EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNOMODULADORA DE LA

“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA EN CULTIVO DE

CÉLULAS MONONUCLEARES EN SANGRE PERIFÉRICA HUMANA

MAGDA CAROLINA FULA COBOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA

MAESTRIA EN MEDICINA ALTERNATIVA – HOMEOPATIA

BOGOTA

2011

1
 EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNOMODULADORA DE LA
“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA EN CULTIVO DE
CÉLULAS MONONUCLEARES EN SANGRE PERIFÉRICA HUMANA

MAGDA CAROLINA FULA COBOS

Trabajo de Grado para obtener el título de Magister en Medicina

Alternativa con énfasis en Homeopatía

Director: Dr. Jorge Eduardo Caminos. Coordinador Departamento

Bioquímica. Facultad Medicina Universidad Nacional de Colombia.

Codirector: Dra. Gloria Casas. Magister en medicina Alternativa. Área

Homeópata. Facultad Medicina Universidad Nacional de Colombia.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA

MAESTRIA EN MEDICINA ALTERNATIVA – HOMEOPATIA

BOGOTA

2011

2
 A Dios, porque sin El
nada es posible, a mi
esposo, hija y a mis
amados padres.

3
 AGRADECIMIENTOS

Agradezco a cada uno de mis maestros, compañeros y personas que me han

acompañado a lo largo de estos 2 años de maestría, he aprendido a ver la
medicina con otros ojos, ha ser mejor profesional y persona. Muchas gracias.

4
 CONTENIDO

Pág.

1. INTRODUCCION 13

2. JUSTIFICACION 15

3. OBJETIVOS 17

3.1 OBJETIVO GENERAL 17

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 17

4. MARCO TEORICO 18

4.1 CITOQUINAS 18

4.1.2 Clasificación de las citoquinas 19

4.2 ANTECEDENTES DE INVESTIGACIÓN DE “ECHINACEA” 22

4.3 HOMEOPATÍA 23

4.3.1 Leyes de la homeopatía 23

4.4 EXPERIMENTACIÓN PATOGENÉTICA DE “ECHINACEA” 25

5 MATERIALES Y METODOS 27

5.1 PREPARACION DE LA FORMULACION HOMEOPATICA DE 27

“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA”

5.2 OBTENCION DE LAS CELULAS MONONUCLEARES DE 27

SANGRE PERIFERICA

5.2.1 Evaluación del efecto de “Echinacea angustifolia” sobre la 29

viabilidad celular de las células mononucleares de sangre
periférica de individuos sano.

5
5.2.2 Evaluación de los niveles de citoquinas en células 30
mononuclereas de sangre periférica tratadas con “Echinacea
angustifolia”.
30
5.3 ANALISIS ESTADISTICO
31
6. RESULTADOS

6.1 VIABILIDAD DE LAS CELULAS MONONUCLEARES DE

SANGRE PERIFERICA DE INDIVIDUOS SANOS AL APLICA 31
“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA”.

6.2 CUANTIFICACION DE LOS NIVELES DE LAS CITOQUINAS 31

MEDIDAS AL APLICAR “ECHINACEA ANGUSTIFOLIA”
HOMEOPATIZADA A LA 30 CH Vs CONTROL.

6.3 RESPUESTA INDIVIDUAL DE LAS CITOQUINAS EN 32

CELULAS MONONUCLEARES DE CADA PACIENTE AL
APLICAR “ECHINACEA ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA A
LA 30 CH Vs CONTROL.

7. DISCUSION 33

36
8. CONCLUSIONES
37
9. BIBLIOGRAFIA

6
 LISTA DE ANEXOS

Pag.
Anexo No 1. Consentimiento informado
41
Anexo No 2. Especificaciones del fabricante del kit “Cytokine
42
Human Panel” Invitrogen.

7
 FIGURAS
Pag.

FIGURA No 1. Efecto “in vitro” de “Echinacea”

homeopatizada a la 30 CH sobre la viabilidad de células 43
mononucleares de sangre periférica.

FIGURA No2. Efecto de “in vitro” de “ Echinacea”

homeopatizada la 30 CH sobre los niveles de citoquinas en 44
células mononucleares de sangre periférica.

FIGURA No3. Curva de calibración del equipo Luminex para

el Factor de Necrosis tumoral. 45

FIGURA No4. Respuestas individuales de las células 46

mononucleares aislada de la sangre periférica expuestas a
“Echinacea” homeopatizada a la 30 CHde los pacientes 1 a
10.

8
 TABLAS
Pag.

TABLA No1. Efecto “in vitro” de “ Echinacea” 48

homeopatizada a la 30 CH sobre la viabilidad de células
Mononucleares desangre periférica.

TABLA No2 Respuesta individual de la IL 1 β en células 49

mononucleares aislada de la sangre periférica de cada
paciente expuestas a “Echinacea” homeopatizada a la 30
CH vs control.

TABLA No3 Respuesta individual de la IL 6 en células

49
mononucleares aislada de la sangre periférica de cada
paciente expuestas a “Echinacea” homeopatizada a la 30
CH vs control.

TABLA No4 Respuesta individual de la IL 8 en células

mononucleares aislada de la sangre periférica de cada 50
paciente expuestas a “Echinacea” homeopatizada a la 30
CH vs control.

TABLA No5. Respuesta individual de la IL 10 en células

mononucleares aislada de la sangre periférica de cada
50
paciente expuestas a “Echinacea” homeopatizada a la 30
CH vs control.

9
 LISTA DE SIGLAS

CH: Centesimal Hahnemanniana

Ig: Inmunoglobulina

IL 1β Interleuquina 1β

IL 6: Interleuquina 6

IL 8: Interleuquina 8

IL10: Interleuquina 10

TNF: Factor de Necrosis Tisular

Th1: Linfocitos T Helper 1

Th2: Linfocitos T Helper 2

CMH: Complejo mayor de Inmunohistocompatibilidad.

10
 RESUMEN

EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNOMODULADORA DE LA

“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA EN CULTIVO DE
CÉLULAS MONONUCLEARES EN SANGRE PERIFÉRICA HUMANA

Introducción: La “Echinacea angustifolia”, es uno de los medicamentos

herbolarios más representativos y utilizado en todo el mundo. Se han realizado
diferentes estudios para valorar su respuesta frente al sistema inmune,
observándose que actúa sobre la mayoría de células inmunitarias, provocando
una modulación en su respuesta. Estos estudios se han realizado con
“Echinacea” como medicamento fitoterapeutico, no se han realizado estudios
en su presentación homeopática. El objetivo de este estudio es evaluar la
respuesta de el sistema inmune frente a la “Echinacea” homeopatizada.

Materiales y Métodos: La cuantificación de los niveles de las citoquinas IL1β ,

IL 6, IL 8, IL 10, FNT, se determinaron sobre células mononucleares en sangre
periférica humana tratadas con “Echinacea angustifolia” homeopátizada a la
potencia 30 CH, mediante el ensayo “Cytokine Human Panel” Invitrogen en el
equipo Luminex 200.

Resultados: Con respecto a la viabilidad celular se encontró una proliferación

de las células mononucleares de hasta un 40 % mas en comparación que el
control, esto demostró que si hay efectos mitogénicos de la “Echinacea”
homeopatizada sobre las células mononucleares, lo que puede concluir que si
hay una modulación positiva a nivel del sistema inmune comparables con su la
presentación fitoterapeutica. Los resultados del análisis de citoquinas IL1β IL
6, IL 8, IL 10, FNT, medidos en el equipo de Luminex, demostró que los
mecanismos inmonomoduladores de la “Echinacea” homeopatizada
posiblemente no están asociadas a estas citoquinas o que su estimulación se
de a otras potencias.

Conclusiones: Los resultados del estudio mostraron un efecto mitogénico a

nivel de las células mononucleares expuestas a la “Echinacea angustifolia”
homeopatizada, este estudio, deja la puerta abierta, para la realización de
nuevos proyectos.

Palabras claves: Echinacea angustifolia homeopátizada, células

mononucleares, citoquina.

