PRÁCTICA DE LABORATORIO No.
6
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE VITAMINA C
STHEFANY PERDOMO VARGAS
EDWIN FABIAN ROJAS PANADERO
DANNA GABRIELA AGUIRRE DIAZ
LUISA FERNANDA ERAZO ORTEGA
UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ASIGNATURA BIOQUÍMICA
FLORENCIA-CAQUETÁ
2024
ABSTRACT
In this laboratory practice, different procedures were carried out for the quantitative
determination of vitamin C present in orange extract, with the purpose of subsequently
comparing the results obtained with those reported in the scientific literature. Taking into
account that ascorbic acid is an antioxidant and water-soluble nutrient that is present in
some foods, in addition to being essential in our dietary behavior in minimal doses.
The lack of vitamin C in the body can cause different diseases in it since ascorbic
acid helps the increase, development and restoration of the body's tissues. This vitamin can
be synthesized from precursors present in some organisms, since others lack it.
RESUMEN
En esta práctica de laboratorio, se realizaron diferentes procedimientos para la
determinación cuantitativa de la vitamina C presente en extracto de naranja, con el
propósito de comprar posteriormente los resultados obtenidos con los reportados en la
literatura científica. Teniendo en cuenta que el ácido ascórbico es un nutriente antioxidante
e hidrosoluble que está presente en algunos alimentos, además de ser esenciales en nuestra
conducta dietética en dosis mínimas.
La carencia de vitamina C en el organismo puede ocasionar diferentes
enfermedades en el mismo ya que el ácido ascórbico ayuda al incremento, desarrollo y
restauración de los tejidos del organismo. Esta vitamina puede ser sintetizada a partir de
precursores presentes en algunos organismos, ya que otros carecen de este.
INTRODUCCIÓN
La cuantificación de vitamina C en frutas mediante métodos espectrofotométricos es
de gran importancia en los campos de la nutrición y la bioquímica. La vitamina C, también
conocida como ácido ascórbico, es un nutriente esencial que juega un papel crucial en
diversas funciones biológicas, incluyendo la síntesis de colágeno, la absorción de hierro y
el mantenimiento del sistema inmunológico. La determinación precisa de su contenido en
alimentos es fundamental para evaluar su valor nutricional y garantizar que las dietas
proporcionen cantidades adecuadas de este antioxidante vital. Además, la monitorización
de los niveles de vitamina C en productos naturales es esencial para el control de calidad en
la industria alimentaria.
A nivel mundial, se han realizado numerosos estudios sobre la cuantificación de
vitamina C en frutas y vegetales utilizando técnicas espectrofotométricas. Un trabajo
destacado es el de Klein y Perry (1982), quienes desarrollaron un método
espectrofotométrico para determinar el contenido de vitamina C en alimentos. Utilizando el
reactivo 2,4-dinitrofenilhidrazina, Klein y Perry lograron una cuantificación precisa del
ácido ascórbico en diversas frutas, incluyendo cítricos, fresas y kiwi. Este estudio
proporcionó una base sólida para la evaluación nutricional y se ha utilizado como
referencia en posteriores investigaciones. (Klein, B. P., & Perry, A. K., 1982).
En Colombia, la investigación sobre la cuantificación de vitamina C en frutas ha
sido abordada por diversas instituciones académicas y centros de investigación. Un ejemplo
es el estudio realizado por Rodríguez y López (2010) en la Universidad Nacional de
Colombia, donde se analizó el contenido de vitamina C en frutas autóctonas como el lulo,
la guayaba y el maracuyá. Utilizando un método espectrofotométrico basado en la reacción
del ácido ascórbico con 2-nitroanilina, los investigadores lograron cuantificar la vitamina C
presente en estas frutas, comparando los resultados con los valores reportados en la
literatura internacional. (Rodríguez, C. A., & López, J. M.,2010).
