Curso de Enfermedades Parasitarias - Plan

2021

TÉCNICAS
DIAGNOSTICAS

Dra. Ernestina Olhagaray

Asistente G2
Unidad Parasitologia Veterinaria
DIAGNÓSTICAR:

Colectar y analizar datos para poder

evaluar un problema y a través de métodos
o sistemas llegar a descubrir la causa
Objetivos
¿PARA QUÉ QUEREMOS DIAGNOSTICAR?

• Para poder tratar

• Para controlar/monitorear
TIPOS DE DIAGNÓSTICO

• Epidemiológico
• Clínico
• Anatomopatológico
• Terapéutico
• Etiológico
Diagnóstico Etiológico

• Directo
• Indirecto
• Molecular
Diagnóstico Etiológico Directo:
Veo e identifico directamente al agente en alguno de sus estadios
Diagnóstico Etiológico Indirecto
Veo la reacción/respuesta inmune del hospedador al agente
Diagnóstico Etiológico Molecular
Amplifico o estudio moléculas específicas de los agentes
Para intentar llegar a un diagnóstico
etiológico contamos con la ayuda de
diferentes Técnicas Diagnósticas
¿Qué tenemos que saber de las
Técnicas Diagnósticas?
Las Técnicas Diagnósticas...

no hacen mágia
no piensan por nostoros
no lo son todo, SON UNA HERRAMIENTA MÁS

Necesitan de nosotros para que:

Le demos una buena muestra: En calidad, cantidad, remitida en buenas condiciones

Sepamos cual y cómo solicitarla

Sepamos COMO INTERPRETARLA cuando tengamos sus resultados

¿Qué técnica uso?
DEPENDE
 ¿De qué depende?

¿Qué estoy buscando? (Diagnóstico presuntivo)

¿Con qué especie animal estoy trabajando? (Hospedador)

¿Qué especies parasitarias aloja? (Agente)

¿En qué organos habitan? (Localización orgánica)

¿Dónde podré verlos? (Muestra)

¿Quiero contarlos o solo identificarlos? (Contexto-ambiente: ¿Cualitativo o Cuantitativo?)

¿Puede haber agentes zoonoticos en esa muestra? (Medidas de bioseguridad)

¿Cuales son las técnicas usadas en Enfermedades Parasitarias?
Técnicas Diagnósticas en Enfermedades Parasitarias

• Tecnicas Coproparasitarias
⚬ Detectan elementos parasitarios que esten siendo emitidos con la materia fecal

• Técnicas NO Coproparasitarias
⚬ Frotis, raspajes, hisopados, análisis de orina
 Recordar

MIS OBJETIVOS

CONOCER FACTORES DEL HOSPEDADOR, AGENTE Y AMBIENTE

CONOCER LAS TÉCNICAS A MI ALCANCE, SUS PROS Y CONTRAS

 Curso de Enfermedades Parasitarias - Plan 2021

TÉCNICAS
COPROPARASITARIAS

Dra. Ernestina Olhagaray

Asistente G2
Unidad Parasitologia Veterinaria
La gran mayoría de los parasitos que habitan el aparato digestivo y
anexos van a salir al medio con las heces para propagarse

(También salen en heces algunos parásitos pulmonares que son deglutidos y larvas de dípteros endoparásitas)
 ¿QUÉ ELEMENTOS PARASITARIOS VAMOS A BUSCAR EN LAS HECES?

• Helmintos gastrointestinales: • Nematodes pulmonares:

LARVAS O HUEVOS LARVADOS

PARÁSITOS ENTEROS SEGMENTOS

• Protozoarios entéricos:
• Larvas de Dípteros

HUEVOS ANTÍGENOS
OOQUISTES, QUISTES ANTÍGENOS Ej: (Miasis cavitaria equinos)

¡TENEMOS QUE CONOCER SU MORFOLOGÍA!