11
 ABSTRACT

EVALUATION OF THE RESPONSE IMMUNOMODULATORY "ECHINACEA

ANGUSTIFOLIA" HOMEOPATHIC GROWING MONONUCLEAR CELLS IN
HUMAN PERIPHERAL BLOOD

Introduction: "Echinacea angustifolia" is one of the most representative and

herbal medicines used around the world. There have been several studies to
assess their response to the immune system, noting that most acts on immune
cells, causing a modulation in the response. These studies have been
conducted with "Echinacea" as herbal medicinal products have not been
studied in homeopathic presentation. The objective of this study is to evaluate
the immune response against the "Echinacea" homeopathic.
Materials and Methods: Quantification of the levels of cytokines IL1 β ,, IL 6,
IL 8, IL 10, TNF, were determined on peripheral blood mononuclear cells
treated with human "Echinacea angustifolia" homeopathic potency to 30 CH, by
the essay "Human Cytokine Panel" on your computer Invitrogen Luminex 200.
Results: With respect to cell viability was found mononuclear cell proliferation
up to 40% compared to the control, this showed that if the mitogenic effects of
"Echinacea" homeopathic on mononuclear cells, which can be concluded if
there is a positive modulation of the immune system level comparable with
phytotherapeutic presentation. The results of the analysis of cytokine IL1 β , IL-
6, IL 8, IL 10, TNF, measured in Luminex's team showed that the mechanisms
inmonomoduladores "Echinacea" homeopathic possibly not associated with
these cytokines or their stimulation were of other powers.
Conclusions: The results showed a mitogenic effect on the level of
mononuclear cells exposed to "Echinacea angustifolia" homeopathic, this study
opens the door for the realization of new projects.
Keywords: homeopathic Echinacea angustifolia, mononuclear cells, cytokines.

12
 1. INTRODUCCION

La medicina homeopática apareció en Europa a finales del siglo XVIII, fue

creada por el doctor Samuel Hahnemann, etimológicamente viene de las
raíces griegas homeois que equivale a semejante y pathos que equivale a
padecimiento o enfermedad (1).

La Homeopatía es un sistema medico complejo, que parte de los rasgos de la

teoría vitalista, donde, se encamina el problema de salud, desde, un enfoque
integrador, que ve al ser humano como un todo, donde, se observa, lo físico, lo
psíquico y la energía vital (1,2). Este sistema esta constituido por tres
disciplinas, la parte doctrinal, donde, se encuentra los principios teóricos de la
homeopatía dada por sus leyes, la parte semiológica donde se encuentra el
arte de interpretar los síntomas y signos del paciente encontrados dentro de la
consulta y un método terapéutico , las anteriores tres disciplinas son
interpretadas y realizadas según los criterios establecidos por su fundador el
doctor Hahnemann, en su obra el Organon y en la materia medica , estas son
propias y únicas de la medicina homeopática, lo que hacen que sea un
sistema medico único y diferente, a otros, sistemas médicos complejos (1,3).

En este estudio se va ha evaluar una sustancia de origen vegetal la “Echinacea

angustifolia”. Esta, es uno de los medicamentos herbolarios más
representativos y utilizado en todo el mundo. Se han realizado diferentes
estudios para valorar su respuesta frente al sistema inmune, observándose que
actúa sobre la mayoría de células inmunitarias, provocando una modulación en
su respuesta (4-14). Estos estudios se han realizado con “Echinacea” como
medicamento fitoterapeutico, no se han realizado estudios en su presentación
homeopática, por lo cual, se desconoce, desde, el punto de vista de la biología
molecular, si al aplicar, esta, en su presentación, como, medicamento
homeopático a una célula, en este caso, a células mononucleares, presente
algún tipo de respuesta similar a la presentada con la “Echinacea” como

13
medicamento fitoteraputico. Para poder evaluar esta respuesta se utilizaran
unas de las citoquinas mas evaluadas dentro de los estudios descritos
anteriormente (4-14).

Todo lo anterior, conlleva a preguntarse, cual será la respuesta de las

citoquinas IL1β , IL 6, IL 8, IL 10, FNT, en cultivo de células mononucleares en
sangre periférica humana al exponerse a la “Echinacea Angustifolia”
homeopatizada a la potencia 30 CH.

14
 2. JUSTIFICACION

La “Echinacea” es una de los medicamentos fitoterapeuticos tradicionales en

América, ha sido empleado durante muchos años por indígenas Norte
Americanos como un elixir para una variedad de enfermedades que incluyen
infecciones, traumatismos, inflamación, fiebre, tratamiento de resfriados y
enfermedades de tracto respiratorio superior (4).

Se ha constituido en una de las plantas medicinales de mayor importancia en

el mercado de hierbas europeas, Canadienses y Estadunidenses, está entre
las más utilizadas como medicina herbolaria o fitoterapeutica, representando un
9,9% de la industria de las hierbas medicinales. Existen tres especies
predominantemente estudiadas de “Echinacea: angustifolia, purpurea y pallida”
(4,5).

Se han realizados diversos estudios “in vitro” con células mononucleares de

origen humano y animal (4-14). Estos estudios se realizaron con las diferentes
variedades de “Echinacea” preparada de manera fitoterapeutica, para evaluar
la respuesta inmunomoduladora de estas células frente a este medicamento.
Se observo que activan la respuesta celular inespecífica, la inmunidad
humoral y el sistema de complemento, aumento de la producción y la actividad
de los leucocitos, linfocitos y monocitos, así como, de las citoquinas, entre las
cuales están, la interleuquina 1 Beta (IL-1 β), interleuquina 6 (IL- 6),
interleuquina 11 (IL -11), el interferón gamma (INF- γ) , el factor de necrosis
del tumoral (TNF). Se observó aumento la actividad fagocitaria del linfocito
citolítico natural (NK), macrófagos y neutrófilos del sistema retículo-endotelial.
Estos son algunos de los estímulos inmunomoduladores encontrados (4-14).

En los anteriores estudios se confirmó la acción inmunomoduladora de la

“Echinacea”, utilizada como medicamento fitoterapeutico. No se han
encontrado en la literatura estudios que evalúen la respuesta de las citoquinas
a la “Echinacea” utilizada como medicamento homeopatizado, por esto la
importancia de este estudio, ya que contribuirá al conocimiento de la respuesta
inmunomoduladora de la misma y al desarrollo de la investigación
homeopática, que mostrara si la “Echinacea” homeopatizada, tiene efectos
inmunomoduladores, el tipo de respuesta sobre este, si estos pueden llegar a
ser comparados con los encontrados a nivel fitoterapeutico .

15
Para este estudio, se utilizara se la potencia 30 CH, ya que esta es la potencia
utilizada por Hahnemann, para realizar los estudios de experimentación pura
como lo expresa el parágrafo 128 del Organon (3).

En este estudio, se evaluará la respuesta inmonomoduladora de la “Echinacea

angustifolia” homeopatizada a la potencia 30 CH sobre las citoquinas IL1 β,
IL 6, IL 8, IL 10, FNT en células mononucleares de sangre periférica de
pacientes sanos medida mediante el ensayo “Cytokine Human Panel”
Invitrogen en el equipo Luminex 200

16
 3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar el efecto inmunomodulador de la Echinacea angustifolia

homeopatizada a la potencia 30 CH en cultivo de células mononucleares
obtenidas de sangre periférica de pacientes sanos medida mediante el ensayo
“Cytokine Human Panel” Invitrogen en el equipo Luminex 200.

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

3.2.1. Determinar mediante el ensayo “Cytokine Human Panel” Invitrogen en

el equipo Luminex 200, el efecto en la regulación de las citoquinas
proinflamatorias (IL 1 β, IL 6, IL 8, IL 10, FNT), al utilizar Echinacea angustifolia
homeopatizada en cultivo de células mononucleares obtenidas de sangre
periférica de pacientes sanos.

3.2.2 Comparar si existe diferencia en la respuesta inmunomoduladora de la

citoquinas proinflamatorias al utilizar Echinacea angustifolia homeopatizada,
frente a los estudios ya reportados con Echinacea fitoterapeutica.

17
 4. MARCO TEÓRICO

4.1 LAS CITOQUINAS

La inflamación, es una respuesta esencial para la conservación de los

organismos frente a la agresión, por tanto la ausencia de esta puede ser
mortal (15). A su vez, La perpetuación de la inflamación es un riesgo
debido a que puede dañar el tejido y provocar necrosis celular, por esto, los
componentes de la respuesta inmunológica se aseguran de su resolución (16).
En este estudio se decidió la experimentación sobre linfocitos T, ya que estos
por medio de las citoquinas ejercen acciones muy importantes en las
respuestas inmunomoduladora.

Las citoquinas son un grupo de proteínas reguladoras. Son macromoléculas de

comunicación intercelular que intervienen en el comportamiento biológico de la
célula (15).

