ENZIMAS

Carrera Profesional de Biotecnología

Asignatura:

Biotecnología Industrial
Docente:

Hans Minchán Velayarce

Integrantes:

• Macalopu Vera Claudia Marina

• Ynfante Quispe Nelson

Noviembre, 2023
ENZIMAS
INDICE
I. RESUMEN ................................................................................................................ 5
II. INTRODUCCION .................................................................................................... 6
III. CUERPO DEL INFORME ....................................................................................... 6
3.1. Campos de aplicación e impactos económicos .................................................. 6
3.1.1. Las enzimas son biocatalizadores ............................................................... 6
3.1.2. Ventajas y limitaciones del uso de métodos enzimáticos frente a métodos
químicos ................................................................................................................... 7
3.1.3. Breve historia de las enzimas utilizadas para la producción industrial de
productos valiosos .................................................................................................... 7
3.1.4. Diversas formas en que se utilizan las enzimas en la industria .................. 8
3.2. Descubrimiento y mejora de enzimas .............................................................. 10
3.2.1. Detección de nuevas enzimas y optimización de enzimas mediante
ingeniería de proteínas ............................................................................................ 10
3.2.2. Desarrollo clásico de cepas de producción ................................................11
3.2.3. Ingeniería genética de cepas productoras ................................................. 13
3.3. Proceso de producción de enzimas bacterianas o fúngicas .............................. 13
3.4. Enzimas hidrolizantes de polisacáridos ........................................................... 14
3.4.1. Enzimas que escinden el almidón producidas porBaciloyAspergilo
Especies14
3.4.2. Enzimas limpiadoras de celulosa: un dominio de Trichoderma reesei .... 16
3.4.3. Cepas de producción ................................................................................. 18
3.5. Enzimas utilizadas como agentes de limpieza ................................................. 18
3.5.1. Proteasa similar a subtilisina .................................................................... 18
3.5.2. Bacilo sp. Cepas de producción y proceso de producción. ...................... 18
3.6. Suplementos alimenticios – Fitasas ................................................................. 18
3.6.1. Campos de aplicaciones de la fitasa ......................................................... 19
3.6.2. Fitasa en el intestino de los animales........................................................ 19
3.6.3. Producción de una fitasa bacteriana en Aspergillus niger ........................ 19
3.7. Enzimas para la industria química y farmacéutica .......................................... 19
3.7.1. Ejemplos de producción química enzimática ........................................... 19
3.7.2. Producción de (S)-Profens por lipasa fúngica .......................................... 19
3.8. Enzimas como herramientas altamente selectivas para investigación y
diagnóstico .................................................................................................................. 20
3.8.1. Enzimas microbianas para análisis e ingeniería de ácidos nucleicos ....... 20
 3.8.2. Enzimas específicas para ensayos cuantitativos de metabolitos .............. 20
3.9. Perspectivas ..................................................................................................... 20
3.9.1. l-DOPA por tirosina fenol liasa................................................................. 20
3.9.2. Activación de alcanos ............................................................................... 20
3.9.3. Cascadas de enzimas ................................................................................ 20
IV. CONCLUSIONES .................................................................................................. 21
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................... 21

INDICE DE ILUSTRACIONES

Ilustración 1. Mecanismo de ajuste inducido para la cinética .......................................... 7

Ilustración 2. Clasificación de enzimas seleccionadas. .................................................... 8
Ilustración 3. Enzimas aplicadas para uso domestico....................................................... 9
Ilustración 4. Enzimas microbianas aplicadas a procesos de producción industrial. ....... 9
Ilustración 5. Mercado estimado de enzimas microbianas en 2017 ............................... 10
Ilustración 6. fuentes principales utilizadas para la detección de nuevas enzimas..........11
Ilustración 7. Estrategias de optimización de enzimas mediante ingeniería de proteínas,
búsqueda en bases de datos ............................................................................................ 12
Ilustración 8. Desarrollo de cepas clásicas mediante evolución dirigida. ...................... 13
Ilustración 9. Estructura molecular del almidón. (a) Superestructura formada por cadenas
de amilosa y (b) tipos de enlaces .................................................................................... 15
Ilustración 10. Aplicaciones industriales de las amilasas bacterianas. ........................... 15
Ilustración 11. La Resistencia a la temperatura de la α-amilasa de Bacilo licheniforme 16
Ilustración 12. Celulosa (a) estructura y recalcitrantica, (b) hidrólisis ........................... 17
Ilustración 13. (c) cuatro tipos de celulasas. ................................................................... 17
Ilustración 14. Principales celulasas producidas porTrichoderma reesei ....................... 18
 I. RESUMEN