El objetivo principal de esta práctica de laboratorio es determinar cuantitativamente
el contenido de ácido ascórbico en diferentes frutas y comparar los resultados obtenidos
con los valores reportados en la literatura científica. Utilizando una técnica
espectrofotométrica que implica la reacción del ácido ascórbico con 2-nitroanilina y la
formación de un compuesto coloreado, se evaluará la concentración de vitamina C presente
en las muestras de frutas. Este análisis permitirá no solo cuantificar la vitamina C, sino
también verificar la precisión y eficacia del método empleado, contribuyendo al
conocimiento y aplicación de técnicas analíticas en la determinación de nutrientes
esenciales.
METODOLOGÍA
Se extrajo el jugo de la naranja, posterior a esto se filtró con ayuda del papel filtro.
En un tubo de ensayo se le agrego 1 ml de filtrado de la fruta y adicionamos 4 ml de ácido
oxálico al 0,15%, se mezcló con el agitador de vidrio para su posterior filtración, dejamos
en reposo mientras las demás muestras estuvieran listas para su lectura en el
espectrofotómetro a 540 nm.
Curva de Calibración
Tubo Blanco; en este se agregó 0,1 ml de 2-nitratoanilina más 0,1 ml de nitrato de
sodio, se mezcló bien hasta obtener la decoloración de la muestra. Luego adicionamos 3,8
ml de etanol y 1 ml de ácido oxálico, se procedió a mezclar y dejamos reposando durante 5
minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, 3,8 ml de agua destilada, y se mezcló.
Tubo 1; se añadió 0,1 ml de 2-nitratoanilina más 0,1 ml de nitrato de sodio, se
mezcló bien hasta conseguir su estado incoloro. Luego adicionamos 3,8 ml de etanol, 0,1
ml de solución patrón de ácido ascórbico y 0,9 ml de ácido oxálico, procedimos a mezclar y
dejamos reposando durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, más 3,8
ml de agua destilada y mezclamos.
Tubo 2; se añadió 0,1 ml de 2-nitratoanilina, más 0,1 ml de nitrato de sodio,
mezclamos bien hasta conseguir la decoloración. Luego adicionamos 3,8 ml de etanol, 0,2
ml de solución patrón de ácido ascórbico, más 0,8 ml de ácido oxálico, se procedió a
mezclar y se dejó reposar durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, y
3,8 ml de agua destilada, y se mezcló.
Tubo 3; se añadió 0,1 ml de 2-nitratoanilina, y 0,1 ml de nitrato de sodio, se mezcló
bien hasta conseguir su estado incoloro. Luego adicionamos 3,8 ml de etanol, 0,4 ml de
solución patrón de ácido ascórbico y 0,6 ml de ácido oxálico, procedimos a mezclar y
dejamos en reposo durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, más 3,8
ml de agua destilada, y se procedió a mezclar.
Tubo 4; se añadió 0,1 ml de 2-nitratoanilina, más 0,1 ml de nitrato de sodio,
mezclamos bien hasta conseguir la decoloración. Luego adicionamos 3,8 ml de etanol, 0,6
ml de solución patrón de ácido ascórbico, más 0,4 ml de ácido oxálico, se procedió a
mezclar y se dejó reposar durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, y
3,8 ml de agua destilada, y se mezcló.
Tubo 5; agregamos 0,1 ml de 2-nitratoanilina, y 0,1 ml de nitrato de sodio,
procedimos a mezclar bien hasta conseguir su estado incoloro. Luego adicionamos 3,8 ml
de etanol, 0,8 ml de solución patrón de ácido ascórbico y 0,2 ml de ácido oxálico,
procedimos a mezclar y dejamos en reposo durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de
NaOH al 10%, más 3,8 ml de agua destilada, y se procedió a mezclar.
Tubo 6; se añadió 0,1 ml de 2-nitratoanilina, más 0,1 ml de nitrato de sodio,
mezclamos bien hasta conseguir la decoloración. Luego adicionamos 3,8 ml de etanol y 1
ml de solución patrón de ácido ascórbico, se procedió a mezclar, dejando reposar durante 5
minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, y 3,8 ml de agua destilada, y se
mezcló.