Las citoquinas, son importantes en la regulación y en la activación a nivel

intercelular. Inicialmente se creía que su función era solo a nivel antiviral, pero
se han ido conociendo todas sus funciones, se considera que son primordiales
para la respuesta inflamatoria innata y adaptativa, en el crecimiento y
diferenciación celular, en el proceso de apoptosis, de angiogénesis y en los
procesos de reparación (11). Tienen otras funciones importantes, en el
desarrollo de respuestas inmunes específicas, induciendo el tráfico de las
células dendríticas, los linfocitos Th1, Th2 y B en el tejido linfoide secundario
(17). Las citoquinas proporcionan un vínculo a nivel molecular entre los
diferentes sistemas, son vitales para el mantenimiento fisiológico y ofrecen
apoyo en la comunicación intercelular (11).

Las citoquinas, se unen a receptores específicos en la membrana de la célula,

esto desencadena la transducción de señales que llevan a la expresión génica
o a la proliferación de estas células. La secreción de las citoquinas, es un
suceso corto y limitado, no se almacenan, su síntesis se inicia con una
trascripción génica transitoria, una vez sintetizadas, se secretan rápidamente,
su acción es corta y pude ser autocrina , yuxtacrina o paracrina, en pocas
oportunidades puede ser endocrina; puede, actuar en diferentes tipos celulares
y provocar diferentes respuestas, esto conlleva a que pueda tener funciones
sinérgicas o antagónicas, la acción de una citoquina puede aumentar o
disminuir la expresión del receptor de si misma o de otra citoquina, lo que
constituye un elemento regulador(15).

18
Durante las reacciones inflamatorias, los leucocitos migran a través de las
paredes de los vasos sanguíneos hacia el tejido extravascular donde realizan
diferentes funciones biológicas, este proceso es controlado por citoquinas las
cuales tienen funciones muy específicas, controlando la activación de estas
células, provocando un efecto inmunomodulador en las mismas (17).

La alteración de producción de citoquinas se ha visto asociado a diferentes

enfermedades, como, trastornos neuropsiquiátricos, trastorno por déficit de
atención con hiperactividad, trastorno obsesivo-compulsivo y anorexia
nerviosa (11).

Las citoquinas también parecen desempeñar un papel en la depresión, la

esquizofrenia y la enfermedad de Alzheimer. Además de la participación en los
trastornos neuropsiquiátricos, las citoquinas tienen actividad en todos los
sistemas del cuerpo. Como resultado del creciente conocimiento de la
actividad de las citoquinas, su alteración como posible etiología de múltiples
enfermedades y de la orientación de sus receptores, se pueden encontrar en
ellas un potencial terapéutico a nivel molecular. Actualmente, hay estrategias
farmacológicas que incluyen citoquinas (11).

La utilización de las citoquinas en terapéutica se inicio en 1986 cuando la

Administración de alimentos y drogas de los Estados Unidos (FDA) aprobó el
antagonista del interferón para el tratamiento de la leucemia de células pilosas
y en el 2001, un antagonista del factor de necrosis tumoral, clave en la
patogénesis de la artritis reumatoide, esto fue descrito como uno de los
avances más importantes en el manejo de esta enfermedad. Además, la IL-1ß
y un antagonista del TNF ofrecen opciones para el tratamiento de
enfermedades periodontales. Existen, nuevos enfoque en el tratamiento del
asma, inhibiendo los linfocitos Th2, lo que disminuye la expresión de las
citoquinas, disminuyendo los niveles de producción de la inmunoglobulina E
(IgE) y los eosinofilos, estos son algunos usos actuales de las citoquinas en
diferentes enfermedades(11).

4.1.2 Clasificación de las Citoquinas.

Se clasificaran las citoquinas según su función fisiológica en la respuesta

inmune en:

- Citoquinas que median, regulan la inmunidad innata y la inflamación,

también, llamadas citoquinas proinflamatorias, aquí encontramos a:

*Interferon (INF), es un factor celular inducible, que interfiere con la capacidad

de un numero variable de virus, poseen propiedades inmunomudoladoras y

19
antiproliferativas, se dividen en: - Alfa (α), este inhibe la replicación viral,
reduce la formación de fibroblastos, monocitos y linfocito B (LB), inhibe el
crecimiento de células tumorales, aumenta la expresión de moléculas del
complejo mayor de histocompatibilidad clase uno (CMH-I) que presentan
antígenos tumorales, produce apoptosis en células tumorales, inhibe la
angiogenesis, potencia la actividad de monocito, macrófago y células NK.
*Beta (β), modula la expresión de CMH, aumenta la capacidad lítica de las
células NK, efecto antiproliferativo tumoral. *Gama (γ), es activador de
macrófagos, tiene funciones especiales en la respuesta innata y en la
adaptativa (15-17).

*Factor de necrosis tumoral Gama (FNT-γ), es una proteína no glicosilada, la

principal fuente de producción son los macrófagos, también se producen en las
células NK, neutrofilos, mastocitos, astrocitos, microglía, fibroblastos, células
de musculo liso y linfocitos T CD4, la principal función es reclutar neutrofilos y
monocitos en los focos de infección, para erradicar microorganismos, estimula
la producción de IL 1 y 6, aumenta la capacidad antimicrobiana de los
leucocitos, estimula la angiogenesis, actúa como coestimulador de los
Linfocitos T, tiene acción protectora antiviral, aumenta la expresión CMH-I y II,
promueve la proliferación de la astroglía y microglía, en infecciones severas
tiene acciones sistémicas, aumenta la síntesis de células en fase aguda, su
producción prolongada produce caquexia, en asociación con IL- 1 puede
producir alteración endotelial que desencadene coagulopatias, en alteraciones
metabólicas severas produce hipoglicemia. Actualmente se utilizan en terapias
oncológicas, en artritis reumatoidea, para el tratamiento de choque séptico
(15-17).

*Interleuquina 1 (IL-1), Existen dos formas distintas la alfa y la beta, la acción

de los dos tipos es similar, algunas de sus acciones, se realizan indirectamente
por la inducción de la síntesis de otros moléculas como la hormona
adrenocorticotropa (ACTH), prostaglandina E2, factor plaquetario 4, IL-6 y 8,
pero, la principal función es la estimulación de los linfocitos T ayudadores, en
los cuales induce la secreción de la IL-2 y la expresión de su receptor (15-17).

*Interleuquina 6 (IL-6), hay aumento de sus receptores en presencia de

infección, pero no por esto, sino como respuesta al aumento de IL-1 y FNT, sus
receptores se encuentran los linfocitos T y B, en los hepatocitos aumenta la
síntesis de varias proteínas plasmáticas y es el principal factor de crecimiento
de los linfocitos B activados, también, es coestimulador de las células T, los
timocitos y cofactor de otras citoquinas (15-17).

20
* Interleuquina 12 (IL-12), es una citoquina importante en la respuesta inmune
innata y un inductor esencial en la inmunidad celular adaptativa, estimula la
producción INF (γ), induce la diferenciación de linfocitos T CD4+ hacia Th1,
induce la síntesis IL-2 y FNT, aumenta la acción citolítica de las células NK,
aumenta la acción de múltiples factores de crecimiento de colonias (15-17).

*Interleuquina 10 (IL-10), es un inhibidor de los macrófagos activados,

interviene en el control homeostático de las reacciones de inmunidad innata y
celular, inhibe la síntesis de INF γ , IL-2, FNT  la expresión de monocitos,
coestimula la producción de mastocitos y linfocitos B en cultivo, induce la
secreción de inmonoglobulinas (15-17).

* Interleuquina 17 (IL-17), es producida por los linfocitos T CD4+, potencia la

expresión de la molécula de adhesión intracelular uno en fibroblastos humanos,
estimula las células epiteliales, endoteliales, es un mediador de la
angiogenesis, se ha observado que participa en la fisiopatología de
enfermedades inflamatorias como artritis (15-17).

- Citoquinas que median y regulan la inmunidad adaptativa, las cuales son:

*Interleuquina 2 (IL-2), es responsable de la expansión clonal de los linfocitos

T, su expresión depende de la activación completa de los linfocitos T CD4+, su
acción es selectiva dependiendo de los receptores de alta afinidad en los
linfocitos, causa proliferación de los linfocitos T, estimula la proliferación,
estimulación de las células NK y linfocitos TCD8+, promueve la apoptosis en
linfocitos T (15-17).

