Diagnóstico por laboratorio de la infección por

Arenavirus del Nuevo Mundo

Junio 07 de 2024

Introducción

Los arenavirus pertenecen a dos géneros de la familia Arenaviridae: el género Mammarenavirus

(arenavirus que infectan a mamíferos) y el género Reptarenavirus (arenavirus que infectan a reptiles)1.
Los arenavirus poseen un genoma ARN monocatenario negativo (grupo V de la clasificación de
Baltimore). El género Mammarenavirus está dividido en dos grupos que difieren genéticamente y por su
distribución geográfica: los arenavirus del Viejo Mundo y del Nuevo Mundo. Al menos 8 de estos
arenavirus son capaces de causar fiebres hemorrágicas en humanos, y de estos, 5 pertenecen al clado B
de los arenavirus del Nuevo Mundo y son de relevancia para la Región de las Américas (Cuadro 1). Estos
virus tienen como reservorio a roedores y su modo principal de transmisión a humanos es a través de
las secreciones de los mismos. Además, se han reportado casos de transmisión entre humanos del virus
Machupo2, 3 y de una cepa nueva del virus Chapare identificada recientemente en Bolivia4. Los
reservorios de los virus Chapare y Sabiá se desconocen aún.

Cuadro 1. Arenavirus del Nuevo Mundo causantes de fiebres hemorrágicas.

Virus Enfermedad Reservorio Distribución
geográfica
Chapare (CHPV) Fiebre hemorrágica Chapare ratón arrocero pigmeo de Bolivia
orejas pequeñas (Oligoryzomys
microtis) (Putativo)
Guanarito (GTOV) Fiebre hemorrágica venezolana ratón de la caña de azúcar Venezuela
(Zygodontomys brevicauda)
Junín (JUNV) Fiebre hemorrágica argentina ratón maicero (Calomys Argentina
musculinus)
Machupo (MACV) Fiebre hemorrágica boliviana laucha campestre (Calomys Bolivia
callosus)
Sabiá (SABV) Fiebre hemorrágica brasileña desconocido Brasil

1. Consideraciones de bioseguridad

Toda muestra biológica (sangre total, suero, coágulo, semen, hisopado/aspirado respiratorio o tejido
fresco) debe considerase como potencialmente infecciosa. La infección por arenavirus puede ocurrir por
exposición a aerosoles provenientes de las muestras, por lo que se deben tomar medidas adicionales
para proteger las vías respiratorias (incluyendo el uso de mascarillas N95) y disminuyendo al máximo
los procedimientos que generen aerosoles. Asimismo, se recomienda realizar cualquier procedimiento
dentro de cabinas de bioseguridad clase II certificadas, extremando las medidas para evitar accidentes

Arenavirus del Nuevo Mundo: diagnóstico por laboratorio 1

por punción o derrame. Además, se debe considerar realizar la inactivación de las muestras (como paso
previo a la extracción de ácidos nucleicos para el diagnóstico molecular o a los métodos serológicos)
bajo condiciones de bioseguridad BSL-3. Las muestras pueden inactivarse térmicamente (60 oC por no
menos de 30 minutos) y/o químicamente (por adición de β-propiolactona, de una mezcla de 0.5% de
Tritón X-100 y 0.5% de Tween-20 o a través de la extracción de ARN)5, 6. Durante la extracción de ARN,
la etapa de lisis (con soluciones que contienen isotiocinato de guanidina) seguida de la adición de etanol
permite la inactivación química de las muestras5, 7. Para manejo de muestras en condiciones de
bioseguridad BSL-2 se recomienda la inactivación térmica, seguida por una inactivación química. Las
muestras también pueden inactivarse por irradiación gama. El intento de aislamiento viral y el cultivo
celular de arenavirus sólo debe ser realizado bajo condiciones de bioseguridad BSL-48. En el caso de
virus Junín, el aislamiento, la producción de antígenos y la neutralización pueden realizarse bajo
condiciones de bioseguridad BSL-3 ya que se cuenta con una vacuna preventiva (Candid#1) y
tratamiento con plasma de convalesciente en el caso de infección.

Todo el personal de laboratorio deberá implementar las técnicas microbiológicas apropiadas de la OMS
así como usar los elementos de protección personal adecuados9. Es importante recordar que se han
descrito varios casos de infección en laboratorio por estos virus, algunos de ellos fatales. Los
laboratorios que no cuenten con las condiciones descritas anteriormente deberán enviar las muestras a
un laboratorio de referencia (ver abajo Toma y envío de muestras).

