su función precisa. Se pensó que la pre- sar alteraciones de gran alcance en la química corporal.
gunta se respondería después de purificar la proteína, incorpo- En la última década, los investigadores identificaron más de
rarla a las bicapas lipídicas artificiales, y demostrar que actuaba 1 000 mutaciones diferentes que dan lugar a la fibrosis quística.
como un canal de cloruro regulado por AMP cíclico, no como un Sin embargo, aproximadamente 70% de los alelos responsables
transportador. Pero estudios posteriores han agregado numero- de la fibrosis quística en Estados Unidos contienen la misma al-
sas complicaciones a la historia, ya que se ha demostrado que teración genética (designada ΔF508); faltan tres pares de bases
además de funcionar como un canal de cloro, la CFTR también de DNA que codifican una fenilalanina en la posición 508, den-
–
1) contiene iones de bicarbonato (HCO3) 2) suprime la actividad tro de uno de los dominios citoplásmicos del polipéptido CFTR.
+
de un canal iónico de Na epitelial, el canal iónico (ENaC) y 3) Posteriores investigaciones han revelado que los polipéptidos

FIGURA 1 Una explicación de los efectos

debilitantes en la función pulmonar a
Capa mucosa Bacterias en
partir de la ausencia de la proteína
hidratada CFTR suspensión
CFTR. En el epitelio de la vía aérea de un
individuo normal, el agua sale de las célu-
las epiteliales en respuesta al movimiento
hacia afuera de los iones, lo que hidrata Flujo Capa mucosa Capa de bacterias
la capa mucosa de la superficie. La capa deshidratada patógenas (biopelícula) Flujo
mucosa hidratada, con su bacteria atrapa- deficiente
da, se mueve fácilmente fuera de las vías
respiratorias. En el epitelio de las vías res-
piratorias de una persona con fibrosis
quística el movimiento anormal de los io- Cilios
nes hace que el agua fluya en la direc-
ción opuesta, lo cual deshidrata la capa
mucosa. Como resultado, las bacterias
atrapadas no se pueden mover fuera de Célula
las vías respiratorias, lo que les permite Na+ Cl– H2O Na+ H2O Cl –
epitelial
proliferar como una biopelícula (página
13) y causar infecciones crónicas. Vía respiratoria de un individuo normal Vía respiratoria de un paciente con CF
 158 TABLA 1

Trastorno hereditario Tipo de canal Gen Consecuencias clínicas

2+
Migraña hemipléjica familiar (FHM, fa- Ca CACNL1A4 Cefalea migrañosa
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

milial hemiplegic migraine)

2+
Ataxia episódica tipo 2 (EA-2, episodic Ca CACNL1A4 Ataxia (falta de equilibrio y coordinación)
ataxia type 2)
2+
Parálisis periódica hipocalcémica Ca CACNL1A3 Miotonía periódica (rigidez muscular) y
parálisis
Ataxia episódica tipo-1 K+ KCNA1 Ataxia
+
Convulsiones neonatales familiares be- K KCNQ2 Convulsiones epilépticas
nignas
+
Sordera dominante no sindrómica K KCNQ4 Sordera
Síndrome de QT largo K+ HERG Vértigo, muerte súbita por fibrilación
KCNQ1, o ventricular
Na+ SCN5A
Parálisis periódica hipercalcémica Na+ SCN4A Miotonía periódica y parálisis
Síndrome de Liddle Na+ B ENaC Hipertensión (presión arterial alta)
Miastenia gravis Na+ nAChR Debilidad muscular
Enfermedad de Dent Cl− CLCN5 Cálculos renales
Miotonía congénita Cl− CLC 1 Miotonía periódica
Síndrome de Bartter tipo IV Cl− CLC Kb Disfunción renal, sordera
−
Fibrosis quística Cl CFTR Congestión pulmonar e infecciones
Arritmias cardiacas Na+ Muchos genes diferen- Latidos cardiacos irregulares o rápidos
tes
+
K
2+
Ca

Véase Nature Cell Biol 2004;6:1040, o Nature 2006;440:444, para una lista más completa.

CFTR que carecen de este aminoácido particular no se procesan Desde que se aisló el gen responsable de la CF el desa-
normalmente dentro de las membranas del retículo endoplásmi- rrollo de una cura mediante terapia génica —o sea, mediante el
co, y de hecho nunca llegan a la superficie de las células epitelia- reemplazo del gen defectuoso por una versión normal— ha sido
les. Como resultado, los pacientes con CF que son homocigotos un objetivo principal de los investigadores de la CF. La fibrosis
para el alelo ΔF508 carecen completamente del canal de CFTR quística es un buen candidato para la terapia génica porque los
en sus membranas plasmáticas y tienen una forma grave de la peores síntomas de la enfermedad son consecuencia de las ac-
enfermedad. Cuando las células de estos pacientes crecen en tividades defectuosas de las células epiteliales que recubren las
cultivos a temperatura más baja, la proteína mutante se trans- vías respiratorias, y por tanto son accesibles a los agentes que
porta a la membrana plasmática donde funciona bastante bien. pueden administrarse por inhalación de un aerosol. Los ensa-
Este hallazgo ha llevado a varias compañías farmacéuticas a bus- yos clínicos se han llevado a cabo usando varios tipos diferentes
car pequeñas moléculas que se puedan unir a estas moléculas de sistemas de administración. En un grupo de ensayos, el gen
mutantes de CFTR, que eviten su destrucción en el citoplasma CFTR normal se incorporó en el DNA de un adenovirus defec-
y les permitan alcanzar la superficie de la célula. Uno de estos tuoso, un tipo de virus que normalmente causa infecciones del
fármacos candidatos, el VX-809, fracasó en mostrar mejoras en tracto respiratorio superior. A continuación, se permitió que las
los pacientes en el resultado de los ensayos clínicos. Otro me- partículas del virus de recombinación infectaran las células de
dicamento llamado Kalydeco (también conocido como Ivacaftor) las vías respiratorias, con la administración del gen normal a las
se une al CFTR y mantiene el canal de iones abierto. Este fárma- células deficientes genéticamente. La principal desventaja en el
co está clínicamente aprobado para el tratamiento de la CF en uso de adenovirus es que el DNA viral (junto con el gen CFTR
pacientes que portan la sustitución de aminoácidos G551D, que normal) no se integra en los cromosomas de la célula hospe-
no impide que el CFTR llegue a la superficie, sino que reduce la dadora infectada, por lo que el virus debe readministrarse con
capacidad de apertura del canal. El Kalydeco supera este defec- frecuencia. Como resultado el procedimiento a menudo induce
to. Desafortunadamente, solo 4% de los pacientes con CF tienen una respuesta inmune dentro del paciente, que elimina el virus
la mutación G551D. No obstante, los ensayos clínicos sugieren y conduce a la inflamación pulmonar. Los investigadores dudan
que el Kalydeco en combinación con el VX-809 se puede usar en emplear virus que integren sus genomas por temor a iniciar
para tratar pacientes con el alelo ΔF508, posiblemente porque la formación de cáncer. En otros ensayos, el DNA que codifica
ayuda a que los canales que alcanzan la superficie permanezcan el gen CFTR normal se ha relacionado con liposomas carga-
abiertos por más tiempo. dos positivamente (página 121), que se pueden fusionar con las
Según una estimación, la mutación ΔF508 tuvo que haberse membranas plasmáticas de las células de las vías respiratorias y
originado hace más de 50 000 años para haber alcanzado una entregando sus contenidos de DNA en el citoplasma. La admi-
frecuencia tan alta en la población. El hecho de que el gen de la nistración basada en lípidos tiene una ventaja sobre los virus: es
CF haya alcanzado esta frecuencia sugiere que los heterocigo- menos propensa a estimular una respuesta inmune destructiva
tos pueden recibir alguna ventaja selectiva sobre aquellos que después de tratamientos repetidos; pero tiene la desventaja de
carecen de una copia del gen defectuoso. Se ha propuesto ser menos eficaz para lograr la modificación genética de las cé-
que los heterocigotos CF pueden estar protegidos de los efec- lulas objetivo. Hasta la fecha, ninguno de los ensayos clínicos
tos del cólera. Una dificultad con esta propuesta es que no hay de terapia génica ha resultado en una mejora significativa de
registro de epidemias de cólera en Europa hasta la década de los procesos fisiológicos o los síntomas de la enfermedad. Si se
1820. Una propuesta alternativa sugiere que los heterocigotos quiere lograr un tratamiento para la CF con base en la terapia gé-
están protegidos de la fiebre tifoidea, porque la bacteria res- nica, será necesario desarrollar sistemas más efectivos de admi-
ponsable de esta enfermedad se adhiere mal a la pared de un nistración de DNA, capaces de alterar genéticamente un mayor
intestino que tiene un número reducido de moléculas de CFTR. porcentaje de las células de las vías respiratorias.
 El potencial de reposo 159
4.16 Potenciales de membrana
Se produce un voltaje (o diferencia de potencial eléctrico) entre
Todos los organismos responden a la estimulación externa, una dos puntos —como en el interior y el exterior de la membrana
propiedad denominada irritabilidad. Incluso una ameba unicelu-