Técnicas Coproparasitarias
 Técnicas Coproparasitarias
Para el diagnóstico de huevos/ooquistes
 Técnicas Coproparasitarias
Para el diagnóstico de larvas
 Examen • Consistencia?
MACROSCÓPICO • Color? Olor? Lo hacemos siempre previo a
• Sangre? Mucus? cualquier examen microscópico
• Parásitos enteros/proglótidos?
DIAGNÓSTICO DE HUEVOS/OOQUISTES
Examen microscópico cualitativo

¿ TIENE O NO TIENE? ¿QUE TIENE?

No me interesa CUANTO: No peso la muestra ni mido volúmenes
EXAMEN
MICROSCÓPICO

Frotis directo/Extensión simple

• Técnica Cualitativa
• No filtramos ni concentramos con ninguna sustancia
EXAMEN
MICROSCÓPICO
FLOTACIÓN
EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por FLOTACIÓN

Técnica de Willis

Densidad: Mayor a la de los huevos

+
Solución de
flotación
Una solución de flotación con mayor densidad que la de los huevos los hará FLOTAR
EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por FLOTACIÓN
Técnica de Willis

Burbujas

Huevos •Se debe recorrer en orden todo el preparado en ORDEN

LA NO VISUALIZACIÓN DE ELEMENTOS PARASITARIOS NO SIGNIFICA QUE EL ANIMAL SEA NEGATIVO

EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por FLOTACIÓN

Técnica de Willis

• Técnica Cualitativa
• De elección para carnívoros (también se puede usar en suinos, equinos, etc.)
• Se basa en concentrar los huevos mediante el uso de soluciones más densas que los hacen flotar

• (algunas) SOLUCIONES USADAS PARA LA FLOTACIÓN

1. Solución saturada de NaCl (d: 1,2)

2. Solución de MgSO4 (d: 1,29) •Soluciones más densas para hacer flotar elementos más pesados
Metastrongylus spp y Macracanthorhynchus hirudinaceus
3. Solución de ZnSO4 (d: 1,33)
 ¿HUEVOS AÚN MÁS PESADOS?

▪ Soluciones de mayor densidad • Sedimentación

Yodomercuriato de potasio d:1,44

TÓXICO
LOS HUEVOS SE DEFORMAN POR LA PRESIÓN
EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por SEDIMENTACIÓN Para eliminar detritos:
• Doble filtrado y doble sedimentación
• Se dispersa la muestra en agua jabonosa

Técnica de sedimentación simple

Varias sedimentaciones en copa

Se descarta el sobrenadante

Leo TODO el sedimento

EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por SEDIMENTACIÓN

Técnica de Happich & Boray

10cm/min

Leo TODO el sedimento

EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Enriquecimiento por SEDIMENTACIÓN

Técnica de Happich & Boray

• Técnica Cualitativa
• Sedimentación a tiempo controlado
• De elección para F. hepatica y Paramphistomum spp
• Se basa en la velocidad de caída de sus huevos (10cm/min)

(Originalmente fue cuantitativa)

• NO hay relación proporcional entre la cantidad de huevos en la muestra y los adultos en el hígado

• Diagnóstico de distomatosis y paramfistomosis CRÓNICAS

• Si no veo huevos no quiere decir que el animal no tiene parásitos

 TÉCNICAS CUANTITATIVAS
¿Cuándo me interesa cuantificar?

Sabemos que hay una infestación constante

¿QUE TIENE? ¿CUANTO?

Peso la muestra y mido volúmenes para sacar proporciones
EXAMEN
MICROSCÓPICO
-Examen Cuantitativo
Técnica de McMaster

■ Contamos los huevos de nematodos gastrointestinales tipo del ORDEN STRONGYLIDA

▪ Se usa también para el lombritest o TRCH (test de reducción de contaje de huevos)
▪ El resultado se expresa en HPG (“huevos por gramo”)

Huevos indiferenciables
-Trichostrongylus spp
-Ostertagia spp
-Cooperia spp
-Haemonchus spp
-Oesophagostomum spp

Huevos diferenciables
-Nematodirus spp
(lo cuento pero no lo incluyo en hpg)
-Moniezia spp
-Toxocara vitulorum
-Trichuris spp
EXAMEN
MICROSCÓPICO
-Examen Cuantitativo

Técnica de McMaster

QUIERO ESTABLECER UNA RELACION ENTRE UN VOLUMEN QUE PUEDA LEER FACIL y RÁPIDAMENTE, PARA no tener que leer todo 1GR DE MATERIA FECAL

¿Cómo hago para leer menos?

