ISSN: 2594-0171
Contribución al Conocimiento Científico y Tecnológico en Oaxaca
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Artículo
CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL PASO A PASO MEDIANTE
FTIR, MASAS Y RMN EN 1 Y 2D DEL COMPUESTO BIOACTIVO
17α-(4-NITROFENIL)ETINIL-ESTRA-1,3,5(10)-TRIENE-3,17β-DIOL
Juárez Niño, Elia Donají1, Santillan Baca, Rosa 2, Ochoa Becerra, Ma. Eugenia 2, Soto
Castro, Delia3
1
Instituto Politécnico Nacional. Centro Interdisciplinario de Investigación para el
Desarrollo Integral Regional (CIIDIR) Unidad Oaxaca. Hornos No. 1003, Col. Noche
Buena, C.P. 71230. Santa Cruz Xoxocotlán, Oaxaca.
2
Departamento de Química, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del IPN,
Apdo. Postal 14-740, 07000 México, CDMX., México.
3 1
CONACyT- Instituto Politécnico Nacional. Centro Interdisciplinario de Investigación
para el Desarrollo Integral Regional (CIIDIR) Unidad Oaxaca. Hornos No. 1003, Col.
Noche Buena, C.P. 71230. Santa Cruz Xoxocotlán, Oaxaca.
Autor de correspondencia: [email protected]
Recibido: 30 de agosto de 2022
Aceptado: 28 de octubre de 2022
Publicado en línea: 31 de octubre de 2022
Resumen
La resonancia magnética nuclear es una técnica de caracterización no invasiva ni
destructiva, que permite elucidar estructuras moleculares, y en conjunto con la
espectroscopía de infrarrojo y la espectrometría de masas es posible validar la estructura
molecular de compuestos bioactivos. Por medio de una reacción de Sonogashira en
condiciones clásicas se sintetizó el 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-
diol, compuesto con actividad tripanocida. En este trabajo se muestra paso a paso la
elucidación estructural del compuesto de manera inequívoca, mediante espectroscopía
infrarroja se asignaron los modos normales de vibración de los grupos funcionales
característicos (-OH y NO2); por resonancia magnética nuclear (1D y 2D) se asignaron y
correlacionaron todas las señales de 1H y 13
C en los espectros correspondientes y se
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corroboró el acoplamiento entre el p-iodonitrobenceno y el 17α-etinilestradiol; finalmente
la espectrometría de masas permitió validar el peso molecular del compuesto.
Palabras clave: Actividad tripanocida, HMBC, HSQC, Sonogashira
Abstract
Nuclear magnetic resonance is a non-invasive and non-destructive characterization
technique, which allows the elucidation of molecular structures and, in conjunction with
infrared spectroscopy and mass spectrometry, it is possible to validate the molecular
structure of bioactive compounds. By means of a Sonogashira reaction under classical
conditions, 17α-(4-nitrophenyl)ethinyl-ethinyl-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol a
compound with trypanocidal activity was synthesized. This work shows step by step the
structural elucidation of the compound unambiguously, by infrared spectroscopy the
normal modes of vibration of the characteristic functional groups (-OH and NO2) were
assigned; by nuclear magnetic resonance (1D and 2D) all the 1H and 13
C signals in the
corresponding spectra were assigned and correlated; the coupling between p-
iodonitrobenzene and 17α-ethinylestradiol was corroborated. Finally, mass spectrometry
allowed validation of the molecular weight of the compound.
Key words: Trypanocidal activity, HMBC, HSQC, Sonogashira
Introducción (OMS, 2022). En este sentido se
Los antimicrobianos (antibióticos, los diseñaron derivados del 17α-
antivíricos, antifúngicos y etinilestradiol (EE), los cuales
antiparasitarios) son utilizados para teóricamente son buenos candidatos para
prevenir y tratar infecciones en seres actuar como antimicrobianos de
humanos, animales y plantas; sin administración oral y absorción por
embargo, el uso indiscriminado de este difusión pasiva. Dichos derivados pueden
tipo de fármacos ha permitido que los ser sintetizados a través de una reacción
microorganismos desarrollen resistencia. de Sonogashira en condiciones clásicas a
Lo que conduce a la búsqueda de nuevos partir del EE y un iodoareno.
antimicrobianos como alternativa o Específicamente el 17α-(4-
complementación a los ya existentes nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-
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3,17β-diol, sintetizado a partir p- una buena actividad anti T. cruzi para la
iodonitrobenceno y el 17α-etinilestradiol cepa TH con un IC5078.09 ± 0.01.