4.16 ӝ Potenciales de membrana

plasmática— cuando hay un exceso de iones positivos en un punto
lar, si se pincha con una aguja de vidrio fino, responde retirando y un exceso de iones negativos en el otro. Los voltajes a través de
sus pseudópodos, se recoge y se mueve en otra dirección. La irri- las membranas plasmáticas se pueden medir al insertar un elec-
tabilidad en una ameba depende de las mismas propiedades bá- trodo de vidrio fino (o microelectrodo) en el citoplasma de una cé-
sicas de las membranas que conducen a la formación y propaga- lula, otro electrodo en el fluido extracelular fuera de la célula y la
ción de los impulsos nerviosos, que es el tema del resto del conexión de los electrodos a un voltímetro, un instrumento que
capítulo. mide la diferencia de potencial entre dos puntos (obsérvese
Las células nerviosas (o neuronas) están especializadas en la FIGURA 4-52). Cuando este experimento se realizó por primera
recolección, producción y transmisión de información, que se co- vez en un axón gigante de calamar, se registró una diferencia de
difica en forma de impulsos eléctricos de rápido movimiento. Las potencial de aproximadamente 70 milivoltios (mV), siendo el inte-
partes básicas de una neurona típica se ilustran en la FIGU- rior negativo con respecto al lado externo (indicado con un signo
RA 4-51a). El núcleo de la neurona se encuentra dentro de una menos, –70 mV). La presencia de un potencial de membrana no
región expandida llamada cuerpo celular, centro metabólico de la es exclusiva de las células nerviosas; tales potenciales están pre-
célula y el lugar donde se fabrican la mayoría de sus contenidos sentes en todos los tipos de células, la magnitud varía entre apro-
materiales. Extendiéndose desde los cuerpos celulares de la ma- ximadamente –15 y –100 mV. Cuando una célula nerviosa o mus-
yoría de las neuronas hay varias extensiones finas, llamadas den- cular se encuentra en un estado no excitado, el potencial de la
dritas, que reciben información entrante de fuentes externas, membrana se denomina potencial de reposo porque está sujeto
usualmente de otras neuronas. También emerge del cuerpo de la a cambios espectaculares, como se analiza en la siguiente sección.
célula una extensión única y más prominente, el axón, que con- La magnitud y dirección del voltaje a través de la membrana
duce los impulsos salientes lejos del cuerpo de la célula y hacia plasmática están determinadas por las diferencias en las concen-
la(s) célula(s) objetivo. Aunque algunos axones pueden tener solo traciones de iones en cada lado de la membrana y sus permeabi-
unos pocos micrómetros de longitud, otros se extienden a distan- lidades relativas. Como se describió anteriormente en este capí-
cias mucho más largas (véase figura 4-51b); en el cuerpo de un + + +
tulo, la Na /K -ATPasa bombea el Na fuera de la célula y el
gran vertebrado como una jirafa, o una ballena, los axones pue- +
K hacia la célula, lo que establece gradientes pronunciados de
den medir muchos metros. La mayoría de los axones se dividen estos dos iones a través de la membrana plasmática. A causa
cerca de sus extremos en prolongaciones más pequeñas, cada una de estos gradientes, es de esperar que los iones de potasio se es-
de las cuales termina en un botón terminal, un sitio especial donde capen de la célula y que los iones de sodio se filtren hacia dentro
los impulsos se transmiten de la neurona a la célula objetivo. a través de sus canales iónicos respectivos. Sin embargo, la gran
Muchas neuronas en el cerebro terminan en miles de botones mayoría de los canales iónicos en la membrana plasmática de una
terminales, que permiten que estas células cerebrales se comuni- célula nerviosa en reposo están cerrados. Aquellos que están
quen con miles de objetivos potenciales. Como se discutió en la +
abiertos son selectivos para el K ; a menudo se los conoce como
página 118, la mayoría de las neuronas en el cuerpo de los verte- + +
canales de fugas de K . Los canales de fuga de K son miembros de
brados están envueltas en una vaina de mielina rica en lípidos, +
la familia K2P de canales K , que carecen del detector de voltaje
cuya función se describe a continuación. S4 (página 145) y no responden a los cambios de voltaje.

Núcleo de la
célula de Schwann
Capas de
Dendritas mielina

Núcleo
Axón

Cuerpo
celular Axón

Vaina de mielina v

Nodo de Ranvier

100 μm
Botón terminal
a) b)

FIGURA 4-51 La estructura de una célula nerviosa. a) Esquema de una neurona simple con un axón mielinizado. Como muestra la figura, la vaina de mie-
lina comprende células individuales de Schwann que se han envuelto alrededor del axón. Los sitios donde el axón carece de envoltura de mielina se lla-
man nodos de Ranvier. (Nota: Las células formadoras de mielina dentro del sistema nervioso central se llaman oligodendrocitos en lugar de células de
Schwann); b) Micrografía compuesta de una sola neurona hipocampal de rata con cuerpo celular y dendritas (púrpura) y un axón de 1 cm de longitud (ro-
jo). Las células nerviosas motoras en los mamíferos mayores pueden ser de 100 veces esta longitud.
FUENTE: b) De Carlos F. Ibáñez. Trends Cell Biol 2007;17:520, © 2007, con permiso de Elsevier.
 160 +80 +80
Potencial de equilibrio del sodio
determinar el potencial de reposo. La diferencia entre el poten-
+
+60 +60 cial de equilibrio K calculado (–91 mV) y el potencial de reposo
+40 +40
medido (–70 mV, véase figura 4-52) se debe a una ligera permea-
Voltaje (mV)

bilidad de la membrana al Na+, a través de un canal de fuga del

+20 +20
0 0 Electrodo entra
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

