Microbiología BÁSICA

El laboratorio de microbiología es fundamental para la detección de agentes

infecciosos que pueden causar enfermedades, este debe trabajar clasificando la
naturaleza específica del microorganismo para orientar la terapia adecuada.
Métodos de estudio de los microorganismos:
Aislamiento y técnica de cultivo
Inocula en un medio que contenga factores nutritivos y ambientales para el
desarrollo in vitro de microorganismos, lo que nos permite identificar al
microorganismo aislado y realizar estudios de sensibilidad o susceptibilidad.
Cultivo Bacteriano (medio inerte): secuencia diagnostica
-Identificar género y especie, por medio de métodos analítico basado en la reacción
(antígeno-anticuerpo)
*Antígeno: estructuras químicas diferentes, ácidos nucleicos, lípidos, polisacáridos,
etc.

*Anticuerpo: proteína.
DOMINIOS (microorganismos)
Archaea / Eukarya / Bacterias
Los microorganismo se nombran según:
Taxonomía

Grupo taxonómico Sufijo

Familia ALES
Género ACEAE
Especie EAE

Tamaño de las Bacterias

Se caracteriza que los microorganismo más
grandes no causan enfermedades en
comparacion a los microorganismo
pequeño que se asoscian a patogenos
(virus y bacterias).
Las bacterias se miden en um y los virus en
nm, el virus más gandre mide aprox. 230 x
320nm (Poxvirus y el más pequeño 27nm
virus de la piomielitis).
0.2-2um diametro x 2-8um largo
Formas bacterianas

Agrupaciones bacterianas en Gram positivas

Cocáceas en diplo

Cocáceas en cadena (Streptococus)

Cocáceas en tétradas

Cocáceas en racimo (Stafilococus)

Gram negativas “granos de caf

Bacilos Gram positivos

“Letras chinas” (Corynebacterium)

Bacilos Gram negativos (sin ninguna agrupación)

Composición química básica de la célula
● >95% de macromoléculas (la mitad son proteínas).
● Proporción de ARN superior que en eucariotas (porque hay muchos
ribosomas).
● Macromoléculas exclusivas que no existen en eucariotas:
○ Peptidoglicano.
○ Lipopolisacárido (en Gram-negativas).
● Carece de esteroles (salvo exclusivamente las bacterias micoplasmiscas
que tienen colesterol)

●
● Presentan Hopanoides en vez de colesterol (son moléculas similares),
estos confieren parte de la rigidez a la membrana.

Proton Motriz
Funciones de la membrana citoplásmatica
procariota
● Secreción de proteínas y otras
moléculas (desechos).
● Interviene en procesos metabólicos y
de biosíntesis.
● Barrera osmótica.

● Límite entre el protoplasto y el medio

● Anclaje de recertores (Receptores
que notan cambiosàquimiotaxisà la bacteria se mueve para conseguir
nutrientes y se aaleja de cosas que la pueden dañar).
 ○ Ácidos teicoicos: polímeros de ribitol-P, con OH sustituidos por
azúcares aminoacidos o D-alanina unidos a NAM. (Antígeno O).
○ Ácidos teicurónicos (ausencia de P).
○ Ácidos lipoteicoicos unidos a las MC.

-Compuesta por 60% de

proteínas y 40% de
lipopolisacáridos.

-La membrana se subdivide en

dos, la membrana externa que
contiene lipopolisacáridos
(compuesto por Lípido A unido a
polisacáridos y a estos se les une
el antígeno. somático “O”) y la
externa que contiene a los
fosfolípidos. La membrana
externa se une por medio de Lipoproteínas de Brown al peptidoglicano.
 La función de los LPS (lopopolisacáridos)
● Región del lípido A: endotoxina.
● El macrófago reconoce el LPS y libera toxinas, activa respuesta
inmune.
● A veces el sistema inmune se libera en “exceso”, endotóxica porque el
lípido A es parte de la berrera por lo
cual las toxinas no salen.

-Protoplastos: célula bacteriana sin

peptidoglicano.
-Esferoplastos: Células bacterianas
con restos de peptidoglicano
(pérdida parcial).
-Lysozyma rompe el enlace b(1.4).

Fimbrias adhesivas

- Permiten adhesión a sustratos, formando

micro-colonias y velos, adehesión a
superficies inertes y vivas.