(Esquema 1, Juárez-Niño, 2021), mostró
Esquema 1. Obtención del 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol por medio de una
reacción de Sonogashira en condiciones clásicas (Tomado de: Juárez-Niño, 2021)
La espectroscopia de resonancia ppm) y las intensidades de los picos
magnética nuclear (RMN) es un tipo de (espectro de RMN) (Silverstein et al., 2005;
espectroscopía de absorción no Yadav, 2005). Existen aproximadamente
destructiva como la espectroscopía de 100 isótopos para los que es posible la
Ultravioleta - visible (UV) o Infrarroja espectroscopia de RMN, sin embargo, los
(IR), bajo las condiciones adecuadas y más utilizados son los isótopos
dependiendo de las características de la hidrogeno-1 (1H-RMN) y carbono-13
muestra, esta absorbe la radiación (13C-RMN) (Yadav, 2005). Esta técnica
electromagnética en la región de se desarrolló inicialmente para identificar
radiofrecuencia (3 MHz a 30.000 MHz) las propiedades químicas de compuestos
(Kaliva & Vamvakaki, 2020; Silverstein et pequeños, pero los avances tecnológicos
al., 2005; Yadav, 2005). Así, la RMN se la han convertido en la herramienta más
ocupa de las transiciones magnéticas útil en el desarrollo y descubrimiento de
nucleares entre los niveles de energía nuevos fármacos, ya que permite
magnética de los núcleos atómicos en las determinar la pureza y estructura
moléculas para detectar su entorno molecular a nivel atómico de una
químico, y permite la construcción de un muestra, sus cambios de fase, alteraciones
gráfico con las frecuencias de absorción conformacionales y configuracionales, la
(desplazamiento químico expresado en solubilidad y potencial de difusión e
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incluso los mecanismos enzimáticos bandas de vibración en el espectro de
(Mohamed et al., 2020; Singh & Singh, FTIR, junto con la asignación del
2022). Junto con la RMN, la espectro de masas.
espectroscopía de infrarrojo por
transformada de Fourier (FTIR) y la Materiales y métodos
espectrometría de masas (MS), Instrumentación y equipo
complementan la información estructural Los espectros de 1H y 13
C se adquirieron
de cualquier compuesto bioactivo (Yadav, en un espectrómetro de imán permanente
2005). Mediante FTIR es posible Spinsolve de 80 MHz (Magritek,
determinar las vibraciones fundamentales Alemania) y en un espectrómetro de imán
de los grupos funcionales presentes en las superconductor ECA de 500 MHz (JEOL,
moléculas, mientras que con la MS se Japón) en metanol deuterado (CD3OD)
obtiene el peso molecular de compuesto y como disolvente. Los desplazamientos
es posible identificar los iones derivados químicos (δ) se expresaron en partes por
de la fragmentación en el proceso de millón (ppm) y las constantes de
ionización (Silverstein et al., 2005; acoplamiento (J) fueron dadas en Hertz
Yadav, 2005). (Hz). Para asignar las señales se utilizaron
Para entender el funcionamiento, los espectros de 1H (32 escaneos), 13
C
mecanismo de acción, interacciones, (621 escaneos), PENDANT-13C (1410
biodisponibilidad y otras características escaneos), HSQC (1024 escaneos) y
de un antimicrobiano es indispensable HMBC (1024 escaneos) con las
determinar la estructura de los siguientes abreviaturas: s= señal simple,
compuestos, realizar evaluaciones de d= señal doble, dd= señal doble de dobles
bioactividad y posteriormente y m= señal múltiple. El espectro de FTIR
correlacionar la estructura con la fue adquirido en un Nicolet 6700
actividad. Por lo anterior, en el presente (ThermoScientific, USA) con un ART
trabajo se muestra paso a paso el uso de la (Attenuated Total Reflectance), mientras
RMN como una herramienta básica en la que las masas fueron obtenidas en un
caracterización y elucidación estructural espectrómetro Agilent G1969A.