Las células vivas pueden llevar a cabo reacciones favorables termodinámicamente, en

condiciones de concentración, temperatura, pH, presión,etc,que difieren grandemente de
las empleadas por el químico orgánico. La clave de este fenómeno reside en que
virtualmente todos los procesos intracelulares están catalizados por enzimas.
Las enzimas son macromoléculas que actúan como catalizadores biológicos. Así mismo,
constituyen la clase de moléculas proteicas más numerosa y especializada, Son los
instrumentos primarios para expresar la acción de los genes, ya que catalizan los millares
de reacciones químicas que, colectivamente, constituyen el metabolismo intermediario de
las células.
En la actualidad se han identificado cerca de un millar de enzimas diferentes. Muchos de
ellos se han aislado en forma pura y homogénea, y alrededor de unos 150 se han
cristalizado. Aunque hoy día la mayor parte de los enzimas relacionados con el
metabolismo básico corriente de la célula son razonablemente bien conocidos, existen
fundamentos genéticos para sospechar que muchos más aún están por descubrir.
 II. INTRODUCCION

Las enzimas en si son un componente esencial para la función de la vida. Debido a que
en si se tratan como proteínas que catalizan o aceleran las reacciones químicas en los
organismos vivos para el funcionamiento de nuestro mecanismo biológico. Sin este
componente, la mayoría de las reacciones que se dan en nuestras células serían demasiado
lentas e ineficientes para mantener el organismo en correcto estado para la vida.
Aparte son esenciales para todos los aspectos del metabolismo, incluye la digestión, la
producción de energía y la eliminación de residuos. También desempeñan un rol en
muchos otros procesos importantes, como la señalización celular, la función inmunitaria
y la reproducción de especies.
Son altamente específicas, lo que significa que cada enzima cataliza una reacción
específica o un conjunto de reacciones esto ayuda mucho a la hora de localizarlas e
aislarlas. Su especificidad se debe a la estructura tridimensional que posee la enzima, que
tiene una bolsa o ranura que se le beneficia para ajustar perfectamente a la molécula de
sustrato y realizar su función.
La enzima y la molécula sustrato se unen juntos, hace disminuir la energía de activación
de la reacción, lo que facilita que ocurra la reacción. Luego cataliza la reacción y libera
las moléculas del producto.
Las enzimas también son muy versátiles. Pueden catalizar una amplia gama de
reacciones, entre ellas: hidrólisis; oxidación; reducción; isomerización; ligadura.
Las enzimas son esenciales para la vida y se utilizan en una amplia variedad de
aplicaciones industriales y comerciales. Por ejemplo, las enzimas se utilizan para producir
productos biotecnológicos.
Este trabajo tiene como objetivo conocer acerca de los tipos de enzimas, su
caracterización así mismo, su importancia biocatalitica.

