UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS

ACADEMIA DE BIOQUÍMICA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA VETERINARIA II

Documento actualizado por:

M. en C. David L. Meléndez Martínez

M.I.A.E. Edith Enríquez Gallosa

M. en C. Leny Álvarez Araujo

Vo.Bo.:

M. en C. Julio César Del Hierro Ochoa

Coordinador de la Academia de Bioquímica

Autorizado por:

Ph. D. Antonio De la Mora Covarrubias

Jefe del Departamento de Ciencias Químico Biológicas

Cd. Juárez Chihuahaua

Mayo del 2016

Instituto de Ciencias Biomédicas

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

Semestre regular Enero – Mayo 20XX

Semestre regular Agosto – Noviembre 20XX

Curso de Verano Junio – Julio 20XX

NOMBRE DEL ALUMNO____________________________________

MATRICULA ____________________

HORARIO DE TEORIA ____________________

HORARIO DE LABORATORIO_______________

GRUPO DE LABORATORIO _________________

NUMERO Y/O NOMBRE DEL EQUIPO ______________________

CONTENIDO

PRÁCTICA 1. BIOSEGURIDAD Y MANEJO INTEGRAL DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA…….10

PRÁCTICA 2. DETECCIÓN DE AMILASA……………………………………………………………….….…9

PRÁCTICA 3. CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA…………………...……………………………12

PRÁCTICA 4. DETECCIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS…………………………………………….……...26

PRÁCTICA 5. CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL SÉRICO……………………………….……………..29

PRÁCTICA 6. CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS SÉRICAS……………………...................................36

PRÁCTICA 7. CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO………….………..….............................................40

PRÁCTICA 8. DETERMINACIÓN DE CREATININA Y UREA SÉRICA……………….............................44

PRÁCTICA 9. DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINAS…………………………………..…………………..49

PRÁCTICA 10. CUANTIFICACIÓN DE TRANSAMINASAS SÉRICAS…………………..……………..…..53

 PROLOGO

Uno de los aspectos fundamentales de la enseñanza de materias correspondientes al área de

las Ciencias Químico-Biológicas en la parte de las asignaturas Básicas, es que el estudiante debe de
comprender los elementos teóricos revisados. Con el fin de reafirmar dichos conocimientos es necesario
que los practiques en el Laboratorio y como consecuencia reciban los refuerzos apropiados y al final de
dicho curso este compenetrado con la materia analizada.
En la Academia de Bioquímica siempre ha existido el interés de que los alumnos que cursen
dichas materias tengan la capacidad de comprender los fenómenos moleculares tanto a nivel celular
como del organismo.
El individuo que se dedique a la investigación y/o a la enseñanza de la Bioquímica, debe de estar
convencido de que el ensayo de formas más eficientes de involucrar al alumno en el estudio de ésta
interesante área, es la única manera de evolucionar positivamente en la investigación y en la excelencia
académica.
Conscientes de las modificaciones en el proceso de la educación del área pecuaria, se ha hecho
una selección de las prácticas del “Manual de Bioquímica General” original de acuerdo con la carta
descriptiva de la asignatura, con el único fin de fomentar la interrelación de los conocimientos teóricos
con la actividad práctica, de una manera más organizada, en aras de un mayor aprovechamiento de la
enseñanza Bioquímica. En base a este pensamiento, les presentamos el "Manual de Prácticas de
Laboratorio de Bioquímica Veterinaria II", con las prácticas que reforzarán al alumno esa parte teórica.
 PRESENTACIÓN

El alumno que estudia la carrera de Médico Veterinario Zootecnista, al estudiar bioquímica, adquiere los
conocimientos para entender los conceptos básicos que le permitirán abordar después otros temas
relacionados con la estructura y funciones del organismo animal.

Por todo lo anterior, en el programa de estudios de la carrera se ha incluido la materia de bioquímica con
horas de teoría y prácticas de laboratorio, estas para tratar de relacionar el análisis teórico con la práctica
de experimentos, motivando así al alumno a desarrollar un adecuado criterio científico, que le permita
cuestionar, reflexionar y aplicar los conocimientos adquiridos.

Es conveniente que el alumno adquiera, desde el inicio de su preparación universitaria, el hábito correcto
en el manejo de los reactivos, materiales y equipos de laboratorio. Por eso se ha diseñado este manual
en tal forma que se ajuste a las limitaciones en cuanto a tiempo y recursos con que cuenta la el
programa. En el manual se incluyen técnicas para llevar a cabo la extracción, la separación, la
cuantificación o la prueba de actividad de algunos compuestos considerados de interés dentro del
temario de la asignatura.

Es necesario aclarar que el presente manual no deberá constituir la única fuente de información, para el
apoyo del laboratorio durante el curso. El alumno deberá llevar a cabo una investigación bibliográfica
complementaria y conocer los prerrequisitos del tema de la práctica antes de realizar cada experimento.
 REGLAS PARA LOS ALUMNOS QUE ASISTEN A LOS LABORATORIOS DE BIOQUÍMICA
1. - Al inscribirse en la materia queda automáticamente inscrito en un grupo de Laboratorio. El maestro
no está facultado para realizar cambios de grupo y/o permutas.
2. - La asistencia a los laboratorios es obligatoria y deberán presentarse con un retardo no mayor de 10
minutos de la hora de entrada.
3. - Para tener derecho a calificación final del laboratorio, se requiere contar con un 80 % de
asistencias.
4. - Toda falta a la práctica equivale a cero en su reporte.
5. - Es obligatorio presentarse con bata blanca de manga larga a las sesiones de laboratorio.
6. - Durante las sesiones de laboratorio queda estrictamente prohibido fumar e ingerir alimentos.
7.- La calificación final de laboratorio corresponde al promedio obtenido en las prácticas, exámenes y
trabajo en el laboratorio.
8.- Los reportes de la semana se entregarán obligatoriamente en el horario establecido por el maestro.
La aceptación extemporánea de reportes queda a consideración del docente.
9.- Los reportes ya calificados, se devolverán a la semana siguiente.
10.- El material que sea dañado por el alumno, deberá reponerse antes de finalizar el curso
acompañado con la factura de compra. De no ser así no se condicionará la calificación del alumno.
11.- Si parte del material es dañado o se pierde y se desconoce al responsable, el material será
repuesto por el grupo asistente a la práctica.
12.- Se realizarán los exámenes de laboratorio pertinentes en las fechas indicadas en la calendarización
de la academia.
13.- Es obligación del alumno entregar el material limpio cada vez que termine su práctica.
14.- Se recomienda mantener limpia su mesa de trabajo y guardar el mayor orden posible.
15.- El alumno se deberá comprometer a regresar el material en las mismas condiciones en que lo
recibieron.
16.- Los reportes o bitácora se calificarán en base a los acuerdos de la academia, teniendo mayor peso
los siguientes
Apartados:
A) Resultados
B) Discusión
C) Conclusiones
D) Cuestionario
E) Bibliografía
El maestro detallará la forma de reportar dentro del encuadre, el día de la recepción del grupo.
Incluyendo el trabajo experimental y la discusión y participación en la práctica.
18.- Es obligación del alumno investigar sobre el tema de la práctica previa realización de ésta, en caso
de presentarse sin haber estudiado se considerará como falta de interés, afectando la calificación de la
participación de la misma.
19.- De igual manera, para aquél alumno que no se prepare para la discusión de las prácticas, se verá
afectado en la parte de su calificación de correspondiente a la misma.

INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE MANUAL

Con la idea de que el alumno pueda manejar de manera más eficiente este Manual se hacen las
siguientes recomendaciones:
1.- Al principio del Manual se incluye un índice de las prácticas a realizar, que permite su rápida
localización.
2.- La secuencia de prácticas, está en función de los programas de teoría y cabe aclarar que en la
primera sesión se les indicará cuales prácticas se van a realizar durante el semestre.
3.- Todas las prácticas están subdivididas en dos partes:
a) Incluye la descripción metodológica de la práctica, que a su vez se subdivide en:
- Título de la práctica
- Objetivo de la práctica
- Prerrequisitos
- Introducción
- Material y Métodos
b) Contiene los elementos correspondientes al reporte de la práctica y se subdivide en:
- Resultados
- Discusión
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía consultada
4.- A continuación, se mencionan algunos aspectos significativos de cada uno de estos elementos:
a) Título de la práctica. - Indica el nombre de la práctica y la de manera específica de lo
que se va a realizar durante la sesión.
b) Objetivo de la práctica. - Señala lo que se espera que el alumno logre al término de
esta.
c) Prerrequisitos. - Comprende una serie de puntos, que el alumno debe de conocer su
significado con anterioridad a la explicación de la práctica, para lo cual se recomienda
consultar la bibliografía recomendada al final de este Manual.
d) Introducción. - Información básica y muy breve, referente a la práctica a realizar.
e) Métodos y Materiales. - Es la descripción del desarrollo de la práctica, señalando el
equipo, cristalería y soluciones a utilizar en la práctica.
 Es importante que el alumno entienda la secuencia del desarrollo antes de iniciar el
experimento, por lo cual es necesario que se lea antes de la sesión de explicación de la
práctica, para que pueda consultar sus dudas con el Docente.
f) Resultados. - En esta sección se anotan los datos obtenidos durante la sesión de la
práctica, de acuerdo a las indicaciones tanto del Manual como del Profesor.
h) Discusión. - Es una de las partes principales de todo experimento, ya que consiste en
realizar un análisis comparativo de los resultados esperados con respecto a los
obtenidos, llevando a cabo la argumentación necesaria de dichos resultados.
i) Conclusiones. - En base a los resultados obtenidos y a la discusión desarrollada,
concluir cuales son los puntos principales y que consecuencias a futuro plantean esta
práctica.
j) Bibliografía consultada. - En este punto se deben incluir las referencias bibliográficas
de los libros o artículos consultados, de acuerdo a los siguientes lineamientos:

En el caso de revistas:
Nombre(s) del autor(es), (año), Título del artículo Nombre de la Revista,
Volumen, Páginas consultadas

En el caso de libros:
Nombre(s) (de los autores), (año), Nombre del capítulo. Nombre del
libro. Editorial. Edición. País. Páginas consultadas.
 PRÁCTICA # 1

BIOSEGURIDAD Y MANEJO INTEGRAL DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

OBJETIVO
El alumno aprenderá acerca de la normatividad que rige en el laboratorio de bioquímica para evitar
cualquier riesgo de accidente y trabajar de forma segura, así como de los materiales, equipo,
reactivos y de los usos adecuados de los mismos.