de un compuesto bioactivo de origen Síntesis del 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-
sintético, así como la asignación de las 1,3,5(10)-triene-3,17β-diol
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La síntesis se realizó siguiendo mediante una reacción de Sonogashira en
metodología descrita en la tesis de Juárez- condiciones clásicas con 62.2% de
Niño (2021) en un matraz de vidrio de 10 rendimiento en 16 horas; con un Rf de
mL, se pesaron 100 mg (0.34 mmol) de 0.61 en un sistema de elución AcOEt/Hex
EE2, 84.01 mg (0.34 mmol) de 1-yodo-4- 4:6. El compuesto obtenido fue un sólido
nitrobenceno, 5 mg (0.03 mmol) de CuI, de color amarillo con punto de fusión de
y 11.84 mg (0.02 mmol) de (PPh3)2PdCl2 ; 118-119 °C; el cual se caracterizó por
se introdujo al matraz una barra de ATR-FTIR, RMN (80 y 500 MHz) de 1H
13
agitación magnética de 15 mm de PTFE y C en 1 y 2 dimensiones, y
(Fisher); y se le acopló un refrigerante de espectrometría de masas como indica.
10 cm; el sistema resultante se purgó con La espectroscopía de infrarrojo permitió
Ar. Posteriormente, se agregaron 2 mL de identificar algunas de las vibraciones
trietilamina (TEA) seca y se burbujeó el normales de la molécula. En el espectro
sistema de reacción con Ar por 10 min. de la Figura 1 se distingue la frecuencia
La mezcla de reacción se sometió a de tensión del OH del anillo A en 3608
agitación y calentamiento a 100 °C por cm-1, en 3430 cm-1 la tensión del OH en
16h. Al finalizar la reacción se la posición 19 (anillo D); las bandas en
adicionaron 10 mL de AcOEt para 3308 y 3104 cm-1 corresponden a las
obtener una fase orgánica, ésta se lavó tensiones C-H de los anillos aromáticos E
con solución saturada de (NH4Cl), hasta y A, respectivamente; mientras que las
que ya no se observó el azul característico bandas de 3051 a 2862 cm-1 corresponden
del Cu2+. Posteriormente, la fase orgánica a las vibraciones de tensión simétrica y
se lavó con agua destilada (4 x 10 mL) y asimétrica C-H de los carbonos alifáticos.
se secó con Na2SO4 anhidro. El AcOEt se La vibración de tensión del alquino se
removió a vacío y el producto se purificó observa en 2218 cm-1 y las vibraciones
mediante cromatografía en columna con del grupo NO2, asimétricas y simétricas
AcOEt/Hex 4:6. se observan en 1518 y 1339 cm-1,
respectivamente. Aunque es posible
Resultados y discusión distinguir las bandas de vibración
El 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)- características esperadas, el FTIR no es la
triene-3,17β-diol (Esquema 1) se obtuvo técnica que de manera inequívoca nos
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permita elucidar la estructura, por lo que se realizó RMN.
Figura 1. Espectro FTIR-ATR del 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol
La elucidación estructural de la molécula en 6.54 ppm (dd, J= 8.5, 2.7 Hz, H-2);
comenzó a partir de las cinco señales esta última señal también presentó un
ubicadas en la región aromática del acoplamiento meta con la señal doble en
espectro 1H-RMN (Figura 2a). Se pudo 6.48 ppm (d, J=2.7 Hz, H-4), por lo cual
asociar al anillo aromático del corresponde al protón de la posición 4.