+
–20 –20 en la célula Na descrito recientemente.
–40 –40
–60 –60
–80 –80
El potencial de acción
–100 –100
Potencial de equilibrio del potasio Nuestra comprensión actual de los potenciales de membrana y
los impulsos nerviosos descansa en un conjunto de investigacio-
Tiempo Tiempo nes llevadas a cabo en los axones gigantes del calamar a finales
de la década de 1940 y principios de la de 1950 por un grupo de
Voltímetro fisiólogos británicos, más notablemente por Alan Hodgkin,
Andrew Huxley y Bernard Katz. Esos axones, que tienen aproxi-
madamente 1 mm de diámetro, transportan impulsos a altas ve-
Electrodo Electrodo de locidades, lo que permite que el calamar escape rápidamente de
de registro referencia
los depredadores. También facilitó la medición de su actividad
eléctrica el gran tamaño de estos axones cuando se comparan con
++ + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + los axones microscópicos de las neuronas de mamíferos. Si la
–– – – – – – – – – – – – – – – – –– – – – – – – – – – – – – – – – membrana de un axón de calamar en reposo es estimulada al
Axón Axón
golpearla con una aguja fina, o sacudiéndola con una corriente
eléctrica muy pequeña, algunos de sus canales de sodio se abren,
lo que permite que un número limitado de iones de sodio se di-
a) b) funda dentro de la célula. Esta oportunidad para que los iones
FIGURA 4-52 Medición del potencial de reposo de una membrana. Se cargados positivamente se muevan hacia la célula reduce el po-
mide un potencial cuando se detecta una diferencia de potencial entre el tencial de membrana, lo que la hace menos negativa. Como el
electrodo de referencia y el de registro. En a) ambos electrodos están en cambio positivo en el voltaje de la membrana provoca una dismi-
el exterior de la célula, y no se mide diferencia de potencial (voltaje). nución de la polaridad entre los dos lados de la membrana, se le
Cuando un electrodo penetra en la membrana plasmática del axón en b), llama despolarización.
el potencial cae inmediatamente a –70 mV (el interior es negativo), que se
Si el estímulo hace que la membrana se despolarice solo unos
acerca al potencial de equilibrio de los iones de potasio, es decir, el po-
tencial que se produciría si la membrana fuera impermeable a todos los pocos milivoltios, digamos desde –70 a –60 mV, la membrana
iones excepto al potasio. vuelve rápidamente a su potencial de reposo tan pronto como el
estímulo cesa (consúltese FIGURA 4-53a), recuadro de la izquier-
+ da). Sin embargo, si el estímulo despolariza la membrana más allá
Debido a que los iones K son la única especie cargada con
de cierto punto, llamado umbral, que ocurre a unos –50 mV, se
una permeabilidad significativa en una célula nerviosa en reposo,
inicia una nueva serie de eventos. El cambio en el voltaje hace
su salida a través de la membrana deja un exceso de cargas nega-
que se abran los canales de sodio regulados por voltaje. Como
tivas en el lado citoplásmico de la membrana. Aunque el gradien-
resultado los iones de sodio se difunden libremente hacia abajo
te de concentración a través de la membrana favorece la salida
+ dentro de la célula [consúltese figura 4-53a), recuadro central]
continua del K , el gradiente eléctrico resultante del exceso de
tanto en su concentración como en su gradiente eléctrico. La ma-
carga negativa en el interior de la membrana favorece la reten- +
+ yor permeabilidad de la membrana a los iones Na , y el movi-
ción de los iones K dentro de la célula. Cuando estas dos fuerzas
miento correspondiente de carga positiva en la célula, hace que
opuestas están equilibradas, se alcanza el equilibrio y no hay más
+ la membrana revierta el potencial brevemente (véase figura
movimiento neto de iones K a través de la membrana. Mediante
4-53b), se vuelve positivo hasta aproximadamente +40 mV, lo que
la siguiente ecuación —la ecuación de Nernst— se puede calcular +
se aproxima el potencial de equilibrio del Na (véase figura 4-52).
el potencial de membrana (Vm) que se mediría en el equilibrio si
Después de 1 ms aproximadamente, los canales de sodio se
la membrana plasmática de una célula nerviosa fuera permeable
+7 inactivan espontáneamente y bloquean la afluencia adicional de
solo a los iones de K . En este caso Vm sería igual al potencial de +
iones Na . Según la opinión predominante, la inactivación resulta
equilibrio del potasio (EK):
de la difusión aleatoria de un péptido de inactivación en la aber-
+ tura del poro del canal, de una manera similar a la descrita para
RF [Ko] +
EK = 2.303
· log10 + los canales de K en la página 147. Mientras tanto, el cambio en
zF [Ki]
el potencial de membrana causado por la afluencia de Na+ desen-
Para el axón gigante de calamar, la [K+i ] interna es de aproxima- cadena la apertura de los canales de potasio dependientes de vol-
+
damente 350 mM, mientras que la [Ko ] externa es de aproxi- taje [consúltese figura 4-53a), recuadro de la derecha], que se
madamente 10 mM; así a 25 °C (298 K) y z = +1 (para el univalen- trata en la página 145. Como resultado, los iones de potasio se
+
te ion K ), difunden libremente fuera de la célula por su empinado gradien-
te de concentración. La disminución de la permeabilidad de la
EK = 59 log10 0.028 = –91 mV +
membrana al Na y el aumento de la permeabilidad al K hacen
+

Un cálculo similar del potencial de equilibrio del Na (ENa) produ-

+ que el potencial de la membrana oscile nuevamente a un valor
ciría un valor de aproximadamente +55 mV. Como las mediciones negativo de aproximadamente –80 mV, acercándose al potencial
+
del voltaje a través de la membrana nerviosa en reposo son simi- de equilibrio del K (obsérvese figura 4-52). Este gran potencial
lares en signo y magnitud (–70 mV) al potencial de equilibrio del negativo de membrana provoca el cierre de los canales de potasio
potasio recién calculado, el movimiento de iones de potasio a dependientes de voltaje (véase figura 4-43b), lo que devuelve la
través de la membrana se considera el factor más importante para membrana a su estado de reposo. En conjunto, estos cambios en
el potencial de membrana se llaman un potencial de acción
7
La ecuación de Nernst se deduce de la ecuación que aparece en la página (véase figura 4-53b). La serie completa de cambios durante un
140, al establecer ΔG = 0, que es el caso cuando el movimiento de los iones potencial de acción lleva solo alrededor de 5 mseg en el axón de
está en equilibrio. calamar, y menos de 1 ms en una célula nerviosa de mamífero
 Potencial de reposo Fase de despolarización Fase de repolarización mielinizada. Tras un potencial de acción, la membrana entra en 161
compuerta de sodio compuerta de sodio compuerta de potasio un breve periodo refractario durante el cual no puede ser reestimu-
cerrada abierta abierta
lada. El periodo refractario ocurre porque los canales de sodio,
voltaje = –70 mV voltaje = +40 mV voltaje = –80 mV
Exterior Exterior Exterior
que se inactivaron durante la etapa inicial del potencial de acción,