PRERREQUISITOS
1. Diferencias entre regla, reglamento, norma y ley.
2. Diferencia entre ley y costumbre.
3. Organismos que rigen las normatividades.
4. Normas involucradas en la seguridad de los laboratorios.
5. Conocimientos sobre soluciones, diluciones y mezclas.
6. Diferencia entre fotocolorímetro, colorímetro y espectrofotómetro.
7. Definiciones y diferencias entre soluciones Molar, Normal y % w/v.

INTRODUCCIÓN
 Bioseguridad es una palabra compuesta por bio (del latín que significa vida) y seguridad
(del latín securitas que significa ausencia de riesgo).
El riesgo es la vulnerabilidad ante un daño para personas, cosas y/o el medio ambiente. Existe una
variedad de riesgos en los que se encuentran los riesgos físicos, químicos, biológicos, ambientales,
laborales, financieros, políticos, etc.
Sin embargo, en el trabajo dentro de un laboratorio, el nivel de seguridad depende del grupo de
riesgo. De acuerdo al manual de la Organización Mundial de Salud (2005), hace referencia al grupo
de riesgo con el nivel de bioseguridad y el tipo de laboratorio en que se trabaje, incluyendo como
una consecuencia las prácticas de laboratorio y el equipo de seguridad a utilizar, como se
establece en la tabla 1.
En los laboratorios de docencia mismos en los que se encuentra clasificado la academia de
bioquímica de esta Institución (UACJ), el material y el equipo deberán contar con un manual de
procedimientos para el uso adecuado de los mismos y en consecuencia evitar riesgos posibles de
accidentes o incidentes que puedan dañar al personal y al mismo tiempo al material y equipo en
cuestión.
En el manejo de sustancias químicas reactivas también se encuentran presentes los riesgos, es
por eso que de acuerdo a la Secretaria de Trabajo y Prevención Social en su Norma 018-STPS-
2000 y al programa de Comunicación de Riesgos de la OSHA (Occupational Safety and Health
Administration), ha sido implementado el uso de las hojas de uso seguro de los materiales o
material safety data sheet (MSDS por sus siglas en ingles), mismas que están al alcance de todo el
personal usuario. Cada sustancia que se maneje en los laboratorios deberá estar debidamente
etiquetada y referenciada con un esquema el cual manifiesta el grado de riesgo de las sustancias
químicas. Mismo con el cual podemos identificar rápidamente el tipo de riesgo al que estamos
expuestos. Vea la figura 1

Tabla 1 Relación de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las prácticas y el equipo
OMS (2005)

Grupo de Nivel de Tipo de Prácticas de laboratorio Equipo de

riesgo bioseguridad laboratorio seguridad
1 Básico Enseñanza TMA (Técnicas Ninguno; trabajo
Nivel 1 básica, Microbiológicas en mesa de
investigación Apropiadas) laboratorio al
 descubierto
2 Básico Servicios de TMA y ropa protectora; Trabajo en mesa al
Nivel 2 atención señal de riesgo descubierto y CSB
primaria; biológico (Cámara de
diagnóstico, Seguridad
investigación Biológica) para
posibles aerosoles
3 Contención Diagnóstico Prácticas de nivel 2 CSB además de
Nivel 3 especial, más ropa especial, otros medios de
investigación acceso controlado y contención
flujo direccional del aire primaria para todas
las actividades
4 Contención Unidades Prácticas de nivel 3 CSB de clase iii o
máxima patógenos más cámara de entrada trajes presurizados
Nivel 4 peligrosos con cierre hermético, junto con CSB de
salida con ducha y clase ii, autoclave
eliminación especial de de doble puerta (a
residuos través de la pared),
aire filtrado

Figura 1. Rombo de riesgos químicos

El Sistema de Comunicación de Riesgos (Right To Know) muy utilizado en los E.U.A. nos refiere de
manera explícita de los riesgos y daños a los cuales estamos expuestos por el manejo de una
sustancia y qué equipo de protección personal se debe de utilizar. Aquí en México la Secretaria de
Trabajo y Previsión Social también se preocupa por los riesgos ocupacionales de los diferentes
centros de trabajo junto con la Secretaria de Salud, por lo que también existen señalizaciones para
determinar las áreas de trabajo, puertas de acceso, y salidas, áreas despejadas, código de
tuberías para sustancias que corran en ellas, etc. Es por eso que es muy importante tomar en
cuenta las barreras de protección y el tipo de ellas, según su clasificación: física, química y
biológica.
También es importante hacer hincapié en el manejo apropiado de los desechos de las sustancias
químicas, tejidos, agares y material peligroso biológico infeccioso (RPBI), que se manejan en los
laboratorios los cuales son vigilados por la SEMARNAT ya que estos son dispuestos al medio
ambiente, llámese agua (a los drenajes que a pesar de llegar a una planta de tratamiento de agua
residuales en algunas ocasiones, estas siguen su curso a canales de irrigación y/o acequias para
riego de cultivos y por ende al subsuelo), cielo abierto (por la emisión de los gases y que
contaminan el aire que respiramos) o tierra (con la disposición de los residuos sólidos que
impactan a el medio alterando los ciclos naturales biológicos).
Los residuos RPBI, son aquellos que se generan durante las actividades asistenciales a la salud de
humanos o animales en los centros de salud, laboratorios clínicos o de investigación, bioteros,
centros de enseñanza e investigación, principalmente; que por el contenido de sus componentes
puedan representar un riesgo para la salud y el ambiente.
De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, son considerados los
siguientes como se muestra en la tabla 2.

Tabla 2. Características físicas y biológicas de los residuos infecto-contagiosos

TIPO DE RESIDUO EDO. FÍSICO ENVASADO COLOR

Sangre Líquidos Recipientes herméticos Rojo
Cultivos y cepas de agentes
Sólidos Bolsa de polietileno Rojo
infecciosos
Patológicos Sólidos Bolsa de polietileno Amarillo
Líquidos Recipientes herméticos Amarillo
Residuos no anatómicos Sólidos Bolsa de polietileno Rojo
Líquidos Recipientes herméticos Rojo
Recipientes rígidos
Objetos punzocortantes Sólidos Rojo
poliprolileno

 Manejo Integral de un Laboratorio

Por otro lado, para llevar a cabo un experimento en cualquier laboratorio obteniendo los mejores
resultados, es necesario que se manejen técnicas básicas de experimentación tales como se indica
a continuación, de acuerdo a los procedimientos de manejo y a la clasificación del material y el
equipo
- Técnicas de medición de líquidos.
- Técnicas de pesado de sólidos.
- Técnicas de separación de líquidos y sólidos.
- Técnicas de cuantificación de líquidos y sólidos.
- Técnicas de mezclado de líquidos y sólidos.

Todas estas técnicas se relacionan con frecuencia con las actividades que cotidianamente se
llevan a cabo en el laboratorio de Bioquímica. Es importante dentro del trabajo de un laboratorio
tomar en cuenta conceptos tales como precisión, exactitud y confiabilidad.

De acuerdo al Centro Español de Metrología

Exacto: es la capacidad de obtener valores o indicaciones próximas al valor verdadero de la
magnitud medida, es decir, será más exacto cuanto más pequeño sea el error sistemático de
medida
Preciso: es la capacidad de obtener valores o indicaciones próximas entre sí al efectuar
mediciones repetidas, será pues más preciso cuanto menor sea la dispersión que presentan entre
sí los sucesivos resultados obtenidos

Por lo que podemos tener 4 tipos de resultados:

1. - Exacto y preciso: Resultados muy próximos entre sí, con un valor medio muy cercano al valor
verdadero.

2. - Exacto, pero no preciso: Valor medio muy cercano al valor verdadero, pero gran dispersión de
los resultados en torno al valor medio.

3. - Preciso, pero no exacto: Resultados muy próximos entre sí, pero valor medio alejado del valor
verdadero.
4. - Ni preciso ni exacto: Gran dispersión de los resultados en torno al valor medio y valor medio
alejado del valor verdadero.

De acuerdo a la Escuela Colombiana de Metrología

Confiabilidad: Es cuando los resultados obtenidos son iguales a los pronosticados.

Para la medición de líquidos:

Los instrumentos más utilizados son: pipetas (serológicas y volumétricas), buretas,
probetas y matraces volumétricos o aforados. Estos materiales de vidrio pueden modificar la
exactitud de la medición debido a cambios extremosos de temperatura. La temperatura promedio
de trabajo es de 25 °C.

Para el pesado de sólidos:

El equipo utilizado son las balanzas granatarias, analítica y hace muchos años las de
torsión. Las balanzas granatarias son útiles en el laboratorio de bioquímica como una herramienta
para el buen uso de la centrífuga, ya que para equilibrar los tubos de centrífuga siempre debe
hacerse en base al peso y volumen del contenido.

Para la separación de líquidos y sólidos:

Se encuentran todas las centrífugas (clínicas y microcentrífugas), donde se separan las
fases diferentes a alta velocidad, quedando en la base del recipiente contenedor el sedimento y la
porción líquida en la parte superior como sobrenadante.

