LICENCIATURA

EN NUTRICIÓN
GESTIONADO CON MODALIDAD A DISTANCIA

Asignatura Bioquímica

Unidad didáctica 3. Biocatálisis

Tema 1. Enzimas

Autor Gustavo Bertot

Índice
Introducción 3
Objetivos 3
1. Catálisis 5
1.1. Los catalizadores 6
2. Enzimas 8
2.1. Aspectos generales 8
2.2. Nomenclatura 10
2.3. Clasificación 10
2.4. Cofactores enzimáticos 10
2.5. Estructura y mecanismos 12
2.5.1. Centro activo 12
2.5.2. Modelos que explican la interacción enzima-sustrato 13
2.5.3. Otros sitios presentes en una enzima 14
2.6. Cinética enzimática 17
2.6.1. Cinéticas no michaelianas o alostéricas 22
2.7. Factores que afectan la actividad 23
2.7.1. pH 23
2.7.2. Temperatura 24
2.7.3. Concentración de enzima 25
2.7.4. Concentración de sustrato 26
2.8. Inhibición enzimática 29
2.8.1. Inhibidores reversibles 29
2.8.2. Inhibidores irreversibles 32
3. Regulación de la actividad enzimática 36
3.1. Regulación alostérica 37
3.2. Regulación por modificación covalente 39
3.3. Control genético 40
3.4. Isoenzimas 41
3.5. Zimógenos 42
3.6. Compartimentalización 43
Ideas clave 48
Solucionario 50
Introducción
Los alquimistas medievales descubrieron que la presencia de algunos elementos
extra­ños en una mezcla hacía posible la obtención de productos diferentes a los ini-
ciales. Des­conociendo la naturaleza del fenómeno, imaginaron la existencia de una
sustancia que transformara los metales como el plomo y el hierro en oro, y a encon-
trarla consagraron vanamente sus esfuerzos. Siglos después, la acumulación de ex-
periencias y observacio­nes llevó a Berzelius, en 1836, a conjuntar todos estos fenóme-
nos en una sola definición, y acuñó las voces “fuerza catalítica” y “catálisis”.

De una forma imaginaria, los catalizadores pueden compararse con la piedra filoso-
fal de los alquimistas, ya que permiten transformar sustancias no en oro, sino en una
serie de materiales valiosos de uso cotidiano. Si una reacción química se lleva a cabo
lentamente puede ser acelerada utilizando un catalizador.

Objetivos
Al finalizar el trabajo con este tema serás capaz de:

• Reconocer las características generales del proceso catalítico y las propiedades

de los catalizadores.

• Reconocer las propiedades diferenciales de los catalizadores biológicos, las

enzimas, respecto de los demás catalizadores.

• Definir cofactor y su participación en los procesos catalíticos. Diferenciar entre

coenzimas y grupos prostéticos.

• Relacionar a las vitaminas del complejo B con los cofactores enzimáticos.

• Definir centro activo de una enzima y otros sitios que puedan estar presentes.
Relacionar la estructura espacial de la enzima con el reconocimiento de su sus-
trato.

• Analizar la temperatura y el pH como factores que modifican la actividad enzi-

mática.

• Definir Km y Vmáx. Reconocer estos parámetros en gráficos de Michaelis-Menten

y dobles recíprocos (Linnerweaver-Burke).

• Interpretar el concepto de Km y Vmax a nivel biológico.

• Diferenciar entre inhibición reversible e irreversible.

• Contrastar las características que definen una inhibición reversible competitiva

versus una inhibición reversible no competitiva.

• Comparar los mecanismos de regulación de la actividad enzimática: alostérica,

covalente y génica.

• Definir isoenzima e interpretar su papel a nivel biológico.

• Definir zimógeno e interpretar su papel a nivel biológico.

• Interpretar el papel de la compartimentación en la regulación de la actividad

enzimática.
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1. Catálisis

RECORDÁ:

El término “catálisis” agrupa al conjunto de procedimientos y conocimientos que

permiten que la velocidad con la que trascurre una reacción se incremente in situ.

La cinética química se ocupa del estudio dinámico de las reacciones químicas tomando
en cuenta el mecanismo en el nivel molecular de tales transformaciones.

El concepto de velocidad de reacción traduce la

rapidez con la que en un sistema se produce una Para revisar el concepto
transformación química. La reacción química glo- de velocidad de reacción,
bal se lleva a cabo a través de etapas, las cuales en podés consultar el tema
su conjunto constituyen el mecanismo de reacción. 3 de la unidad didáctica 1
La velocidad se define en términos de parámetros de esta asignatura (“Las
que pueden ser medidos durante la transforma- reacciones químicas”).
ción; así, podemos definirla como la variación de la
concentración de uno de los reactivos que desa-
parece, o de uno de los productos que aparece, en el sistema respecto del tiempo.

De manera general, se pueden determinar las características de una reacción si se conoce

a cada instante la composición química del sistema. En la mayoría de las reacciones, la
velocidad de transformación es proporcional a la concentración de reactivos elevados
a una potencia.

EJEMPLO:

Para la siguiente reacción:

A + B  productos

V α [A]p[B]q o V = k[A]p[B]q

k = constante de proporcionalidad (constante de velocidad)

Para que una reacción química se lleve a cabo, es necesario suministrar cierta cantidad de
energía a las moléculas de reactivo.

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Los reactivos son “activados” de manera que se favorezca su combinación para llegar a un
cierto “estado de transición”, el cual, al descomponerse, puede dar lugar a los productos.
La barrera energética que separa los reactivos de los productos se denomina energía de
activación. La velocidad de reacción depende de esa energía de activación a través de la
constante de velocidad (k).

1.1. Los catalizadores

Las principales características que distinguen a un catalizador son:

• El catalizador no se considera ni reactivo ni

producto en la reacción; de hecho, no puede ∆Go: variación de energía
actuar en reacciones termodinámicamente libre de Gibbs, es la di-
imposibles (∆Go > 0); es decir, un catalizador no ferencia entre la energía
“crea” reacciones, solamente acelera aquellas libre útil para realizar tra-
que pueden ocurrir. bajo entre el estado final
y el estado inicial. Cuando
• Si bien el catalizador puede tener una vida li-
los valores son negativos
mitada, en lapsos cortos, se puede decir que
(∆Go < 0) la reacción es
permanece inalterado y al final de la reacción
espontánea.
se recupera sin cambios.

• Para una reacción en equilibrio, A + B  C, el catalizador no modifica el valor de la

Keq. En consecuencia, un aumento de la velocidad en una dirección es acompañado
por un aumento similar en la constante de velocidad de la reacción inversa.

• El catalizador puede tener uno o dos efectos sobre un sistema, un efecto acelerador
o un efecto orientador. En el segundo caso, la función catalítica se observa en la va-
riación de los valores de selectividad de un proceso cuando varias direcciones son
termodinámicamente posibles.

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EJEMPLO:

Así, por ejemplo, el alcohol etílico se puede descomponer según las siguientes
reacciones:

C2H4 + H2O (I)

C2H5OH
C2H4O + H2 (II)

La utilización de óxido de zinc como catalizador conduce casi exclusivamente a

la reacción (I). Si se emplea cobre como catalizador, la reacción (II) se produce en
mayor extensión.

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2. Enzimas
Las reacciones químicas que ocurren en los siste-
mas vivientes son tan variadas como complejas. La mayoría de las reac-
ciones que ocurren en
La mayoría de las reacciones que ocurren en los
los sistemas vivos son
sistemas vivos son catalizadas por proteínas cono-
catalizadas por proteínas
cidas con el nombre de enzimas. Se puede afirmar
conocidas con el nombre
con fundamento que, sin la catálisis enzimática, no
de enzimas. Sin la catálisis
sería posible la vida.
enzimática, no sería posi-
Es suficiente decir que el proceso base de la acti- ble la vida.
vidad vital, la asimilación del CO2 por la clorofila de
las plantas, es un proceso fotoquímico y catalítico.
La transformación por las células, de albúminas, grasas, carbohidratos, así como la síntesis
de otras moléculas, son catalíticas. La formación de las cadenas de ADN, que es la base
del código genético, depende de la presencia de ciertas enzimas.

2.1. Aspectos generales

RECORDÁ:

Las enzimas son macromoléculas que catalizan reacciones químicas siempre

que sea termodinámicamente posible.

Son principalmente proteínas, aunque algunas moléculas de ARN también son capaces
de actuar como catalizadores (las ribozimas y los ribosomas, esenciales para el proceso de
corte y empalme alternativo y la traducción del ARN mensajero, respectivamente).

Casi todos los procesos celulares requieren de las

enzimas para que ocurran a velocidades significa- Casi todos los procesos
tivas. A las reacciones mediadas por enzimas se las celulares requieren de las
denomina reacciones enzimáticas. enzimas para que ocurran
a velocidades significativas.
En estas reacciones, las moléculas sobre las que
actúa la enzima en el comienzo del proceso son
llamadas sustratos, y estas los convierten en diferentes moléculas, llamadas productos.