Tubo Muestra; añadimos 0,1 ml de 2-nitratoanilina, y 0,1 ml de nitrato de sodio,
procedimos a mezclar bien hasta conseguir su estado incoloro. Luego adicionamos 3,8 ml
de etanol, más 1 ml de filtrado de jugo de naranja, procedimos a mezclar y dejamos en
reposo durante 5 minutos, para luego agregar 1,2 ml de NaOH al 10%, más 3,8 ml de agua
destilada, y mezclamos.
Una vez los 9 tubos de ensayo estaban listos, procedimos a llevarlos al
espectrofotómetro con ayuda de la gradilla, para lectura de las muestras a 540 nm en el
artefacto anteriormente nombrado.
OBSERVACIONES Y DATOS
Tabla 1
Aporte fotográfico y observaciones del proceso para la curva de calibración.
No. TUBOS DE ENSAYO
B 1 2 3 4 5 6 Muestra
A este se le Al tubo 5 En este se
En este En este se Al tubo de
A este se agrego 2- En este se agrego agrego 2-
tubo se agrego 2- muestra se
agrego 2- nitroanilin tubo se 2- nitroanilina,
agrego 2- nitroanilin agrego 2-
nitroanilin a, Nitrito agrego 2- nitroanilin Nitrito de
nitroanilin a, Nitrito nitroanilin
a, Nitrito de sodio, nitroanilin a, Nitrito sodio,
a, Nitrito de sodio, a, Nitrito
de sodio, Etanol, a, Nitrito de sodio, Etanol,
de sodio, Etanol, de sodio,
Etanol, Solucion de sodio, Etanol, Solucion
Etanol, Solucion Etanol,
Solucion patron de Etanol, Solucion patron de
Acido patron de Filtrado
patron de acido Solucion patron de acido
oxalico, acido del jugo,
acido ascorbico, patron de acido ascorbico,
NaOH al ascorbico, NaOH al
ascorbico, Acido acido ascorbico, NaOH al
10% y Acido 10% y
Acido oxalico, ascorbico, Acido 10% y H2O
H2O oxalico, H2O
oxalico, NaOH al Acido oxalico, destilada,
destilada, NaOH al destilada,
NaOH al 10% y oxalico, NaOH al cuando
este no 10% y al
10% y H2O NaOH al 10% y agregamos
cambio H2O agregarle
H2O destilada, 10% y H2O el agua
mucho su destilada, el agua
destilada, cuando se H2O destilada, destilada se
coloracion, cuando se destilada
al agrago el destilada, cuando se torno de
trato de agrago el va
agregarle agua al agrego el color
tornarse de agua tomando
el agua destilada agregarle agua violeta un
un color destilada un color
destilada se torno de el agua destilada poco oscuro
lechoso, se torno de violeta
este tomo un color destilada tomo un a
pero muy un color super
un color violeta un tomo un color comparacio
poco y violeta claro,
violeta poco mas color violeta n de los
quedo claro. aunque en
translucido oscuro que violeta casi translucido demas, este
translucido el fondo se
muy claro. el del tubo igual al del un poco fue el que
. torno mas
2. tubo 3. mas oscuro arrojo un
que los oscuro que
violeta
tubos en la
oscuro.
anteriores. superficie.
MUESTRA DE CÁLCULO
Grafica 1
Curva de calibración
0.45
0.4
0.35
0.3
Absorbancia
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Concentración
Concentración en mg/100 ml y en mg/100 g de jugo, densidad del jugo.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La determinación cuantitativa de vitamina C en el extracto de naranja utilizando el método
espectrofotométrico arrojó los siguientes resultados:
La curva de calibración mostró una relación lineal entre la concentración de ácido
ascórbico y la absorbancia, lo que permitió cuantificar con precisión el contenido de
vitamina C en la muestra de jugo de naranja.