Podría leer una centésima parte, o sea 0,15 ml

1 cm

1 cm

0,15 cm

Relación de dilución 1:15 cm3 =mL

1gr materia fecal
+ Cámara de McMaster
14 ml de solución sat. NaCl Ésta carga 0,15ml por celda
=
15 ml

• 0,15ml es la centésima parte de 15ml → voy a multiplicar los huevos contados x100
EXAMEN
MICROSCÓPICO
-Examen Cuantitativo
Técnica de McMaster

Permite ESTIMAR la carga parasitaria mediante la determinación de los huevos por gramo (HPG) de materia fecal

• Técnica cuantitativa: CANTIDADES CONOCIDAS de materia fecal(gr) y de solución saturada de NaCl (mL)
• Hacemos flotar los huevos dentro de una cámara graduadas para poder contar los huevos

Cámara de “ovinos” Cámara de “bovinos”

Sus celdas cargan diferentes volúmenes

DIAGNÓSTICO DE LARVAS
EXAMEN
MICROSCÓPICO
- Recuperación de larvas
Técnica de Baermann

• Técnica Cualitativa
• RECUPERA larvas (desde materia fecal, pastura, etc)
• Técnica de elección para diagnóstico confirmatorio de Dictyocaulosis y Aelurostrongylosis
• Se basa en la migración de las larvas por su hidrotropismo positivo
• No dejar pasar más de 6-12 horas entre la colecta y el procesamiento (pueden eclosionar huevos de NGI que complican la visualización)
EXAMEN
MICROSCÓPICO
-Cultivo de larvas= Coprocultivo
3 métodos: Roberts-O’Sullivan, Corticelli-Lai, Whitlock

▪ Permite obtener larvas 3 que tienen valor diagnóstico de géneros de NGI

▪ Se basa en brindar a los huevos las condiciones óptimas de temperatura, humedad, oxigenación y tiempo (min 7
días) para que desarrollen hasta L3

Muestra
Humedad Oxigenación (sustrato+1 h sin tapa) Temperatura Tiempo
EXAMEN
MICROSCÓPICO
-Cultivo de larvas= Coprocultivo

• Evaluamos: Largo de COLA DE LA VAINA (Corta, Mediana, Larga) - Largo TOTAL de la L3 - Forma de cola - Número de células intestinales
• Complementa al resultado obtenido en el McMaster: Contamos y relacionamos el porcentaje % de géneros con el hpg obtenido en el
McMaster

http://helminto.inta.gob.ar/Niec/Cultivo%20e%20Identificaci%C3%B3n%20de%20Larvas%20Infectantes%20de.pdf
 Procedimientos para (casi) todas las técnicas coproparasitarias

• Examinar macroscópicamente
Podemos ver restos de parásitos, trazas de sangre o mucus, consistencia, color

• Analizar una porción representativa

Teoricamente podría analizarla toda, prácticamente no es práctico

• Homogeinizar y disgregar con agua o solución

Los elementos parasitarios no se distribuyen de forma homogenea en las heces

• Filtrar para eliminar detritos mayores

Para poder ver con más claridad sólo lo que estoy buscando

• Concentrar o "juntar" los elementos que quiero ver

Para asegurarme de que si hay algun elemento, lo voy a encontrar
 BIOSEGURIDAD

PREVIO A CUALQUIER TÉCNICA/MANIPULACIÓN

de HECES DE CARNÍVOROS
DEBEN SOMETERSE A BAÑO MARÍA
15 minutos a 100°C

¿ ?
 Otras técnicas

Huevos son indiferenciables

en familia Taeniidae
■ Técnica de coproantígeno (ELISA)
– Diagnóstico de E. granulosus en heces de perros
– Utilizada por CoNaHoBA

■ Tests rápidos de ELISA para Giardia

 ¿QUÉ HAGOS CON LOS DATOS QUE OBTUVE?
Tomo decisiones basadas en la INTERPRETACIÓN de los RESULTADOS

¿Trato o no? ¿Con qué? ¿A quienes? ¿Agentes zoonóticos?