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Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su veloci-
dad crece solo con algunas reacciones de entre otras posibilidades, el conjunto de enzi-
mas sintetizadas en una célula determina el metabolismo que ocurre en cada célula. A su
vez, esta síntesis depende de la regulación de la expresión génica.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcio-

nan disminuyendo la energía de activación para Las enzimas funcionan
una reacción; así aceleran sustancialmente la velo- disminuyendo la energía
cidad de una reacción. La gran mayoría de las reac- de activación para una
ciones de las enzimas son millones de veces más reacción; así aceleran sus-
rápidas que las reacciones no catalizadas. tancialmente la velocidad
de una reacción.
Las enzimas cumplen con todas las propiedades
de los catalizadores. Sin embargo, por su natura-
leza química (proteínas o ácidos ribonucleicos), las enzimas presentan otras propiedades
particulares:

• Específicas. Una enzima generalmente cataliza una única reacción, aunque en algu-
nos casos puede actuar sobre varias reacciones que se encuentran relacionadas. El
grado de especificidad por el sustrato es, por lo general, muy elevado, y en ocasiones
es virtualmente absoluto.

• Termolábiles. Dada su naturaleza química y su estructura conformacional, las en-

zimas se pueden desnaturalizar por acción de la temperatura y, en consecuencia,
alterar e inclusive perder su actividad biológica.

• Regulables. Un organismo debe ser capaz de controlar la actividad catalítica de sus

componentes enzimáticos, de modo tal que pueda coordinar los numerosos proce-
sos metabólicos, responder a los cambios de su ambiente, crecer y diferenciarse,
todo esto realizado de manera ordenada.

La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas: los inhibidores son
moléculas que disminuyen la actividad de las enzimas, mientras que los activadores son
moléculas que incrementan la actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren
de cofactores para su actividad. Además, la actividad es afectada por la temperatura, el
pH y la concentración del sustrato.
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2.2. Nomenclatura

Muchas enzimas han sido designadas añadiendo el sufijo -asa al nombre del sustrato, es
decir, la molécula sobre la cual ejerce su actividad catalítica. Por ejemplo, la ureasa catali-
za la hidrólisis de la urea, y la arginasa cataliza la hidrólisis de la arginina.

Otras enzimas han recibido su nombre en función del tipo de reacción que catalizan. Así,
la lactato deshidrogenasa cataliza la reducción de piruvato a lactato (última etapa de la
glucólisis anaeróbica).

Incluso algunas se conocen de hace mucho tiempo y mantienen su nombre, sin dar infor-
mación alguna del sustrato o la reacción que catalizan. Por ejemplo, la tripsina.

2.3. Clasificación

No obstante, existe una clasificación sistemática de las enzimas que las divide en seis
grandes grupos o clases, cada uno de los cuales se divide a su vez en subclases:

• Oxirreductasas: catalizan reacciones de oxidorreducción o redox.

• Transferasas: transfieren grupos funcionales entre dadores y aceptores.

• Hidrolasas: introducen una molécula de agua en el sitio de rotura (hidrólisis).

• Liasas: realizan la formación o rotura de enlaces covalentes sin ir acoplados a sustan-

cias de alto valor energético (como el ATP).

• Isomerasas: catalizan reordenamientos intramoleculares.

• Ligasas: participan en reacciones de síntesis acopladas a sustancias de alto valor

energético (como el ATP).

2.4. Cofactores enzimáticos

Además de la estructura proteica, que confiere a las enzimas una configuración tridimen-
sional, la mayoría de ellas requiere de alguna o algunas moléculas inorgánicas u orgánicas
pequeñas, que funcionan en conjunto con la enzima en el proceso catalítico. Estas enzi-
mas conjugadas se denominan holoenzimas, y están formadas por:

• Una parte proteica (apoenzima).

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• El cofactor no proteico (coenzima). Este puede ser: iones metálicos (cofactores me-
tálicos, dando origen a las metaloenzimas) (tabla 1) o vitaminas, derivados de vitami-
nas o moléculas sintetizadas utilizando parte de vitaminas, denominados coenzimas
cuando están ligados a la enzima por interacciones no covalentes (permitiendo una
unión reversible entre enzima y cofactor) o grupos prostéticos cuando están ligados
a la enzima de forma covalente (generando una unión irreversible entre enzima y co-
factor) (tabla 2). Los cofactores iones metálicos actúan como grupos prostéticos.

TABLA 1: COFACTORES METÁLICOS

Elemento Enzima activada
Zn2+ Deshidrogenasas, ARN y ADN polimerasas
Mg2+ Fosfohidrolasas, fosfotransferasas, fosfatasas
Mn2+ Arginasa, peptidasas, quinasas
Mo 6+
Nitratoreductasa, nitrogenasa, xantina deshidrogenada
Fe2+, Fe3+ Citocromos, catalasa, peroxidasas, nitrito reductasa
Cu2+
Citocromo oxidasa, tirosinasa, ácido ascórbico oxidasa
Ca2+ 1,3–β–glucan sintetasa
K+ Piruvato fosfoquinasa, ATPasa
Se Glutatión peroxidasa
Ni2+ Ureasa

TABLA 2: COFACTORES (COENZIMAS O GRUPOS PROSTÉTICOS)

Y SU RELACIÓN CON LAS VITAMINAS
Cofactor (coEZ o GP) Vitamina precursor Reacciones
Pirofosfato de Tiamina (GP) Tiamina (B1) Transferencia de aldehí-
dos
Flavina adenina dinucleótido (FAD) Riboflavina (B2) Oxidorreducción
(GP)
Flavina adenina mononucleótido Riboflavina (B2) Oxidorreducción
(FMN) (GP)
Nicotinamida adenina dinucleótido Nicotinamida Oxidorreducción
(NAD) (coEZ)
NAD fosfato (NADP) (coEZ) Nicotinamida Oxidorreducción
Coenzima A (coEZ) Ácido pantoténico Transferencia de acilos
Fosfato de piridoxal (GP) Piridoxina (B6) Transferencia de amino
Biotina (GP) Biotina Carboxilación
Tetrahidrofolato (coEZ) Ácido fólico Transferencias de C

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TABLA 2: COFACTORES (COENZIMAS O GRUPOS PROSTÉTICOS)

Y SU RELACIÓN CON LAS VITAMINAS
Metilcobalamina y adenosilcobala- Cianocobalamina (B12) Alquilación
mina (coEZ)
Ácido ascórbico (coEZ) Vitamina C Hidroxilación
Vitamina K Vitamina K γ-carboxilación

2.5. Estructura y mecanismos

La actividad de las enzimas está determinada por su estructura tridimensional, de mane-

ra tal que se crea una región con las dimensiones moleculares correctas, la topología ade-
cuada y el alineamiento óptimo de los grupos iónicos, polares y regiones hidrófobas para
acomodar el sustrato específico. La región que contiene estas características se conoce
como el centro activo.

2.5.1. Centro activo

RECORDÁ:

El centro activo es una porción de la estructura de la enzima donde se une/n el/

los sustrato/s específicamente y tiene lugar una reacción química mediante la
cual se rompen y forman ciertos enlaces para dar lugar al/los producto/s.

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Se caracteriza por:

• Representar una porción pequeña de la estructura total de la enzima. Es decir, hay

una gran diferencia entre el número de aminoácidos totales que componen la enzima
y los que conforman el centro activo. Esto permite que se den los plegamientos y la
estructura tridimensional adecuada para situar los aminoácidos que participan en el
reconocimiento y posicionamiento del sustrato en su lugar correcto y funcional.

• Presentar una entidad tridimensional, importante para el reconocimiento de la mo-

lécula sustrato con una serie de hendiduras en su estructura; incluso el centro activo
puede contener a su vez un sitio de unión al sustrato para permitir su acomodamiento
sobre el sitio catalítico donde se realiza una reacción.

• Una alta especificidad, que se manifiesta en la disposición concreta de las cadenas

laterales de los aminoácidos que participan en enlaces débiles enzima-sustrato.

Teniendo en cuenta que el sustrato en solución se

mueve libremente, para que una reacción se dé, las Para que una reacción se
moléculas se deben encontrar en el espacio para dé, las moléculas se de-
colisionar. El centro activo es el escenario en el que ben encontrar en el espa-
se produce dicho encuentro. Así, el centro activo fa- cio para colisionar, lo que
cilita la colisión y las condiciones para que las posi- ocurre en el centro activo.
ciones de las moléculas sean las adecuadas.

2.5.2. Modelos que explican la interacción enzima-sustrato

Modelo llave-cerradura

El modelo de llave-cerradura justifica que la interacción entre el sustrato (llave) y la enzima

(cerradura) se da solo si estos son complementarios. El sustrato encaja en el centro activo
de la enzima de la misma manera que la llave en la cerradura.

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A través de esta teoría se puede explicar la especificidad de las enzimas. Sin embargo,
este modelo rígido de la enzima no explica que se produzcan cambios conformacionales
en el centro activo cuando entra en contacto con el sustrato e interacciona con él median-
te distintos tipos de fuerzas, como se observa en el caso del estudio de la enzima hexoqui-
nasa, en el que se observó que, a medida que la glucosa se acercaba al centro activo, la
enzima experimentaba un cambio conformacional para “abrazar” al sustrato. Además, esta
teoría no explica la reversibilidad de las reacciones.