4.17 ӝ Propagación de los potenciales de acción como impulso

+ + + Na+ + + + + + + Na+ + + + + ++ + – + + se deben cerrar antes de que puedan reabrirse en respuesta a otro
– + +– – + +– – + + + K+
estímulo. Como se muestra en la figura 4-43, la transformación
Compuerta Com- Compuerta Com-
de sodio Compuerta puerta Compuerta de sodio puerta de del canal iónico de la conformación inactivada a la cerrada solo
cerrada de potasio de sodio de potasio cerrada potasio
cerrada abierta cerrada abierta puede ocurrir después de que el péptido inactivador haya salido
+ – + –
de la abertura del poro.
– – – + + – +– + – –
K+
– – +– –
K
+ – – – Na
– – + –
– –
– – –
K+ Aunque el potencial de acción cambia drásticamente el volta-
je de la membrana, solo un pequeño porcentaje de los iones en
++ ++++ – – – ++++++++ ambos lados de la membrana están involucrados en cualquier po-
Canal de fuga – – – – – – +++ ––––––––
de potasio tencial de acción. Los sorprendentes cambios en el potencial de
Tiempo Tiempo Tiempo membrana que se ven en la figura 4-53b) no son causados por
1 2 3 + +
cambios en las concentraciones de iones Na y K en los dos lados
– – – – – – +++ –––––––– de la membrana (tales cambios son insignificantes). Más bien los
++ ++++ – – – ++++++++
provocan los movimientos de las cargas, en una dirección u otra,
que resultan de los cambios fugaces en la permeabilidad en estos
+ +
iones. Aquellos iones Na y K que sí cambian de lugar a través
de la membrana durante un potencial de acción son eventual-
Permeabilidad de Na+ + +
mente bombeados de regreso por la Na /K -ATPasa. Incluso si
Permeabilidad iónica

esta se inhibe, una neurona a menudo puede continuar emitien-

do miles de impulsos antes de que se disipen los gradientes ióni-
cos establecidos por la actividad de la bomba.
Una vez que la membrana de una neurona se despolariza al
Permeabilidad de K+ valor umbral, se dispara un potencial de acción en su forma más
completa, sin más estimulación. Esta característica de la función
de las células nerviosas se conoce como la ley del todo o nada. No
hay término medio; la despolarización subumbral es incapaz de
desencadenar un potencial de acción mientras que la despolariza-
0 1 2 ción umbral provoca automáticamente una respuesta máxima. La
a) Tiempo (ms) energía necesaria para crear un potencial de acción se almacena
+ +
con anticipación mediante la Na /K -ATPasa, que genera gra-
dientes iónicos pronunciados a través de la membrana plasmáti-
Potencial de membrana

ca. Una vez que se logra esto, los diversos iones están listos para
40 fluir a través de la membrana hacia abajo de sus respectivos gra-
dientes electroquímicos tan pronto como se abran sus canales
iónicos, al igual que el agua que fluye de una presa una vez que
(mV)

0 se liberan las compuertas.

Los movimientos de los iones a través de la membrana plas-
mática de las células nerviosas forman la base de la comunicación
neuronal. Ciertos anestésicos locales, como la procaína y la novo-
caína, actúan por cierre de los canales iónicos en las membranas
de las células sensoriales y las neuronas. Mientras estos canales
–70 iónicos permanezcan cerrados las células afectadas no pueden
generar potenciales de acción, y por tanto no pueden informar al
0 1 2 cerebro de los eventos que ocurren en la piel o los dientes.
b) Tiempo (ms)

FIGURA 4-53 Formación de un potencial de acción. a) Tiempo 1, recua-

dro superior izquierdo: la membrana en esta región de la célula nerviosa
REPASO
+
muestra el potencial de reposo, en el que solo los canales de fuga de K 1. ¿Qué es un potencial de reposo? ¿Cómo se establece como
están abiertos y el voltaje de la membrana es de aproximadamente –70 resultado del flujo de iones?
mV. Tiempo 2, recuadro central superior, muestra la fase de despolariza- 2. ¿Qué es un potencial de acción? ¿Cuáles son los pasos que
ción: la membrana se ha despolarizado más allá del valor umbral abriendo conducen a sus diversas fases?
las compuertas de sodio reguladas por voltaje, lo que provoca una afluen-
+
cia de iones Na (indicado en el cambio de permeabilidad en el gráfico in-
+
ferior). El aumento de la permeabilidad del Na hace que el voltaje de la
membrana se invierta temporalmente y alcance un valor de aproximada-
mente +40 mV en el axón gigante del calamar (tiempo 2). Es esta inversión
del potencial de membrana lo que constituye el potencial de acción.
4.17 Propagación de los potenciales
Tiempo 3, recuadro superior derecho, muestra la fase de repolarización: de acción como impulso
en una pequeña fracción de segundo, las compuertas de sodio se inacti-
van y las compuertas de potasio se abren, lo que permite que los iones de Hasta este punto la discusión se ha restringido a eventos que ocu-
potasio se difundan por la membrana (parte inferior del dibujo) y establez- rren en un sitio particular en la membrana de la célula nerviosa,
can un potencial más negativo en esa ubicación (–80 mV) que el potencial donde la despolarización experimental ha desencadenado un po-
de reposo. Casi tan pronto como se abren, las compuertas de potasio se
cierran y dejan los canales de fuga de potasio como la ruta primaria de
tencial de acción. Una vez que se ha iniciado un potencial de ac-
movimiento de iones a través de la membrana, y se restablece el poten- ción, no permanece localizado en un sitio en particular, sino que
cial de reposo. b) Un resumen de los cambios de voltaje que ocurren du- se propaga como impulso nervioso a lo largo de la célula hasta
rante un potencial de acción, como se describe en la parte a). las terminaciones nerviosas.
 162 Siguiente nodo
Na+
++ + + + + + + + – – – – – – – – + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + +
– – – – – – – – – + + + + + + + +– – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – +
+ El flujo de corriente despolariza –
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Axón Dirección de propagación el siguiente nodo de Ranvier Dirección

de impulso
– – – – – – – – – + + + + + + + +– – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – Axón
++ + + + + + + + – – – – – – – – + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + +

+ –
Región en Región de Región donde la – +
periodo potencial despolarización desencadenará
refractario de acción un potencial de acción Na+