Para la cuantificación de líquidos y sólidos:

Los fotómetros, colorímetros y especialmente los espectrofotómetros son los equipos
mayormente usados en la cuantificación de soluciones, donde dependiendo de la cantidad de los
solutos dan una turbidez o coloración que detectan estos aparatos a una longitud de onda. Estas
soluciones están basadas en el mezclado de líquidos y sólidos.

Mezclado de líquidos y sólidos:

Las soluciones normales, molares y porcentuales, así como los diferentes tipos de
diluciones son las mezclas más utilizadas en el laboratorio. Frecuentemente, las soluciones
involucran mezclas de sólidos en líquidos o de líquidos en líquidos, en tanto que las diluciones solo
involucran mezclas líquidas en líquidos. De la destreza con que se lleven a cabo estas mezclas
depende el buen resultado de la experimentación en el laboratorio.
El propósito de esta parte de la práctica, es evaluar la capacidad de cada alumno para la
aplicación de todas las técnicas antes descritas, que son una base importante para el desarrollo de
prácticas posteriores.

METODOLOGÍA.

MATERIAL:
a) En lo referente a bioseguridad, normas aplicables a el uso y manejo de laboratorios
b) En lo referente al material y equipo:
1. 1 pipeta de 10 ml
2. 1 pipeta de 5 ml
3. 1 pipeta de 2 ml
4. 1 pipeta de 1 ml
5. 1 pipeta de 0.5 ml
6. 1 pipeta de 0.2 ml
7. 1 pipeta de 0.1 ml
8. 1 micropipeta de 10 a 100 microlitros
9. 1 micropipeta de 100 a 1000 microlitros
 10. 1 probeta de 100 ml
11. 1 probeta de 250 ml
12. 1 probeta de 1000 ml
13. 1 bureta de 50 ml
14. 1 matraz Erlenmeyer de 125 ml
15. 1 balanza granataria
16. 1 espectrofotometro
MÉTODOS
Investigación y experimentación
Procedimientos:
A.
Investigue en las diferentes referencias impresas o computarizadas el marco
teórico sobre el cual se sustenta la minimización de los riesgos para la
realización del trabajo seguro en cualquier laboratorio
B.
En presencia del maestro, haga un listado de todo el material del laboratorio de
acuerdo a su material de elaboración, e investigue la función de cada uno de ellos,
por ejemplo:

Cristalería Función
Tubos de ensaye
Pipetas serológicas
Pipetas volumétricas
Matraces Erlenmeyer
Porcelana
Morteros con pistilos
Metálico
Soporte universal
Gradilla
Pinzas para bureta

Haga lo mismo para el equipo localizado en el laboratorio

C. En equipos de trabajo según lo indique el maestro, irán los alumnos

conociendo, manipulando y a su vez comparando todo el material que requieran
para hacer los siguientes experimentos.
 Medición de líquidos. - Utilizando pipetas serológicas de diferentes
volúmenes y en presencia del profesor, seleccione la pipeta adecuada
para hacer las siguientes mediciones:
a) 0.05 mL b) 5 décimas de mililitro c) 2.4 mL
b) d) 5.6 mL e) 9.8 mL
Así mismo, utilizando la probeta adecuada mida también los siguientes
volúmenes:
a) 28 mL b) 125 mL c) 265 mL
Utilizando la probeta de 100 mL, llene hasta 50 mL y vacié a la bureta y
posteriormente vacié al matraz Erlenmeyer de 125 mL Observe y registre
todos los detalles del proceso
 Medición de sólidos. - Utilizando la balanza granataria y en presencia del
profesor, realice las siguientes pesadas:
a) 1.5 g b) 5.5 g c) 9.8 g d) 27.5g e) 60 g
  Cuantificación de líquidos y sólidos
Diluciones dobles. - Utilizando una solución madre de permanganato de
potasio, realice las siguientes diluciones de tal manera que contenga un
volumen total de 4 mL:
a) Dilución 1:2 b) dilución 1:4 c) dilución 1:8 d) dilución 1:16
Mida en el espectrofotómetro la absorbancia de cada dilución a una longitud de
onda de 520 nm. Registre sus absorbancias.
 Mezclado de líquidos y sólidos
Soluciones. - Utilizando un reactivo sólido que indique el profesor, prepare
las siguientes soluciones:
a) Solución 1.5% peso/volumen
b) Solución 0.1 molar
c) Solución 0.5 normal
Una vez hechas las soluciones, proceda a medir las absorbancias en el
espectrofotómetro a la longitud de onda que le indique el profesor. Registre los
valores de absorbancia.
 Separación de líquidos y sólidos
De las soluciones anteriores coloque 5 mL de cada una de las soluciones
en tubos de ensaye y coloque un cuarto tubo con 5 mL de agua destilada,
centrifugue y observe y registre los resultados.

RESULTADOS
DISCUSIONES
CONCLUSIONES

BLIBLIOGRAFIA CONSULTADA
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Organización Mundial de la Salud.Tercera
Edición. Ginebra 2005
Hanbook of Good Laboratory Practice (GLP). World Health Organization. TDR For
Research on diseases of poverty UNICEF – UNDP – World Bank – Who Switzeiland
Second Edition
Centro Español de Metrología. www.cem.es/preguntas_frecuentes/ 02-mayo-2013

Escuela Colombiana de Metrología. Metrología y Mecánica de Banco. Protocolo.

Escuela Colombiana de Ingeniería “Julio Garavito”, Edición 2007-1 Pág. 12 02-mayo-2013
www.escuelaing.edu.co/programas/ing_industrial/.../metrologia.pdf

CUESTIONARIO

1. Diferencia entre acto inseguro y condición insegura

2. ¿Cuál es la norma mexicana que comunica los riesgos de las sustancias químicas con la
hoja de datos de uso seguro y el del rombo de colores?

3. ¿Qué significado tiene este esquema?

4. Mencione tres barreras químicas de seguridad

5. Diga de qué color y en qué tipo de recipientes deben desecharse los objetos
punzocortantes.

6. ¿En que se fundamentan todos los laboratorios para el uso de bata, lentes y guantes
durante el trabajo en los mismos?

7. ¿Qué diferencia existe entre la pipeta serológica y la volumétrica?

8. ¿Qué diferencia existe entre una pipeta terminal (to deliver) y una subterminal (to contain)?

9. ¿Qué tipo de material se debe usar para preparar 1 litro de una solución 0.1 M de
bicarbonato de sodio?

10. ¿Cuándo debe utilizarse el vaso de precipitado?

11. ¿Qué tipo de charola puede utilizarse en el horno?

12. ¿Por qué cuando se utilizan las incubadoras de calor húmedo, se debe utilizar gradillas de
plástico y no metálicas o de alambrón?

13. Mencione los nombres tanto de un material como de un equipo de exactitud y precisión.

14. Mencione dos nombres de materiales que no sean exactos ni precisos

15. Mencione un parámetro de confiabilidad dentro de los materiales y equipos de laboratorio

16. ¿Cuál es la diferencia entre un fotómetro, un colorímetro y un espectrofotómetro?

17. Nombre de la ley involucrada como fundamento en el manejo del espectrofotómetro

18. ¿Cuál es el fundamento de la ley antes mencionada?

19. ¿Cuáles son las fuerzas ejercidas en el manejo de la centrífuga?

20. ¿Qué es el menisco y como se debe leer?

21. ¿Qué equipo necesita usar para obtener una muestra de 10 mg de NaCl?

22. ¿Qué es Normalidad?

23. ¿Cómo se prepara una solución 3.5 Molar de K2CrO7?

24. ¿Qué diferencia existe entre una solución % v/v y una % p/v?

25. ¿Qué refiere la ley de Lambert y Beer?

26. ¿Por qué es tan importante esta ley?

 PRÁCTICA # 2

DETECCIÓN DE AMILASA

OBJETIVO

El alumno podrá conocer la importante actividad que realiza la enzima amilasa en el

organismo animal.

INTRODUCCIÓN

La a-amilasa es una enzima que hidroliza enlaces glucosídicos de los polisacáridos almidón y
glucógeno, dando como productos, maltosa, maltotriosa, dextrinas y algo de glucosa (Figura 1).

Figura 1. Actividad de a-amilasa

La saliva humana contiene esta enzima y es conocida como ptialina o amilasa salival. La reacción,
hidrólisis de almidón por saliva normalmente es de poca importancia en la digestión debido al corto
tiempo que puede actuar sobre los alimentos y la amilasa salival es fácilmente inactivada a pH de 4
o con medio más ácido, por eso su acción cesa en el medio ácido del estómago. Actualmente se
ha descrito en la literatura que un gran número de especies animales carecen de esta enzima.
El principal sitio de digestión del almidón y del glucógeno es el intestino delgado y hasta ahí es
vertido el jugo pancreático que contiene amilasa pancreática. Se ha comprobado que esta enzima
requiere para una actividad óptima, la presencia de iones cloruro y de un pH cercano a 7.

En el plasma sanguíneo se ha demostrado que la presencia de enzimas como las amilasas

aparentemente proviene de la desintegración de células de tejidos como el páncreas, y por eso se
le ha considerado como una enzima de escape. Los niveles de esta enzima proporcionan datos
útiles para el diagnóstico clínico; se sabe que pueden estar bajos en las enfermedades hepáticas y
altos en la pancreatitis aguda, en donde dichos niveles se encuentran aumentados desde muy
temprano en su evolución
La determinación de amilasa puede hacerse también en orina en una muestra recogida en un
tiempo determinado (desde 1 hasta 24 horas) pues la eliminación de orina varía con la dilución
diferente de la orina.

La actividad de la amilasa en la orina es generalmente mayor que en el suero, por lo que debe
usarse orina pura o una dilución 1:5 o 1:10 en tal forma que el tiempo de hidrólisis de la cantidad
de sustrato sea aproximadamente de veinte minutos.