Modelo inducido o de encaje inducido

Este modelo propone que la enzima y el sustrato no son complementarios antes de que se
produzca la interacción o unión del sustrato al centro activo, sino una vez formado el com-
plejo enzima-sustrato (ES). Así, a medida que el sustrato va entrando en el centro activo,
este experimenta un cambio conformacional para favorecer la interacciones enzima-sus-
trato. Estas interacciones pueden ser de diversos tipos: puentes de hidrógeno, fuerzas
electroestáticas, iónicas, hidrófobas, de Van der Waals, pero no covalentes.

La aproximación del sustrato a la enzima induce la formación del centro activo. La tensión
sobre el sustrato inducida por la unión del sustrato a la enzima deforma los ángulos de
enlace y “activa” el sustrato.

2.5.3. Otros sitios presentes en una enzima

Además del centro activo, una enzima puede presentar otros sitios de unión a moléculas,
incluso aquellas que son sustrato o producto de la reacción. Estos sitios no son catalíticos,
sino que actúan como centros de regulación de la actividad de la enzima; se los conoce
como sitios alostéricos.
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Verificá tu aprendizaje

Actividad 1
Definí los siguientes términos:

a. Catalizador.

b. Enzima.

c. Sustrato y producto.

d. Centro activo.

e. Sitio alostérico.

f. Cofactor.

g. Coenzima.

h. Grupo prostético.

i. Holoenzima.

j. Apoenzima.

k. Inhibidor.

Actividad 2
Resolvé las siguientes consignas.

1. Respondé: ¿qué propiedades diferentes y distintivas presentan las enzimas como ca-
talizadores biológicos respecto de otro tipo de catalizadores no biológicos? ¿Por qué
estas propiedades permiten adecuar el proceso catalítico de las enzimas en el ámbito
biológico?

______________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

2. Explicá por qué una enzima cataliza una reacción química.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________
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3. Mencioná algunos ejemplos de vitaminas, coenzimas y metales que sean importan-

tes en las reacciones enzimáticas e indicá por qué son importantes.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Actividad 3
Determiná la clase de enzima que catalizaría cada una de las siguientes reacciones:

a. _______________________________

b. _______________________________

c. _______________________________

d. _______________________________

e. _______________________________

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2.6. Cinética enzimática

RECORDÁ:

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones químicas que son

catalizadas por las enzimas.

La aplicación de modelos matemáticos simples a la actividad de las enzimas bajo condi-

ciones variables de laboratorio, y en presencia de sustratos competidores o de inhibidores
enzimáticos, hizo posible elucidar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el
metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula y cómo puede ser inhibida su
actividad por drogas o venenos, o potenciada por otro tipo de moléculas, e incluso modi-
ficarla con propósitos terapéuticos.

Los mecanismos enzimáticos pueden ser divididos en:

• Mecanismo de único sustrato. Los estudios cinéticos llevados a cabo en enzimas

que solo unen un sustrato pretenden medir la afinidad con la que se une el sustrato y
la velocidad con la que lo transforma en producto.

• Mecanismo de múltiples sustratos. Al estudiar una enzima que une varios sustratos,
la cinética enzimática puede mostrar también el orden en el que se unen los sustra-
tos y el orden en el que los productos son liberados.

Los principios generales de la cinética de las reacciones químicas son aplicables a las
reacciones catalizadas por las enzimas. No obstante, estas muestran –además del fenó-
meno de la especificidad– un rasgo característico que no se observa en los catalizadores
no enzimáticos, la saturación con el sustrato, entendida en términos de ocupación de los
centros activos de todas las moléculas de enzima.

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Así, la velocidad de la reacción va aumentando a

medida que aumenta la concentración de sustrato La velocidad de la reacción
hasta que la enzima se satura. En ese momento se va aumentando a medida
habrá alcanzado el punto de saturación de la enzi- que aumenta la concentra-
ma y, aunque se añada más sustrato, no aumentará ción de sustrato hasta que
más la eficiencia. la enzima se satura. En ese
momento se habrá alcan-
Como las reacciones catalizadas por enzimas son zado el punto de satura-
saturables, al aumentar la concentración de sustrato ción de la enzima.
(representado como [S]), la velocidad de catálisis no
muestra un comportamiento lineal. Si la velocidad
inicial de la reacción se mide a una determinada concentración de sustrato, la velocidad de
la reacción (representada como V) aumenta linealmente con el aumento de la [S]. Sin em-
bargo, cuando aumentamos la [S], la enzima se satura de sustrato y alcanza su velocidad
máxima (Vmax), que no sobrepasará en ningún caso, independientemente de la [S].

La figura muestra el efecto de la concentración del sustrato [S] sobre la velocidad de la

reacción (V) catalizada por una enzima que une un único sustrato, en la cual se distinguen
tres fases:

• A bajas [S], la velocidad es directamente proporcional a [S] (lineal) y la cinética se deno-

mina de primer orden.

• En la zona intermedia de [S] la velocidad del proceso deja de ser lineal, y a esta zona se
la denomina de cinética mixta.

• A altas [S], la velocidad de la reacción se hace prácticamente constante e independien-

te de la [S], y la cinética se considera de orden cero.

Este comportamiento es característico de muchas enzimas y fue estudiado por Michaelis y

Menten en 1913.

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A partir de la figura se definen dos parámetros cinéticos de gran importancia, que son carac-
terísticos de cada enzima: la velocidad máxima (Vmax) y la constante de Michaelis-Menten
(Km).

RECORDÁ:

La Vmax se obtiene cuando la velocidad de reacción se hace independiente de

la concentración de sustrato. Este valor depende de la cantidad de enzima que
tengamos.

La Km nos indica la concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es

la mitad de la velocidad máxima. Este parámetro es independiente de la concen-
tración de enzima, y es característico de cada enzima según el sustrato utilizado
(si tiene varios).

No obstante, Km nos da más información, pues también nos indica la afinidad que posee la
enzima por el sustrato, siendo esta mayor cuanto menor es Km. Así, cuanto menor sea Km
menor será la cantidad de sustrato, necesaria para alcanzar la mitad de la Vmax, por lo que
mayor será la afinidad hacia ese sustrato o, dicho de otra forma, si es poco afín, necesitará
más sustrato para alcanzar ese valor de velocidad.

La relación entre la velocidad de reacción, la concentración de sustrato, Vmax y Km, quedan

reflejadas en la ecuación de Michaelis-Menten definida para una enzima que presenta un
único sitio de unión al sustrato:

La importancia del estudio de la cinética enzimática reside en dos principios básicos:

• Permite explicar cómo funciona una enzima.

• Permite predecir cómo se comportará esa enzima in vivo.

Las constantes cinéticas definidas anteriormente, Km y Vmax, son los pilares fundamentales
para intentar comprender el funcionamiento de las enzimas en el control del metabolismo.

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Significado de Km
Km es única para cada par enzima-sustrato: los diferentes sustratos que reaccionan con
una enzima determinada lo hacen con diferentes valores de Km.

EJEMPLO:

Tomemos como ejemplo una enzima que cataliza una reacción y puede utilizar
tres sustratos:

EZ

S1  P1 (Km alto)

S2  P2 (Km muy bajo)

S3  P3 (Km bajo)

Se puede definir si hay prioridad catalítica para alguno de los sustratos o si la

reacción ocurre al azar analizando los valores de Km. En este caso, existe prioridad
catalítica; primero S2, luego S3 y finalmente S1, dado que un valor de muy bajo Km
define mayor afinidad por S2 que por S3 y S1.

De manera similar, las diferentes enzimas que actúan sobre un único sustrato tienen dis-
tintos valores de Km.

EJEMPLO:

Tomamos como ejemplo dos enzimas que catalizan dos reacciones diferentes,
pero utilizan el mismo sustrato:

EZ1

S  P1 (Km alto)

EZ2

S  P2 (Km bajo)

Nuevamente, se puede definir si hay prioridad catalítica para alguno de los sus-
tratos o si la reacción ocurre al azar analizando los valores de Km. En este caso, la
reacción prioritaria a bajas concentraciones de S es la catalizada por la enzima 2
ya que presenta el valor más bajo de Km y, por consiguiente, mayor afinidad. La
enzima 1 catalizará la formación del P1 cuando haya altas concentraciones de S.

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Representación de Lineweaver-Burk
Si bien los parámetros cinéticos podrían obtenerse a partir de la curva de Michaelis-Menten,
esto no es muy preciso debido a que la aproximación Vmax se hace asintótica. Existen méto-
dos gráficos más fiables que facilitan el cálculo de Km y Vmax. Todos ellos se hacen en base
a transformaciones matemáticas de la ecuación de Michaelis-Menten, y entre ellas la más
utilizada es la representación de Lineweaver-Burk, también conocida como dobles-inversos
o recíprocos. En ella se representa 1/v frente a 1/[S], se obtiene una recta cuya intersección
con el eje de x es –1/Km, y con el eje y es 1/Vmax, siendo la pendiente Km/Vmax.