FIGURA 4-54 La propagación de un impulso resulta del flujo local de io-

nes. Un potencial de acción en un sitio en la membrana despolariza una Nodo de Vaina de
región adyacente a esta y desencadena un potencial de acción en el se- Ranvier mielina
gundo sitio. El potencial de acción solo puede fluir hacia adelante, porque
la porción de la membrana que acaba de experimentar un potencial de FIGURA 4-55 Conducción saltatoria. Durante la conducción saltatoria, so-
acción permanece en un periodo refractario. lo la membrana en la región nodal del axón se despolariza y es capaz de
generar un potencial de acción. Esto se logra mientras la corriente fluye
directamente desde un nodo activado al siguiente nodo inactivo a lo largo
del axón.
Los impulsos nerviosos se propagan a lo largo de una mem-
brana porque un potencial de acción en un sitio tiene un efecto
en el sitio adyacente. La gran despolarización que acompaña a
un potencial de acción crea una diferencia de carga a lo largo de
las superficies interna y externa de la membrana plasmática (ob- lípidos, la vaina de mielina es ideal para prevenir el paso de iones
sérvese FIGURA 4-54). Como resultado, los iones positivos se a través de la membrana plasmática. Además, casi todos los cana-
+
mueven hacia el área de despolarización en la superficie externa les iónicos de Na de una neurona mielinizada residen en los es-
de la membrana, y lejos de ese sitio en la superficie interna (véa- pacios no envueltos, o nodos de Ranvier, entre las células de
se figura 4-54). Este flujo local de corriente hace que la membra- Schwann adyacentes u oligodendrocitos que forman la cubierta
na se despolarice justo en la región por delante del potencial de (véase figura 4-51). En consecuencia, los nodos de Ranvier son los
acción. Debido a que la despolarización que acompaña al poten- únicos sitios donde se pueden generar potenciales de acción. Un
cial de acción es muy grande, la membrana en la región adyacen- potencial de acción en un nodo desencadena un potencial de ac-
te se despolariza fácilmente en un nivel mayor que el valor um- ción en el siguiente nodo (consúltese FIGURA 4-55), lo cual pro-
bral, lo que abre los canales de sodio en esta región adyacente y voca que el impulso salte de un nodo a otro sin tener que activar
genera otro potencial de acción. De aquí que una vez que se ac- la membrana intermedia. La propagación de un impulso por este
tiva, una sucesión de potenciales de acción pasa a lo largo de mecanismo se llama conducción saltatoria. Los impulsos se
toda la neurona sin ninguna pérdida de intensidad, para llegar a conducen a lo largo de un axón mielinizado a velocidades de has-
su célula objetivo con la misma fortaleza que tenía en su punto ta 120 metros por segundo, más de 20 veces mayor que la veloci-
de origen. dad en que viajan los impulsos en una neurona no mielinizada
Puesto que todos los impulsos que viajan a lo largo de una del mismo diámetro.
neurona exhiben la misma fortaleza, los estímulos más fuertes no La esclerosis múltiple (ES, multiple sclerosis), una enfermedad
pueden producir impulsos “más grandes” que los estímulos más asociada con el deterioro de la vaina de mielina que rodea a los
débiles. Sin embargo, somos claramente capaces de detectar dife- axones en varias partes del sistema nervioso ilustra de manera
rencias en la fortaleza de un estímulo. La habilidad de hacer dis- impresionante la importancia de la mielinización. Las manifesta-
criminaciones sensoriales depende de varios factores. Por ejem- ciones de la enfermedad por lo general comienzan en la edad
plo, un estímulo fuerte —como el agua hirviendo— activa más adulta; los pacientes experimentan debilidad en sus manos, difi-
células nerviosas que un estímulo débil como el agua tibia. cultad para caminar y problemas con su visión.
También activa las neuronas de “alto umbral” que permanecerían
en reposo si el estímulo fuera más débil. La fortaleza del estímulo
también está codificada en el patrón y la frecuencia mediante los
que los potenciales de acción se lanzan hacia una neurona en
REPASO
particular. En la mayoría de los casos, cuanto más fuerte es el
estímulo, mayor es el número de impulsos generados. 1. ¿Cómo se propaga un potencial de acción a lo largo de un
Cuanto mayor es el diámetro de un axón, menor es la resis- axón? ¿Qué es la conducción saltatoria, y cómo ocurre tal pro-
tencia al flujo local de corriente, y más rápidamente un potencial ceso?
2. ¿Cuál es el papel de la vaina de mielina en la conducción de
de acción en un sitio puede activar las regiones adyacentes de la
un impulso?
membrana. Algunos invertebrados, como el calamar y las lombri-
ces tubulares, han desarrollado axones gigantes que facilitan que
el animal escape del peligro. Sin embargo, hay un límite en este
enfoque evolutivo. Como la velocidad de conducción aumenta
con la raíz cuadrada del aumento del diámetro, un axón de 480
μm de diámetro puede conducir un potencial de acción solo cua- 4.18 Neurotransmisión: el salto
tro veces más rápido que uno de 30 μm de diámetro. de la hendidura sináptica
Durante la evolución de los vertebrados, se logró un aumento
en la velocidad de conducción cuando el axón se cubrió con una Las neuronas se vinculan con sus células objetivo en las uniones
envoltura de mielina (véanse figuras 4-5 y 4-51). Debido a que especializadas llamadas sinapsis. El examen cuidadoso de una
está compuesta por muchas capas de membranas que contienen sinapsis revela que las dos células no hacen contacto directo, sino
que están separadas entre sí por un espacio angosto de aproxima- para los transmisores químicos que actúan sobre las células post- 163
damente 20 a 50 nm. Este espacio se llama hendidura sináptica. sinápticas. Dos de los neurotransmisores mejor estudiados son
Una célula presináptica (una célula receptora o una neurona) la acetilcolina y la noradrenalina que transmiten impulsos a los
conduce impulsos hacia una sinapsis, y una célula postsinápti- músculos esqueléticos y cardiacos del cuerpo.

4.18 ӝ Neurotransmisión: el salto de la hendidura sináptica

ca (una neurona, músculo o glándula) se encuentra siempre en el
lado receptor de una sinapsis. La FIGURA 4-56 muestra una serie O
de sinapsis entre las ramas terminales de un axón y una célula del +
músculo esquelético; las sinapsis de este tipo se llaman uniones CH3 C O CH2 CH2 N(CH3)3
neuromusculares.
Acetilcolina (ACh)
¿Cómo un impulso en una neurona presináptica salta a través
de la hendidura sináptica y afecta la célula postsináptica? Estudios
realizados hace décadas indicaron que una sustancia química está OH H
involucrada en la transmisión de un impulso de una célula a otra +
(página 148). En el microscopio electrónico, las mismas puntas HO C CH2 NH3
(botones terminales) de las ramas de un axón parecen contener
OH
grandes cantidades de vesículas sinápticas (véase figura 4-56,
recuadro izquierdo), que sirven como sitios de almacenamiento Noradrenalina

Membrana de célula objetivo postsináptica

Vesículas sinápticas

Hendidura sináptica

Botón terminal de la neurona presináptica

Axón de la célula nerviosa

Fibra muscular

FIGURA 4-56 La unión neuromuscular es el sitio donde las ramas de un axón motor forma sinapsis con las fibras musculares de un músculo esquelé-
tico. El recuadro izquierdo muestra las vesículas sinápticas que residen dentro del botón terminal del axón, y la estrecha hendidura sináptica entre el bo-
tón terminal y la célula objetivo postsináptica. El recuadro derecho muestra el botón terminal presionado estrechamente contra la membrana plasmática
de la célula muscular. Las moléculas de los neurotransmisores (rojo) liberadas por las vesículas sinápticas de la neurona presináptica se unen a los recep-
tores (amarillo) en la superficie de la célula muscular (azul).
 164
1 Impulso nervioso
Vesícula sináptica
Acetilcolina
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

Membrana
presináptica

2
3 4 5a 5b 6
Hendidura
sináptica Compuertas Ca2+ 0 0
Ca2+ Liberación

mV

mV
Enlace de AcCh Impulso nervioso
abiertas de AcCh por el receptor –70 or –70

Compuertas Na+ Compuertas Cl --

abiertas abiertas
Membrana
postsináptica

FIGURA 4-57 Secuencia de eventos durante la transmisión sináptica con la acetilcolina como neurotransmisor. Durante los pasos 1-4 un impulso ner-
2+
vioso alcanza el botón terminal del axón, las compuertas de calcio se abren lo que conduce a una afluencia de Ca , y la acetilcolina se libera de las vesí-
culas sinápticas y se une a los receptores en la membrana postsináptica. Si la unión de las moléculas del neurotransmisor causa una despolarización de
la membrana postsináptica (como en 5a), allí se puede generar un impulso nervioso (6). Sin embargo, si la unión del neurotransmisor causa una hiperpo-
larización de la membrana postsináptica (5b) la célula objetivo se inhibe, lo cual hace más difícil que se genere un impulso en la célula objetivo mediante
otra estimulación excitatoria. La descomposición del neurotransmisor por la acetilcolinesterasa no se muestra.