2. Procedimientos de laboratorio

Como en la mayoría de las enfermedades virales agudas, el diagnóstico por laboratorio de la infección
por arenavirus puede realizarse mediante la detección directa del virus o de sus componentes
(diagnóstico virológico) o mediante la detección de la respuesta inmune generada por la infección
(diagnóstico serológico). Sin embargo, la dinámica de la infección por arenavirus del Nuevo Mundo aún
no se ha establecido completamente (Figura 1), lo cual genera limitaciones en las técnicas y desafíos
adicionales para la interpretación de los resultados.

2.1 Diagnóstico virológico

El diagnóstico en la fase aguda de la enfermedad se realiza mediante métodos virológicos: detección del
material genético (ARN) viral por Transcripción Reversa seguida de Reacción en Cadena de la
Polimerasa (RT-PCR por sus siglas en inglés), PCR en tiempo real, detección de antígenos virales por
Ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) o inmunohistoquímica y/o por aislamiento viral.
Aunque la duración de la viremia no ha sido plenamente establecida, se ha documentado la detección
hasta por 10 días después de iniciados los síntomas, dependiendo del virus y condiciones del paciente.

2.1.1 Diagnóstico molecular

Arenavirus del Nuevo Mundo: diagnóstico por laboratorio 2

El ARN viral de los 5 virus se puede detectar por RT-PCR principalmente en suero, sangre total y tejidos.
Asimismo, el ARN viral puede ser detectado en otros tipos de muestras como el hisopado nasofaríngeo,
pero aún no se ha establecido durante cuánto tiempo se puede realizar la detección. Existen protocolos
de RT-PCR convencional (punto final) para la detección universal de los arenavirus del Nuevo Mundo
del clado B que incluye los 5 virus de interés10-12, con lectura en gel de agarosa, lo cual puede disminuir
la sensibilidad de la detección. En estos casos, la confirmación de la detección y la identificación del virus
se realizan por secuenciación del producto de amplificación de la RT-PCR convencional. En cuanto a
ensayos específicos para cada virus, existe una RT-PCR convencional para JUNV13 y varios ensayos en
tiempo real para GTOV, JUNV, MACV y SABV11, 14-16. Sin embargo, solo se ha publicado un ensayo para
CHPV15 y hay pocos datos sobre el desempeño de los ensayos universales antes mencionados10-12 con
este virus. En general, es importante notar que la mayoría de los ensayos de RT-PCR para arenavirus
han sido validados con pocas muestras de pacientes o solamente con cultivos virales. Para estos ensayos
se recomienda la inactivación térmica de las muestras, seguida por una inactivación química a través de
la extracción del ARN.

2.1.2 Detección de antígenos virales

La detección de antígenos virales en suero se puede realizar por ELISA de captura de antígeno, utilizando
anticuerpos monoclonales dirigidos contra las proteínas de los arenavirus. Se ha descrito un anticuerpo
específico para JUNV así como otros que reconocen los 5 arenavirus de interés17. Para estos ensayos se
recomienda usar muestras inactivadas térmica y químicamente por adición de β-propiolactona o de
Tritón X-100 y Tween-20.
En los casos fatales, también se pueden detectar los antígenos virales por inmunohistoquímica en tejido
(hígado, bazo, riñón, pulmón, nódulos linfáticos)18. Los tejidos fijados en formaldehído (formol) o
glutaraldehído se consideran inactivados5.

Figura 1. Dinámica de la infección por arenavirus y de la respuesta inmune*.

Información crítica: Día de inicio de fiebre / síntomas

IgM IgG
Viremia

Días post inicio de síntomas

0 3 10
Fiebre

RT-PCR
ELISA IgM
ELISA IgG
IgM: hasta 3 – 6 meses
IgG: hasta 3 – 5 años (persistancia de por vida?)

*Adaptado de: Viral Special Pathogens Branch, CDC, Atlanta, 2019

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2.1.3 Aislamiento viral

Generalmente, los arenavirus pueden aislarse por cultivo en células Vero o BHK21, o por inoculación
intracerebral en ratones o hámsteres6. El aislamiento y cultivo de estos virus solo se puede realizar en
laboratorios con nivel de bioseguridad BSL-4 con la excepción del virus Junín (ver arriba). Además, la
cepa vacunal de JUNV Candid #119, que puede ser manejada en nivel de bioseguridad BSL-28. Por lo tanto,
el aislamiento viral como método diagnóstico constituye una opción limitada en la gran mayoría de los
países de la Región.