Los cálculos realizados indican que la concentración de vitamina C en el jugo de naranja es
de 47,62 mg/100 ml, este valor se encuentra dentro del rango reportado en la literatura
científica para naranjas, que generalmente oscila entre 40-60 mg/100 ml. La técnica
espectrofotométrica utilizada, basada en la reacción del ácido ascórbico con 2-nitroanilina,
demostró ser un método eficaz y confiable para la determinación cuantitativa de vitamina C
en frutas cítricas.
Los resultados obtenidos son coherentes con los valores típicos reportados para el
contenido de vitamina C en naranjas, lo que valida la precisión y aplicabilidad del método
analítico empleado en esta práctica de laboratorio.
PREGUNTAS
1. ¿QUÉ OTRAS TÉCNICAS EXISTEN PARA ANALIZAR VITAMINA C?
EXPLIQUE EN QUE SE BASA UNA DE ELLAS.
Existen varias técnicas para analizar la concentración de vitamina C (ácido ascórbico) en
diferentes muestras. Algunas de las más comunes incluyen:
Titulación Redox: Es una técnica clásica en la que se utiliza un agente oxidante para
reaccionar con la vitamina C. Un ejemplo es la titulación con una solución de yodo
o con una solución de 2,6-diclorofenolindofenol (DCPIP).
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC): Separa los componentes de una
mezcla y permite cuantificar la vitamina C.
Espectrofotometría UV-Vis: Mide la absorción de luz ultravioleta o visible por la
vitamina C.
Electroquímica: Utiliza electrodos para detectar cambios en la corriente eléctrica
causados por la oxidación o reducción de la vitamina C.
Enzimáticas: Emplean enzimas específicas que reaccionan con la vitamina C,
produciendo un cambio medible.
Quimioluminiscencia: Detecta la luz emitida durante una reacción química en la que
participa la vitamina C.
ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS
Una de las técnicas ampliamente utilizadas para el análisis de vitamina C es la
espectrofotometría UV-Vis. Esta técnica se basa en la capacidad del ácido ascórbico para
absorber luz en la región ultravioleta del espectro electromagnético.
Principios Básicos:
Absorción de Luz: La vitamina C tiene un máximo de absorción en el rango de 245-265
nm. Cuando una muestra que contiene vitamina C se expone a luz UV, la cantidad de luz
absorbida es proporcional a la concentración de vitamina C en la muestra.
Ley de Beer-Lambert: Esta ley establece que la absorción de luz por una solución es
directamente proporcional a la concentración del soluto (en este caso, la vitamina C) y la
longitud del camino óptico (el espesor de la solución que atraviesa la luz).
𝐴=𝜖⋅𝑐⋅𝑙A=ϵ⋅c⋅l
donde:
𝐴A es la absorbancia,
𝜖ϵ es el coeficiente de absorción molar,
𝑐c es la concentración de la solución,
𝑙l es la longitud del camino óptico.
Procedimiento General:
Preparación de la Muestra: Se disuelve una cantidad conocida de la muestra en un
solvente adecuado (agua o buffer).
Medición del Blanco: Se mide la absorbancia de una muestra de control que no contiene
vitamina C para calibrar el espectrofotómetro.
Medición de la Muestra: Se mide la absorbancia de la muestra que contiene vitamina C.
Cálculo de la Concentración: Utilizando la ley de Beer-Lambert, se calcula la
concentración de vitamina C en la muestra a partir de la absorbancia medida.
Ventajas:
Rapidez y Simplicidad: La espectrofotometría UV-Vis es rápida y relativamente fácil de
realizar.
Sensibilidad: Es una técnica bastante sensible y puede detectar bajas concentraciones de
vitamina C.
No Destructiva: No destruye la muestra, permitiendo su posterior análisis con otras
técnicas si es necesario.
Esta técnica es muy útil en la industria alimentaria y en laboratorios de investigación para
asegurar la calidad y la cantidad de vitamina C en productos alimenticios, suplementos y
muestras biológicas.