*Interleuquina 4 (IL-4), es importante para la producción de anticuerpos de IgE

para el desarrollo de linfocitos TCD4+ del patrón Th2, antagoniza los efectos de
activación de los macrófagos causado por el INF, promueve la diferenciación y
activación de los linfocitos B activadas, estimula la expresión molécula CMH-II
(15-17).

* Interleuquina 5 (IL-5), promueve la producción de los linfocitos Th2 y los

mastocitos, estimula el crecimiento y diferenciación de los eosinofilos, la
estimulación de la proliferación de los linfocitos B, promueve a partir de los
timiocitos la proliferación de linfocitos T(15-17).

*Interferon gama (INF-γ), inhibe la proliferación de varios tipo celulares (15-17).

21
4.2 ANTECEDENTES DE INVESTIGACION EN “ECHINACEA”

La “Echinacea”, es uno de los medicamentos fitoterapeuticos tradicionales,

mas utilizados en América. Existen tres especies predominantes de
“Echinacea: angustifolia, purpurea y pallida” (4).

Los principales metabolitos secundarios identificados en diferentes partes de la

planta incluyen alcaloides, alcamidas, polisacáridos, poliacetilenos, flavonoides,
fenilpropanoides libres, glicosilados y aceites esenciales. Las 2 especies de
“Echinacea” más cultivadas mundialmente son “Echinacea purpurea” en un
80% y “Echinacea angustifolia” en un 20% (5).

Los herbolarios utilizaban “Echinacea” para varias enfermedades, desde

alopecia hasta cáncer, su aplicación moderna es sobre todo para el apoyo
inmunológico. Hoy en día, es posiblemente el más reconocido suplemento
herbario para la prevención y tratamiento de los resfriados y la gripe (4-5).

Las diferentes especies de “Echinacea” demuestran propiedades

inmunomoduladora, parecen activar la inmunidad celular ,humoral y el sistema
de complemento, polisacáridos de la “Echinacea”, han demostrado “in vitro”,
estimular preferentemente el sistema mononuclear y estimular la liberación
de citoquinas como: IL-1 ,del mismo modo, los estudios “in vitro “ en
galactanos de “Echinaea”, han mostrado que inducen la liberación del FNT-α
en los macrófagos, en otro estudio, las glicoproteínas aisladas de la
“Echinaea pallida” mostraron una marcada respuesta inmunomoduladora,
estimulando la producción de inmonoglobulinas como la IgM y proliferación de
los linfocitos en ratones. Un estudio aleatorizado, doble ciego, observó 48
adultos participantes, del sexo femenino, durante un período de cuatro
semanas para determinar la actividad inmunológica con varias preparaciones
de “Echinacea”, frente a placebo, en los diversos preparados utilizados en el
estudio, se encontró un incrementó en la propendían, una proteína en el suero
utilizado como un marcador para evaluar la respuesta inmunológica, este
incremento fue del 21 por ciento frente a placebo en los participantes que
tomaron una combinación de extracto de “Echinacea purpurea y angustifolia”.
Los estudios clínicos han mostrado resultados mixtos en relación con
“Echinacea”, efecto sobre la reducción y la duración de síntomas asociados con
un resfriado común, influenza y otras infecciones respiratorias agudas (11).

22
También, presenta actividad antiinflamatoria, esta actividad se debe, a la
producción de prostaglandinas E2, que es un derivado de la ciclooxigenasa
uno y dos (COX- I-II), siendo estos clave en la fase inicial de la inflamación
(9).

4.3 HOMEOPATÍA

La medicina homeopática es un método terapéutico que apareció en Europa a

finales del siglo XVIII, etimológicamente viene de las raíces griegas homeois
que equivale a semejante y pathos que equivale a padecimiento o enfermedad,
esta es la base del manejo en homeopatía (1).

La medicina homeopática, es un sistema medico complejo, se basa en la

integralidad, esto se ve reflejado en el paradigma de la complejidad, este
paradigma esta sustentado en: la teoría de los sistemas, este, resalta el
carácter integrado de los sistemas biológicos que muestra la relación que tiene
las diferentes partes de un todo o unidad, la sinergia que explica, el todo es la
suma de las diferentes partes y la recursividad que explica, que un sistema a
su vez, esta compuesto por otro sistema, lo que nos da como resultado la
integralidad del ser, pilar fundamental de la homeopatía, esta teoría muestra al
ser como un todo compuesto de diferentes partes (2,18,19). Como todo
sistema complejo cuenta con 3 disciplinas que son la parte doctrinal, la
semiología y el método terapéutico (1).las cuales se explicaran a continuación.

En la parte doctrinal se encuentran sus leyes las cuales son:

1. Vitalismo o Energía vital: La fuerza vital anima al cuerpo material lo gobierna

con poder ilimitado, por medio de ella se realizan todas las funciones del
cuerpo, es la encargada de dar la armonía a todas las partes del organismo,
es inmaterial y soberana, su alteración o perturbación, provocan un estado
anormal, esta alteración solo puede ser de índole inmaterial como lo es la
fuerza vital, esta perturbación conlleva a que el organismo a presentar
síntomas morbosos, estos dan a conocer la enfermedad al observador, para
que este a su vez pueda escoger el remedio adecuado que ayude a la fuerza
vital a recuperar su armonía para así provocar de nuevo un estado de salud
(1,3).

2. Principio de semejanza: En el cual se plantea que toda sustancia que es

capaz de provocar enfermedad en un individuo sano, a su vez, es capaz de
curar enfermedades cuyos síntomas y signos sean similares a los que produce
en el individuo sano, la fuerza de los síntomas del medicamento son mayores a
los de la enfermedad, esto provoca en cada caso individual una curación
rápida, segura y radical, entonces, se observa que la energía vital alterada por

23
una enfermedad natural, al ser embargada, por la enfermedad artificial del
medicamento teniendo esta mas fuerza que la natural, provoca que la
enfermedad cese y desaparezca, estos síntomas artificiales se agotan dejando
al paciente libre de enfermedad (1,3)

3. Experimentación pura o Patogénesis: Esta es la manera en que se puede

averiguar los síntomas morbosos provocados por medicamentos en sujetos
sanos, es un camino seguro y natural de poder descubrir que cambios,
síntomas y signos individuales producen los diversos medicamentos en la
salud física y mental. Para obtener la totalidad de los elementos morbosos que
produce un medicamento se debe realizar observaciones en numerosas
personas de ambos sexos, con condiciones adecuadas y de constituciones
diferentes, solo se puede saber si los hallazgos son verdaderos si aparecen
casi siempre los mismos síntomas en casi todos los sujetos. La dosis utilizada
para esta experimentación es la trigésima potencia o 30 CH (3,20).

4. La Dosis infinitesimal: Los medicamentos homeopáticos deben ser diluidos y

dinamizados, lo cual atenúa los efectos tóxicos del medicamento y potencia
efectos curativos, así se tiene que en los medicamentos homeopáticos no se
encuentra la sustancia que le dio origen, por estar generalmente por encima de
la cuarta dilución centesimal hahnemaniana (CH), Hahnemann desarrolló
técnicas para controlar la concentración, de las sustancias para crear los
remedios homeopáticos. Primero, tomó la sustancia y la conservó en un
solvente, normalmente alcohol, las sustancias que usó fueron plantas, animales
y minerales, lo que se conoce como tintura madre, luego, tomó una gota de la
disolución y le añadió 99 gotas de alcohol puro, mezcló el líquido precipitando
el contenedor sobre una superficie dura, lo que seria la sucusión o
dinamización, se cree que la dinamización es esencial para crear un remedio
efectivo. El primer paso crea un remedio con una disolución de una parte en 10
o 100. Esta disolución será anotada por CH de centesimal, la disolución
continúa, siempre añadiendo una parte de la tintura a 99 partes de alcohol y
haciendo dinamización a cada paso. Dicho proceso realizado seis veces
conlleva a un remedio 6 CH y así sucesivamente (1,21).

5. Individualidad morbosa y medicamentosa: Cada individuo tiene una manera

individual de enfermarse, así mismo, el medicamento homeopático elegido
como tal, reúne todos los síntomas y signos clínicos que manifiesta un
individuo, siendo capaz de curar a este al incluir la totalidad sintomática (1).

6 Ley de la curación: Esta indica, la manera en que se evoluciona de la

enfermedad a la curación, entonces, la mejoría se presenta de manera
centrifuga de adentro hacia afuera, de arriba hacia abajo, aliviando a los
órganos mas importantes primero y hay una curación de síntomas de la

24
enfermedad en sentido inverso, esto quiere decir, que los últimos síntomas en
desaparecer serán los primeros que aparecieron (1,20-21).

