Alumnos:
Rodriguez González América Zamanta
Castañeda Aguirre Ana Belém
Carvajal Atlet Donaldo
Dulce Belén
INTRODUCCION:
La tinción de bacterias es un procedimiento fundamental en microbiología para distinguir
entre diferentes tipos de bacterias según las características de su pared celular. Una de las
técnicas más comunes es la tinción de Gram, desarrollada por el bacteriólogo danés Hans
Christian Gram en 1884.
Las bacterias se clasifican en dos grandes grupos: gram positivas y gram negativas,
basándose en la reacción que muestran durante la tinción de Gram. Esta técnica utiliza
colorantes violetas y rojos para diferenciar entre estos dos tipos de bacterias.
Las bacterias gram positivas retienen el tinte violeta-índigo debido a su estructura de
pared celular más gruesa y con alto contenido de peptidoglicano. Esto las hace aparecer
de color violeta o morado bajo el microscopio después de la tinción de Gram.
En contraste, las bacterias gram negativas tienen una pared celular más delgada y una
estructura más compleja que incluye una membrana externa. Durante la tinción de Gram,
estas bacterias retienen al principio el colorante violeta, pero luego se decoloran con un
agente de descoloración (como alcohol o acetona) y se tiñen con un colorante de contraste
(como safranina), apareciendo rosa o rojo bajo el microscopio.
En resumen, la tinción de Gram es una técnica valiosa para distinguir entre bacterias gram
positivas y gram negativas, lo que proporciona información crucial sobre la estructura de
su pared celular y su comportamiento frente a diferentes agentes químicos.
MANEJO DE LA MUESTRA:
El espécimen deberá tomarse previo a la tinción.
Realizar una extensión en el portaobjetos desengrasado con suficiente muestra y
seque en posición vertical a temperatura ambiente.
Fijar la muestra con calor
SUGERENCIAS DE TINCION
En los enjuagues de agua corriente, puede sustituir por agua destilada para evitar
la adherencia de partículas y sales duras.
Causas de precipitados en la placa: Lavado inadecuado, dejar que el colorante
seque sobre la lámina porta objetos sucios.
PROCEDIMIENTO
Coloque la placa en la gradilla de tinción.
Cubra el frotis con colorante Violeta de Genciana y espere un minuto.
Escurra el colorante de Violeta de Genciana sin enjuagar, cubra con solución Yodo
Gram y espere 1 minuto.
Lava con solución de acetona alcohol mezcla para decolorar, deje actuar de 5 – 15
seg. En frotis delgados y de 15 – 60 seg. En frotis gruesos.
Enjuagar para remover restos de colorantes.
Cubra el frotis con colorante Safranina y esperar 1 minuto.
Lavar repetidas veces con agua corriente o destilada hasta aclarar.
Secar al aire y observar al microscopio con objetivo 100X.
¿Por qué es importante fijar las bacterias antes de realizar la tinción?
Si la muestra contiene células muertas o es antigua, las bacterias pueden
perder su capacidad de retención del colorante y dar un resultado erróneo.
Esto significa que las bacterias gram positivas podrían no teñirse de violeta
como deberían, y ser confundidas por gram negativas. Asimismo, si la
muestra está contaminada con sustancias ajenas al procedimiento, esto
también puede influir en la calidad del resultado.
Cuál es el nombre de los reactivos que utilizaste y cuál es la función
Azul de genciana: especialmente en la técnica de tinción de Gram, como uno de los
colorantes primarios. Su función principal es teñir las bacterias de color azul o violeta
inicialmente, lo cual es fundamental para diferenciar entre bacterias gram positivas y gram
negativas.
Lugol: Se utiliza como agente de tinción para muestras microbiológicas, lo
que facilita su visualización bajo el microscopio.
Acetona con alcohol: El alcohol-acetona disuelve la membrana externa de
las bacterias gramnegativas, liberando el cristal violeta.
Como resultado, las bacterias gramnegativas pierden el color morado.
Agua: el agua es para lavar toda esa tinción
Azafranina: La safranina es un colorante utilizado en la tinción de Gram, un
método crucial en microbiología para distinguir entre bacterias Gram
positivas y Gram negativas
Dependiendo de la tinción que observaste (Gram positiva o Gram negativa)
realiza un dibujo de la pared celular que lo represente
Figura 1.1 dibujo de la pared celular Gram positiva y foto de nuestra
muestra al microscopio
Conclusión:
La conclusión es que primero debemos hacer un correcto manejo de las
sustancias para que el resultado sea el correcto en nuestro caso salieron
Gram positivas varea según el tipo de bacterias en nuestras muestras
tuvimos varios puntos rosas por los que pensamos que teníamos Gram
negativo pero predominan las positivas y estaban un poco amontonadas
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