MATERAL POR EQUIPO

Siete tubos de ensaye
Una gradilla
Una pizeta con agua destilada
Un vaso de precipitado de 200 mL

MATERAL POR MESA

Cinco pipetas de 1 mL
Cuatro pipetas de 5 mL
Cuatro propipetas de 2 mL
Tres propipetas de 5 mL
Micropipeta 100 µL
Puntas de 100 µL

REACTIVOS POR MESA:

Almidón 1%
Reactivo de Yodo-Lugol
Reactivos de Fehling A y B

MÉTODO

a) Reacción cualitativa

En tres tubos de ensaye colocar los reactivos según la siguiente tabla:

REACTIVOS MUESTRA TESTIGO CONTROL

Saliva 0.1 mL -------------------- -----------------
Sustrato(almidón 1 mL 1 mL ------------------
)
Lugol 0.1 mL 0.1 mL 0.1 mL
Agua destilada 5 mL 5 mL 5 mL

Anotar sus observaciones.

b) Hidrólisis de almidón y prueba de azúcares reductores

Mediante esta experiencia veremos la actividad de la amilasa o ptialina presente en la saliva. Esta
enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace o-glicosídico, por lo que el
almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. Es necesario que recuerdes las
reacciones características de los glúcidos para comprender este experimento.
Preparar los tubos como lo indica la siguiente tabla:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Almidón 1% 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL
Saliva ------------------- ------------------- 0.1 mL 0.1 mL
Fehling A 1.0 mL ------------------- ------------------- -----------------
Fehling B 1.0 mL ------------------- ------------------- -----------------
Yodo-Lugol ------------------- 3 gotas ------------------- -----------------
Colocar los tubos 3 y 4 en un vaso de precipitado a baño María a 37⁰ C durante 15 minutos.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Fehling A ------------------ ----------------- 1.0 mL -----------------
Fehling B ------------------ ----------------- 1.0 mL -----------------
Yodo-Lugol ------------------ ----------------- ----------------- 3 gotas

RESULTADOS
Se encuentran valores de amilasa elevados en los casos de pancreatitis aguda, cáncer del
páncreas, ovarios o pulmones, enfermedades de la vesícula biliar, obstrucción intestinal.

DISCUSIONES
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la estructura y función de los polisacáridos almidón y glucógeno?
2.-Describa la secuencia de pasos del proceso de digestión mencionando los nombres de las
principales enzimas.
3.- ¿Cuál es la diferencia entre a amilasa y b amilasa?
4.- ¿Cuáles son los niveles normales de amilasa salival? ¿En que pueden alterarse?
5.- ¿De qué manera reacciona el yodo con las cadenas del almidón antes y después de
hidrolizarlo? Anote los colores.
6.- ¿Qué especies animales segregan amilasa salival?
7.-Haga una comparación de la actividad de la amilasa salival y la amilasa pancreática.
8.- ¿Cuáles son los niveles normales de amilasa en plasma sanguíneo y en orina?
9.- ¿Qué es una enzima de escape y cuál es su importancia en el diagnóstico clínico? Mencione
ejemplos.
 PRÁCTICA # 3

CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

OBJETIVO

Determinar la concentración de glucosa en suero y analizar las implicaciones clínicas de niveles

anormales

INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos son la principal fuente de energía en corto y mediano plazo. En los animales los
carbohidratos se transportan en la sangre en forma de glucosa, la cual es llevada hasta los tejidos
para asegurar a las células un adecuado suministro energético.
La concentración de glucosa sanguínea se puede alterar por varias hormonas que actúan
estimulando o suprimiendo la producción o la utilización de glucosa. La actividad de las hormonas
depende de si el animal está en ayunas o no. La adrenalina, el glucagón, los glucocorticoides, las
hormonaspituitaria anterior y las hormonas de la tiroides causan un aumento en la concentración
de glucosa sanguínea y se llaman agentes hiperglicemiantes. En cambio, la insulina disminuye el
azúcar sanguíneo y es hipoglicemiante. La insulina es producida por las células ß del páncreas y
cuando estas cesan o dejan de funcionar, tal como ocurre en la diabetes mellitus, el azúcar
sanguíneo aumenta hasta alcanzar valores muy altos y entonces se excreta glucosa en la orina.
Los padecimientos del páncreas se presentan en la mayor parte de las especies animales
domésticos. Son de importancia clínica en el perro, en la que las diversas variedades producen
síntomas confusos. De acuerdo con Confín y Christensen (1952), se presentan cuatro tipos clínicos
y anatomopatológicos. Estos son: 1) necrosis pancreática aguda, 2) pancreatitis crónica, 3) fibrosis
pancreática y 4) colapso acinar del páncreas o atrofia. Los cuatro tipos se traducen por síntomas
clínicos y datos de laboratorio diferentes de acuerdo con el tipo específico de célula del páncreas
que se halla afectada. En la necrosis pancreática aguda se hallan usualmente síntomas referibles
al colapso, acompañados por datos de dolor abdominal intenso. La enfermedad es más común en
animales obesos. Si el animal sobrevive más de un día o dos se encontrará glucosuria e
hiperglicemia. La pancreatitis crónica constituye, aparentemente, la curación y fase de cicatrización
del proceso anterior cuando no ha sobrevenido la muerte rápidamente. Con frecuencia existe un
principio gradual con síntomas relativos a desórdenes digestivos, incluyendo heces líquidas,
espumosas o grasosas (esteatórrea) acompañadas generalmente de glucosuria. Es importante
señalar que los animales muy gordos pertenecen frecuentemente a este grupo. El páncreas
funciona como una glándula digestiva que elabora enzimas lipolíticas, aminolíticas y proteolíticas, a
la vez que, como glándula de secreción interna, productora de insulina que desempeña un papel
importante en la regulación del metabolismo de la glucosa. Por medio de los exámenes de
laboratorio clínico, es posible poner de relieve las deficiencias secretoras y definirlas. Cuando la
enzima digestiva es deficiente, las heces tienden a ser sueltas, pastosas o espumosas y contienen
exceso de grasa, que, inclusive llega a ofrecer el aspecto de aceite libre.

MATERAL POR EQUIPO

Una gradilla
Cuatro tubos de ensaye
Pizeta con agua destilada
Un vaso de precipitado de 200 mL

MATERAL POR MESA

Cuatro pipetas de 1.0 mL
Tres propipetas de 1.0 mL
Una micropipeta 10 µL
Puntas para micropipeta

REACTIVOS POR MESA

Glucosa oxidasa,
Solución estándar o suero control

PROCEDIMIENTO
La primera muestra de sangre (basal) se toma en ayunas, (sabiendo el valor de la glucosa basal y
no pasando de los 120 mg/dl) se ingieren 50 gr de una solución de glucosa. La otra muestra de
sangre se toma al haber transcurrido dos horas. Preparar una serie de tubos acorde a la siguiente
tabla:

REACTIVOS TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

PROBLEMA 1 PROBLEMA 2
BLANCO ESTÁNDAR
(BASAL) (DOS HORAS)
Reactivo de Glucosa 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL
0.010mL (10 ----
Agua destilada ---- ----
µL)
Solución estándar o 0.010mL (10 ----
---- ----
Suero control µL)
0.010mL (10 ----
Suero problema (basal) ---- -----
µL)
Suero problema (dos 0.010mL (10
---- ----- -----
horas) µL)

Mezclar y dejar que se lleve a cabo la reacción durante 15 minutos a temperatura ambiente. Leer
la absorbancia del problema y el patrón ajustando a cero con el tubo blanco a una longitud de onda
de 500nm.

CÁLCULOS

Absorbancia del problema

Glucosa mg/dL = X Concentración del estándar
Absorbancia del estándar

INTERPRETACION DE RESULTADOS
Esta prueba es suficiente para la evaluación rutinaria de la diabetes. Los pacientes con
insuficiencia adrenal o con tumores en los islotes del páncreas suelen tener los niveles de glucosa
bajos en la sangre en ayunas. Los valores de la curva van aumentando hasta una lectura máxima y
luego descienden un poco por encima de valor de glucosa en ayunas y en los pacientes diabéticos
permanece un valor alto después de 2 horas. Los valores en ayunas y los valores máximos
aumentan con la edad debido a una disminución de la tolerancia a la glucosa. Un aumento en la
tolerancia a la glucosa puede encontrarse en los casos de hipofunción de la tiroides, adrenal o
pituitaria o también hay un defecto de la absorción intestinal. El rango normal de los niveles de
glucosa en el perro y en el gato es del orden de 60-110 mg /dL. En perros normales el aumento del
nivel de glucosa en la sangre, se elevará desde el nivel de ayuno al nivel máximo, alrededor de
media hora después de la administración de 50 gr de solución glucosada, después desciende
hasta el nivel original al cabo de 2 horas aproximadamente. El valor máximo no sobrepasa
generalmente 160 mg /dL. También se puede hacer una prueba de tolerancia, en los casos en que
se sospecha de diabetes mellitus. En casos de diabetes mellitus, el nivel de glucosa en la sangre
está alrededor de 150 mg /dL al final de la primera hora y no vuelve al valor original a las 2 horas;
de hecho, puede continuar subiendo. Cuando se presenta hiperadrenocorticalismo el resultado de
una prueba de tolerancia a la glucosa será similar al que se ha encontrado en la diabetes mellitus
(Bush et al).
RESULTADOS
DISCUSIONES
CONCLUSIONES

CUESTIONARIO
1.- Investigue el papel del páncreas como glándula de secreción
2.- ¿En qué parte del páncreas se produce la insulina y cuál es su papel?
3.- ¿Cuál es el papel del glucagón?
4.- ¿Cómo se encuentra el nivel sanguíneo de glucosa en enfermedades del páncreas? (investigue
al menos dos enfermedades).
5.- Investigue el valor normal de glucosa sanguínea en varias especies.
6.- ¿Qué relación existe entre los valores sanguíneos de glucosa y amilasa en una pancreatitis y en
una obstrucción intestinal (ya visto)?
7.- ¿Qué relación existe entre el nivel de adrenalina y el nivel de glucosa?
 PRÁCTICA # 4

DETECCIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS

OBJETIVO

El alumno comprenderá de donde provienen los cuerpos cetónicos y las reacciones químicas para
detectarlos.