Reacciones multisustrato
Si bien el modelo de Michaelis-Menten es válido para reacciones simples de un solo sus-
trato, las reacciones enzimáticas que requieren múltiples sustratos y producen múltiples
productos son mucho más comunes (de hecho, representan ~60% de las reacciones bio-
químicas conocidas). Este tipo de reacciones se producen principalmente a través de dos
mecanismos diferentes:

• Reacciones secuenciales: aquellas en las que todos los sustratos deben combinarse
con la enzima antes de que la reacción pueda ocurrir y los productos sean liberados.
La adición de los sustratos a la enzima puede ser en orden obligatorio (mecanismo
ordenado) o al azar (mecanismo al azar). Ejemplos: glutation S-transferasa, dihidrofo-
lato reductasa y ADN-polimerasa.

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• Reacciones Ping-Pong: aquellas en las que uno o más productos son liberados antes
de que todos los sustratos hayan sido adicionados. Ejemplos: algunas enzimas redox,
transfereasas, carboxilasas (por ejemplo, acetil-CoA carboxilasa) y serino proteasas
(por ejemplo, tripsina y quimiotripsina).

2.6.1. Cinéticas no michaelianas o alostéricas

Algunas reacciones enzimáticas dan lugar a curvas sigmoideas, al ser representadas en una
curva de saturación, lo que suele indicar una unión cooperativa del sustrato al centro cata-
lítico de la enzima. Esto quiere decir que la unión de una molécula de sustrato influye en la
unión de las moléculas de sustrato posteriores. Este comportamiento es el más común en
las enzimas multiméricas, que presentan varias zonas de interacción con el sustrato.

En el mecanismo de cooperación, la unión de una molécula de sustrato a una de las zonas

de interacción altera significativamente la afinidad por el sustrato de las demás zonas de
interacción. Las enzimas con este tipo de comportamiento son denominadas alostéricas.

La cooperatividad positiva tiene lugar cuando la primera molécula de sustrato unida in-
crementa la afinidad del resto de zonas de interacción. Por el contrario, la cooperatividad
negativa tiene lugar cuando la primera molécula de sustrato unida reduce la afinidad de
la enzima por nuevas moléculas de sustrato.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

22
 Licenciatura en Nutrición

La cooperatividad positiva hace que la enzima sea más sensible a la concentración de sus-
trato, con lo que su actividad puede llegar a variar en gran medida, aunque se mueva en ran-
gos muy estrechos de concentración de sustrato. Por el contrario, la cooperatividad negativa
hace que la enzima sea insensible a pequeños cambios en la concentración de sustrato.

2.7. Factores que afectan la actividad

Hay muchas variables que pueden influir en la actividad enzimática. Las más importantes son:

• pH.

• Temperatura.

• Concentración de enzima.

• Concentración de sustrato.

• Inhibidores.

2.7.1. pH
De manera general, y analizando el siguiente gráfico
de velocidad en función del pH, podemos observar En el rango de pH ópti-
que existe un pH o rango de pH en donde se puede mo se puede verificar la
verificar la máxima actividad de una enzima y que, máxima actividad de una
en la medida en que se aleja de ese pH, la actividad enzima. En la medida en
se pierde. Este pH o rango de pH lo denominamos que se aleja de ese pH, la
pH óptimo. actividad se pierde.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

23
 Licenciatura en Nutrición

Cada enzima tiene su pH óptimo en el que mostrará su mayor actividad.

EJEMPLO:

Esto lo vemos con la pepsina –una enzima proteolítica que debe cumplir su ac-
ción en el estómago en presencia del jugo gástrico rico en ácido clorhídrico–,
mientras que la tripsina –otra proteasa, pero que cumple su acción en intestino– lo
hace en un entorno donde la acidez proveniente del estómago fue neutralizada
por el bicarbonato producido por el páncreas.

2.7.2. Temperatura
En términos generales, el aumento de la tempera-
tura aumenta la velocidad de una reacción, ya que El aumento de la tempera-
al aumentar la temperatura se proporciona una tura aumenta la velocidad
energía que hace vibrar las moléculas y favorece el de una reacción, ya que al
número de colisiones que se dan entre ellas. aumentar la temperatura
se proporciona una ener-
En presencia de una enzima, la temperatura favo-
gía que hace vibrar las
rece la actividad catalítica hasta alcanzar un deter-
moléculas y favorece el
minado valor, temperatura óptima, momento en el
número de colisiones que
cual se reduce drásticamente, como consecuencia
se dan entre ellas.
del proceso de desnaturalización que, como pro-
teínas o ARN, pueden experimentar las enzimas. El
centro activo se ve afectado por esa desnaturalización y la reacción se puede detener.

Por otro lado, a bajas temperaturas se puede observar que, si bien disminuye la actividad,
no se pierde. Esto es el resultado de que a esas temperaturas el movimiento de las mo-
léculas se ve enlentecido y se hacen más difíciles las interacciones entre el sustrato y la
enzima y los fenómenos de colisión.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

24
 Licenciatura en Nutrición

Es importante notar que la temperatura óptima depende de la naturaleza de cada enzima

y del ámbito donde debe desarrollar su actividad catalítica. Así, encontramos especies de
bacterias y algas que habitan en fuentes de aguas termales y, en el otro extremo, ciertas
bacterias árticas cuyas enzimas tienen temperaturas óptimas cercanas a 0°C.

2.7.3. Concentración de enzima

La actividad enzimática es directamente proporcio-
nal a la cantidad de enzima presente para una de- La actividad enzimática es
terminada concentración de sustrato. directamente proporcional
a la cantidad de enzima
presente para una deter-
minada concentración de
sustrato.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

25
 Licenciatura en Nutrición

2.7.4. Concentración de sustrato

Según se analizó anteriormente y de acuerdo con Michaelis-Menten.

Verificá tu aprendizaje

Actividad 4
Analizá el siguiente gráfico y resolvé las distintas consignas.

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1. Explicá qué información proporciona el gráfico.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

2. Respondé: ¿cuáles son los parámetros cinéticos de una enzima con una cinética de
Michaelis-Menten?

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

3. Señalá en el gráfico Km y Vmax.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

4. ¿Cómo harías para realizar un gráfico doble recíproco (Linneweaver-Burke) y dónde

encontrarías Km y Vmax?

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Actividad 5
Explicá cuál es la influencia de las variaciones de temperatura sobre las velocidades de
reacción enzimática aclarando qué pasa a baja temperatura y a alta temperatura, e indicá
qué es la temperatura óptima.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

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 Licenciatura en Nutrición

Actividad 6
Analizá cómo afectan los cambios de pH a la actividad enzimática.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

Actividad 7
En el siguiente gráfico se muestran los pH óptimos de tres enzimas. ¿Qué podés decir de
cada una de ellas?

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

28
 Licenciatura en Nutrición

2.8. Inhibición enzimática

Muchas sustancias alteran la actividad de una enzi-

ma cuando se combinan con ella de una forma que Los inhibidores reducen la
influencia la unión con el sustrato y/o su capacidad actividad de una enzima.
catalítica. Las sustancias que reducen la actividad La unión de un inhibidor a
de una enzima de esta manera se conocen como una enzima puede impedir
inhibidores. la entrada del sustrato al
centro activo de la enzima
La unión de un inhibidor puede impedir la entrada
y/u obstaculizar el proce-
del sustrato al centro activo de la enzima y/u obsta-
so catalítico.
culizar el proceso catalítico. Estos inhibidores pue-
den unirse a las enzimas de dos formas:

• Reversible: la desaparición del inhibidor restaura la actividad enzimática. Los inhi-

bidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente y diferentes tipos de
inhibiciones son producidas dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al
complejo enzima-sustrato o a los dos.

• Irreversible: el inhibidor inactiva permanentemente a la enzima. Los inhibidores irre-

versibles usualmente reaccionan con la enzima y cambian su estructura química.
Estos inhibidores modifican los residuos esenciales de los aminoácidos necesitados
para la actividad enzimática.

2.8.1. Inhibidores reversibles

Los inhibidores reversibles se unen a la enzima con interacciones no covalentes. Los en-
laces débiles múltiples entre el inhibidor y el sitio activo se combinan para producir una
unión fuerte y específica. Al contrario de lo que ocurre con el sustrato y los inhibidores irre-
versibles, los inhibidores reversibles generalmente no experimentan reacciones quími-
cas cuando se unen a la enzima y pueden ser removidos fácilmente por dilución o diálisis.

Los inhibidores enzimáticos reversibles pueden ser clasificados, según el efecto que pro-
duzcan en las constantes cinéticas Km y Vmax, del siguiente modo:

• Competitivos.

• No competitivos.

• Acompetitivos.

• Mixtos.

En el esquema clásico de Michaelis-Menten, una enzima (E) se une a su sustrato (S) para
formar el complejo enzima-sustrato (ES). En la catálisis, este complejo se quiebra para li-
berar al producto P y E. El efecto de los inhibidores dependerá de que el inhibidor se una a
E, al complejo ES o a ambos.