7 Ley de acción y reacción, es el efecto que ejerce el medicamento cuando de

administra a un ser vivo, describe la acción y reacción del ser vivo al
medicamento. Todo medicamento que obra sobre la vitalidad provoca una
desarmonía en la fuerza vital y produce cierta alteración en la salud por un
periodo mas o menos largo esta es llamada la acción primaria, a esta acción la
energía vital pone oposición esta es una acción automática de conservación y
esta es la acción o reacción secundaria al medicamento (1,3)

8. Miasmas, todo ser humano esta propenso a enfermarse de cierta forma, es

el terreno que tiene el paciente que lo predispone a la enfermedad (1).

La semiología es la manera de interpretar los signos y síntomas morbosos que

expresa la energía vital en su estado anormal, para esto el medico debe
deshacerse de cualquier preconcepto observar atentamente y tratar de ser
fiel a lo real, debe permitir que el paciente exprese toda su sintomatología sin
interrumpirlo, preguntarle acerca de su régimen de vida, para poder así tratar
obtener los signos y síntomas morbosos dignos de curar, que la energía vital
quiere dar a conocer como enfermedad (1,3).

El método terapéutico, al obtener los signos y síntomas morbosos dignos de

curar, se halla la totalidad sintomática por medio de la cual la enfermedad
indica el medicamento para su alivio (3).

4.4 PATOGENESIA O EXPERIMENTACIÓN PURA DE “ECHINACEA

ANGUSTIFOLIA”

Como se había explicado anteriormente, la patogenesia de un medicamento,

es el resultado de la experimentación de este en una persona, anotando
cuidadosamente los síntomas encontrados, en el caso de la “Echinacea”
angustifolia estos son los síntomas mas representativos hallados.

*Síntomas mental: Aturdimiento en la cabeza, con irritabilidad, confusión, no

puede estudiar ni pensar, ni lo desea, está somnoliento, no puede leer,
bosteza. Lento al hablar y contestar, se irrita si lo corrigen y no tolera que lo
contradigan, depresión mental en la tarde.

*Síntomas generales: su indicación fundamental, manejo de enfermedades

infecciosas y febriles, es en septicemias toxemias, con estados adinámicos.
Mordeduras de serpientes, picaduras de insectos y sus efectos.

25
Agrava: después de comer, al anochecer, por esfuerzos físicos y mentales, por
exposición al aire frío. Mejora: acostado y en reposo, inclinado hacia adelante.

*Síntomas Particulares: Vértigo al mover la cabeza, cefalea sorda que empeora

al anochecer, con sensación de plenitud o cerebro demasiado grande, peor a
cada latido, cefalea frontal sobre los ojos a lado izquierdo, mejora al aire libre.
Cefalea en el vértex que mejora con el reposo. Cefalea en las sienes, pulsátil,
que mejora con la presión y el reposo, en región occipital siente la cabeza muy
grande. Dolor agudo profundo en el cerebro. Cefalea con oleadas periódicas de
calor a la cabeza, cara y cuello, con vértigo y postración. Los ojos duelen al leer
o mirar un objeto cercano, con lágrimas, mejora al cerrarlos, siente como
somnolencia en los ojos, sin sueño, ojos brillantes, lagrimeo por aire frío.
Obstrucción nasal que no mejora sonándose, narinas dolorosas, descarga
mucosa del lado derecho de la nariz, con dolorimiento como en carne viva y
epistaxis, secreción nasal fétida, catarro postnatal con ulceración y fetidez,
salen falsas membranas de la nariz, estornudos con cefalea frontal. Laringe
irritada, voz ronca, se la aclara constantemente y expulsa mucosidades.
Erupciones en la frente y mejillas, cosquilleó o picoteo en los labios. Neuralgias
en el maxilar superior e inferior. Grietas en labios y comisuras labiales.
Odontalgias del lado derecho. Lengua blanca de mañana con bordes rojos o
marrón, con leve ardor y cosquilleo. Mucosidades adherentes, blancas,
espumosas. Ardor de lengua con sialorrea. Boca seca en su parte posterior,
encías sangrantes, aftas, mal sabor en boca en la mañana, sabor metálico, a
pimienta. Garganta dolorida al lado izquierdo, con mucosidades y Sensación de
tenerla en carne viva, cosquilleo o picoteo u hormigueo y ardor en la garganta.
Angina ulcerosa o gangrenosa, amígdalas lívidas, púrpuras o negruzcas,
recubiertas de una falsa membrana grisácea que se extiende al orofaringe y
laringe. Difteria con expresión agónica, fiebre muy alta y pulso filiforme.
Anorexia. Deseo de agua fría. Náuseas que le impiden comer que mejora
acostado. Después de comer, se siente lleno de gases con eructos, sensación
de algo duro y grande en el estomago, eructos ácidos, ardor en estomago,
gastralgias que baja a los intestinos, seguidos de diarrea, dolor en el
hipocondrio derecho, sensación de plenitud en el abdomen, dolores
umbilicales que mejoran doblándose, dolores agudos, cortantes, en el vientre,
que aparecen y desaparecen bruscamente, dolor en la fosa ilíaca izquierda.
Apendicitis. Peritonitis. Dolores constrictivos en el vientre, seguidos por flatos
ofensivos o una deposición floja amarillenta asociada a gran agotamiento,
sangra después de defecar. Micciones frecuentes, a veces involuntarias, calor
al pasar la orina, dolor y ardor al orinar, orina pálida, copiosa, oscura, dolor en
el periné lo siente como estirado. Testículos doloridos y retraídos. Fiebre o
septicemia puerperal, con supresión de descargas y timpanismo doloroso. Flujo
mucoso al anochecer, excorianté, ofensivo. Dolor profundo en la fosa ilíaca

26
derecha. Dolor como por un cuerpo extraño en el tórax y detrás del esternón,
dolor agudo quemante retro esternal, dolor en los músculos pectorales.
Sensación de plenitud en la parte superior del tórax. Dolor en el pulmón
derecho, leves dolores o puntadas precordiales, sensación de latidos rápidos
en el corazón. Dolor en la parte superior de la espalda, en región lumbar y
sacro que empeora al agacharse. Debilidad en los miembros, dolor en el
hombro izquierdo que mejora con el reposo y el calor, dolor agudo en el brazo
izquierdo, que baja a los dedos, con sensación de falta de fuerzas, dolor agudo
en el codo izquierdo, manos frías, dolor en las muñecas y en el pulgar derecho.
Dolor en el muslo derecho, pierna derecha y cadera izquierda, pies fríos.
Sudores en la parte superior del cuerpo. Intenso prurito y ardor en la piel del
cuello. Pápulas rojas que pican, piel seca, forúnculos, abscesos, erisipelas, las
afecciones cutáneas se presenta con un estado general grave (22,23).

27
 5. MATERIALES Y MÉTODOS

5.1 PREPARACIÓN DE LA FORMULACIÓN HOMEOPÁTICA DE

“ECHINACEA ANGUSTIFOLIA”

La “Echinacea angustifolia” se prepara de acuerdo a la farmacopea

homeopática Alemana Versión 2000 (24). Método 3ª: tintura madre y diluciones
liquidas, la primera dilución decimal (D1) se hace a partir del 3 partes
(volúmenes) de Tintura Madre y 7 partes (volúmenes) de alcohol 62% (p/p). La
segunda dilución decimal (D2) se hace a partir de 1 parte de la primera dilución
decimal y 9 partes de alcohol 62% (p/p), las diluciones siguientes se producen
subsecuentemente, se emplea alcohol al 43% para elaborar las diluciones
desde la cuarta dilución (D4) en adelante.

Esta preparación fue realizada en el Laboratorio Homeopático Alemán Ltda.,

quien certifica el análisis del producto. Con certificación ISO 9001:2008

5.2 OBTENCIÓN DE LAS CÉLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE

PERIFÉRICA

Luego de obtener el obligatorio consentimiento informado por parte de los

participantes del estudio (Anexo 1). Se eligieron a 11 individuos sanos en
edades entre los 20 y 40 años de edad según criterios de inclusión
mencionados mas adelante , posterior a la obtención de la muestra de sangre
periférica, se obtuvieron células mononucleares, mediante gradientes de
densidad con Ficoll-Hypaque por centrifugación a 400g por 20 min a
temperatura ambiente. Después de esto, las células se lavaron dos veces con
medio de cultivo RPMI Invitrogen® a 300g por 10 min y la densidad celular se
calculó por conteo en cámara de Neubauer, utilizando la siguiente fórmula:

Numero de células = X/4 (fd) (V) (D)

X/4= promedio de células en 4 cuadrantes de la cámara de Neubauer

fd= factor de dilución Azul Tripan/suspensión celular
V = 10.000 volumen de la cámara de Neubauer
D = volumen en el que se encuentra la suspensión celular.