2.2 Diagnóstico serológico

Varios ensayos serológicos pueden usarse para el diagnóstico de las fiebres hemorrágicas causadas por
los arenavirus del Nuevo Mundo. Estos ensayos son útiles en muestras agudas (días 1 a 5 después del
inicio de síntomas) pareadas con muestras convalecientes (más de una o dos semanas después del inicio
de síntomas). Una seroconversión o un aumento de títulos de más de 4 veces entre muestra aguda y
convaleciente confirma la infección por arenavirus6. En muestras convalecientes no pareadas, la
presencia de anticuerpos tipo IgM es presuntiva de infección reciente. Los ensayos serológicos tienen
como limitante la reactividad cruzada entre los anticuerpos que se generan ante una infección 6. En
efecto, los 5 arenavirus de interés pertenecen al mismo serogrupo, por lo que la presencia en las
muestras de pacientes de anticuerpos capaces de detectar uno de ellos no implica necesariamente una
infección con este virus, sino que puede resultar de una infección con otros virus del serogrupo. Los
ensayos de neutralización presentan una mayor especificidad20. En la actualidad, los ensayos serológicos
para estos arenavirus son caseros y no existen estuches comerciales.

2.2.1 Inmunofluorescencia indirecta

La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es uno de los ensayos serológicos utilizados para el diagnóstico
de infecciones por arenavirus21. En este ensayo, los anticuerpos presentes en las muestras reconocen
antígenos virales presentes en células infectadas, inactivadas y fijadas sobre las láminas de IFI y a su vez
se detectan con anticuerpos específicos. Para estos ensayos serológicos se recomienda usar muestras
inactivadas térmica y químicamente por adición de β-propiolactona o de Triton X-100 y Tween-20.

2.2.2 ELISAs IgM e IgG

Los anticuerpos de tipo IgM o IgG presentes en las muestras se pueden detectar a través de la técnica de
ELISA, utilizando antígenos virales6. Tradicionalmente, se desarrollaron ensayos con cultivos virales
inactivados22 para los que se necesitaba cultivar grandes cantidades de virus en nivel de bioseguridad
BSL-4. Sin embargo, en la actualidad existen ensayos que utilizan proteínas recombinantes lo que facilita
su uso, como por ejemplo un ELISA IgG par JUNV23. Para estos ensayos serológicos se recomienda usar
muestras inactivadas térmica y químicamente.

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2.2.2 Ensayos de neutralización

En los ensayos de neutralización, los anticuerpos presentes en las muestras inhiben la infección de
cultivos celulares con cepas virales. Estos ensayos tienen como ventaja una mayor especificidad que las
demás técnicas serológicas6. Sin embargo, los arenavirus en cultivo no causan (o causan poco) efecto
citopático, por lo que para detectar el virus se necesita realizar tinción por rojo neutro o
inmunofluorescencia. Además, estas técnicas tienen que realizarse en nivel de bioseguridad BSL-48 con
la excepción del virus Junín (ver arriba) y de ensayos que usan pseudovirus de tipo VSV (virus de la
estomatitis vesicular) con proteínas recombinantes de arenavirus21.

2.3 Aplicación de las técnicas diagnósticas en el contexto de la Región

En resumen, para los laboratorios de salud pública de la Región que no tienen estandarizado los
protocolos serológicos y que no poseen áreas de nivel de bioseguridad 4, los ensayos de RT-PCR y RT-
PCR en tiempo real en suero y tejidos podrían constituir la opción diagnóstica más viable.

3. Toma y envío de muestras

Para la toma de muestras hemáticas se deberán seguir las recomendaciones publicadas por la OPS24.
Para pacientes fallecidos, se recomienda la obtención de sangre por punción cardiaca. Asimismo, las
muestras de tejido (hígado, bazo, riñón, pulmón, tracto respiratorio, nódulos linfáticos), frescas o
conservadas en formol (siempre en recipientes de tapa rosca, preferiblemente plásticos), resultan útiles
para la detección molecular y para análisis histopatológicos, siempre y cuando se cuente con las
condiciones adecuadas para realizar la autopsia, en particular la protección respiratoria. Las muestras
tomadas deberán enviarse de inmediato (refrigeradas en caso de suero, coágulo o sangre entera y
congeladas en el caso de tejido fresco) al laboratorio de referencia regional o nacional designado para
estas enfermedades. Dependiendo de su capacidad, el laboratorio podrá realizar las pruebas
diagnósticas indicadas y/o enviar las muestras a un laboratorio de referencia fuera del país. Las
muestras deberán enviarse con triple empaque y siguiendo las recomendaciones de la OPS y la OMS para
muestras de Categoría A25, 26. En la región de las Américas, existen dos Centros colaboradores de la OMS
para fiebres hemorrágicas por arenavirus: la Rama de Patógenos Virales Especiales (Viral Special
Pathogens Branch) de los CDC de los Estados Unidos y el Instituto Nacional de Enfermedades Virales
Humanas "Dr. Julio I. Maiztegui" (INEVH) en Argentina, que pueden ser contactados a través de la
OPS/OMS.

Arenavirus del Nuevo Mundo: diagnóstico por laboratorio 5

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