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Tipos de inhibición

• Inhibidores competitivos. Una sustancia que compite directamente con el sustrato

normal por el sitio de unión al sustrato de una enzima se conoce como un inhibidor
competitivo. Este tipo de inhibidor se asemeja al sustrato; por lo tanto, se une en for-
ma específica al sitio activo de la enzima; pero, como difiere del sustrato, no puede
reaccionar como lo hace este. Estos inhibidores se pueden unir a E, pero no al ES. La
inhibición competitiva aumenta Km (es decir, el inhibidor interfiere con la unión del
sustrato), pero no afecta la Vmax (el inhibidor no obstaculiza la catálisis en ES porque
no se puede unir a ES).

• Inhibidores no competitivos. Los inhibidores tienen afinidades idénticas por E y ES.

La inhibición no competitiva no cambia Km (es decir, no afecta la unión del sustrato),
pero disminuye Vmax (es decir, la unión del inhibidor obstaculiza la catálisis).

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30
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• Inhibidores acompetitivos. Los inhibidores se unen solamente al complejo ES y no a

la enzima libre. El orden de fijación es importante ya que, en la secuencia, se requiere
que primero se una el S y después se fije el inhibidor. Presumiblemente se produce
una distorsión del sitio activo y, por lo tanto, la enzima es catalíticamente inactiva.
Este tipo de inhibición disminuye la Vmax ya que una fracción del complejo ES formado
será desviada hacia la formación del complejo ESI. Dado que el inhibidor disminuye la
concentración de ES, también producirá una disminución de Km.

• Inhibidores mixtos. Los inhibidores se unen tanto a E como a ES, pero sus afinidades
por estas dos formas de enzimas son distintas. Un inhibidor mixto se une a los sitios
de la enzima que participan en la unión al sustrato y en la catálisis. Por lo tanto, los
inhibidores del tipo mixto interfieren con la unión del sustrato (incremento de Km) y
traba la catálisis en el complejo ES (disminución de Vmax).

En la siguiente tabla se muestran los diagramas de Lineweaver-Burke, en los que se ob-

servan las variaciones en los parámetros cinéticos Km y Vmax para los dos mecanismos inhi-
bitorios principales: competitivo y no competitivo

Tipo de inhibición Mecanismo Gráfico Km Vmax

Lineweaver-Burke
Competitiva: los inhibi-
dores se unen a E, pero ↑ No varía
no al ES. Interfieren con
la unión del sustrato,
pero no afectan la catá-
lisis del ES.
No competitiva: los
inhibidores tienen afini-
dades idénticas por E y
ES. No afecta la unión ↓
No varía
del sustrato, pero impi-
de la formación del pro-
ducto a partir de ES.

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2.8.2. Inhibidores irreversibles

Los inhibidores irreversibles modifican una enzi-
ma covalentemente y, por lo tanto, la inhibición no La inhibición irreversible
puede ser revertida. es diferente de la inac-
tivación enzimática. Los
Estos inhibidores comúnmente contienen grupos
inhibidores irreversibles
funcionales reactivos como grupos nitrogenados,
son generalmente es-
aldehídos, haloalcanos o alquenos que reaccio-
pecíficos para un tipo de
nan con las cadenas de aminoácidos para formar
enzima y no inactivan a
uniones covalentes. Los residuos modificados son
todas las proteínas; no
generalmente grupos hidroxilos o sulfhidrilos; esto
funcionan destruyendo la
incluye a los aminoácidos serina, cisteína, treonina
estructura proteica, sino
o tirosina.
alterando específicamente
Los inhibidores irreversibles forman un complejo el sitio activo. Por ejemplo,
con la enzima reversible y no covalente (EI o ESI) y pH y temperaturas ex-
esto luego reacciona para producir la modificación tremas usualmente cau-
covalente en el “complejo del punto muerto”. Dado san la desnaturalización
que la formación de EI puede competir con ES, la de todas las estructuras
unión de los inhibidores irreversibles puede preve- proteicas, pero este no es
nirse por competencia tanto con el sustrato como un efecto específico. De
con un segundo inhibidor reversible. Este efecto de manera similar, algunos
protección es una buena evidencia de una reacción tratamientos químicos no
específica del inhibidor irreversible con el sitio activo. específicos como el ácido
clorhídrico destruyen la
estructura de la proteína
hidrolizando los enlaces
peptídicos que mantienen
unida a las proteínas, libe-
rando aminoácidos libres.

La cinética de un inhibidor enzimático irreversible se asemeja a la de un inhibidor no com-

petitivo puro porque reduce la concentración de enzima funcional a todas las concentra-
ciones de sustrato.

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EJEMPLO:

El di-isopropilfluorofosfato (DIFP) es un ejemplo de un inhibidor irreversible de la

acetilcolinesterasa (una enzima que degrada el neurotransmisor acetilcolina). La
enzima hidroliza el enlace entre el fósforo y el flúor, pero el residuo de fosfato que-
dó unido a una serina en el sitio activo, desactivándolo. En consecuencia, el DIFP
actúa como una potente neurotoxina.

Un caso particular de inhibición irreversible se verifica cuando ciertas sustancias se unen al

centro activo de la enzima, donde comienza el proceso catalítico; pero cuando alcanza el
estado de transición (ET), el complejo enzima-ET presenta una muy alta afinidad impidien-
do que la reacción prosiga y se forma el producto. A este tipo de inhibidores se los conoce
como sustratos suicidas.

Verificá tu aprendizaje

Actividad 8
Resolvé las siguientes consignas.

1. Definí inhibición enzimática y explicá en qué se basa cada tipo de inhibición (irreversi-
ble, reversible competitiva y reversible no competitiva).

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

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2. Distinguí entre inhibición enzimática e inactivación enzimática.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Actividad 9
Se quiere determinar los parámetros cinéticos de una enzima que se comporta según
Michaelis-Menten en ausencia y en presencia de un inhibidor enzimático. Se obtuvo el
siguiente gráfico:

1. ¿Cómo calcularías los parámetros cinéticos a partir del gráfico? ¿Qué valor se calcula
para los KM y las Vmáx?

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

2. Indicá cuál de las rectas corresponde a la reacción en ausencia (control) o presencia

de dos concentraciones de diferentes inhibidores: A y B. Considerá que la concentra-
ción del inhibidor A es menor que la del inhibidor B.

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

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3. ¿Qué tipo de inhibición ocurre?

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

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 Licenciatura en Nutrición

3. Regulación de la actividad enzimática

RECORDÁ:

Un organismo debe ser capaz de regular la actividad catalítica de sus compo-

nentes enzimáticos, de modo tal que pueda coordinar los numerosos procesos
metabólicos, responder a los cambios de su ambiente y crecer y diferenciarse,
todo esto realizado de manera ordenada.

La célula utiliza varios mecanismos para controlar la actividad catalítica de las enzimas:

• Control de la actividad enzimática. La actividad catalítica de una enzima puede re-

gularse directamente a través de las alteraciones estructurales que influencian la
afinidad de unión enzima-sustrato o el número de recambio.

- Regulación alostérica: modificadores no covalentes que producen un cambio

conformacional entre los estados de mayor y menor actividad de la enzima. Al igual
que la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno está regulada en forma alostérica
por la unión de ligandos como CO2, H+ y 2,3-BPG, la afinidad de unión al sustrato de
una enzima puede variar con la unión de pequeñas moléculas llamadas efectores
alostéricos.

- Regulación por modificaciones covalentes: la actividad de algunas enzimas está

regulada mediante una modificación covalente, usualmente la fosforilación y des-
fosforilación en los aminoácidos serina, treonina y tirosina (aquellos que presentan
un grupo hidroxilo), que producen la interconversión entre las formas activa e inac-
tiva de la enzima.

• Control de disponibilidad de la enzima: control genético. La cantidad de una enzi-

ma dada en una célula depende del equilibrio que se establece entre su velocidad
de síntesis y de su velocidad de degradación. Cada una de estas velocidades está
controlada directamente por la célula a nivel de la transcripción de genes y está su-
jeta a cambios en el tiempo que puede ir desde minutos a horas.

Los mecanismos de control sobre la actividad enzimática pueden responder de forma

rápida (dentro de los segundos o minutos) a un estímulo externo y, por lo tanto, se clasifi-
can como mecanismos de control “a corto plazo”.

Los mecanismos sobre la cantidad de enzima responden más lentamente a los cambios
de las condiciones (dentro de horas o días en los organismos superiores) y, por lo tanto, se
los llama mecanismos de control “a largo plazo”.

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3.1. Regulación alostérica

La actividad de muchas enzimas puede ser con-

trolada por ligandos que interactúan de maneras La actividad de muchas
diferentes de las de los inhibidores competitivos o enzimas puede ser con-
no competitivos. Estos ligandos pueden ser activa- trolada por ligandos. Estos
dores, inhibidores o incluso sustrato de la enzima. pueden ser activadores,
inhibidores o incluso sus-
Los ligandos que producen cambios en la actividad
trato de la enzima.
enzimática pero que no se modifican como resulta-
do de la acción enzimática se denominan efectores,
modificadores o moduladores.

Las enzimas que responden a moduladores tienen

centros conocidos como centros alostéricos, una Las enzimas que respon-
región específica de la enzima diferente del centro den a moduladores tienen
activo. La unión del modulador alostérico provoca centros conocidos como
un cambio conformacional en la enzima de modo centros alostéricos.
que también cambia la afinidad hacia el sustrato u
otro ligando. Los modificadores alostéricos negativos producirán una disminución en la
actividad enzimática, mientras que los modificadores alostéricos positivos incrementa-
rán la actividad de la enzima.