La secuencia de eventos durante la transmisión sináptica se lo primordial a un influjo de iones de sodio y a un potencial
puede resumir de la siguiente manera (véase FIGURA 4-57). de membrana menos negativo (más positivo). Esta despolari-
Cuando un impulso llega a un botón terminal (paso 1, consúltese zación de la membrana postsináptica excita la célula y hace
FIGURA 4-57), la despolarización acompañante induce la apertura que tenga más probabilidades de responder a este estímulo, o
2+
de varios canales de Ca dependientes de voltaje en la membrana a estímulos posteriores, al generar un potencial de acción pro-
plasmática de esta parte de la célula nerviosa presináptica (paso 2, pio (obsérvese figura 4-57, pasos 5a y 6).
véase figura 4-57). Los iones de calcio por lo general están presen- 2. El transmisor enlazado puede desencadenar la apertura de
tes a muy baja concentración dentro de la neurona, como en todas canales selectivos de aniones, lo que conduce principalmente
las células (alrededor de 100 nM). Cuando las compuertas se a un influjo de iones cloruro y a un potencial de membrana
abren, los iones de calcio se difunden desde el fluido extracelular más negativo (hiperpolarizado). La hiperpolarización de la
2+
al botón terminal de la neurona, lo que provoca que la [Ca ] se membrana postsináptica hace que sea menos probable que
eleve más de mil veces en los microdominios localizados cerca de la célula genere un potencial de acción, porque posteriormen-
2+
los canales. La [Ca ] elevada desencadena la fusión rápida de una te se requiere una mayor entrada de sodio para alcanzar el
—o unas pocas— vesículas sinápticas cercanas con la membrana umbral de la membrana (véase figura 4-57, paso 5b).
plasmática y conlleva a la liberación de moléculas de neurotrans-
misores en la hendidura sináptica (paso 3, véase figura 4-57). La mayoría de las células nerviosas en el cerebro reciben señales
Una vez liberadas de las vesículas sinápticas, las moléculas de tanto excitadoras como inhibidoras de muchas neuronas presi-
neurotransmisores se difunden a través del espacio angosto, y se nápticas diferentes. Es la suma de estas influencias opuestas lo
unen selectivamente a moléculas receptoras que se concentran que determina si se generará o no un impulso en la neurona post-
directamente, a través de la hendidura, en la membrana plasmá- sináptica.
tica postsináptica (paso 4, obsérvese figura 4-57). Una molécula Todos los botones terminales de una determinada neurona
de neurotransmisor puede tener uno de dos efectos opuestos, en liberan los mismos transmisores neurológicos. Sin embargo, un
dependencia del tipo de receptor en la membrana celular objetivo neurotransmisor dado puede tener un efecto estimulador sobre
8
a la que se une: una membrana postsináptica particular y un efecto inhibidor
sobre otra. Por ejemplo, la acetilcolina inhibe la contractilidad
1. El transmisor unido puede desencadenar la apertura de cana- del corazón, pero estimula la del músculo esquelético. Dentro del
les selectivos de cationes en la membrana, lo que conduce en cerebro el glutamato sirve como neurotransmisor excitador pri-
mario, y el ácido gamma aminobutírico (GABA, gamma-aminobu-
8 tyric acid) como el neurotransmisor inhibitorio primario. Varios
Nótese que esta discusión ignora una clase importante de receptores neu-
anestésicos generales, así como el Valium y sus derivados, actúan
rotransmisores que no son canales iónicos, y por tanto no afectan directa-
mente el voltaje de la membrana. Este otro grupo de receptores son miem- uniéndose al receptor GABA y potenciando la actividad del inte-
bros de una clase de proteínas llamadas GPCR, que se discuten en detalle rruptor primario “apagado” del cerebro. Como se verá en la si-
en la sección 15.3. Cuando un neurotransmisor se une a uno de estos recep- guiente sección, muchos fármacos diferentes que afectan trastor-
tores puede iniciar una variedad de respuestas, que a menudo incluyen la nos como la ansiedad, la depresión, el insomnio y la esquizofrenia,
apertura de canales iónicos mediante un mecanismo indirecto. ejercen su acción en la sinapsis.
Acción de fármacos en las sinapsis áreas del cerebro, incluyendo el hipocampo, cerebelo, e hipotála- 165
mo, lo que explica los efectos de la marihuana en la memoria, la
Es importante que un neurotransmisor tenga solo una semivida coordinación motora y el apetito, respectivamente. Si la marihua-
después de su liberación de una neurona presináptica; de lo na aumenta el apetito uniéndose a los receptores CB1, se deduce