III. CUERPO DEL INFORME

3.1. Campos de aplicación e impactos económicos

3.1.1. Las enzimas son biocatalizadores
Los biocatalizadores son células vivas, como las bacterias, que constan de una red
compleja de vías metabólicas o una sola enzima. Por un lado, las células son
inmovilizadas y permeables, en las que se sobre producen y atrapan diversas enzimas.
Las enzimas industriales son sólo proteínas, macromoléculas formadas por cientos de
aminoácidos(Wilson et al., 2020).
Las enzimas reducen la energía de activación al estabilizar los intermediarios de la
reacción, lo que da como resultado un aumento de la velocidad de reacción.
 3.1.2. Ventajas y limitaciones del uso de métodos enzimáticos frente a
métodos químicos
Las ventajas de las enzimas pueden ser condiciones de reacción suaves (temperatura, pH
neutro y condiciones atmosféricas). La selectividad permite la conversión de sustratos sin
protección de grupos funcionales, produciendo productos de reacción estereo y
regioquímicamente definidos (Wilson et al., 2020).
Sin embargo, existen varios desafíos asociados con el uso de enzimas para aplicaciones
industriales. La mayoría de las enzimas necesitan condiciones de reacción acuosas y sólo
unas pocas (por ejemplo, las lipasas) toleran los disolventes orgánicos. Incluso en
sistemas optimizados, las enzimas tienden a perder actividad rápidamente debido a la
mala estabilidad y al despliegue de la estructura tridimensional. Para prolongar su vida
media, las enzimas se pueden inmovilizar sobre soportes, como perlas microporosas. Sin
embargo, aunque la inmovilización puede permitir el reciclaje de enzimas hasta cien
veces, crea un factor de coste adicional. También puede limitarse la interacción de
enzimas inmovilizadas con sustratos insolubles o de alto peso molecular. La necesidad de
reciclar cofactores o mediadores en cantidades estequiométricas puede contribuir a otros
costos y limitaciones para algunas enzimas (Wilson et al., 2020).
3.1.3. Breve historia de las enzimas utilizadas para la producción industrial
de productos valiosos
La comprensión de las enzimas y sus posibles aplicaciones se origina en los estudios
fundamentales de Payen, Buchner y Fischer en el siglo XIX. En 1833, el químico francés
Anselme Payen fue el primero en descubrir una enzima a la que llamó diastasa, una
amilasa vegetal procedente del extracto de malta. Posteriormente, en
1876, Friedrich Kühne utilizó la proteasa tripsina del páncreas para
la preparación de queso.
En 1894, Emil Fischer propuso el principio de bloqueo de teclas
describir la relación enzima sustrato. Luego, en 1897, Eduard
Buchner demostró que las enzimas también pueden funcionar
independientemente de las células. Demostró que la fermentación
alcohólica puede ocurrir en presencia de extracto de células de
levadura y sin células vivas. Estos estudios llevaron a la sugerencia
de nombrar a estos catalizadores "enzima" del griego "zyme", que
significa "de levadura de panadería". En 1901, Jokichi Takamine
Ilustración 1. Mecanismo
presentó la primera patente de enzima para la takadiastasa, una de ajuste inducido para la
amilasa, como fármaco para favorecer la digestión, y así impulsó el cinética
avance de la investigación sobre enzimas industriales. Takamine fue
el primero en utilizar microorganismos para la producción de enzimas. Patentado en 1907,
Otto Roehm utilizó enzimas proteolíticas para la producción de cuero. Posteriormente, en
1913, la enzima pancreática tripsina se utilizó como aditivo en el lavado de ropa para
mejorar los resultados. Hasta ese momento, lavar la ropa era un proceso laborioso que
requería altas temperaturas, mucho trabajo manual y mucho tiempo. Hoy en día, la
adición de enzimas a los detergentes para ropa reduce la cantidad de productos químicos
y el uso de energía para calentar. Aunque las enzimas granuladas constituyen menos del
1% (p/p) de los detergentes para ropa, mejoran en gran medida el rendimiento del
detergente (Wilson et al., 2020).
Desde 1959, el modelo de ajuste inducido descrita por Koshland se utiliza para describir
el mecanismo molecular de interacción entre enzima y sustrato. El concepto esencial del
modelo es que tanto las enzimas como los sustratos no son rígidos y ambos se ajustan
durante su interacción. Aunque se han resuelto miles de estructuras tridimensionales
mediante dispersión de rayos X y espectroscopia de RMN, las reglas que gobiernan el
plegamiento de una cadena de aminoácidos en una enzima activa, no se comprenden
completamente.
Hoy en día se producen y venden más de 500 enzimas, la mayor variedad se utiliza para
aplicaciones científicas (por ejemplo, para técnicas moleculares). Además, más de 500
productos industriales se elaboran utilizando enzimas. La empresa NOVOZYMES
(Dinamarca) es el mayor productor comercial de enzimas, seguida de DUPONT
(EE.UU.).
3.1.4. Diversas formas en que se utilizan las enzimas en la industria
Las enzimas microbianas se aplican en la industria para procesos a gran escala o para
productos químicos especializados costosos (Wilson et al., 2020).
Ejemplo:

• El la fructosa es un producto utilizado en los jarabes a gran escala.