- La fimbria es un factor de virulencia en

las bacterias patogenas (ej. Placa dental,
E. coli uropatógeno (fibrina P)).
Codificación cromosómica.

Fenómenos de variación de fase, fenotipo Fim+Fim- reprime el gen

Fenotipo de variación antigénica, DNA—ARN *resistencia evade el s. inmune* varia
la pilina
Adhesión a superficie ejemplo E. coli mecanismo para aderirse al epitelio del
intestino.
Pili sexual (se encuentran en menor cantidad)
No difieren para reproducirse
Codificación plasmídica, pili conjugativo
Son receptores para fagos; virus son capaces de infectar a las
bacterias

Flagelos
Es más largo que el cuerpo de la
bacteria
Contiene la proteína del filamento:
flagelina AgH
El movimiento es conferido por el
motor en el corpúsculo basal, la
energía proviene del gradiente de
protones (fuerza protón motriz).

Patrón de flagelación (cantidad)

Monótricas: un flagelo
Lofótricas: dos o más flagelos
Anfítricas: uno cada polo
Perítricas: alrededor del cuerpo

Mecanismo de movimiento, este puede ser causado por un atrayente o repelente.

CAR en línea recta (en contra de las agujas del reloj)
AR giros o volteretas (sentido de las agujas del reloj)
Glucocálix. Cápsula y capa mucosa o slime
-Está compuesta por polisacáridos a excepción de los Bacillus poli que está
compuesto de polipéptido, son rígidas e impermeables
Constituyen el antigenos cápsula K
Sus funciones son adhesión a sustratos vivos o inertes, protección contra agentes
fagositicos y bacterianos (factor de virulencia).
Esporas realizan esporulación

Endospora metabolismo en estado de reposo, forma evolutiva de supervivencia

 ● Son entidades biologicas que existen en el limite de lo vivo y lo no vivo, no
tienen organelos por lo cual son considerados microorganismos simples
pero a la vez complejos.

●
● Sus genomas (DNA o RNA, pero nunca juntos) se replican dentro de las
células vivas ya que necesitan algunas enzimas para completar el
proceso.
● Son parásitos intracelulares obligados, pueden infectar a todo tipo de
células.
● Son específicos para distintos tipos celulares.Ej: VIH Linfocito tiene el
receptor específico.

Composición de los virus, se dividen en dos tipos:

Envoltura: los fosfolípidos los obtiene de la célula infectada (hopedera) y las
glicoproteínas por el virus.
Cápside: protege el genoma viral de endonucleasas del hospedero, tienen tres tipos
de simetría helicoidal, icosaédrica o compleja.
● Composición química de los virus:
ácidos nucleicos, proteínas, lípidos y
carbohidratos (solamente presente en los que
presentan envoltura).
● Genoma viral: los genes que
pueden codificar; pocas proteínas ejemplos
Polymavirus 4 proteínas 6-7 genes 5Kb (100
pares de base nitrogenadas equivalen a
1Kb).

○ El virus se une por puentes de hidrógeno con el receptor en la célula

huésped.
○ El receptor en el caso de los bacteriofagos son las fimbrias, flagelo y
pared celular de las bacterias.

Clasificación del genoma viral

Los virus pueden discriminar a que células infectar ya sea células únicamente
humanas o animales, este proceso se le denomina rango de hospederos.
Métodos de diagnósticos para los virus
● Cultivo de esporas:
○ Efecto citopático (después
de ser infectada), se identifica con fluorescencia
detectando la presencia de anticuerpos.
● Algunas técnicas de
reconocimiento son EIA, inmunofluorescencia,
wertnblot antígeno o anticuerpos directa o
indirectamente.
 ● Se encuentran en el ambiente, son oportunistas, infectan a personas con
el sistema inmune deprimido o suprimido.
● El crecimiento del hongo es radial.
● Keratofinicas, utilizan la keratina como nutriente.
● Son cosmopolitas (crecen en diversos ambientes).
● Son aerobios o facultativos, requieren O2 y CO2 para crecer.
● Son heterótrofos.
Se clasifican en:
Superiores

Inferiores

También se dividen según:

● Macroscópia -setas
● Microscopia -levaduras
-mohos
-hongos dimórficos (crecen dependiendo de la Tº)
Estructura de los hongos:
● La pared celular es rígida porque contiene
quitina.
● La membrana presenta ergosterol.
● Se dividen en unicelulares (levaduras, candida) y
pluricelulares (hongos filamentosos).
● Son quimioheterótrofos que obtienen su
alimento por medio de reacciones químicas.
● Se pueden reproducir de manera sexual
(telemorfo) o asexual (anamorfo).
● Los hongos no realizan fotosíntesis.
Levaduras (hongos unicelulares)
● Esféricas, ovóides o alargadas.
● Las más importantes son las Candida spp.
● Reproducción por brote.
● Núcleo cercano al brote.
● Identificación por características metabólicas o bioquímicas.