4.18 ӝ Neurotransmisión: el salto de la hendidura sináptica

contrario, el efecto del neurotransmisor se extendería y la neu- que el bloqueo de estos receptores podría disminuir el apetito.
rona postsináptica no se recuperaría. Un neurotransmisor se Esta línea de razonamiento llevó al desarrollo de un fármaco de
elimina de la sinapsis de dos maneras: por enzimas que destru- pérdida de peso CB1-bloqueador llamado Acomplia, que se ha
yen moléculas neurotransmisoras en la hendidura sináptica, y retirado del mercado debido a sus efectos secundarios.
por proteínas que transportan moléculas neurotransmisoras a
las terminales presinápticas, un proceso llamado recaptación. Plasticidad sináptica
Debido a la destrucción o recaptación de las moléculas neuro-
transmisoras, el efecto de cada impulso no dura más de unos Las sinapsis son más que simples sitios de conexión entre las
pocos milisegundos. neuronas adyacentes; son un determinante clave en el enruta-
Interferir con la destrucción o recaptación de neurotransmi- miento de los impulsos a través del sistema nervioso. Se cree que
sores puede tener fatales efectos fisiológicos y de comportamien- el cerebro humano contiene al menos cien mil millones de sinap-
to. La acetilcolinesterasa es una enzima localizada dentro de la sis. Estas sinapsis actúan como compuertas estacionadas a lo lar-
hendidura sináptica que hidroliza la acetilcolina. Comenzamos go de varias vías, que permiten que algunas partes de la informa-
este capítulo describiendo los terribles efectos del gas nervioso ción pasen de una neurona a otra, a la vez que retienen otras
sarín, que funciona al inhibir la acetilcolinesterasa. Cuando esta partes o las redirigen en otra dirección. Mientras que a menudo
enzima se inhibe por la exposición al sarín, la posterior acumu- las sinapsis se perciben como estructuras fijas e invariables, pue-
lación de acetilcolina en las uniones neuromusculares en todo el den mostrar una notable cualidad dinámica conocida como “plas-
cuerpo provoca una sobreestimulación de las fibras musculares ticidad sináptica”. La plasticidad sináptica es particularmente
postsinápticas adyacentes. Como resultado los músculos es- importante durante la infancia y la niñez, cuando el circuito neu-
queléticos del cuerpo, incluidos los necesarios para respirar, su- ronal del cerebro alcanza su configuración madura.
fren una contracción violenta seguida de debilidad muscular y La plasticidad sináptica se observa con más facilidad en estu-
parálisis. Los inhibidores más leves de la acetilcolinesterasa se dios sobre las neuronas del hipocampo, una parte del cerebro
usan para tratar los síntomas de la enfermedad de Alzheimer, que es de vital importancia en el aprendizaje y la memoria a
que se caracteriza por la pérdida de neuronas liberadoras de ace- corto plazo. Cuando las neuronas del hipocampo se estimulan
tilcolina. repetidamente durante un corto periodo, las sinapsis que conec-
Muchos fármacos actúan inhibiendo los transportadores que tan estas neuronas con sus vecinos se “fortalecen” mediante un
despejan los transmisores neuronales de la hendidura sináptica. proceso conocido como potenciación a largo plazo (LTP, long-
Una serie de antidepresivos muy recetados como Prozac y Zoloft term potentiation) que puede durar días, semanas o incluso más.
inhiben la recaptación de serotonina, un neurotransmisor impli- Las investigaciones sobre la LTP se han centrado en el receptor
cado en los trastornos del estado de ánimo. Por otra parte, la co- N-metil-D-aspartato (NMDA, N-methyl-D-aspartate), que es uno
caína interfiere con la reabsorción del neurotransmisor dopami- de varios tipos de receptores que se unen al neurotransmisor
na, liberado por ciertas células nerviosas en una porción del excitatorio glutamato. Cuando el glutamato se une a un receptor
cerebro conocida como sistema límbico. El sistema límbico con- NMDA postsináptico, abre un canal de catión interno dentro del
2+
tiene los centros de “placer” o “recompensa” del cerebro. La pre- receptor que permite la entrada de iones Ca en la neurona
sencia sostenida de dopamina en las hendiduras sinápticas del postsináptica, y desencadena una cascada de cambios bioquími-
sistema límbico produce una sensación efímera de euforia, así cos que conducen al fortalecimiento sináptico. Las sinapsis que
como un fuerte deseo de repetir la actividad. Los ratones que han se han sometido a la LTP pueden transmitir estímulos más débi-
sido modificados genéticamente para carecer del transportador les, y provocar respuestas más fuertes en las células postsinápti-
de dopamina (DAT, dopamine transporter) —proteína responsa- cas. Se cree que estos cambios realizan un papel importante a
ble de la recaptación de dopamina— muestran un comportamien- medida que la información o los recuerdos recién aprendidos se
to similar al de los ratones normales que recibieron cocaína o codifican en los circuitos neuronales del cerebro. Cuando los
anfetaminas. La administración de cocaína o anfetaminas no tie- animales de laboratorio son tratados con medicamentos que in-
ne efectos conductuales adicionales en los animales que carecen hiben la LTP —como aquellos que interfieren con la actividad del
del gen DAT. Otros numerosos medicamentos actúan sobre las receptor NMDA— su capacidad para aprender nueva informa-
neuronas presinápticas que liberan dopamina, o las postsinápti- ción se reduce enormemente.
cas que responden a la dopamina. Se cree que las anfetaminas Existen muchas otras razones por las cuales el estudio de la
estimulan la liberación excesiva de dopamina desde las termina- sinapsis es tan importante. Por ejemplo, se cree que varias enfer-
les presinápticas, y también interfieren con la recaptación de las medades del sistema nervioso, incluyendo la miastenia gravis, la
moléculas neurotransmisoras en la hendidura sináptica. Varios enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia e incluso la depre-
fármacos antipsicóticos se enlazan a ciertos subtipos del receptor sión, tienen sus raíces en la disfunción sináptica.
de dopamina en las neuronas postsinápticas, y bloquean su esti-
mulación por la dopamina.
9
El compuesto activo en la marihuana (Δ -tetrahidrocannabinol)
actúa mediante un mecanismo totalmente diferente. Se une a los
receptores cannabinoides (CB1, cannabinoid) ubicados en las ter-
minales presinápticas de ciertas neuronas del cerebro, lo que redu-
ce la probabilidad de que estas neuronas liberen neurotransmiso- REPASO
res. Los receptores CB1 interactúan normalmente con compuestos 1. Describa los pasos entre el momento en que un impulso al-
producidos en el cuerpo llamados endocannabinoides. Los endo- canza el botón terminal de una neurona presináptica y se ini-
cannabinoides son producidos por las neuronas postsinápticas cia un potencial de acción en una célula postsináptica.
después de la despolarización. Estas sustancias se difunden “en 2. Contraste los roles de las bombas y canales de iones en el
reversa” a través de la hendidura sináptica hacia la membrana establecimiento y uso de gradientes de iones, en particular
presináptica donde se unen a los receptores CB1, suprimiendo la cuando se aplica a las células nerviosas.
transmisión sináptica. Los receptores CB1 se localizan en muchas
 166
Preguntas analíticas
1. ¿Qué tipos de proteínas integrales se espera que residieran en iones marcados esperaría usted que aparezca más rápida-
CAPÍTULO 4 ӝ Estructura y función de la membrana plasmática