PRERREQUISITOS

1.- ¿Cómo se forman los cuerpos cetónicos?

2.- ¿Cómo se forman los cuerpos cetónicos en rumiantes y en los monogástricos?
3.- ¿Cuál es la importancia de los cuerpos cetónicos cuando no puede ser utilizada la glucosa
como fuente de energía?

INTRODUCCIÓN

El hígado de muchos vertebrados posee la capacidad enzimática de desviar parte del acetil-CoA
procedente de la oxidación del ácido graso o del piruvato, probablemente durante los periodos de
formación excesiva, hacia la producción de acetato libre y D-B-hidroxibutirato, los cuales son
transportados por la sangre a los tejidos periféricos, donde pueden ser oxidados por medio del ciclo
del ácido tricarboxílicos. Estos compuestos junto con la acetona, reciben colectivamente el nombre
de cuerpos cetónicos. Cuando el metabolismo de la glucosa está alterado, como en el caso de la
diabetes mellitus, se excretan en la orina cantidades excesivas de productos intermediarios del
metabolismo de las grasas, como el ácido β-hidroxibutírato y el ácido acetoacetato o ácido
diacético. Esta última sustancia se transforma lentamente en acetona cuando la orina se deja
reposar a temperatura ambiente.

El metabolismo energético del rumiante se basa en la utilización de los ácidos grasos de cadena
corta (ácidos grasos volátiles) derivados de los glúcidos ingeridos. Cuando la demanda energética
de la vaca es elevada y hay baja disponibilidad de precursores de glucosa, la oxidación de los
ácidos grasos no es completa y se producen cuerpos cetónicos (como β-hidroxibutirato y
acetoacetato) y una menor liberación de energía. Los factores principales que predisponen a
cetosis son el exceso de condición corporal en el momento del parto, las situaciones que
comprometen la ingestión de materia seca (exceso de densidad animal en el patio de posparto,
cambios frecuentes de vacas entre patios, estrés por calor), ensilados de mala calidad (con altos
niveles de humedad), y las raciones altas en energía en el preparto pueden, por una parte, inducir
descensos del consumo de materia seca y, por otra, aumentar el riesgo de hígado graso y cetosis.

MATERIAL POR EQUIPO

Seis tubos de ensaye
Una gradilla
Un vaso de precipitado de 200 mL
Pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Cuatro pipetas de 10 mL
Dos pipetas 1.0 mL
Dos propipetas de 1.0 mL
Tres propipetas de 10 mL

REACTIVOS POR MESA

Nitroprusiato de Sodio
Hidróxido de amonio
MÉTODO

Prueba de Rhotera para acetona y ácido acetoacético.

Fundamento: La reacción de Rothera se basa en el principio de la formación de ferropentacianuro
por la reacción del nitroprusiato con el compuesto isonitro de la acetona o el derivado isonitroamino
de la misma. La reacción positiva da un color de permanganato. La acetona, el ácido diacético y el
ácido β-hidroxibutírico se encuentran en la orina en los estados de cetosis, diabetes e inanición.
Tanto el ácido diacético, que es excretado por el riñón, como la acetona, que es un derivado de su
descomposición en la orina, reaccionan positivamente a esta prueba. La velocidad con que se
desarrolla el color depende de la proporción de estos compuestos en la orina. Tanto la acetona
como el ácido acetoacético producen un color púrpura en presencia de nitroprusiato de sodio en
solución alcalina.

A). Detección de cuerpos cetónicos en orina (se empleará orina de una vaca preñada y
en ayuno). Preparar el experimento como lo indica la siguiente tabla:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Testigo Muestra 1 Muestra 2
Agua destilada 5.0 mL ---------------------- ----------------------
Orina centrifugada -------------------- 5.0 mL 5.0 mL
Nitroprusiato de 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Sodio
Hidróxido de 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
amonio

La aparición de un color púrpura es positivo

B). Determinación de acetona en la leche

Debido a que la acetona urinaria está 10 a 15 veces más concentrada en la sangre (acetona
sanguínea), y a que en la leche existe en la misma concentración, aproximadamente que en la
sangre, las interpretaciones se hacen más fácilmente verificando la reacción en dicha secreción.
Preparar el experimento como lo indica la siguiente tabla:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Testigo Muestra 1 Muestra 2
Agua destilada 5.0 mL ---------------------- ----------------------
Leche -------------------- 5.0 mL 5.0 mL
Nitroprusiato de 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Sodio
Hidróxido de 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
amonio

La aparición de un color púrpura es positivo

RESULTADOS
DISCUSIONES
CONCLUSIONES

CUESTIONARIO
1.- ¿La orina de un animal diabético en ayunas será de pH básico o ácido y diga por qué?
2.- ¿Por qué la degradación de glucosa puede contribuir a la formación de cuerpos cetónicos?
3.- Diga si los cuerpos cétonicos se pueden formar a partir de moléculas proteicas, ¿por qué?

PRÁCTICA # 5
 CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL SÉRICO

OBJETIVO

Determinar la concentración de colesterol sérico y analizar las implicaciones clínicas de niveles

anormales de colesterol.

PRERREQUISITOS

1. Estructura, función y tipos de colesterol

2. Relación metabólica entre el colesterol y las lipoproteínas
3. Análisis de la digestión del colesterol esterificada y no esterificado
4. Relación de las Lipoproteínas plasmáticas con la aterogénesis.

INTRODUCCIÓN

El colesterol es uno de los lípidos que se encuentran en mayor concentración en la sangre,

se puede afirmar que la fracción lipídica del colesterol, es la segunda en cuanto a concentración y
ésta se localiza principalmente formando parte de las lipoproteínas. Químicamente el colesterol es
un compuesto cíclico con estructura básica de perhidrofenantreno con un total de 27 carbones, un
radical OH en el carbono 3 y un doble enlace entre los carbonos 5 y 6 (Devlin, 2006) (figura 1).

Figura 1.- Estructura del colesterol

El colesterol es un lípido muy poco soluble en agua (0.2 mg/100 mL). La concentración de
colesterol en el plasma de individuos sanos es de 150 a 200 mg/100 mL, lo que constituye una
concentración doble de la concentración normal de glucosa sanguínea. El colesterol existe en dos
formas: como colesterol libre en muy pequeñas cantidades y como colesterol esterificado mediante
la unión de un ácido graso no saturado de cadena media al carbono 3. Este tipo de colesterol es el
más frecuente tanto en sangre como en tejidos (Devlin, 2006).
La mayor parte de colesterol que existe en el organismo es sintetizada en el hígado, esto implica
que el colesterol exógeno tenga menor importancia metabólica. La síntesis de colesterol endógeno
es activada en primera instancia ante el excedente de Acetil-S-CoA que haya en el hepatocito, ya
que éste funciona como metabolito precursor y en segunda instancia ante la presencia de efectores
hipercolesterolémicos que aumentan la síntesis de colesterol o bien disminuyen el catabolismo del
colesterol ya formado.
Determinación de colesterol total
Existen dos métodos para la determinación del colesterol: los químicos y los enzimáticos. Los
primeros se basan en la clásica reacción de Lieberman – Burchard y posterior medición
colorimétrica. Estos métodos han quedado obsoletos y abandonados por su imprecisión,
inexactitud, complejidad y frecuentes interferencias analíticas.
Los métodos enzimáticos se basan en el empleo de la enzima colesterol esterasa que hidroliza los
esteres de colesterol, y el colesterol libre es el substrato de la enzima colesterol oxidasa, que oxida
específicamente al colesterol según la siguiente reacción;
 Colesterol esterasa
Colesterol Colestona + H2O2

Determinándose a continuación el agua oxigenada liberada mediante unas reacciones enzimáticas

auxiliares. Entre ellas las más difundidas son las que emplean la enzima peroxidasa y el sistema
cromogénico fenol – antipirina. La mayoría de los métodos enzimáticos incorporan todas las
enzimas en un solo reactivo, facilitándose su utilización y automatización en el laboratorio (Díaz, et
al., 1997).

MATERIAL POR EQUIPO

Tres tubos de ensaye
Una gradilla
Celdas de 1.0 mL para espectrofotómetro
Una pizeta con agua destilada
MATERIAL POR MESA
Micropipeta de 10 µL
Puntas para micropipeta
Dos pipetas de 1.0 mL
Una propipeta de 2.0 mL
REACTIVOS POR MESA:
Reactivo de colesterol
Suero control o solución estándar

PROCEDIMIENTO

Preparar una serie de tubos acorde a la siguiente tabla:

REACTIVOS TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

BLANCO ESTÁNDAR PROBLEMA
Reactivo de Colesterol 1.0mL 1.0mL 1.0mL
Agua destilada 0.010mL (10 µL) ---- ----
Solución estándar o Suero
---- 0.010mL (10 µL) ----
control
Suero problema ---- ----- 0.010mL (10 µL)

Mezclar y dejar que se lleve a cabo la reacción durante 20 minutos a temperatura ambiente. Leer la
absorbancia del problema y el patrón ajustando a cero con el tubo blanco a una longitud de onda
de 500nm.
CÁLCULOS:
mg Absorbancia del problema Concentración del estándar
-------- Colesterol total = ---------------------------------------------------- X o control que se esté
usando
dl Absorbancia del estándar o control
RESULTADOS
DISCUSIONES
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO:
1. ¿Qué tipos de colesterol hay?
2. Mencione algunas enfermedades relacionadas con los niveles altos de colesterol
3. ¿Cómo regula el colesterol su propia síntesis?
4. Resuma los acontecimientos químicos de la biosíntesis de colesterol

PRÁCTICA # 6
 CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS SÉRICAS

OBJETIVO

Conocer y desarrollar dos técnicas de cuantificación de proteínas del suero y analizar los
resultados en relación a posibles anormalidades desde un punto de vista metabólico.