nitrobenceno el primer juego de señales Una vez asignadas las señales de los
1
dobles localizado en 7.63 (H-22, H-23) y anillos aromáticos en el espectro H-
8.21 (H-24, H-25) ppm debido a que cada RMN se correlacionaron los carbonos
una de las señales integraba para dos correspondientes a través del espectro de
hidrógenos, además que ambas señales dos dimensiones HSQC (Figura 2b)
están más desplazadas por la presencia ubicando a las señales desplazadas en
del grupo nitro y presentan una constante 133.4, 127.1, 124.7, 116.0 y 113.8 ppm
de acoplamiento (J) de 9 Hz, indicando con los carbonos de las posiciones 22-23,
acoplamientos de hidrógenos en posición 1, 24-25, 4 y 2, respectivamente.
orto. Posteriormente, se asignaron las tres Posteriormente, con ayuda del espectro
señales restantes con el anillo aromático HMBC se logró establecer las
del EE2, primero se estableció un correlaciones a dos y tres enlaces con
acoplamiento orto entre la señal ubicada otros carbonos y protones de la molécula,
en 7.09 ppm (d, J= 8.2 Hz, H1) y la señal por ejemplo, la asignación del C-26 se
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identificó por la correlación a 2 distancias importancia, ya que ésta dio cuenta
de enlace con H-24 y H-25, así como la inequívoca del acoplamiento entre el EE2
correlación a tres enlaces con H-22 y H- y el nitrobenceno. Al analizar la
23, estos últimos correlacionan a dos estructura se espera la correlación de C-
distancias de enlace con C-21, lo que 20 con H-22 y H-23, misma que se
permitió su asignación (Figura 2c). De observa claramente en la Figura 2d.
manera análoga se asignaron C-5 y C-1.
La región de los alquinos, resulta de suma
a) Región aromática del espectro 1H b) Región aromática del espectro HSQC
c) Región aromática del espectro HMBC d) Región aromática-alifática del espectro
HMBC
Figura 2. Ampliaciones de la región aromática de los espectros RMN (500 y 126 MHz, CD3OD) del 17α-(4-
nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol
Para la parte alifática de la molécula la enlace con C-9, y de igual forma la
reconstrucción comenzó a partir de H-1 correlación de H-4 con C-6 (Figura 2d).
que correlaciona a tres distancias de Conforme se fueron asignando las nuevas
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señales en el espectro HMBC, estas se (Figura 3e) el cual permitió distinguir
registraron tanto en el espectro HSQC entre carbonos cuaternarios y secundarios
1
como en el de H. Iterativamente se (señales hacia abajo), así como entre
repitió el proceso de asignación de primarios y terciarios (señales hacia
señales en los distintos espectros (Figura arriba); y mediante una ampliación del
13
3a, b, c y d) para poder asignar toda la espectro C (Figura 3f) fue posible
región alifática. A la par se fueron identificar la señal correspondiente al C-
corroborando las señales en el espectro 13 que se encontraba traslapada con la
con la secuencia de PENDANT-13C señal del CD3OD.
b) Región alifática del espectro HSQC
a) Región alifática del espectro 1H
c) Región alifática-aromática del espectro HMBC d) Región alifática del espectro HMBC
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e) Espectro PENDANT-13C f) Región alifática del espectro 13C
Figura 3. Ampliaciones de la región alifática de los espectros RMN (500 y 126 MHz, CD3OD) del 17α-(4-
nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol
En la Tabla 1 se muestran los con los desplazamientos obtenidos en el
desplazamientos químicos de las señales equipo de 500 MHz (Tabla 1).
características y diferenciadas del Además de la asignación de todas las
compuesto obtenido; cabe destacar que señales esperadas de los núcleos de
los espectros obtenidos a 80 MHz protón y de carbono, en los espectros de
permiten ver claramente los productos de RMN no existen señales adicionales que
acoplamiento, incluso en los espectros de correspondan a impurezas, evidenciando
13
C existe una coincidencia casi exacta que al nivel de detección de RMN la
muestra es un compuesto puro.