Tubo germinativo Pseudo hifa (estrangulaciones)

Hongos filamentosos (mohos)
● Las Hifas se
dividen según el color,
tamaño, si son septadas
o no (cenótico).
● Micelio o talo son
un conjunto de hifas,
puede ser reproductivo,
aéreo y vegetativo.
● Aerobios
obligados.
Las hifas septadas se subdividen en:
● Hialinas claras-blancas (reverso)
● Dematiaceos negras-oscuras (reverso)

Micelio reproductivo o aéreo

micelio vegetativo o de
nutrición

Estructura de los Poros

● Los poros ayudan a cerrar el paso para las

sustancias tóxicas o permitir el paso de
nutrientes.
poro simple, cuerpos de woronin, parentosoma

Agregaciones miceliales

Esclerocio: Reservas,
resistencia
Picnidio: Asexual, hueco,
interior cubierto de
conidioforos
Coremio: micelio
reproductivo
Estructuras de reproducción
Esporas: Teleomorfo o sexual
-Plasmogamia
-Cariogamia
-Meiosis

Ascoesporas,
Basidioesporas, Zigosporas

Conidio: Anamorfo o asexual

-Artroconidios: fragmentación de una
hifa
-Blastoconidios: formados por gemación
-Micronidios
-Macronidios

Ascomicotas, Basidiomicotas
Nutrición Bacteriana
Proceso mediante el cual los seres vivos captan del medio las “sustancias
químicas” para crecer, con fines energéticos (catabolismo) o biosintéticos
(anabolismo).
Se clasifican en:
● Aprovisionamiento de energía, fotótrofos o quimiótrofos
● Quimiótrofos: fuentes de electrones, litotrofas (moléculas
sencillas) o organotrofas (moléculas orgánicas)
Punto de vista biosintético
● Autótrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias
inorgánicas.
● Autótrofas estrictas: no pueden crecer usando materia orgánica.
● Heterótrofas: fuente de carbono es orgánica la obtienen del medio
ambiente.
Clasificación de los nutrientes
● Macronutrientes: se consumen en grandes cantidades, C, H, O, N, P, S,
Mg, Ca, Fe.
● Micronutrientes: se consumen en poca cantidad y puede variar entre
bacterias según su necesidad, Cu, Co, Zn, Mo,etc.
● Inorgánicos: moléculas simples que no contienen C e H.
● Orgánicos: moléculas que contienen al menos una combinación de
átomos de H y C.
Los nutrientes en los cultivos pueden variar, existen cultivos con nutrientes
Universales (H2O, CO2 y sales biliares), Particulares (puede ser orgánico o
inorgánico) y Factores de crecimiento (vitaminas y coenzimas).
Las bacterias liberan enzimas al exterior para degradar los desechos
orgánicos, las enzimas hidrolizan los enlaces en los nutrientes para
convertirlos en moléculas más pequeñas y que pueden ingresar a la bacteria.

Transporte pasivo
● Inespecífico – se utiliza para moléculas pequeñas (oxígeno, agua,
Co2, amoniaco).
● Específico (requieren proteína transportadora)– se utiliza para
moléculas más grandes como el glicerol.
Transporte activo
● Transporte simple (fuerza protón Motriz)
● Translocación de grupo –modificación química de la sustancia para
que no se devuelva por el gradiente de concentración.
● Sistema ABC– participación de proteínas protoplasmáticas y eº
derivada del ATP.

Transporte de Hierro
El hierro es un cofactor de muchas enzimas y citocromos, para su captación
de hierro deben secretar un sideróforo debido a que el ión ferroso es
insoluble. E. coli secreta enterobactina para captarlo, formando un complejo
en R en ME (por sistema ABC).