La mayoría de las enzimas alostéricas son oligoméricas, es decir, constan de varias subu-
nidades (dímeros, trímeros, tetrámeros, etc.). Las subunidades idénticas se denominan pro-
tómeros, que a su vez constan de uno o varios polipéptidos. Dada su naturaleza oligoméri-
ca, estas enzimas presentan una cinética sigmoidea y las interacciones que se establecen
entre los centros de unión alostéricos se explican a través del concepto de cooperación.

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37
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Muchas enzimas que tienen una posición central en una vía metabólica lineal o ramificada
pueden ser temporariamente reguladas por el producto final de una o de ambas vías. A
este fenómeno se lo describe como inhibición por producto final o feedback negativo, lo
cual asegura que la síntesis de un producto se frena tan pronto como suficiente cantidad
de producto ha sido generado.

1. Inhibición simple. El producto final (E)

inhibe el paso AB.

2. Inhibición cooperativa. Ambos produc-

tos (D, E) inhiben el primer paso de su
propia síntesis.

3. Inhibición multivalente.

4. Inhibición en una ramificación de una

vía biosintética (inhibición secuencial).

Regulación por inhibición por producto final (feedback negativo).

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38
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3.2. Regulación por modificación covalente

En este tipo de regulación, las formas activa e inacti-

va de una enzima y otras proteínas pueden ser inter- Las formas activa e
convertidas por modificaciones covalentes de sus inactiva de una enzima y
estructuras que son catalizadas por otras enzimas. otras proteínas pueden
ser interconvertidas por
Estas modificaciones covalentes implican la
modificaciones covalentes
unión-desunión de un grupo químico funcional.
de sus estructuras que
La actividad de muchas enzimas, canales de mem-
son catalizadas por otras
branas y otras proteínas son reguladas por fosfori-
enzimas.
lación y desfosforilación, es decir, la unión de un
grupo fosfato o la pérdida de este, la modificación
covalente reversible más común. Sin embargo, existen otros tipos de modificaciones cova-
lentes como, por ejemplo, el agregado de grupos acetilos (acetilación), de ácido miristoico
(miristoilación), de grupos sulfato, entre otros.

Las enzimas que catalizan las reacciones de fosforilación se denominan proteínas quina-
sas, que constituyen una familia de proteínas con más de 500 enzimas homólogas. Estas
enzimas catalizan la transferencia del grupo fosfato terminal (gγ) del ATP a una serina, treo-
nina o tirosina específica de la enzima. Las proteínas fosfatasas catalizan las reacciones
de desfosforilación por eliminación hidrolítica del grupo fosfato, como ortofosfato (Pi).

Es importante notar que la fosforilación y la desfosforilación no son el reverso el uno del

otro; cada uno es esencialmente irreversible en condiciones fisiológicas.

Fosforilar no implica activar. Algunas enzimas son activadas por fosforilación, mientras que
otras son inactivadas.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

39
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RECORDÁ:

En conjunto, las proteínas quinasas y las proteínas fosfatasas crean un sistema

de control cíclico en el que el equilibrio entre la forma activa y la inactiva de la
enzima está dado por la acción de ambas enzimas; en función de cuál de las dos
predomina en su actividad un momento dado, se produce la activación o la inac-
tivación de la enzima.

La fosforilación es un mecanismo altamente efectivo en el control de la actividad de pro-

teínas, tanto desde el punto de vista estructural como termodinámico, cinético y regulador:

• Las dos cargas negativas del grupo fosforilo pueden modificar las interacciones elec-
trostáticas presentes en la proteína no modificada, perdiéndose o formándose nuevas
interacciones en la proteína modificada, alterando la unión al sustrato y la capacidad
catalítica.

• Un grupo fosfato puede formar tres o más puentes de hidrógeno y establecer nuevas
interacciones específicas.

• La fosforilación y la desfosforilación pueden ocurrir durante segundos o hasta por ho-

ras. La cinética puede ser ajustada de acuerdo con las necesidades de los procesos
fisiológicos.

• La fosforilación puede evocar efectos muy amplificados. Una única quinasa activada
puede fosforilar cientos de proteínas diana en un intervalo corto de tiempo. Poste-
riores amplificaciones pueden lograrse dado que las proteínas dianas pueden ser
enzimas, las cuales a su vez pueden transformar un gran número de sustratos.

3.3. Control genético

Las concentraciones de las enzimas –y, en con-

secuencia, las actividades enzimáticas– pueden Las actividades enzimáticas
alterarse por medio de la síntesis de proteínas en pueden alterarse por medio
respuesta a las necesidades metabólicas. Los me- de la síntesis de proteínas
canismos implicados incluyen el control sobre la en respuesta a las necesi-
trascripción génica específica (inducción o repre- dades metabólicas.
sión de genes), el procesamiento del ARN mensa-
jero precursor y la traducción a nivel ribosómico.

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3.4. Isoenzimas

Las isoenzimas son enzimas que catalizan la misma reacción, pero difieren en la secuencia
de aminoácidos, es decir, están codificadas por dis-
tintos loci genéticos y son estructuralmente diferen-
tes. Usualmente estas enzimas tienen parámetros La existencia de las isoen-
cinéticos y/o propiedades reguladoras diferentes. zimas permite un control
La existencia de las isoenzimas permite un control fino del metabolismo
fino del metabolismo adecuado para las necesida- adecuado para las nece-
des particulares de un tejido particular o un estadio sidades particulares de
del desarrollo. un tejido particular o un
estadio del desarrollo.

EJEMPLO:

La enzima lactato deshidrogenasa (LDH), que participa en el metabolismo anae-

róbico de la glucosa y en la síntesis de glucosa, cataliza la reducción del piruvato
a lactato en forma reversible:

LDH

Piruvato + NADH+ H+  Lactato + NAD+

La LDH es un tetrámero constituido por dos cadenas polipeptídicas: H y M (cuya

secuencia de aminoácidos es 75% idéntica), pudiéndose encontrar cinco com-
binaciones diferentes (H4, H3M, H2M2, HM3, M4). La isoenzima H4 se encuentra
principalmente en corazón, tiene una mayor afinidad por el sustrato piruvato que
la isoenzima M4, de músculo esquelético. Además, el piruvato inhibe alostérica-
mente a la isoenzima H4, pero no a la muscular. La isoenzima M4 funciona ópti-
mamente en condiciones anaeróbicas, mientas que la isoenzima H4 lo hace en
condiciones aeróbicas. Otras combinaciones, como la H3M, presentan propieda-
des intermedias.

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3.5. Zimógenos

Algunas enzimas son secretadas en una forma inactiva. Las modificaciones covalentes por
ruptura proteolítica liberan a la forma activa de la enzima.

Muchas enzimas adquieren su actividad enzimática

total cuando espontáneamente se pliegan alcan- Algunas enzimas son
zando su nivel de organización estructural adecua- sintetizadas como precur-
do. Sin embargo, algunas enzimas son sintetizadas sores inactivos que son
como precursores inactivos que son subsecuente- subsecuentemente acti-
mente activados por ruptura de uno o varios enla- vados por ruptura de uno
ces peptídicos. A estos precursores inactivos se los o varios enlaces peptídi-
denomina zimógenos (o proenzimas). De manera cos. A estos precursores
contraria a la regulación reversible por fosforilación, inactivos se los denomina
la activación de un zimógeno es un evento que zimógenos.
puede ocurrir solamente una vez.

EJEMPLO:

Veamos algunos ejemplos de proteólisis específica como mecanismo de activar

enzimas y otras proteínas en los sistemas biológicos.

La quimotripsina es una enzima digestiva que hidroliza proteínas en el intestino

delgado. Su precursor inactivo, el quimotripsinógeno, se sintetiza en el páncreas,
al igual que otros zimógenos y enzimas digestivas. Estos zimógenos son alma-
cenados en gránulos de las células acinares del páncreas hasta que un estímulo
(hormona o impulso nervioso) provoca la liberación del contenido de los gránulos
a los ductos pancreáticos que conducen al duodeno. Este precursor se convierte
a su forma activa por acción de la enzima tripsina, que provoca la eliminación de
un dipéptido de la cadena polipeptídica generando la π-quimotripsina con acti-
vidad enzimática, que actúa sobre otra π-quimotripsina, que elimina un segundo
dipéptido generando α-quimotripsina activa.

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42
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EJEMPLO

La coagulación sanguínea está mediada por una cascada de activaciones proteolí-

ticas que aseguran una respuesta rápida y amplificada ante un trauma.

El colágeno deriva de la ruptura proteolítica del pro-tropocolágeno a nivel extrace-

lular. De manera similar, la pro-colagenasa se activa a colagenasa (la enzima que
cataliza la degradación del colágeno) por acción de una proteasa específica; así, la
síntesis y la degradación del colágeno se encuentran asociadas a muchos proce-
sos del desarrollo.