la membrana plasmática de una célula epitelial y que podrían mente dentro de un medio de agua de mar mientras la neurona
estar ausentes en la de un eritrocito? ¿Cómo se relacionan permanece en reposo? ¿Después de que la neurona fuera esti-
estas diferencias con las actividades de estas células? mulada para llevar a cabo una serie de potenciales de acción?
2 Muchos tipos diferentes de células poseen receptores que 12. Ha sido difícil aislar proteínas que contienen canales de agua
unen hormonas esteroides, que son moléculas solubles en lípi- (es decir, acuaporinas) debido a la alta velocidad de difusión de
dos. ¿En qué parte de la célula cree usted que pueden residir agua a través de la bicapa lipídica. ¿Por qué esto dificultaría el
esos receptores? ¿En qué parte de la célula esperaría que resi- aislamiento de la acuaporina? ¿Hay alguna manera en que se
diera el receptor de insulina? ¿Por qué? pueda distinguir la difusión de agua a través de la bicapa lipí-
3. En la página 140 se calculó que cuando un soluto está 10 veces dica versus la que se produce a través de las acuaporinas? El
más concentrado fuera de una célula que dentro, la energía mejor enfoque para estudiar el comportamiento de la acuapo-
libre para mover el soluto a la célula es –1.4 kcal/mol. ¿Cuál rina ha sido expresar los genes de acuaporina en los ovocitos
sería el cambio de energía libre para mover el soluto a la célula de rana. ¿Hay alguna razón por la que los ovocitos de un anfi-
si la concentración externa (fuera de la célula) fuera mil veces bio que habita en un estanque sean particularmente adecua-
más concentrada que la concentración interna (dentro de la dos para tales estudios?
célula)? ¿Cuántas veces mayor debería ser la concentración 13. ¿Cómo es que los coeficientes de difusión medidos para los
externa en comparación con la interna para que la energía libre lípidos dentro de las membranas tienden a ser más cercanos a
necesaria para mover el soluto sea de –2.8 kcal/mol? Si en los esperados para la difusión libre que los medidos para las
cambio la energía libre para mover el soluto a la célula fuera proteínas integrales en las mismas membranas?
+2.8 kcal/mol, ¿qué le diría a usted sobre la concentración 14. Suponga que la membrana plasmática de una célula es repen-
+
externa en relación con la concentración interna? (Véase video tinamente permeable en el mismo grado tanto al Na como a
+
tutorial cuantitativo). K , y que ambos iones están presentes en un gradiente de con-
4. Suponga que estaba planeando usar liposomas en un intento centración de la misma magnitud. ¿Esperaría que estos dos
de administrar medicamentos a un tipo particular de célula en iones se muevan a través de la membrana a la misma veloci-
el cuerpo, por ejemplo, una célula adiposa o muscular. ¿Hay dad? ¿Por qué sí, o por qué no?
alguna manera de que se pueda construir el liposoma para 15. La mayoría de los invertebrados marinos no muestran pérdida
aumentar la especificidad de su objetivo? o ganancia de agua por ósmosis, mientras que la mayoría de
5. ¿Cómo es que, a diferencia de los polisacáridos como el almi- los vertebrados marinos experimentan una pérdida continua
dón y el glucógeno, los oligosacáridos en la superficie de la de agua en su entorno de alta salinidad. Especule sobre la
membrana plasmática pueden estar implicados en interaccio- base de esta diferencia y cómo podría reflejar las diferentes
nes específicas? ¿Cómo se ilustra esta característica al deter- vías de evolución de los dos grupos.
minar el tipo de sangre de una persona antes de recibir una 16. ¿Cómo se podría esperar que las concentraciones de soluto
transfusión? dentro de una célula vegetal se comparasen con las de sus
6. La tripsina es una enzima que puede digerir las porciones fluidos extracelulares? ¿Esperaría lo mismo de las células de un
hidrofílicas de las proteínas de membrana, pero no puede animal?
penetrar en la bicapa lipídica y entrar en una célula. Debido a 17. ¿Cuál sería la consecuencia para la conducción de impulsos si
+
estas propiedades, la tripsina se ha usado junto con la SDS- los canales de Na fueran capaces de reabrir inmediatamente
PAGE para determinar qué proteínas tienen un dominio extra- después de haberse cerrado durante un potencial de acción?
celular. Describa un experimento que usa tripsina para 18. ¿Cuál sería el valor del potencial de equilibrio del potasio si la
+
determinar la lateralidad de las proteínas de la membrana de concentración externa de K es de 200 mM y la concentración
los eritrocitos. interna de 10 mM a 25 ºC? ¿A 37 ºC?
+
7. Observe la micrografía electrónica de barrido de eritrocitos en 19. Como se discutió en la página 155, el cotransportador Na /glu-
+
la figura 4-32a). Estas células, que son aplanadas y tienen cosa transporta dos iones Na para cada molécula de glucosa.
depresiones circulares en cada lado, se dice que tienen una Si esta relación fuera de 1:1 en lugar de 2:1, ¿cómo afectaría esto
forma bicóncava. ¿Cuál es la ventaja fisiológica de un eritrocito la concentración de glucosa a la que el transportador podría
bicóncavo sobre una célula esférica con respecto a la absor- trabajar en contra?
ción de O2? 20. Una proteína transmembrana por lo general tiene las siguien-
8. Suponga que está cultivando una población de bacterias a tes características: 1) la porción que transita la bicapa de mem-
15 ºC y luego eleva la temperatura del cultivo a 37 ºC. ¿Qué brana tiene al menos 20 aminoácidos de longitud, que son en
efecto cree usted que esto podría tener en la composición de gran parte o exclusivamente residuos no polares; 2) la porción
ácidos grasos de membrana? ¿En la temperatura de transición que ancla la proteína en la cara externa tiene dos o más resi-
de la bicapa lipídica? ¿En la actividad de las desaturasas de duos ácidos consecutivos, y 3) la porción que ancla la proteí-
membrana? na en la cara citoplásmica tiene dos o más residuos básicos
9. Observe la figura 4-6. ¿Qué lípidos se esperaría que tengan la consecutivos. Considere la proteína transmembrana con la si-
mayor velocidad de voltereta? ¿Cuáles la mínima? ¿Por qué? Si guiente secuencia:
determinó experimentalmente que la fosfatidilcolina realmente
muestra la mayor velocidad de voltereta, ¿cómo podría explicar NH2-MLSTGVKRKGAVLLILLFPWMVAGGPLFWLAADESTYKGS-
este hallazgo? ¿Cómo se puede esperar que la velocidad de COOH
voltereta de los fosfolípidos se compare con la de una proteína
integral? ¿Por qué? Dibuje esta proteína tal como residiría en la membrana plasmá-
10. ¿Cuál es la diferencia entre la representación bidimensional y tica. Asegúrese de etiquetar los extremos N y C y las caras
la tridimensional de una proteína de membrana? ¿Cómo se externas y citoplásmicas de la membrana. (El código de una
obtienen los diferentes tipos de perfiles y cuál es más útil? ¿Por sola letra para aminoácidos se da en la figura 2-26).
qué cree usted que hay tantas proteínas más cuya estructura 21. Muchos invertebrados marinos, como el calamar, tienen fluidos
bidimensional se conoce? extracelulares que se asemejan al agua de mar, y por tanto
11. Si se inyectara un axón gigante de calamar con un pequeño poseen concentraciones de iones intracelulares mucho más
volumen de solución que contiene NaCl 0.1 M y KCl 0.1 M donde altas que los mamíferos. En una neurona de calamar, las con-
+ +
los iones Na y K se marcaron con radiactividad, ¿cuál de los centraciones iónicas son aproximadamente
 canales que son igualmente permeables a los iones de sodio 167
Concentración
Ion intracelular Concentración extracelular
y potasio. Bajo estas condiciones,
+
K 350 mM 10 mM Vm = (Vk+ + VNa+)/2
+

Preguntas analíticas
Na 40 mM 440 mM
Cl− 100 mM 560 mM + +
Si [K dentro] = 140 mM y [Na dentro] = 10 mM para la célula muscu-
Ca2+ 2 3 10−4 mM 10 mM + +
lar, y [Na fuera] = 150 mM y [K fuera] = 5 mM, ¿cuál es el potencial
pH 7.6 8.0 membrana de la unión neuromuscular de un músculo estimu-
lado con acetilcolina?
23. Los dominios transmembrana consisten en hélices α individua-
Si el potencial de reposo de la membrana plasmática Vm es les o láminas β en forma de barril. Al observar las figuras 2-30
–70 mV, ¿alguno de los iones está en equilibrio? ¿Qué tan lejos y 2-31, ¿por qué una sola hélice α es más adecuada para abar-
de estar en equilibrio en mV está cada ion? ¿Cuál es la direc- car la bicapa que un solo filamento β?
ción del movimiento neto de cada ion a través de un canal 24. Conociendo cómo selecciona el canal K+ los iones de K+,
+
abierto permeable a ese ion? sugiera un mecanismo por el cual el canal de Na puede selec-
22. El potencial de membrana Vm de una célula está determinado cionar su ion.
por la permeabilidad relativa de la membrana a varios iones. 25. ¿Cómo compararía la velocidad de movimiento de los iones a
Cuando la acetilcolina se enlaza a sus receptores en la mem- través de un canal con aquellos transportadores activados por
brana muscular postsináptica, provoca una apertura masiva de una bomba tipo P? ¿Por qué?