28
5.2.1. Evaluación del efecto de “Echinacea angustifolia” sobre la viabilidad
celular de células mononucleares de sangre periférica de individuos sanos.

Para poder determinar el efecto de la “Echinacea angustifolia” sobre la

viabilidad celular, las células mononucleares fueron utilizadas inmediatamente
después de ser aisladas y se mantuvieron en incubadora a 37ºC con 5% de
CO2 en medio de cultivo celular RPMI suplementado con 10% de suero
autólogo, 1% de aminoácidos no esenciales y 1% de penicilina/estreptomicina.

La evaluación de la toxicidad de “Echinacea angustifolia” se realizó en cajas de

cultivo de 96 pozos en los cuales se sembraron 1x105 células/pozo en un
volumen total de 150µl de medio RPMI suplementado. Las células se
sembraron por triplicado, para cada dilución y dosis de compuesto, y se
utilizaron 6 pozos sin adición del compuesto “pozos control” para cada dilución
y dosis. El tratamiento con “Echinacea angustifolia” se llevó a cabo
adicionando las dosis de 2, 4, 6, 8, 10,12 y 14 µl, de la dilución 30 CH.

Se evaluó la viabilidad celular a las 48 y 72 horas de tratamiento por el método

colorimétrico de MTT. Para esto, una vez cumplido el tiempo, el medio de
cultivo fue retirado de cada pozo y se adicionó 100µl de la solución de MTT
preparada en medio de cultivo RPMI sin suero y las células fueron incubadas
por 4 horas a 37ºC. Cumplido este tiempo de incubación se retiró el MTT de
los pozos, y los cristales de formazan generados por las células vivas fueron
disueltos adicionando a los pozos 100µl de dimetilsulfóxido DMSO e incubación
en oscuridad por 15 minutos. Se obtuvieron lecturas de absorbancia a 595nm
en un lector de placas Humareader utilizando como blanco 3 pozos con el
disolvente DMSO.

Los resultados de viabilidad se expresaron como porcentaje (%) de células

vivas, según la siguiente relación:

% de viabilidad = Absorbancia de las células tratadas x100

Absorbancia de las células control
La curva dosis respuesta se calculó teniendo en cuenta el rango de diluciones y
dosis utilizadas y el porcentaje de reducción o aumento del crecimiento celular
correspondiente. A partir de ello se determinaron las diluciones que produjeron
la reducción de la viabilidad celular, y se escogió la dosis y tiempo para el
análisis de citoquinas por Elisa.

29
5.2.2. Evaluación de los niveles de citoquinas en células mononucleares de
sangre periférica tratadas con “Echinacea angustifolia”.

Para evaluar los niveles citoquinas en células mononucleares de sangre

periférica tratadas con “Echinacea angustifolia” homeopatizada, se utilizaron
once voluntarios sanos que cumplieron con los criterios de inclusión:

- Personas que no presentaran enfermedades virales, bacterianas o

inmunosuprimidos.
- Personas que no estuvieran recibiendo algún tipo de tratamiento
alopático u homeopático.
- Personas que tuvieran en su muestra el número de células
mononucleares necesarias para el estudio.
- Personas que aprueben el estudio, que luego de leer y entender
posibles complicaciones de toma y los requerimientos del estudio, estén
de acuerdo firmando el consentimiento informado.

Los voluntarios sanos que cumplieron con los criterios de inclusión antes
descritos, se les toma datos personales y la muestra de sangre periférica. A 10
de estas muestras se les expuso al medicamento y una de las onces muestras
fue tomada como control a la cual no se expuso a ninguna sustancia.
La cuantificación de los niveles de citoquinas se determinaron sobre las células
mononucleares tratadas con “Echinacea angustifolia” homeopátizada con la
dosis seleccionada y la potencia escogida la 30 CH previamente
succusionada, mediante el ensayo “Cytokine Human Panel” Invitrogen en el
equipo Luminex 200. Donde se eligieron de este kit la medición de la IL 1β,
IL 6, IL 8, IL 10, FNT ya que son las citoquinas proinflamatorias más medidas
en los estudios realizados con “Echinacea” en presentación fitoterapeutica.
Para esto se siguieron las especificaciones del fabricante (Anexo 2).

5.3 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Se calcularon las medias y las desviaciones estándar para cada citoquina

analizada en cada uno de los pacientes. Se realizó análisis de varianza Anova
para hallar diferencias entre las citoquinas analizadas y sus respectivos
controles seguidos por una test de Bonferroni.

30
 6. RESULTADOS.

6.1 VIABILIDAD DE LAS CÉLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE

PERIFÉRICA DE INDIVIDUOS SANOS AL APLICAR “ECHINACEA
ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA A LA 30 CH.
La viabilidad “Echinacea angustifolia” se llevó a cabo adicionando las dosis de
2, 4, 6, 8, 10, 12 y 14 µl de la preparación a potencia 30 CH previamente
sucuccionada, dando como resultado en las diferentes dosis un efecto
proliferativo, que alcanza en su dosis 14 µl una proliferación del 40.9 % con
referencia al control (Tabla No 1) por lo cual se decidió realizar el experimento
a esta dosis, ya que fue la que provoco mayor proliferación celular. Estos
resultados encontrados en la medición de la viabilidad celular demuestra que
la “Echinacea angustifolia” a la 30 CH provoca en las células mononucleares
un efecto mitogeníco, ya que conlleva a proliferación de las mismas (Figura
No1). Estos resultados, también, dejan ver que el medicamento a lo largo de
las diferentes dosis aplicadas a la células mononucleares no provoco ningún
tipo de toxicidad, lo que da ha entender que la “Echinacea angustifolia” a la 30
CH no tiene efectos tóxicos sobre las células.

Otro conclusión del resultado de la viabilidad, es que sustancias disueltos mas

allá del numero de Avogadro si presenta en sus compuestos parte del
medicamento, ya que en la viabilidad si se observa una diferencia en el
crecimiento celular entre las células expuestas a la “Echinacea angustifolia” a
la 30 CH previamente succionada y el control, lo que ayuda a entender y
respalda la ley de la dosis infinitesimal, porque si no fuese así, los resultados
deberían ser iguales o muy similares.

6.2 CUANTIFICACIÓN DE LOS NIVELES DE LAS CITOQUINAS MEDIDAS

AL APLICAR “ECHINACEA ANGUSTIFOLIA” HOMEOPATIZADA A LA 30 CH
VS CONTROL.
La cuantificación de los niveles de las citoquinas IL 1β, IL6, IL 8, IL 10, FNT se
determinaron sobre las células mononucleares tratadas con “Echinacea
angustifolia” homeopátizada a 30 CH previamente succusionada vs el control
que no presenta exposición a ninguna sustancia, esto fue medido, por medio el
ensayo “Cytokine Human Panel” Invitrogen en el equipo Luminex 200. Dando
como resultado en todas las interleuquinas expuestas a medicamento vs
control, diferencias no significativas (P>0.05) como lo muestra la Figura No 2.
En cuanto al FNT presento reportes por encima del reporte de curva de

31
calibración del equipo Luminex por lo cual no pudo ser tomado en cuenta esto
se muestra en la Figura No 3.

6.3 RESPUESTA INDIVIDUAL DE LAS CITOQUINAS EN CÉLULAS

MONONUCLEARES DE CADA PACIENTE AL APLICAR ECHINACEA
ANGUSTIFOLIA HOMEOPATIZADA A LA 30 CH VS CONTROL.
En la cuantificación de los niveles de las citoquinas IL 1β, IL6, IL 8, IL 10, FNT
expuestas a la “Echinacea angustifolia” homeopátizada a 30 CH previamente
succusionada vs el control, se evaluó, dentro del estudio, la posibilidad de,
diferentes respuestas de las citoquinas, de cada uno de los 10 pacientes
evaluados vs el paciente control, para investigar si hay respuestas individuales
en cada muestra de células mononucleares aislada de la sangre periférica, en
la figura No 4 y en las tablas No 2 al 5, se puede ver que la respuesta en los
diferentes pacientes, incluyendo al control es muy similar lo que da diferencias
no significativas (P>0.05), exceptuando el paciente numero 3 y en menor
proporción el paciente numero 10 donde se observa una respuesta elevada de
la IL6 con respecto al control. Pero en general, no hubo una diferencia
significativa e individualizadora entre pacientes y tampoco, comparándose con
el control.