2. RESUMA LA FUNCIÓN DE LA VITAMINA C EN EL ORGANISMO.
La vitamina C, también conocida como ácido ascórbico, es una vitamina esencial que
desempeña múltiples funciones cruciales en el organismo. A continuación, se resumen sus
principales roles:
Funciones de la Vitamina C:
Antioxidante Potente:
La vitamina C actúa como un antioxidante, protegiendo las células del daño causado por los
radicales libres, que son moléculas inestables que pueden causar estrés oxidativo y dañar
componentes celulares como el ADN, proteínas y lípidos.
Síntesis de Colágeno:
Es fundamental para la biosíntesis del colágeno, una proteína esencial para la formación y
reparación de tejidos, incluyendo piel, vasos sanguíneos, huesos, cartílagos y tendones. El
colágeno también es crucial para la cicatrización de heridas.
Función Inmunológica:
La vitamina C contribuye al buen funcionamiento del sistema inmunológico. Mejora la
actividad de los fagocitos, la producción de interferón, y la integridad de las barreras
epiteliales contra patógenos. También puede reducir la duración y severidad de los
resfriados comunes.
Absorción de Hierro:
Mejora la absorción del hierro no hemo, presente en alimentos de origen vegetal, ayudando
a prevenir la anemia ferropénica. La vitamina C reduce el hierro férrico (Fe3+) a hierro
ferroso (Fe2+), que es la forma más fácilmente absorbida por el intestino.
Síntesis de Neurotransmisores:
Participa en la biosíntesis de varios neurotransmisores, como la norepinefrina y la
serotonina, que son cruciales para la función cerebral y el estado de ánimo.
Metabolismo de Lípidos y Colesterol:
La vitamina C está involucrada en la síntesis de carnitina, una molécula esencial para el
transporte de ácidos grasos a las mitocondrias para su conversión en energía. También
ayuda en la regulación del colesterol.
Prevención de Enfermedades Crónicas:
Al actuar como antioxidante y antiinflamatorio, la vitamina C puede ayudar a reducir el
riesgo de enfermedades crónicas como enfermedades cardiovasculares, ciertos tipos de
cáncer y enfermedades neurodegenerativas.
Detoxificación:
Ayuda en la detoxificación de sustancias nocivas en el hígado y contribuye a la eliminación
de metales pesados del cuerpo.
En resumen, la vitamina C es esencial para la salud y el bienestar general debido a su papel
en la protección celular, el soporte del sistema inmunológico, la síntesis de colágeno y
neurotransmisores, y la mejora de la absorción de nutrientes. Su deficiencia puede llevar a
una serie de problemas de salud, incluido el escorbuto, caracterizado por debilidad, anemia,
problemas en la piel y encías sangrantes.
3. ¿POR QUÉ ES NECESARIO HACER LA EXTRACCIÓN DE LA
VITAMINA C CON ÁCIDO OXÁLICO?
La extracción de vitamina C con ácido oxálico se realiza debido a varias razones clave que
facilitan y mejoran la precisión del análisis de esta vitamina. A continuación, se detallan los
motivos principales:
Razones para Usar Ácido Oxálico en la Extracción de Vitamina C:
Prevención de la Oxidación:
La vitamina C es muy susceptible a la oxidación, especialmente en presencia de metales y
bajo condiciones de luz y calor. El ácido oxálico actúa como un agente quelante que
secuestra iones metálicos (como el hierro y el cobre) que pueden catalizar la oxidación de
la vitamina C, protegiéndola y estabilizándola durante el proceso de extracción.
Condiciones Ácidas:
La estabilidad de la vitamina C es mayor en condiciones ácidas. El ácido oxálico
proporciona un medio ácido que ayuda a mantener la vitamina C en su forma reducida y
activa, evitando su degradación y pérdida durante la extracción.
Eficiencia de Extracción:
El ácido oxálico ayuda a liberar la vitamina C de las matrices alimenticias o biológicas al
romper enlaces que pueden retenerla, mejorando la eficiencia y completitud de la
extracción. Esto es particularmente útil en muestras complejas donde la vitamina C puede
estar ligada a otros componentes.