PRERREQUISITOS

1.-Analizar el fundamento químico de la reacción de Biuret.

2.-Conocer la función de las principales proteínas en el suero humano y animal.

INTRODUCCIÓN

Una de las fracciones orgánicas más importantes de la sangre es el de las proteínas, tanto por
su contenido porcentual como por las funciones que realizan. El contenido total de proteínas
del plasma es normalmente del orden de 5.7 a 8.0 g/dl en humanos. Las proteínas séricas
constituyen la mayor parte de los sólidos del plasma y son una mezcla compleja de proteínas
simples conjugadas como glucoproteínas y lipoproteínas.
Las proteínas del plasma están constituidas en tres grupos principales:
Albúmina, globulinas y fibrinógeno. El fibrinógeno normalmente constituye del 4 al 6 % de las
proteínas plasmáticas, es producido por el hígado y tiene importancia fundamental para la
coagulación de la sangre.
La albumina es la principal proteína del suero; se halla también en los espacios
extravasculares, linfa y otros líquidos biológicos como el amniótico, bilis, jugo gástrico.
Se encuentra en la orina de pacientes con enfermedades renales y es uno de los componentes
principales del edema. Las dos funciones principales de la albúmina plasmática son:
El mantenimiento de la presión coloidosmótica y el transporte de algunos metabolitos como
bilirrubinas, aminoácidos, ácidos grasos, enzimas medicamentos, etc. La albúmina es
sintetizada por las células hepáticas en una cantidad de 12 a 14 g/día. Las globulinas se
dividen en tres grupos principales: globulinas alfa, globulinas beta y globulinas gama.
Las globulinas alfa y beta ejercen diversas funciones en la circulación tales como el transporte
de metabolitos e iones metálicos. Las globulinas gamma actúan en la actividad inmunológica
ya que constituyen las inmunoglobulinas que resisten a la infección. La mayor parte de las
globulinas alfa y beta son de origen hepático pero las gamma globulinas se pueden sintetizar
en hígado y tejido linfático.
El hígado es el centro principal de las proteínas plasmáticas. La formación de albúmina y de
fibrinógeno parece estar limitada al hígado; aproximadamente el 80 % de las globulinas se
fabrican en el hígado, incluyendo las lipoproteínas. El principal papel del hígado en la síntesis
proteínica del plasma se refleja en la disminución notable de albúmina y fibrinógeno que tiene
lugar en el tejido hepático dañado, como se observa en pacientes con cirrosis o a
consecuencia de una hepatectomía experimental. Existe una gran cantidad de compuestos
químicos entre los cuales se incluyen a las drogas y a los fármacos que afectan la integridad
metabólica de los hepatocitos. Algunos de ellos afectan la capacidad de síntesis de metabolitos
como la albúmina y en la mayoría de los casos el efecto es tan drástico que puede llegar a ser
letal. Dentro de los compuestos que han sido catalogados como hepatotóxicos están el
cloroformo, dinitrofenol, la clorpromazida, el fluoruracilo y la tetraciclina. Esta última afecta al
hígado de una manera proporcional a la concentración que se administra en pacientes
desnutridos. La tetraciclina es hepatotóxica a dosis mayores de 3 g/día y su efecto comienza a
las 48 horas de administrarse ésta dosis. Si la tetraciclina es un antibiótico que a dosis
mayores de 3 g/día disminuye el metabolismo del hepatocito a la albúmina se sintetiza
únicamente el hígado, entonces, es factible encontrar bajos niveles de albúmina sérica en un
individuo que ha sido tratado con altas dosis de este antibiótico.
MATERIAL POR EQUIPO
Seis tubos de ensaye
Una gradilla
 Celdas de 2 mL para espectrofotómetro
Un vaso de precipitado de 200 mL
Una pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Cuatro pipetas de 5.0 mL
Seis pipetas de 1 mL
Dos propipetas de 5.0 mL
Tres propipetas de 1.0 mL
Una micropipeta de 10 µL
Puntas para micropipeta

REACTIVOS POR MESA:

Reactivo de Biuret
Solución salina
Suero control o solución estándar
Verde de bromocresol

MÉTODOS
a) Cuantificación de proteínas totales
Preparar una serie de tubos de acuerdo al siguiente cuadro:

TUBO BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Reactivo Biuret 5 mL 5 mL 5 mL
Solución salina 0.1 mL ------------ ---------------
Suero control ------------ 0.1 mL ---------------
Suero no hemolizado ------------- ------------ 0.1 mL

Agitar los tubos y dejar reposar durante 15 min.

Medir la absorbancia del patrón y del problema ajustando a cero con el blanco a 550nm.

b) Cuantificación de albúmina
Preparar una serie de tubos de acuerdo al siguiente cuadro:

TUBO BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Verde de bromocresol 3 mL 3 mL 3 mL
Solución salina 0.05 mL ------------ ---------------
Suero control ------------ 0.05 mL ---------------
Suero no hemolizado ------------- ------------ 0.05 mL

Mezclar y dejar reposar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.

Medir la absorbancia del problema y el patrón ajustando a cero con el blanco a 640 nm.

Calcular la concentración con la siguiente fórmula:

As. Problema
Proteínas totales o albúmina = ---------------------X Concentración del Patrón (en g/dL)
As. Patrón

INTERPRETACION DE RESULTADOS: El rango de valores normales de los niveles de

proteína total en suero en el perro es de 5.0-7.5 g/dL, y en el gato de 5.0-7.0 g/dL.
Un incremento en los niveles de proteína total del suero se puede deber a deshidratación y a
un incremento en el nivel de globulina.
 Una disminución en el nivel de la proteína total se debe siempre a un nivel bajo de la albúmina,
esto debido a gran pérdida de albúmina en la orina, excesiva pérdida de proteínas plasmáticas
debido a hemorragias, incremento de la destrucción de proteína en el shock, infecciones
agudas (fiebre) y ocasionalmente con neoplasias. También se encuentran valores disminuidos
de proteína total en el ayuno, la desnutrición y en casos de graves desórdenes hepáticos como
hepatitis y cirrosis hepáticas (Bush).

RESULTADOS

DISCUSIÓNES

1.- Analice el efecto de la tetraciclina y diga si la dosis es proporcional a la depresión de la

actividad anabólica del hepatocito.
2.- Discuta si las pruebas de cuantificación de albúmina y proteínas totales son confiables para
analizar este efecto.
3.- Mencione que efecto podría tener un suero hemolizado en la confiabilidad de este experimento.

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué papel juega la albumina en equilibrio coloidosmótico de sangre?

2.- ¿Cuál es la función de la albúmina y por qué?
3.- Mencione 5 tipos Mencione globulinas e indique sus funciones.
4.-Mencione cinco tipos de globulinas que funcionan en el transporte de iones o metabolitos en la
sangre.
5.-Explique cómo es el efecto tóxico del 2-4-dinitrofenol sobre el hepatocito e indique como afecta a
los niveles de proteínas totales en la sangre.

BIBLIOGRAFÍA

PRÁCTICA # 7
 DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

OBJETIVO

Comprenderá de donde proviene el ácido úrico y el fundamento químico para su detección, así
como su significancia clínica.

INTRODUCCIÓN

El ácido úrico es la principal sustancia nitrogenada excretada por los animales uricotelicos. El ácido
úrico es un compuesto nitrogenado, blanco, incoloro e insípido que se forma en el cuerpo como
resultado del catabolismo de las purinas. Está presente en pequeñas cantidades en la orina
humana, y en cantidades mayores en la orina de los pájaros y reptiles. El ácido úrico es muy poco
soluble en agua e insoluble en alcohol y éter. Al calentarse forma urea, amoniaco y dióxido de
carbono. La gota es el resultado de una alteración en el metabolismo del ácido úrico. Las piedras
en los riñones formadas por sales de ácido úrico aparecen en las personas con altos niveles de
este ácido en la orina.
Las bases que originan el ácido úrico son la adenina y la guanina, que forman parte de los ácidos
nucleicos. Por un proceso de aminación oxidativa, con intervención de una enzima, la adenasa, la
adenina se transforma en hipoxantina y la guanina en xantina. Por acción de una nueva enzima, la
xantinoxidasa, la hipoxantina se transforma en xantina y está en ácido úrico.
Existen dos fuentes de ácido úrico: la endógena, originada por destrucción de tejidos del propio
organismo y la exógena, proveniente de la alimentación.

MATERIAL POR EQUIPO

Tres tubos de ensaye
Tres tubos para sedimentación
Una gradilla
Celdas de 2 mL para espectrofotómetro
Un vaso de precipitado de 200 mL
Una pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Dos pipetas de 5.0 mL
Seis pipetas de 1 mL
Dos propipetas de 5.0 mL
Tres propipetas de 1.0 mL

REACTIVOS POR MESA

Ácido fosfotúngstico
Suero control o estándar
Carbonato de sodio al 3.5 %

PROCEDIMEINTO
FUNDAMENTO. Se basa en la reducción del ácido fosfotúngstico a azul de tungsteno en medio
alcalino constituido por carbonato de sodio.