32
 7. DISCUSION

La inmunología, se ha convertido en un puente, entre, la medicina homeopática

y la alopática, ya que, en la inmunología, es mas, fácil aplicar la leyes de la
homeopatía, tal como es, el caso de la ley de la similitud y la de la dosis
infinitesimal, es por esto, que el campo de la inmunología ha sido un buen
terreno para el estudio de la homeopatía. En el campo científico, se
encuentran, diversos estudios, que evalúan, la respuesta de células
inmunológicas de la sangre frente a diferentes medicamentos homeopáticos
(23-26). Una, de las células estudiadas son, las mononucleares, debido a, que
estas, se prestan para realizar estudios “invitro”, para evaluar las respuestas de
las células inflamatorias, por esto, se escogió este tipo de células para este
estudio. En los objetivos, de esta investigación, se tenia diferentes
expectativas, una de estas era evaluar si, la “Echinacea angustifolia”
homeopatizada a la 30 CH, presentaba un efecto inmunomodulador en las
citoquinas proinflamatoria y otro, si este efecto podría ser comparable o similar
al presentado en estudios realizados con “Echinacea” en presentación
fitoterapeutica.

Se observo, en la viabilidad, realizada a las células mononucleareas, frente a

la aplicación del medicamento homeopático a diferentes dosis, una
proliferación de hasta 40 % con referencia al control, lo que indicaría que la
“Echinacea angustifolia” a la 30 CH presenta una respuesta mitogénica, al
promover una proliferación a nivel de las células mononucleares. Lo que
confirmaría que su uso en cuadros infecciosos, esta indicado, como se refiere
en diferentes materias medicas (22,23). Este resultado comprueba, que si
hay, un efecto modulador sobre el sistema inmune, específicamente sobre
las células mononucleares y que este puede, equipararse a lo visto con el
medicamento en presentación fitoterapeutica.

En el estudio con el kit de citoquinas, medidas por medio del equipo de

Luminex, se encontró una diferencia no significativa, entre las citoquinas
expuestas al medicamento homeopático y el control, esto se puede deber a
varios factores, el primero puede ser la potencia a la que se dio. Aunque, se
eligió la potencia 30 CH para la realización de este estudio, porque, fue la que
utilizo Hahnemann para efectuar la patogenesia, tal vez, a esta potencia las
citoquinas no presentan activación, pero, como se había comentado
anteriormente, en la literatura no hay evidencia de estudios similares con
“Echinacea” en presentación homeopática, por lo cual, no se pueda realizar
una comparación de este resultado, pero, se puede llegar a la hipótesis, de que
tal vez, a potencias mas elevadas, de hecho al utilizar otras escalas, como la

33
milesimal, es posible que se encuentren resultados significativos, esto da pie a
nuevas investigaciones en el futuro que puedan llegar a aclarar esta hipótesis.

Otra opción, pude ser, que los mecanismos inmonomoduladores de la

“Echinacea” Homeopatizada no estén asociados a estas citoquinas y por lo
cual estas no sean sensibles a este medicamento. En un estudio realizado con
el cadmio en presentación homeopática a diluciones 15 y 20 CH expuesto
sobre células cancerígenas y sobre linfocitos primarios se encontraron una
respuesta de los linfocitos T, mientras ninguna respuesta sobre las células
cancerígenas, esto se interpreto como una diferente sensibilidad frente al
medicamento (29),esto podría ser lo que sucedió en el estudio actual, que no
hay una suficiente sensibilidad de las citoquinas expuestas a la “Echinacea”
homeopatizada, esta podría ser otra hipótesis que explique los resultados de
esta investigación.

Por otro lado, se podría llegar a creer que el tipo de técnica utilizado para este
estudio no es el mas indicado, en la literatura se ha encontrado variedad de
técnicas utilizadas, todas con diferentes resultados, actualmente, no se ha
llegado a determinar, cual es, el mejor sistema de prueba, para la realización
de los experimentos en homeopatía (30), como tal, no habría un fundamento
claro para confirmar o descartar esta posible hipótesis, de ahí, la importancia
que hay hoy en día, de definir métodos únicos para realización de los estudios
experimentales en homeopatía, para que así, estos mismos, puedan tener la
posibilidad de ser repetidos, hallando la misma respuesta, que es uno de los
grandes problemas que se tienen actualmente, para dar confiabilidad a los
resultados encontrados en la investigación homeopática (31).

Otro resultado que se evaluó, fue la respuesta de las células mononucleares de

cada paciente, lo que ayudaría a evaluar la ley de la individualidad, al observar
las graficas se observa que la mayoría de respuestas son similares, pero, en 2
de los 10 pacientes, se observo una diferencia, en el paciente 3 y 10, se
observo una respuesta de la IL 6 al medicamento, esto puede ser interpretado
como una respuesta individual del paciente frente al medicamento, aunque no
es significativo, es posible que en estudios posteriores con potencias mas
elevadas, estas, respuestas individuales al medicamento sean mas evidentes y
desde el punto de vista molecular se pueda corroborar esta ley de la
homeopatía.

En la viabilidad de las células mononucleares frente a la “Echinacea

angustifolia”, se observo como se había dicho anteriormente una proliferación
de la células, lo que no solo demuestra que, si ejerce un efecto mitogénico y
modulador, sino, que corrobora que a pesar de que la potencia que utilizamos
esta mas allá del numero de Avogadro que se sobrepasa luego de la potencia

34
12 CH, hay un efecto diferente al control, lo que demuestra desde el punto de
vista molecular, que si hay medicamento a pesar de la dilución de este, lo que
sustenta la veracidad de la ley de la dosis infinitesimal, esta ha sido
corroborada en otros estudios, entre estos, esta el de Secale cornutum a la 30
CH, utilizado para el manejo de cáncer de piel, donde, quieren evaluar la
respuesta histológica del papiloma DMBA inducida en ratones, al exponerse a
un medicamento que a pesar de que se supera el numero de Avogadro y que
supuestamente, ya no se encuentra ninguna partícula del medicamento
original, encontrándose una reducción en la incidencia del papiloma(32). En la
revisión sistemática de modelos animales y altas diluciones, realizada por
Bonamin y Endler, donde se escogieron 31 artículos, da como una de las
conclusiones, la efectividad de los medicamentos altamente diluidos (33).

Otro punto importante que aporta la viabilidad es que dejan ver que el
medicamento a lo largo de las diferentes dosis aplicadas a la células
mononucleares no provoco ningún tipo de toxicidad.

35
 8. CONCLUSIONES

Los resultados del estudio en cuanto a lo observado en la viabilidad son

positivos, porque muestran que si hay un efecto mitogénico de la”Echinacea”
homeopatizada sobre las células mononucleares, lo que confirma que
presenta una respuesta moduladora sobre el sistema inmune, lo que
demuestra que su uso en infecciones es adecuado.

Desde el punto de vista de doctrina homeopática, corrobora la ley de dosis

infinitesimal. También, muestra que la ”Echinacea” homeopatizada no
presenta toxicidad.

Dentro de la discusión, se deja planteadas diferentes hipótesis, que dejan la

puerta abierta, para la realización de nuevos proyectos a base de este, para
valorara las diferentes inquietudes e hipótesis, que se presentaron en los
resultados de este estudio y siga aportando nuevos conocimientos desde la
biología molecular a la medicina homeopática del siglo veintiuno.

Este tipo de estudio, promueve y estimula la investigación en homeopatía, esto

es muy importante, para que la homeopatía como ciencia medica se continúe
actualizando y se corrobore desde el punto científico su viabilidad y eficacia,
cuestionada hoy en día por la medicina alopática.

36
 9. BIBLIOGRAFÍA

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40
 ANEXOS

Anexo No 1. Consentimiento informado.

Consentimiento informado

Fecha:

Un grupo de investigadores de la Universidad Nacional de Colombia se

encuentra desarrollando un proyecto de investigación con el propósito de
determinar la acción de medicamentos homeopáticos sobre células
mononuclares de humanos.