Medios de cultivo
● Medios complejos o indefinidos (sin cantidades específicas)
-Digeridos crudos extracto de carne y levadura
-Digeridos de peptona o carne de soja
-Digeridos de caseína

● Medios sintéticos o definidos (disueltas en agua)

-Cantidades concretas de sustancias químicas
Crecimiento Microbiano
Incremento en el número de células, también puede ser medido como un
incremento en la masa microbiana.
● Tiempo de generación: aprox. 20 minutos pero puede variar entre
bacterias.
● Velocidad de crecimiento: cambio en el número de células o masa
celular por unidad de tiempo.
● Crecimiento exponencial: modelo del incremento de la población en
el que el número de células se duplica cada cierto período de tiempo.
*Curva de crecimiento se divide en 4 fases: fase de latencia (adaptación de
las bacterias al cultivo), fase logarítmica (multiplicación exponencial), fase
estacionaria (aumenta el nº de células muertas y se detiene la división por
falta de nutrientes) y fase de muerte (la mayoría de las bacterias están
muertas).
Se puede medir con el recuento total de células y recuento de células
viables (células vivas).

Fisión binaria
Las bacterias cuando realizan división celular comienzan a alargar su cuerpo,
replicar el ADN y formar un anillo que realiza contrición para separar las dos
células hijas.

● Proteínas Fts
Cuando se termina de replicar el
ADN es la señal para las proteínas,
forman el aparato de división
bacteriana llamado divisona.

● Proteína MIE
Reconocen el centro
Síntesis de la Pared Celular Bacteriana
El bactoprenol transporta unidades monoméricas + pentapéptidos (enzimas
transpeptidasas o PBP) en la membrana cuando sale al exterior se corta la
D-Alanina (se libera eº para que se produzca transpeptidación).
*La penicilina se una a las transpeptidasas
Factores ambientales en el crecimiento
Los más importantes son la temperatura, pH, disponibilidad de agua y
oxígeno.
Temperatura al mínimo afecta disminuyendo el metabolismo es mucho más
lento o se detiene pero la bacteria no muere, Tº óptima varía según el tipo de
bacteria y el metabolismo funciona al 100% y Tº máxima las enzimas se
desnaturalizan y el metabolismo falla. Se clasifican según la temperatura de
donde habitan:
El pH al interior de la bacteria siempre es neutro pero pueden vivir en
ambientes con condiciones en pH diferente, se dividen en tres grupos
basófilas, neutrófilas (mayoría de las bacterias) y acidófilas.
Presión osmótica las bacterias soportan un alto rango de presiones por la
pared celular, las bacterias pueden ser Halófilas extremas (les gusta la sal)
soportan un 15-30% de sales, Halófilas corrientes soportan 2-10% de sales,
Osmófilos que crecen en ambientes con altas concentraciones de azúcar o
Xerófilos que crecen en ambientes muy secos.
Las bacterias se clasifican según la necesidad de oxígeno o C02 para su
crecimiento:
Aerobios (crecen en presencia de oxígeno), Anaerobios obligados (no
crecen en presencia de oxígeno), Aerobios facultativos (crecen en ambos
ambientes pero prefieren el oxígeno), Microaerófilos (necesitan una baja
concentración de oxígeno) o Anaerobios aerotolerantes (pueden crecer en
ambos ambientes pero prefieren el CO2).
Cuando se reduce el oxígeno se producen elementos tóxicos como H2, O2,
O2- y OH que puede provocar muerte en las bacterias.
Es importante saber las condiciones en las cuales crecen las bacterias para
saber cómo transportar las muestras de laboratorio y que el resultado no se
altere (Fase preanalítica, fase analítica y fase postanalítica).
Metabolismo Bacteriano
● Es importante conocer y entender el modo de acción de algunos ATB
que bloquean una vía metabólica o la síntesis de alguna
macromolécula esencial.
● Metabolismo se define como un conjunto de reacciones bioquímicas
catalizadas por enzimas permitiendo el crecimiento de un organismo.
Se divide en dos:
-Anabolismo: requiere energía, creación de macromoléculas
(endotérmicas).
-Catabolismo: libera energía, degradación de nutrientes (exotérmicas).
Catalizadores biológicos
● Endoenzimas: actúan en el interior de la célula (oxidasas-perdida de
lectrones, reductoras–ganancia de electrones)
● Exoenzimas: degradación de macromoléculas. (coagulasa)
se subdividen en :
-Constitutivas: enzimas que degradan glucosa.
-Inducidas: enzimas que degradan lactosa.
Generación de ATP en las bacterias
● Fosforilación oxidativa: es posible en presencia de O2
● Fosforilación a nivel de sustrato: producción de ATP en ausencia de un
receptor externo de los electrones fermentación). La glucosa entra a la
célula como glucosa 6-P y por una serie de reacciones se transforma
en piruvato, si se encuentra en ausencia de O2 comenzará la vía
fermentativa hasta ácido láctico u otro producto.
● Fermentación láctica:
Piruvato + NADH —---- ácido láctico + NADH+
Genética bacteriana
Elementos genéticos:
● nucleoide o cromosoma
● plásmidos (genes imprescindibles)
● bateriòfagos (ADN proveniente de virus
● transposones y secuencias de inserción
● integrones (material genético, se forman los genes de resistencia)
*Los cromosomas aislados están compuestos de 60% ADN, 30% ARN y 10%
proteínas. El cromosoma bacteriano generalmente es circular.
*El cromosoma bacteriano mide aproximadamente entre 3.000-5.000 kb
Estructura del ADN

