Microscopia
Los microorganismos son demasiado pequeños para ser detectados por el ojo Humano, por
ello, es esencial la observación microscópica para determinar la forma, el Tamaño,
agrupamiento y características de coloración de los mismos.
Existen varios tipos de microscopios y se han desarrollado numerosos métodos que
Permiten examinar con gran detalle las muestras que contienen microorganismos.
Los microscopios se dividen en dos:
De luz(ópticos):Utilizan radiación en el Espectro visible y un Sistema de lentes ópticos. Se
dividen en campo claro, campo oscuro, Fluorescencia ,Contraste de Fases.
Electrónico: Emplean un haz de electrones en vez de ondas luminosas y un sistema de
condensadores electromagnéticos. Se dividen en De trasmisión y de barrido.
Microscopio óptico
Componentes:
OCULARES:El papel de los oculares consiste en aumentar, a manera de Lupa, la imagen
real proyectada por objetivos tantas veces Como indique el número inscrito en ellos. Posee
dos lentes: la Que queda cerca del ojo se llama ocular, la que queda en el Extremo inferior
se llama colectora. Hay oculares de Diferentes aumentos. En uno de los oculares
(generalmente el izquierdo) se Encuentra un anillo de Dioptrías, que sirve para ajustar la
Visión binocular.
Objetivo:Conjunto de lentes que producen imágenes de la muestra Aumentadas 4, 10, 40 o
100 veces.
Constan de dos lentes, la que queda más cerca de la Preparación se llama lente frontal y la
que queda en la parte Superior se llama lente posterior. La denominación de los objetivos se
efectúa indicando su aumento propio, el cual se Halla grabado en cada pieza.
Es un sistema de lentes convenrgentes entre la fuerte de luz y La platina. Estos lentes
concentran los rayos luminosos sobre la Preparación (condensador de abertura).
Filtro:Es un disco de vidro mate o de dirente color que se puede Ubicar en la parte inferior
del diafragma y sobre un anillo Transportable; este filtro permite seleccionar la longitud de
Onda de luz a emplear.
Emisora de luz:Proporciona la luz necesaria para la observación de la muestra. Esta puede
ser o bien espejos, lámparas o bombillas. Si emplea Espejos, los cóncavos se usan cuando
la luz requerida es menor (con lentes de 4, 10 y 40) y el espejo plano para mayor
iluminación.
Diafragma: Está formado por un conjunto de láminas falciformes las cuales por medio de
una palanca lateral se pueden cerrar concéntricamente regulando la cantidad de luz
proveniente del [Link] los rayos luminosos emergen de la cara Superior
del condensador como un cono de luz con el vértice Hacia abajo. Los rayos no muy
divergentes pasan a través del Objetivo y cuanto más amplio es el alcance de la apertura
Numérica más amplio es el ángulo que puede investigarse pues Mayor es el número de
rayos divergentes que puede recoger.
Microcospia en campo oscuro
Cuando la luz incide sobre un pequeño objeto, parte se Dispersa haciendo que el objeto
aparezca luminoso y por Ello visible sobre un fondo oscuro. La técnica de Iluminación en
campo oscuro explota este fenómeno y Permite detectar objetos tan pequeños que de otro
modo No proporcionan suficiente [Link] iluminaciónConsigue mediante el uso de
una clase especial de Condensador que enfoca sobre la muestra un cono hueco de Luz
cuyos rayos divergentes no entran en el objetivo. Sólo la luz Dispersada por la muestra
penetra en el objetivo y pueden observarse los objetos iluminados sobre el resto del campo
oscuro del microscopio.
Microcospia en luz ultravioleta
La microscopia ultravioleta permite una resolución algo mejor y, por consiguiente, Mayor
amplificación que la que se obtiene por el microscopio óptico corrienteLa ventaja principal
de la microscopia ultravioleta es Que hace visible la absorción específica de algunas
sustancias. La absorción Característica en ultravioleta de ciertos cuerpos permite su
localización, Diferenciación y determinación en preparación adecuada, aún en estado vivo.
Como Las radiaciones de UV son invisibles, las imágenes se hacen visibles recogiéndolas
Sobre una emulsión fotográfica utilizando un tubo condensador convertidor de Imagen, o
presentándolas en una pantalla de televisión, después de recogerlas en un Tubo o fototubo
sensible al UV en cámara de televisión.
MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA
Algunos compuestos químicos absorben la energía de las radiaciones UV y la emiten Como
ondas visibles de mayor longitud. Estos cuerpos aparecen de un color a la luz Ordinaria y
de color completamente diferente a la luz UV, dependiendo del Fluorocromo que se use.
Dichos compuestos se llaman fluorescentes y el fenómeno Recibe el nombre de
fluorescencia. Cuando se trata una mezcla de bacterias con una
Solución de colorante fluorescente, los organismos que combinan o retienen en cualquier
forma este producto, se hacen fluorescentes cuando se los irradia con UV y Pueden verse en
el campo microscópico como cuerpos luminosos.
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASES
El relativamente bajo contraste de las células vivas puede aumentarse Considerablemente
mediante el uso de un instrumento con un sistema óptico Modificado, conocido como
microscopio de contraste de fases. En el microscopio de contraste de fase, un sistema de
anillos en el Condensador y en el objetivo separa los rayos refractados de la muestra de
aquellos Que no lo sean. Los dos conjuntos de rayos se recombinan después de que los
rayos Refractados hayan pasado a través de un anillo de cristal, que introduce una
diferencia De fase adicional. Mediante ésta modificación óptica, se aumenta
considerablemente el Grado de contraste de las células, cuyos índices de refracción difieren
muy Ligeramente del índice de refracción del medio circundante.
Microscopio Electrónica
El Microscopio Electrónico (M.E.) tiene la ventaja de su enorme amplificación, porque, a
causa de la pequeñísima longitud de onda del haz de electrones que se utiliza para
Amplificar el objeto, puede aumentarse cien veces el poder de resolución del microscopio
óptico.
Emplea ondas de electrones y campos magnéticos para producir la imagen mientras que el
microscopio utiliza ondas luminosas y lentes.
El Material de observación se dispone en extensión, sumamente fina y seca, sobre Pequeñas
pantallas que se introducen en el aparato en un punto situado entre el Condensador
magnético y el objetivo magnético, que representa la platina del Microscopio. La imagen
amplificada se observa en una pantalla fluorescente a través De una mirilla de cierre
hermético, o se impresiona en una placa fotográfica por una Cámara adaptada al aparato.
Microscopio de transmisión
En este microscopio el contraste es el resultado de la dispersión Diferencial de los
electrones por la muestra, estando el grado De dispersión en función del número y de la
masa de átomos Que se hallan en la trayectoria de los electrones.
Sin Embargo se obtiene mayor contraste por tinción negativa. En ella los depósitos de
Metales pesados se disponen en todos los sitios de la rejilla excepto en los lugares Donde
están las partículas, así, éstas resaltan por su brillo relativo en la pantalla Fluorescente.
Otra de las técnicas preparativas para el uso de este microscopio es la réplica Sombreada,
para hacer visibles partículas muy pequeñas usando objetos para Replicarlas mediante su
propia sombra.
Microscopio de Barrido
El Microscopio De barrido permite obtener imágenes tridimensionales de Objetos
microscópicos cuyo tamaño varía ampliamente. El MEB explora la superficie de la imagen
punto por punto, al Contrario que el MET, que examina una gran parte de la muestra Cada
vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy Concentrado de
electrones, de forma parecida a un barrido.