Tabla 1. Desplazamientos químicos de las señales características del 17α-(4-
nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol a 500 MHz en metanol deuterado. (entre
paréntesis las correspondientes de 13C a 20 MHz)
Posición δH (ppm) (multiplicidad, J en Hz) δC (ppm)
1 7.09 (d, J=8.2 Hz) 127.1 (127.2)
2 6.54 (dd, J = 8.5, 2.7 Hz) 113.8 (113.8)
4 6.48 (d, J = 2.7 Hz) 116.0 (116.1)
17 - 80.9 (80.9)
18 0.93 (s) 13.5 (13.5)
19 - 100.1
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20 - 84.8
22, 23 7.63 (d, J=9.0 Hz) 133.4 (133.4)
24, 25 8.21 (d, J=9.0 Hz) 124.7 (124.6)
26 - 148.5 (148.4)
Por otro lado, se obtuvo el espectro de además de otros picos asociados a la
masas donde se aprecia el pico con un perdida de una molécula de agua [M-
valor de m/z de 418.2, correspondiente al H2O, m/z 400.2], y la carga por
ión molecular más un hidrógeno, con el complejación de un átomo de Na (m/z,
cuál la molécula adopta la carga positiva 440.2) (Figura 4 ).
y es detectada por el equipo [M+H],
Figura 4. Espectro de masas del 17α-(4-nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene-3,17β-diol
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Conclusiones especialmente al Doctor Prisciliano Cano
En este trabajo, se evidencia paso a paso Barrita del CIIDIR Oaxaca por las
el uso de la resonancia magnética nuclear facilidades para adquirir los espectros
como una poderosa herramienta FTIR y a CINVESTAV Zacatenco por las
espectroscópica no invasiva ni destructiva facilidades para la caracterización en
que permite conocer la estructura de RMN y Masas.
moléculas desconocidas mediante las
determinaciones cuantitativas de Referencias
parámetros moleculares como los Juárez-Niño, E. D. (2021). Diseño in
desplazamientos químicos, la silico y obtención de derivados del
multiplicidad de las señales, las 17-α-etinilestradiol como
constantes de acoplamiento y sus potenciales antimicrobianos
relaciones atómicas. La RMN junto con la [Maestría en Ciencias en
espectroscopía infrarroja y la Conservación y Aprovechamiento
espectrometría de masas permitieron la de Recursos Naturales]. Instituto
elucidación estructural inequívoca del Politécnico Nacional.
compuesto tripanocida 17α-(4- Kaliva, M., & Vamvakaki, M. (2020).
nitrofenil)etinil-estra-1,3,5(10)-triene- Nanomaterials characterization.
3,17β-diol, lo que convierte a estas Polymer Science and
técnicas en herramientas básicas para la Nanotechnology: Fundamentals
caracterización estructural de cualquier and Applications, 401–433.
compuesto bioactivo. https://doi.org/10.1016/B978-0-
12-816806-6.00017-0
Agradecimientos Mohamed, M. A., Mohd Hir, Z. A., Wan
Elia Donají Juárez Niño agradece al Mokthar, W. N. A., & Osman, N.
CONACYT por la beca de Maestría y S. (2020). Features of metal oxide
Doctorado en Ciencias No. CVU colloidal nanocrystal
1008405. Los autores agradecen al characterization. Colloidal Metal
CONACYT (Proyecto INFRA 300802) y Oxide Nanoparticles, 83–122.
al IPN (SIP20210814, y SIP20220864) https://doi.org/10.1016/B978-0-
por el apoyo financiero. Se agradece 12-813357-6.00008-5
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OMS. (2022). Resistencia a los M. Lesure, S. Rigby, & S. Warner,
antimicrobianos. Organización de Eds.; 7th ed.). Jon Wiley & Sons.
Las Naciones Unidas. Singh, M. K., & Singh, A. (2022).
https://www.who.int/es/news- Nuclear magnetic resonance
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sheets/detail/antimicrobial- Polymers and Fibres, 321–339.
resistance#:~:text=%C2%BFQu% https://doi.org/10.1016/B978-0-
C3%A9%20son%20los%20antimi 12-823986-5.00011-7
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