Para poder efectuar la medición es necesario obtener una muestra de sangre

de donantes voluntarios. A partir de dicha muestra se obtendrán células
mononucleares que serán expuestos al medicamento homeopático. Una vez se
realicen y registren las observaciones no se utilizaran con ningún otro
propósito.

La participación en el estudio es voluntaria y usted puede elegir retirarse en

cualquier momento. La información recolectada, será archivada garantizando
la confidencialidad de la identidad de cada participante, las conclusiones
derivadas de la investigación; podrán ser enviadas a una publicación científica
o expuestas ante la comunidad médica.

Los riesgos y efectos adversos del procedimiento de punción venosa son: Dolor
generalmente mínimo mientras se realiza la punción, hematoma en sitio de
punción, venoflebitis, infección en sitio de punción.

Queda constancia de que el voluntario ha entiende lo anteriormente expuesto

y acepta participar libre y voluntariamente en el estudio.

Nombre________________________Firma____________________________
__CC_________________Tel _______________________

41
Anexo No2. Especificaciones del fabricante del kit “Cytokine Human

Panel” Invitrogen.

Especificaciones generales

Marca: Luminex ®

Marcador: GRO-α, eotaxina, MCP-2, MCP-3, RANTES, IP-10, MIP-1β, MCP-1,

MIG, MIP-1α

Sistema: Luminex ®

Especie: Humano

Plataforma: Luminex ®

Bolas Tipo: Poliestireno

Bolas Región: Ver prospecto del producto

Sensibilidad: Ver prospecto del producto

Tamaño del producto: 100 pruebas

Proteínas de la familia: Quimiocinas

Lectura de la enzima: RPE

Método de detección: Fluorescente

Investigación Categoría: inmunología

Tipo de muestra (específico): Suero, plasma,

Sobrenadantes de cultivo celular

Contenido y almacenamiento :Premezclado contiene perlas recubiertas de

anticuerpos de captura, de serie, el anticuerpo detector premezclado,

diluyentes, concentrado de SAV, tampones, la solución de lavado, filtro de

placas, el protocolo completo y la hoja de muchos datos técnicos específicos.

Conservar a 2-8 º

42
 FIGURAS

Figura No 1. Efecto “in vitro” de “Echinacea” homeopatizada a la 30 CH

sobre la viabilidad de células mononucleares de sangre periférica.

Equinacea
160
140
120
proliferacion

100
80
60
Equinacea
40
20
0
2µl 4 µl 6 µl 8 µl 10 µl 12 µl 14 µl Control

dosis

Equinacea
160
140
120
Título del eje

100
80
60
40
20
0
2µl 4 µl 6 µl 8 µl 10 µl 12 µl 14 µl Control

43
FIGURA No2. Efecto de “in vitro” “Equinacea” homeopatizada a la 30
CH sobre los niveles de citoquinas en células mononucleares de sangre
periférica.

1000000,00

100000,00

10000,00

1000,00 Equinacea 30CH

Control

100,00

10,00

1,00
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6

44
FIGURA [Link] de calibración del equipo Luminex para el Factor de
Necrosis tumoral.

45
FIGURA No4. Respuestas individuales de las células mononucleares
aislada de la sangre periférica expuestas a “Echinacea”” homeopatizada
a la 30 CH de los pacientes 1 a 10

1000000,00 1000000,00

100000,00 100000,00

10000,00 10000,00

1000,00 1000,00

100,00 100,00

10,00 10,00
1,00 1,00
IL-10 IL-8
IL IL-1B IL-6 IL-10 IL-8 IL-1B IL-6
IL
P1 P2

1000000,00
1000000,00
100000,00
100000,00
10000,00 10000,00

1000,00 1000,00

100,00 100,00
10,00 10,00
1,00
1,00
IL-10 IL-8
IL IL-1B IL-6
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6
IL
P3 P4

1000000,00
1000000,00
100000,00
100000,00
10000,00
10000,00
1000,00
1000,00
100,00 100,00
10,00 10,00

1,00 1,00
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6 IL-10 IL-8 IL
IL-1B IL-6
P5 P6

46
 1000000,00
100000,00
100000,00
10000,00 10000,00

1000,00 1000,00

100,00 100,00
10,00 10,00
1,00
1,00
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6
P7 P8

100000,00 1000000,00
10000,00 100000,00
10000,00
1000,00
1000,00
100,00
100,00
10,00 10,00
1,00 1,00
IL-10 IL-8 IL-1B IL-6 IL-10 IL-8 IL-1B IL-6
P9 P10

47
 TABLAS

TABLA No1. Efecto “in vitro” de “Echinacea” homeopatizada a la 30 CH

Sobre la viabilidad de celulas mononucleares de sangre periférica.

DOSIS ECHINACEA
2µl 116,096334

4 µl 114,748542

6 µl 109,265838

8 µl 112,687399

10 µl 108,835513

12 µl 120,544784

14 µl 140,910014

CONTROL 100

48
TABLA No2. Respuesta individual de la IL 1 β en células mononucleares
aislada de la sangre periférica de cada paciente expuestas a “Echinacea”
homeopatizada a la 30 CH vs control.

PACIENTES IL 1 β CONTROL DIFERENCIA 95% CI OF DIF

1.000 21976 8200 -13776 -31271 to 3719
2.000 7304 8200 896,1 -16599 to 18392
3.000 8200 8200 0 -17495 to 17495
4.000 7285 10862 3577 -13918 to 21072
5.000 3605 3732 127,6 -17368 to 17623
6.000 9062 5764 -3298 -20793 to 14198
7.000 2093 1606 -486,9 -17982 to 17009
8.000 2909 2731 -178,3 -17674 to 17317
9.000 2067 1553 -514,5 -18010 to 16981
10.00 7972 3425 -4547 -22043 to 12948

TABLA No 3 Respuesta individual de la IL6 en células mononucleares

aislada de la sangre periférica de cada paciente expuestas a “Echinacea”
homeopatizada a la 30 CH vs control.

PACIENTES IL-6 CONTROL DIFERENCIA 95% CI OF DIF

1.000 862956 625765 -237192 -1,104e+006 to 629896

2.000 166704 230206 63502 -803586 to 930589

3.000 755737 336,8 -755400 -1,622e+006 to 111688

4.000 277058 205253 -71805 -938892 to 795283

5.000 140195 80469 -59726 -926813 to 807362

6.000 370022 174181 -195842 -1,063e+006 to 671246

7.000 105550 80469 -25081 -892169 to 842007

8.000 79145 80469 1324 -865764 to 868412

9.000 80469 80469 0 -867088 to 867088

10.00 188257 70072 -118186 -985273 to 748902

49
TABLA No4. Respuesta individual de la IL 8 en células mononucleares
aislada de la sangre periférica de cada paciente expuestas a “Echinacea”
homeopatizada a la 30 CH vs control.

PACIENTES IL-8 CONTROL DIFERENCIA 95% CI of DIF

1.000 113,1 171,9 58,79 -163,2 to 280,8

2.000 171,9 171,9 -0,009995 -222,0 to 222,0

3.000 171,9 110,6 -61,28 -283,3 to 160,7

4.000 171,2 46,78 -124,4 -346,4 to 97,56

5.000 54,15 106,3 52,12 -169,9 to 274,1

6.000 58,97 103,1 44,09 -177,9 to 266,1

7.000 171,9 171,9 -0,03 -222,0 to 222,0

8.000 102,5 171,9 69,39 -152,6 to 291,4

9.000 42,68 27,55 -15,13 -237,1 to 206,9

10.00 171,9 158,1 -13,79 -235,8 to 208,2

TABLA No5. Respuesta individual de la IL 10 en células mononucleares

aislada de la sangre periférica de cada paciente expuestas a “Echinacea”
homeopatizada a la 30 CH vs control.

PACEINTES IL-10 CONTROL DIFERENCIA 95% CI of DIF

1.000 100503 34776 -65728 -141272 to 9817

2.000 92973 98537 5564 -69980 to 81109

3.000 97573 96542 -1032 -76576 to 74512

4.000 94161 94291 129,8 -75415 to 75674

5.000 92447 91029 -1418 -76962 to 74126

6.000 97835 93903 -3933 -79477 to 71612

7.000 81602 75844 -5758 -81303 to 69786

8.000 90922 89401 -1521 -77065 to 74023

9.000 86120 83586 -2534 -78078 to 73010

10.00 93709 88027 -5682 -81226 to 69862

50