Preparar según la siguiente tabla:

TUBO BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Ácido fosfotúngstico 1 mL 1 mL 1 mL
Agua destilada 0.3 mL ------------ ---------------
Suero control ------------ 0.3 mL ---------------
Suero no hemolizado ------------- ------------ 0.3 mL

Mezclar bien cada tubo y centrifugar los tubos problema y patrón a 2000 rpm por 5 minutos y
recuperar el sobrenadante.

En seguida preparar otra serie de tubos de acuerdo al siguiente cuadro:

TUBO BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Carbonato de sodio al 3.5 % 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL
Sobrenadante tubo blanco 0.5 mL ------------ ---------------
Sobrenadante tubo patrón ------------ 0.5 mL ---------------
Sobrenadante tubo problema ------------- ------------ 0.5 mL

Mezclar bien cada tubo y dejar reposar durante 20 minutos.

Leer la absorbancia del problema y del patrón ajustando el fotocolorímetro a cero con el blanco a
una longitud de onda de 640 nm.

RESULTADOS

DISCUSIÓNES

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué es necesario desproteinizar el suero en la técnica de detección del ácido úrico?
2.- ¿En qué situaciones clínicas se eleva la concentración sanguínea de ácido úrico?
3.-Investigue en cuales animales se encuentra elevado el ácido úrico y si es de importancia clínica.
4.- Investigue que síntomas se presentan en la enfermedad gota
5.- ¿De dónde procede el ácido úrico?
6.-Esquematice las bases púricas y pirimídicas
7.-Describa cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las purinas.
8.-Mencione cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las pirimidinas.
9.- Defina uricemia, uremia y uricaciduria
Valores normales:

Hombres: 3.5 – 7.5 mg/dl

Mujeres: 2.5 – 6.5 mg/

PRÁCTICA # 13
 DETERMINACIÓN DE CREATININA Y UREA SÉRICAS

OBJETIVO

Al finalizar esta práctica, el alumno deberá tener los fundamentos para poder interpretar desde el
punto de vista clínico, los resultados obtenidos en la cuantificación de urea y creatinina de una
muestra de suero de pacientes humanos y algunos animales.

PRERREQUISITOS

1.- Describir los puntos principales del ciclo de la urea.

2.- Describir los mecanismos de producción de la creatinina.
3.- Identificar los principales tejidos productores de urea y creatinina
4.-Explicar las razones de la producción de estos metabolitos en el ser humano y animales.

INTRODUCCIÓN

La urea es el principal producto de excreción, proveniente del catabolismo de las proteínas, el cual
se origina a partir de los grupos amino de los aminoácidos. Esta vía, es el principal medio de
excreción de nitrógeno por el organismo. La urea es sintetizada en el hígado por medio del ciclo de
la urea también llamado ciclo de la ornitina, cuya función fundamental es convertir el amoniaco y el
bióxido de carbono en urea.
La urea es el producto final del metabolismo proteico; sintetizada por el hígado, transferida al
torrente circulatorio y excretada por el riñón.
El nitrógeno ureico sanguíneo (BUN) está elevado en toda lesión renal, que perturbe su función
excretora. La urea también se eleva en casos de azoemia prerrenal (elevación de los productos
nitrogenados del metabolismo orgánico por causas no renales), que depende un bajo volumen
plasmático circulante como ocurre en la hemorragia masiva, deshidratación, hipotensión o choque.
Está también elevada en los casos que cursen con catabolia proteínica elevada, acompañada de
baja eliminación renal.
Cuando los niveles de urea pasan de 214 mg/100 mL, aparece depresión mental, somnolencia y
desequilibrio hidroelectrolítico, y si los niveles siguen aumentando, aparece el coma urémico.
Los niveles bajos de urea se observan en el embarazo, hidratación excesiva, hepatopatías graves
y mal nutrición.

La creatinina se forma en los músculos a partir del fosfato de creatina. Un 2 % de esta sustancia se
convierte diariamente en esta sustancia. La creatinina muscular fosforilada origina un compuesto
de alto contenido energético que representa el papel de sustancia de reserva para la síntesis de
ATP. Cuando el fosfato de creatina cede un fosfato se transforma en creatina y si no se resintetiza,
se deshidrata y se convierte en creatinina que difunde y se excreta en la orina. La conversión de
creatina en creatinina no es reversible. En las distrofias musculares la capacidad del músculo para
almacenar creatina disminuye por lo que aumenta la creatina en sangre y se produce creatinuria.
La creatinina libre que aparece en la sangre y orina no vuelve a ser utilizada. Esta se excreta en la
sangre de manera constante. En condiciones fisiológicas normales la creatinina urinaria representa
la filtración glomerular y la excreción tubular activa, formándose a partir de la creatina en
cantidades constantes. La creatinina normal del suero no se modifica con la dieta, edad, sexo,
catabolia proteínica ni ejercicio. Sin embargo, con una ingesta proteíca sustancia, que incluye una
cantidad considerable de carne y con ejercicios intensos durante largos periodos, se han
observado en sujetos jóvenes sanos, excreciones urinarias de creatinina del orden de 2.5 a 2.7
g/24 horas., pero con niveles sanguíneos de creatinina en los sujetos normales son más
constantes que los niveles en la orina.

La cifra normal está comprendida entre 0.5 y 1.2 mg/100 mL de suero o plasma, y es proporcional
a la masa muscular, por lo que en la mujer los niveles normales son más bajos (0.5 a 1.0 mg/ 100
mL). Sus aumentos generalmente van parejos con los de la urea, aunque la creatinina tarda más
en subir.
Cuando en la insuficiencia renal con uremia se encuentran cifras mayores de 5 mg/100 ml, el
pronóstico es mortal a corto plazo. Está considerablemente elevada en las nefrosis por tóxicos.
Se observan también cifras altas en los casos de obstrucción urinaria, las que se normalizan al
ceder la obstrucción.

Figura1. Metabolitos de excreción

MATERIAL POR EQUIPO

Nueve tubos de ensaye
Tres tubos para sedimentación
Dos gradillas
Celdas de 2 mL para espectrofotómetro
Una pinza para tubos de ensaye
Un vaso de precipitado de 200 mL
Una pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Cuatro pipetas de 5.0 mL
Ocho pipetas de 1.0 mL
Cuatro propipetas de 5.0 mL
Cuatro propipetas de 1.0 mL
Una micropipeta de 50 µL
Puntas para micropipeta

MÉTODO
Experimento No. 1
Cuantificación de urea sérica.

REACTIVOS BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Diacetilmonoxima (DAM) 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 0.05 mL -- --
Suero control -- 0.05 mL --
Suero problema -- -- 0.05 mL
Reactivo ácido 3 mL 3.0 mL 3.0 mL

Mezclar y calentar en baño de ebullición durante 15 minutos. Enfriar al chorro de agua y leer
ajustando con el blanco a 520 nm.

CÁLCULOS
Abs problema
(Nitrógeno ureico) = ----------------------x concentración del suero control patrón
Abs patrón
(Urea) = Nitrógeno ureico x 2.14 = mg/dL
VALORES NORMALES
10-18 mg/dL Nitrógeno uréico
22-40 mg/dL urea
EXPERIMENTO No.2
Determinación de creatinina por obtención de filtrado

REACTIVOS BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Agua destilada 3.5 mL 3.5 3.5
Tungstato de Sodio 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Ácido sulfúrico (H2SO4) 2/3 N 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Suero control -- 0.5 mL --
Suero problema -- -- 0.5 mL

Mezclar y centrifugar los tubos patrón y problema 5 minutos a 2500

Tomar el sobrenadante y preparar el experimento como lo indica la siguiente tabla

REACTIVOS BLANCO PATRÓN PROBLEMA

Sobrenadante 3 mL 3 mL 3 mL
NaoH 0.75 N 1 mL 1 mL 1 mL
Acido pícrico 1 mL 1 mL 1 mL

Mezclar y reposar por 15 minutos a temperatura ambiente y leer absorbancia a 490 nm ajustando a
cero con el tubo blanco

INTERPRETACION DE RESULTADOS: El rango normal de valores de urea en la sangre es de 15-

40 mg/dl en el perro y en el gato es de 30-65 mg/dl.
El nivel de urea en la sangre se eleva durante unas pocas horas después de haber consumido
alimentos proteicos. Animales alimentados con dietas altamente proteicas, mostrarán elevados
niveles de urea en la sangre en ayunas.
Los niveles elevados están principalmente asociados con enfermedad renal, obstrucción de las
vías urinarias, excesiva destrucción de proteínas, alteración de la función cardiaca y
hemoconcentración (Bush et al).

RESULTADOS

DISCUSIONES

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuál es la función de la urea en el organismo?

2.- ¿Por qué los niveles de urea se elevan en el caso de insuficiencia renal severa?
3.-Mencione cual es la función del ácido pícrico n la determinación de la creatinina.
4.-Mencione dos posibles errores que se puedan originar en la determinación por alteraciones en el
suero.
5.- El nivel de creatinina en suero se considera que es constante, por lo cual se utiliza para
determinar si hay daño en riñón calculando la velocidad de filtración glomerular. Explique cómo se
hace esa determinación y para qué sirve.

BIBLIOGRAFÍA
 PRÁCTICA # 8

DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA DIRECTA Y TOTAL EN SUERO

OBJETIVO

Determinar la concentración de bilirrubina total y directa por la técnica de Van der Berg y
las analizar como una prueba de función hepática.

PREREQUISITOS

1.- Conocer y describir el metabolismo de las bilirrubinas.