La apoptosis (muerte celular programada) está mediada por enzimas proteolíticas

denominadas caspasas, las cuales son sintetizadas como precursores. Cuando es-
tas proenzimas son activadas por medio de un conjunto de señales, las funciones
de las caspasas causan la muerte celular.

3.6. Compartimentalización
La compartimentalización
Las vías metabólicas tienen lugar en ubicaciones del citoplasma de la célula
celulares específicas. La compartimentalización del eucarionte permite que las
citoplasma de la célula eucarionte permite que las diferentes vías metabóli-
diferentes vías metabólicas operen en diferentes cas operen en diferentes
ubicaciones y, en consecuencia, la disponibilidad ubicaciones y, en conse-
de sustratos esté limitada. Inclusive, existen en- cuencia, la disponibilidad
zimas que son transportadas entre distintos com- de sustratos esté limitada.
partimentos, como por ejemplo la glucoquinasa
hepática, una enzima citoplasmática que cataliza la
fosforilación de la glucosa cuando los niveles séricos de glucosa aumentan luego de una
ingesta y que es traslocada al núcleo cuando los niveles de glucosa vuelven a los valores
basales (impidiendo, de esta manera, que fosforile a la glucosa, que ahora se obtiene por
degradación del glucógeno almacenado y que el hígado debe transportar hacia la sangre).

COMPARTIMENTALIZACIÓN CELULAR
Orgánulo Principales funciones
Mitocondria Ciclo de Krebs, fosforilación oxidativa, oxidación de ácidos grasos,
degradación de aminoácidos.
Citosol Glucólisis, vía de las pentosas, biosíntesis de ácidos grasos, mu-
chas reacciones de gluconeogénesis.
Lisosoma Digestión enzimática de los componentes celulares y de la ma-
teria ingerida.
Núcleo Replicación y transcripción del ADN, procesamiento del ARN.

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COMPARTIMENTALIZACIÓN CELULAR
Orgánulo Principales funciones
Aparato de Golgi Procesamiento postraduccional de las proteínas de membrana
y secretoras; formación de la membrana plasmática y vesículas
secretoras.
Retículo endoplas- Síntesis de proteínas unidas a la membrana y secretoras.
mático rugoso
Retículo endoplas- Biosíntesis de lípidos y esteroides.
mático liso
Peroxisomas Reacciones oxidativas catalizadas por aminoácido oxidasas y ca-
talasa; reacciones del ciclo del glioxilato en plantas.

Verificá tu aprendizaje

Actividad 10
Explicá el fundamento de los siguientes mecanismos de regulación de la actividad enzi-
mática:

1. Alostérico.

2. Modificación covalente.

3. Genético.

4. Zimógenos.

5. Isoenzimas.

6. Compartimentación celular.

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

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Actividad 11
Indicá si las siguientes afirmaciones son verdaderas (V) o falsas (F) y reescribí de manera
adecuada aquellas que consideres falsas.

1. Una enzima presenta regulación alostérica cuando distintas sustancias compiten con
el sustrato a nivel del centro activo. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

2. Se dice que una enzima se regula covalentemente cuando su actividad es modifica-

da por la unión de ciertos grupos químicos a residuos de aminoácidos. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

3. Hablamos de zimógenos cuando una enzima presenta distintas estructuras molecu-

lares que catalizan la misma reacción. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

4. La inducción o represión genética permite modificar la actividad de una enzima

haciéndola más o menos activa, respectivamente. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

5. Las isoenzimas son enzimas que catalizan distintas reacciones y presentan estructura
molecular idéntica. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Bioquímica I Unidad didáctica: 3. Biocatálisis

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 Licenciatura en Nutrición

6. La presencia de isoenzimas junto con la compartimentación celular es una estrategia

biológica que permite establecer un mecanismo eficiente de regulación enzimática.
V/F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

7. Los mecanismos de regulación por retroalimentación negativa permiten el control de

una vía metabólica por el producto final de la misma. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

8. Todas las enzimas se regulan a través de mecanismos alostéricos, covalentes y ge-

néticos. V / F

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Actividad 12
Resolvé esta enzimogrilla.

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 Licenciatura en Nutrición

1. Capacidad de una enzima para discriminar entre sustratos o ligandos competitivos.

2. Modelo que describe el comportamiento de algunas enzimas como una dependen-

cia hiperbólica de la Velocidad vs [sustrato] (dos palabras).

3. Enzimas que tienen diferente estructura proteica y catalizan la misma reacción.

4. Zona de la enzima donde se une el sustrato para transformarse en producto (dos pa-
labras).

5. Parámetro cinético relacionado con la afinidad de la enzima por el sustrato.

6. Parámetro cinético que depende de la cantidad de enzima presente (dos palabras).

7. Inhibición enzimática que se puede revertir aumentando la concentración de sustrato.

8. Inhibición enzimática que no se puede revertir aumentando la concentración de sus-

trato (dos palabras).

9. Ion inorgánico o coenzima necesaria para la actividad enzimática.

10. Molécula que modula a una enzima, por la unión no covalente, en un sitio distinto
del sitio activo (dos palabras).

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47
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Ideas clave
• Los catalizadores aceleran la velocidad de una reacción porque disminuyen la
energía de activación. Además, entre otras propiedades, permanecen inaltera-
dos al final de la reacción y no modifican la Keq de la reacción.

• Las enzimas son catalizadores orgánicos muy eficaces, específicos y, dada su

naturaleza proteica o de ácido ribonucleico, termolábiles.

• Los cofactores, sean coenzimas o grupos prostéticos orgánicos e inorgánicos,

desempeñan funciones importantes en la catálisis. Algunos cofactores son deri-
vados de vitaminas del complejo B o vitaminas activadas.

• Los sustratos, cuando se unen al sitio activo de las enzimas, inducen cambios
conformacionales mutuos en el otro, que facilitan el reconocimiento del sustrato
y del proceso catalítico.

• La temperatura, el pH, la concentración de enzima, la concentración de sus-

trato y los inhibidores afectan la actividad de las enzimas.

• Para el modelo de Michaelis-Menten, Km (concentración de sustrato necesaria

para alcanzar la mitad de la Vmáx) y Vmáx son los parámetros cinéticos que carac-
terizan a la enzima.

• Las formas lineales de la ecuación de Michaelis-Menten (dobles recíprocos o

Linneweaver-Burke) simplifican la determinación de Km y Vmáx.

• Los inhibidores pueden actuar de forma irreversible cuando se une a la enzima

covalentemente o con muy alta afinidad impidiendo que la enzima catalice la
reacción, o de forma reversible, sea al sitio activo (competitivos) modificando la
Km (aumenta) pero no la Vmáx, o no competitivos cuando se unen a un sitio dife-
rente al sitio activo disminuyendo la Vmáx pero sin afectar Km.

• La homeostasis incluye mantener un ambiente intracelular y dentro de órganos

relativamente constante pese a amplias fluctuaciones en el ambiente externo.
Esto se logra por medio de cambios apropiados en las velocidades de reaccio-
nes bioquímicas en respuesta a necesidad fisiológica.

• El control activo del flujo de metabolitos comprende cambios de la concentra-

ción y/o la actividad catalítica de una enzima que cataliza una reacción limitante
comprometida o enzima clave.

• La unión de metabolitos y segundos mensajeros a sitios distintos del sitio catalí-

tico de enzimas (efectos alostéricos) desencadena cambios conformacionales
que aumentan o disminuyen su actividad, actuando como moduladores positi-
vos o negativos de la enzima.

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• La fosforilación por proteínas quinasas y la desfosforilación subsiguiente por

proteínas fosfatasas regula la actividad de muchas enzimas. Las proteínas qui-
nasas y fosfatasas que participan en cascadas de regulación que responden a
señales hormonales o de segundo mensajero constituyen redes reguladoras
que pueden procesar e integrar información ambiental compleja para producir
una respuesta celular apropiada e integral.

• El control sobre la expresión de una enzima permite aumentar o disminuir la

concentración de la enzima según las necesidades celulares.

• La proteólisis selectiva de proenzimas inactivas (zimógenos) desde el punto

de vista catalítico inicia cambios conformacionales que forman el sitio activo.
La secreción como una proenzima inactiva facilita la movilización rápida de la
enzima en respuesta a lesión o necesidad fisiológica, y puede proteger al tejido
de origen.

• La existencia de isoenzimas, enzimas que catalizan la misma reacción pero

que son genéticamente independientes, es decir, estructuralmente distintas,
le brinda a cada enzima propiedades únicas en cuanto a expresión en tejidos
específicos, compartimentos subcelulares, mecanismos de control, pH óptimo,
entre otros.

• La compartimentación celular permite que se puedan desarrollar reacciones

químicas de forma controlada dado que, por ejemplo, la presencia de mem-
branas separa metabolitos que pueden interferir entre reacciones o evitar la
presencia de metabolitos que alteren la reacción, o que un sustrato que pue-
de derivarse a distintas vías sea selectivamente utilizado para aquella que se
compartimentaliza.