*Si no presente el grupo fosfato se

llama nucleocido
*ADN polimerasa III necesita el grupo
hidroxilo 3’ libre del tercer carbono

Enzimas que participan en la replicación del ADN

ADN polimerasa
● ADN polimerasa III: inicia la síntesis desde un partidor de ARN
previamente sintetizado por la enzima primasa, sintetiza de 5´ a 3´y
tiene acció exonucleasa de 3ˋa 5ˋ.
 ● ADN polimerasa I: retira los fragmentos de Okasaki (ARN) de la cadena
resagada y los coloca fragmentos de ADN de 5ˋa 3ˋy también presenta
acción de exonucleasa de 3ˋa 5ˋ.
Helicasa
Enzima encargada de romper los enlaces de hidrógenos que presentan los
nucleótidos permitiendo separar las dos cadenas de ADN, previamente la
enzima topoisomerasa descompacta la cadena y las proteínas SSB
mantienen separada la hebras de ADN formando las “horquillas de
replicación”
Primasa
Enzima encargada de colocar un ARN partidor, tiene que ser en la unión de
bases nitrogenadas Adenina—--Timina que es reconocido por la enzima.
Ligasa
Enzima encargada de unir los espacios que quedan al incorporar los nuevos
nucleótidos que coloca la ADN pol I con los que colocó la ADN pol II.
*La hebra rezagada debe elonga para que pueda ser sintetizada por la Pol III,
se forman los fragmentos de Okazaki porque continuamente la hebra
rezagada se debe elongar para ser sintetiza por lo cual la Primasa debe
colocar continuamente el ARN partidor.
Transcripción
La ARN polimerasa utiliza un molde de ADN de cadena sencilla para
sintetizar una cadena complementaria de ARN. ARN polimerasa sintetiza de
5ˋa 3ˋ.
El ARN polimerasa se une a una secuencia de ADN llamada promotor (se
encuentra al inicio del gen). Una vez unida el ARN polimerasa separa las
cadenas de ADN para proporcionar la cadena molde. Comienza a producir
nucleótidos uno a uno y el nucleótido Timina es reemplazado por Uracilo. La
secuencia de terminación causan que el tránsito sea liberado de la ARN
polimerasa, se forma un bucle que enlentece el ARN polimerasa hasta que se
suelta o por el factor Rho (helicasa de ADN-ARN) hace que se suelte la ARN
polimerasa.
Los transcritos de ARN pueden funcionan como ARNm (sintetizan proteínas)
El RNAm monocistrónico porque apartir de este se va a producir una sola
secuencia polipeptídica (1 proteína) o RNA policistrónico presenta mas de
una secuencia polipeptídica
Traducción
ARNt sirven para transportar los aminoácidos a los ribosomas y para
asegurarse que llevan el aminoacido correcto. El anticodon (grupo 3 tres
bases) reconoce a un codón en específico en el ARNm para poder ir
agregando los nuevos aminoacidos
El reconocimiento correcto del ARNt por la Aminoacil-tRNA sintetasa de
valina