INTRODUCCIÓN

La bilirrubina es un compuesto cromógeno de color amarillo o naranja formado en la

excresión del catabolismo de la Hemoglobina. El grupo porfirínico HEM es la fuente directa de
bilirrubina y se detecta en dos formas: bilirrubina libre y conjugada con ácido glucurónico, siendo
esta conjugación a nivel hepático.
El hígado tiene la capacidad para concentrar y eliminar la bilirrubina por mecanismos específicos y
es transportada por el torrente sanguíneo unida electrostáticamente a la albúmina. Se liberan por
día 6 gr. de hemoglobina los cuales son catabolizadas en células del sistema retículo endotelial
donde es liberada la bilirrubina, esto se hace por medio de dos reacciones enzimáticas: primero el
complejo de oxigenasas microsómicas y la acción de la biliverdina reductasa.
La determinación clínica de bilirrubina sérica es utilizada como prueba de funcionamiento hepático,
las enfermedades ligadas con altas concentraciones de bilirrubinas se conocen como
hiperbilirrubinemias y son responsables de un síndrome llamado Ictericia que determina múltiples
etiologías.

MATERIAL POR EQUIPO

Cuatro tubos de ensaye
Una gradilla
Celdas de 2 mL para espectrofotómetro
Un vaso de precipitado de 200 mL
Una pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Ocho pipetas de 1.0 mL
Cuatro propipetas de 1.0 mL

JUEGO DE REACTIVOS POR MESA

Ácido sulfanílico 29 Mm, Acelerador (cafeína + Benzoato de sodio + Acetato de sodio),
Fehling II (Tartrato de sodio y potasio con Hidróxido de sodio)
Solución Salina 0.89%

METODO

FUNDAMENTO. Utilizando la técnica de Van der Berg basado en las siguientes reacciones: El
ácido sulfanílico diazoico en un medio alcalino reacciona con la bilirrubina formando un complejo
azobilirrubina el cual tiene una coloración café parda, la sensibilidad es mayor para la bilirrubina
conjugada que la libre. Si se detecta ésta última se aplica un acelerador del color (cafeína,
benzoato de sodio y acetato de sodio).
PROCEDIMIENTO

a) Técnica para Cuantificación de Bilirrubina Total

Distribución de reactivos para la Cuantificación de la Bilirrubina Total

TUBO BLANCO PROBLEMA

Ácido sulfanílico 0.2 ml 0.2 ml

Nitrito de sodio ----- 0.1 ml

Acelerador 1.0 ml 1.0 ml

Suero problema 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente por 30 minutos

Fehling II 1.0 ml 1.0 ml

Mezclar y leer la absorbancia del problema a 580 nm, ajustando el espectrofotómetro a cero con el
blanco.

b) Técnica: para Bilirrubina Directa (Conjugada)

Distribución de los reactivos para la Cuantificación de la Bilirrubina Directa (Conjugada)

TUBO BLANCO PROBLEMA
Ácido sulfanílico 0.2 mL 0.2 mL
Nitrito de sodio ----- 0.1 mL
Solución salina 2.0 mL 2.0 mL
Suero problema 0.2 mL 0.2 mL

Mezclar y reposar 5 minutos y leer a 510 nm ajustando el espectrofotómetro a cero con el blanco.

RESULTADOS
Para calcular las concentraciones aplique las siguientes fórmulas para cada analito
trabajado:
Bilirrubina total (mg/dL) = Absorbancia del problema X 10.5
Bilirrubina Directa (mg/dL) = Absorbancia del problema X 14
Bilirrubina indirecta (mg/dL) = Total - Directa

Valores de referencias:

Hasta 1.0 mg/dL. Para bilirrubinas totales

Hasta 0.3 mg/dL. Para bilirrubinas directas

DISCUSIÓN

Con base en los resultados obtenidos y el objetivo planteado analice la importancia de esta
determinación, como parte de un Perfil Hepático. Discuta la Técnica utilizada.

CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA
 PRÁCTICA # 9

DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS SÉRICAS

OBJETIVO

El alumno determinará la transaminasa glutamico pirúvica (STGP) y la transaminasa

glutámico oxaloacética (STGO) en el suero para interpretar fenómenos fisiológicos, metabólicos y
patológicos relacionados con estas enzimas.

PRERREQUISITOS

a) Función de las transferasas.

b) fundamentos metabólicos de las transaminaciones.
c) Importancia Clínica de STGO y STGP.

INTRODUCCIÓN
Las transaminasas son enzimas que realizan la interconversión de aminoácidos alfa-
cetoácidos por transferencia de grupos amino. Existe una gran variedad de transaminasas con
diferente significado fisiológico, de ellas la STGO y la STGP son las más importantes desde un
punto de vista clínico.
La STGO promueve la siguiente reacción:
STGO
L-aspartato + cetoglutarato <--------> oxaloacetato + L-glutamato

La STGP a su vez promueve la siguiente reacción:

STGP
L-alanina + cetoglutarato <--------> piruvato + L-glutamato
Estas reacciones son reversibles y utilizan l fosfato de piridoxal como coenzima. Estas
transaminasas están distribuidas ampliamente en tejidos animales en forma principal de tejido
hepático y tejido cardíaco y en forma secundaria en plasma, bilis y fluido cerebroespinal sus niveles
extracelulares deben ser bajos en condiciones normales y solo cuando hay lesión celular se podrán
encontrar altos títulos de estas enzimas.
En pacientes con infarto al miocardio o con lesión hepática aguda se encontrarán altos
títulos de dichas transaminasas los cuales se mantendrán elevados por un periodo de 24 a 36
horas en caso de infarto y por mucho más tiempo en caso de lesión hepática.

MATERIAL POR EQUIPO

Siete tubos de ensaye
Una gradilla
Celdas de 2 mL para espectrofotómetro
Un vaso de precipitado de 200 mL
Una pizeta con agua destilada

MATERIAL POR MESA

Ocho pipetas de 2.0 mL
Dos pipetas de 10 mL
Seis propipetas de 1.0 mL
Dos propipetas de 10 mL

REACTIVOS POR MESA

Sustrato de TGO y TGP
Estándar de Piruvato, agua destilada,
Dinitrofenilhidracina o reactivo de color
NaOH al 0.4 N

MÉTODO

FUNDAMENTO. Se utilizará la reacción de dinitrofenilhidracina para cuantificar a ambas

transaminasas. Esta reacción tiene el siguiente fundamento químico:
El substrato de alanina en solución amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGP produciendo
piruvato el cual en un medio alcalino reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina formando una
fenilcarbazona (dinitrofenilhidrazona) que se puede cuantificar fotometricamente a 505 nm.
El substrato de aspartato en solución amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGO produciendo
oxaloacetato que reacciona con la dinitrofenilhidracina a pH alcalino dando también una
fenilcarbazona que se puede medir fotometricamente a 490 nm.

PROCEDIMIENTO
Primero se deberá elaborar una curva de calibración como se muestra en el siguiente cuadro:

a) Curva de calibración

Distribución de los reactivos iniciales para la Curva de Calibración

Tubo mL de piruvato Sustrato de GPT H2O destilada Absorbancia

1 0 1.0 0.2
2 0.10 0.90 0.2
3 0.20 0.80 0.2
4 0.30 0.70 0.2
5 0.40 0.60 0.2

Posteriormente se le van a adicionar los siguientes reactivos, dando tiempos de reposo para que
reaccione el contenido.

Agregar 1.0 mL de dinitrofenilhidracina. Reposar 20 minutos a temperatura ambiente

Agregar 10 mL de NaOH 0.4 N. Reposar 10 minutos a temperatura ambiente

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm ajustando el equipo con un blanco con agua destilada

Una vez obtenidas todas las absorbancias, genere una gráfica donde el eje de las X serán las
Unidades Internacionales (UI) y el eje de las y las absorbancias (gráfica 1). Recuerde que la gráfica
deberá tener escala para poder interpretar los resultados obtenidos mediante una interpolación.

Equivalencias de las absorbancias obtenidas con las Unidades de TGO y TGP

Absorbancias Unidades de TGO Unidades de TGP

obtenidas equivalentes equivalentes
0 0
24 28
61 57
114 97
190 150
Gráfica 1. Curva de calibración de unidades TGO/TGP
 Para la cuantificación de las transaminasas, solo se prepara un tubo problema por cada
determinación y se utiliza un blanco de agua destilada para ajustar el fotocolorímetro.

b) Tratamiento de los problemas

Distribución de los reactivos para la Cuantificación de las transaminasas TGO Y TGP Séricas
Tubo problema Tubo problema
Reactivos y tiempos de incubación
de TGO de TGP

Solución amortiguadora de substrato 0.2 mL 0.2 mL

Preincubación a 37° C 5 minutos 5 minutos

Suero (no hemolizado) 0.2 mL 0.2 mL

Mezclar e incubar a 37° C 30 minutos 30 minutos

Reactivo de Dinitrofenilhidracina 0.5 mL 0.5 mL

Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente 20 minutos 20 minutos

Hidróxido de sodio 0.4 N 5.0 mL 5.0 mL

Mezclar y reposar 5 minutos a temperatura ambiente.

Medir la absorbancia del tubo de TGP a 490 nm y de TGO a 505 nm ajustando el
espectrofotómetro a cero de absorbancia con agua destilada.

RESULTADOS:

Con base en la gráfica Interpolar los valores de absorbancia obtenidos en la curva de calibración
para determinar las concentraciones de cada transaminasa (TGO y TGP).

Valores obtenidos:

TGO UI/mL
TGP UI/mL

VALORES DE REFERENCIA:

STGO: 4 a 36 Unidades Internacionales / mL

STGP: 4 a 32 Unidades Internacionales / mL

DISCUSIÓN
CONCLUSIÓN

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

CUESTIONARIO

1._ Mencione cinco enfermedades en donde estén altos los títulos de STGO y de STGP.
2._ ¿Cuáles serán las pruebas específicas primarias para la elaboración de un perfil hepático?
3._ ¿Que es el coeficiente de Rittis? y que datos clínicos nos refiere.
4._ En que otro tipo de tejidos además del hepático y cardíaco es posible encontrar este tipo de
transaminasas.