Compatibilidad Analítica:
El ácido oxálico es compatible con muchas técnicas analíticas utilizadas para cuantificar la
vitamina C, como la titulación redox, la espectrofotometría y la cromatografía. No
interfiere significativamente con las reacciones químicas o las mediciones, permitiendo una
detección precisa y confiable.
Solubilidad:
La vitamina C es soluble en agua, y el ácido oxálico en solución acuosa proporciona un
medio eficaz para disolver la vitamina C de las muestras. Esto facilita la manipulación y
análisis posterior de la muestra líquida.
Procedimiento General:
Preparación de la Muestra: La muestra (por ejemplo, un alimento) se homogeniza si es
necesario.
Adición de Ácido Oxálico: Se añade una solución de ácido oxálico a la muestra para
liberar y estabilizar la vitamina C.
Extracción: La mezcla se agita y se deja reposar para permitir que la vitamina C se
disuelva en el ácido oxálico.
Filtración: La solución se filtra para eliminar los sólidos y obtener un extracto líquido que
contiene la vitamina C.
Análisis: El extracto se analiza utilizando la técnica analítica apropiada (HPLC,
espectrofotometría, etc.).
En resumen, el uso del ácido oxálico en la extracción de vitamina C es esencial para evitar
su oxidación, mantener su estabilidad, mejorar la eficiencia de la extracción y asegurar la
precisión del análisis. Esto resulta en una cuantificación más fiable de la vitamina C en
diversas muestras.
4. ¿QUÉ SUCEDE SI LA EXTRACCIÓN DE VITAMINA C SE HACE EN
VEGETALES COCIDOS?
Si la vitamina C es extraída de vegetales cocidos, el contenido de vitamina c o ácido
ascórbico será poco o tendera a desaparecer, a diferencia de si se extrae del vegetal crudo.
Esto debido a que el ácido ascórbico es poco resistente al calor, además de que en la
cocción las vitaminas tienden a quedarse un 3,5 % en el agua de la misma, ya que además
de ser termolábil (el calor lo destruye), es hidrosoluble, por ende, la vitamina c se perderá
en el agua de cocción o se destruirá en gran cantidad.
5. CONSULTE LA TABLA DE COMPOSICIÓN DE ALIMENTOS
COLOMBIANOS Y NOMBRE CINCO ALIMENTOS RICOS EN
VITAMINA C.
La Tabla de Composición de Alimentos Colombianos (TCAC) es una herramienta que
ofrece información específica sobre el valor nutricional de los alimentos que se
consumimos los colombianos. Este recurso o herramienta fue creado por varias
instituciones de salud y nutrición de nuestro país (Colombia), entre estas entidades
encontramos incluido el Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF).
1. Guayaba (Psidium guajava)
2. Papaya (Carica papaya)
3. Mango (Mangifera indica)
4. Maracuyá (Passiflora edulis)
5. Naranja (Citrus sinensis)
CONCLUSIONES
Se llevaron a cabo diferentes procedimientos para la determinación cuantitativa de vitamina
C en extracto de naranja, comparando los resultados con la literatura científica.
La concentración de vitamina C en el jugo de naranja se determinó en 47,62 mg/100 ml,
dentro del rango típico para naranjas.
La técnica espectrofotométrica utilizada, basada en la reacción del ácido ascórbico con 2-
nitroanilina, demostró ser eficaz y confiable.
Los resultados obtenidos validan la precisión del método empleado y confirman la utilidad
de la espectrofotometría para cuantificar la vitamina C en frutas cítricas.
En resumen, el estudio demostró la eficacia del método espectrofotométrico para la
determinación precisa del contenido de vitamina C en el jugo de naranja, confirmando su
aplicabilidad en la cuantificación de este importante nutriente antioxidante.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Colombia. Revista de la Universidad Nacional de Colombia, 28(2), 153-162.
Klein, B. P., & Perry, A. K. (1982). Ascorbic Acid and Vitamin A Activity in Selected Vegetables from
Different Geographical Areas of the United States. Journal of Food Science, 47(3), 941-945.
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%20de%20los%20alimentos,contenido%20en%20vitamina%20C%2084.