¿Fue eficaz una droga/tratamiento? ¿Repito el muestreo?

 RECORDAR:

❖ Son técnicas específicas pero poco sensibles:

No ver elementos parasitarios NO QUIERE DECIR QUE EL ANIMAL NO esté parasitado
El animal puede estar parasitado y no vimos ningún elemento
(esa muestra no tenía, mal obtenida o mal conservada, formas inmaduras, etc.)

❖ N o c o n f u n d i r RECUPERACION DE LARVAS con CULTIVO DE LARVAS(=COPROCULTIVO)

❖ ¿Qué hago con los resultados?

Los interpreto teniendo en cuenta los objetivos y la epidemiología
 Bibliografía
▪ Diagnóstico de las helmintiasis por medio del examen coprológico - Thienpont y col.
(https://eva.fvet.edu.uy/pluginfile.php/43777/mod_resource/content/2/Thiempont.pdf)

▪ Manual para diagnóstico das helmintoses de ruminantes”- Ueno

https://r1.ufrrj.br/adivaldofonseca/wp-content/uploads/2014/06/manual_helmintoses-UENO-site-do-CBPV.pdf

▪ Clases, videos y repartidos del Departamento

▪ Red de helmintologia para america latina y el caribe (http://helminto.inta.gob.ar)

▪ Diagnóstico de las parasitosis más frecuentes de los rumiantes - César A . Fiel / Pedro E
Stefan / Diego A . Ferreyra https://www.aavld.org.ar/publicaciones/Manual%20Diagnostico%20final.pdf
 Curso de Enfermedades Parasitarias - Plan 2021

Otras técnicas Diagósticas

(NO COPROPARASITARIAS)

Dra. Ernestina Olhagaray

Asistente G2
Unidad Parasitologia Veterinaria
Para parásitos que se localizan en otro sitio anatómico y

que se no se pueden evidenciar en materia fecal

Debemos tomar otro tipo de muestras y hacer otras

técnicas diagnósticas
1) Frotis sanguíneo
2) Raspajes de piel
3) Hisopado auricular
4) Diagnóstico de ectoparásitos
5) Análisis de orina
6) Cinta engomada
7) Digestión peptídica
8) Diagnóstico de resistencia
 1. Frotis sanguíneo
Hacer frotis inmediatamente o remitir sangre CON anticoagulante
 1. Frotis sanguíneo

Hacer frotis inmediatamente de tomada la muestra o remitir sangre CON anticoagulante

 2.Raspaje de piel
Profundo Superficial

Sarcoptes spp
Demodex spp
3. Hisopado auricular
4. Diagnóstico de ectoparásitos

• Conocer morfología
• Uso de claves dicotómicas

https://inta.gob.ar
 5. Análisis de orina

• Se hace sedimentar orina y se observa al microscopio

• Dioctophyma renale

• Capillaria spp
 6. Método de Graham o de cinta adhesiva/engomada

– Diagnóstico de Oxyuris equi

 7. Digestión peptídica

– Diagnóstico de Trichinella spiralis en músculo

Por si quieren ver el proceso de la técnica: https://www.youtube.com/watch?v=fm_RE9ZSFa8

 7. Diagnostico de resistencia

– Lombritest o TRCH : Estudia eficacia de principios activos antihelmínticos

– Bioensayos in vitro para diagnóstico de resistencia en ectoparásitos

 7. Diagnostico de resistencia

BIOENSAYOS IN-VITRO
Usados para el diagnostico de resistencia en R.microplus

Test Inmersión Adultos

• Vivas/Muertas
• Oviposición E. Olhagaray

• %Eclosión

Test Paquete Larvas

• Vivas/Muertas

Test Inmersión Larvas

• Vivas/Muertas
http://www.ainfo.inia.uy/digital/bitstream/item/2830/1/18429230712114518.pdf
 7. Diagnostico de resistencia

BIOENSAYOS IN-VITRO
Usados para el diagnostico de resistencia de Haematobia irritans

Fotos clase E Castro