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Solucionario
Actividad 1

a. Catalizador: todo aquello que acelera una reacción química, sea de naturaleza
física (temperatura, descarga eléctrica) o química inorgánica u orgánica.

b. Enzima: ARN o proteínas que actúan como catalizadores, es decir, que aceleran
reacciones químicas.

c. Sustrato y producto: sustrato y producto: sustrato es el/los reactivo/s de la

reacción que cataliza una enzima y producto es el resultado final obtenido.

d. Centro activo: lugar donde se une el sustrato y ocurre el proceso catalítico.

e. Sitio alostérico: lugar de la enzima diferente al centro activo donde se unen mo-
léculas que regulan la actividad catalítica.

f. Cofactor: elemento químico o molécula orgánica necesaria para la actividad de

una enzima.

g. Coenzima: cofactor de naturaleza orgánica que se une a la enzima cuando ocu-

rre la reacción química y se libera de ella cuando finaliza.

h. Grupo prostético: cofactor metálico o de naturaleza orgánica, que se encuentra

y permanece a la enzima.

i. Holoenzima: el complejo cofactor + apoenzima.

j. Apoenzima: parte proteica de una holoenzima.

k. Inhibidor: molécula que disminuye o inactiva una enzima.

Actividad 2

1.

• Especificidad: la capacidad que tienen las proteínas y los ARN de alcanzar es-
tructuras con niveles de organización espacial, por lo menos, estructuras ter-
ciarias, le permite generar sitios en donde ocurran interacciones adecuadas
con buena afinidad entre la enzima y su/s sustrato/s para que ocurra el pro-
ceso catalítico.

• Regulación: en particular haciendo referencia a las enzimas con naturaleza pro-

teica, como cualquier otra proteína que participa de proceso celulares, puede
ser controlada por una variedad de mecanismos tanto a nivel de su actividad
como a nivel de su concentración (incluso vale para los ARN catalíticos).

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• Termolabilidad: como consecuencia de su naturaleza proteica o de ARN son

sensibles procesos de desnaturalización y pérdida de sus niveles de organiza-
ción estructural.

2. Por ser un catalizador, una enzima disminuye la energía de activación de la

reacción (energía necesaria para alcanzar el estado de transición) acelerando en
consecuencia la transformación de sustrato en producto.

3. (Para los ejemplos volver a revisar las tablas 1 y 2). Algunas vitaminas, derivados
de vitaminas, coenzimas, metales actúan como cofactores enzimáticos, sin los
cuales aquellas enzimas que los requieren pierden su actividad biológica.

Actividad 3

a. Oxirreductasa.

b. Transferasa.

c. Liasa.

d. Isomerasa.

e. Ligasa (sintetasa).

Actividad 4

1. El gráfico relaciona la velocidad de actividad de una enzima en función de la

concentración del sustrato.

2. Los parámetros cinéticos son la velocidad máxima (la velocidad en la que el sus-
trato satura la enzima) y la constante de Michaelis-Menten (la concentración de
sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad máxima).

3. En principio, no se podría establecer la velocidad máxima ya que el gráfico no

muestra que se mantengan dos velocidades cuando aumenta la concentración
de sustrato; por lo tanto, asumiendo que el último punto hace referencia a la Vmax,
entonces en el gráfico los parámetros cinéticos serían:

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51
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4. Para realizar el gráfico de Linnerweaver-Burke hay que tomar los puntos repre-
sentados en el gráfico V en función de sustrato, calcular 1/el valor y graficar los
nuevos valores obtenidos 1/V vs 1/S. Tomando valores aproximados:

V S 1/V 1/S
30 20 0,033 0,05
70 50 0,0143 0,02
80 100 0,0125 0,01
88 200 0,0113 0,005
95 500 0,0105 0,002

Con esos valores de 1/V y 1/S se realiza el gráfico. Se prolonga la recta para poder
ubicar los parámetros cinéticos:

• 1/Km es el valor donde la recta corta el eje X.

• 1/Vmáx es el valor donde la recta corta el eje Y.

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Actividad 5

La temperatura favorece el proceso catalítico hasta alcanzar un valor máximo que se

corresponde con la temperatura (o rango de temperatura) óptima en la que la enzima
alcanza su mayor actividad. Las temperaturas mayores a la óptima pueden producir
fenómenos de desnaturalización con la consecuente pérdida de la estructura protei-
ca, del centro activo y, finalmente, la actividad catalítica. A bajas temperaturas dismi-
nuye el movimiento de moléculas, por lo cual las interacciones entre sustrato y enzima
son menores y, en consecuencia, disminuye la actividad enzimática.

Actividad 6

El aumento o disminución de la concentración de protones modifica la ionización de

grupos químicos de las cadenas de los aminoácidos presentes en la enzimas y grupos
químicos del sustrato, por lo cual existe un pH o rango de pH en el que se verifican
las mejores interacciones entre el sustrato y el centro activo de la enzima y la enzima
alcanza su máxima actividad, el pH óptimo. Por fuera de este pH óptimo, los cambios
y modificaciones de las interacciones conducen incluso a la desnaturalización de las
enzimas, llegando a perder toda su actividad.

Actividad 7

La enzima 1 presenta un pH óptimo cercano a 2, por lo cual su mejor actividad la de-

sarrollará a pH muy ácido.

La enzima 2 presenta un pH óptimo cercano a 7, por lo cual su mejor actividad la de-

sarrollará a pH neutro.

La enzima 3 presenta un pH óptimo cercano a 10, por lo cual su mejor actividad la de-
sarrollará a pH alcalino.

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Actividad 8

1. La inhibición enzimática es la disminución o pérdida de la actividad de una enzi-

ma como consecuencia de la unión de sustancias de forma reversible o irreversi-
ble, sea al centro activo o a sitios alostéricos.

En la inhibición irreversible, el inhibidor produce cambios químicos a nivel del

centro activo alterando la estructura e impidiendo que el sustrato pueda inte-
raccionar en consecuencia. Además, puede darse el caso de que el inhibidor, al
unirse al centro activo, genere un estado de transición de muy alta afinidad y el
complejo enzima-estado de transición se estabilice y no progrese la reacción con
formación de producto.

En la inhibición reversible, el inhibidor mantiene un estado de equilibrio con la

enzima entre la forma unida y la forma no unida. Dependiendo de dónde se una
será competitiva si lo hace en el centro activo o no competitiva si lo hace en un
sitio alostérico.

2. La inhibición hace referencia a un fenómeno específico, por unión reversible o

irreversible del inhibidor al centro activo de la enzima o a otros sitios; mientras
que la inactivación hace referencia a la pérdida de la actividad enzimática como
consecuencia de la pérdida de su estructura, por ejemplo por desnaturalización.

Actividad 9

1. 1/Km es el valor donde la recta corta el eje X; 1/Vmax es el valor donde la recta corta
el eje Y.

Para los tres casos, Km = 1.

• Línea negra: Vmáx = 500

• Línea azul: Vmáx = 200

• Línea roja: Vmáx = 100

2. La línea negra corresponde al control sin inhibidor, la línea azul al inhibidor con me-
nor concentración y la línea roja al inhibidor con mayor concentración.

3. El tipo de inhibición es no competitiva ya que el inhibidor no modifica Km y disminuye

la Vmáx.

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Actividad 10

1. Alostérico: unión de moléculas a sitios diferentes al centro activo (sitios alosté-

ricos) que pueden actuar como moduladores positivos, incrementando la acti-
vidad de la enzima, o moduladores negativos, disminuyendo la actividad de la
enzima.

2. Modificación covalente: unión y pérdida de grupos químicos que modifican la ac-

tividad de la enzima definiendo un estado activo y un estado inactivo. Por ejem-
plo, unión-eliminación de grupo fosfato: fosforilación-desfosforilación.

3. Genético: control sobre la cantidad (concentración) de la enzima que se realiza a

nivel de la expresión del gen que la codifica. De esta manera, se aumenta o dis-
minuye la cantidad de enzima disponible.

4. Zimógenos: enzimas que se sintetizan como precursores inactivos y que son ac-
tivadas por ruptura proteolítica específica.

5. Isoenzimas: enzimas que catalizan la misma reacción pero que son estructural-
mente diferentes, es decir, son genéticamente independientes.

6. Compartimentación celular: enzimas que catalizan reacciones en compartimen-

tos celulares específicos o enzimas que pueden ser traslocadas entre diferentes
compartimentos.

Actividad 11

1. Falso. Una enzima presenta regulación alostérica cuando distintas sustancias se

unen a sitios alostéricos diferentes al centro activo.

2. Verdadero.

3. Falso. Hablamos de zimógenos cuando una enzima se sintetiza como un precur-

sor inactivo que se activa por ruptura proteolítica.

4. Falso. La inducción o represión genética permite modificar la concentración de

una enzima ya que es un mecanismo que actúa a nivel de la expresión de los
genes.

5. Falso. Las isoenzimas son enzimas que catalizan la misma reacción y presentan
estructura molecular diferentes.

6. Verdadero.

7. Verdadero.

8. Falso. Algunas enzimas son regulables y no hay condición que defina que deba
hacerlo por todos los mecanismos posibles.

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Actividad 12

1. Especificidad.

2. Michaelis-menten.

3. Isoenzimas.

4. Sitio activo.

5. Km.

6. Velocidad máxima.

7. Competitiva.

8. No competitiva.

9. Cofactor.

10. Modulador alostérico.

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