• La xilosa isomerasa en la industria, esta enzima se utiliza para convertir la d-
glucosa en d-fructosa.
Clasificación de enzimas seleccionadas.
Cada enzima tiene un número de código que caracteriza el tipo de reacción en cuanto a
clase (primer dígito) y subclases (segundo, tercer y cuarto dígito). Aproximadamente el
90% de las enzimas microbianas relevantes para su aplicación pertenecen a las hidrolasas.

Ilustración 2. Clasificación de enzimas seleccionadas.

 a) Enzimas microbianas utilizadas en aplicaciones domésticas

Ilustración 3. Enzimas aplicadas para uso domestico

b) Enzimas microbianas aplicadas a procesos de producción industrial.

Ilustración 4. Enzimas microbianas aplicadas a procesos de producción industrial.

c) Mercado estimado de enzimas microbianas en 2017

Ilustración 5. Mercado estimado de enzimas microbianas en 2017

Los costosos precursores para la síntesis química de productos farmacéuticos y productos

químicos especiales también se consideran productos químicos finos. Las aminas quirales
desempeñan un papel en la síntesis orgánica estereoselectiva. Se utilizan como agentes
de resolución, componentes básicos o auxiliares quirales. Aunque clásicamente están
disponibles mediante resolución racémica con ácidos ópticamente activos, las aminas
quirales también se pueden obtener mediante enfoques enzimáticos (Wilson et al., 2020).
Aproximadamente la mitad de los compuestos farmacéuticos existentes son moléculas
quirales. Los proveedores especializados ofrecen estos bloques de construcción quirales
según las solicitudes de los clientes. Los productos intermedios de enantiopuro
representan un mercado de más de 10 mil millones de dólares (Wilson et al., 2020).
3.2. Descubrimiento y mejora de enzimas
3.2.1. Detección de nuevas enzimas y optimización de enzimas mediante
ingeniería de proteínas
Las dos fuentes principales utilizadas para la detección de nuevas enzimas
industrialmente relevantes son (Wilson et al., 2020):
a) Microbios aislados
b) ADN metagenómico
Los microorganismos que producen enzimas con
las propiedades deseadas (por ejemplo, tolerancia
y estabilidad a altas temperaturas) pueden
seleccionarse y aislarse de nichos ecológicos
únicos (por ejemplo, un respiradero térmico)
utilizando sustratos o indicadores apropiados.
La metagenómica es la estrategia alternativa al
cribado de microbios convencional. En este
enfoque, no es necesario aislar ni cultivar los
microbios. En cambio, las secuencias de ADN de
interés pueden clonarse y expresarse enE. coli, el
caballo de batalla de la biología molecular, o en
otros microorganismos huéspedes adecuados. La
preparación de bibliotecas genómicas a partir de
ADN ambiental y la selección sistemática de
dichas bibliotecas en busca de marcos de lectura Ilustración 6. fuentes principales utilizadas para la
abiertos pueden revelar genes putativos que detección de nuevas enzimas

codifican nuevas enzimas (Wilson et al., 2020).

3.2.2. Desarrollo clásico de cepas de producción
Si se aísla un microorganismo y se descubre que produce una actividad enzimática
interesante, se pueden aplicar herramientas clásicas para mejorar su rendimiento (Wilson
et al., 2020).
Las enzimas naturales no necesariamente cumplen con los requisitos de los procesos
comerciales y generalmente necesitan ajustes para lograr una producción a escala
industrial. Los desafíos comunes que deben abordarse son la inhibición del sustrato/
producto, la estabilidad, la especificidad del sustrato o la enantioselectividad. El
desarrollo de biocatalizadores mejorados es desafiante y complejo. Dos enfoques para la
optimización de enzimas son:
a) El rediseño racional de enzimas bien estudiadas
b) Métodos combinatorios realizados aleatoriamente que buscan la funcionalidad
deseada en bibliotecas.
Ilustración 7. Estrategias de optimización de enzimas mediante ingeniería de proteínas, búsqueda en bases de datos

• Desarrollo de cepas clásicas mediante evolución dirigida.

Las cepas aisladas productoras de enzimas se pueden mejorar mediante el proceso
llamado evolución dirigida, que implica múltiples ciclos de mutagénesis y selección
aleatorias. Físicas (por ejemplo, irradiación ultravioleta a 254 nm) y químicas (por
ejemplo,norte -metilo-norte′-nitro-norte-nitrosoguanidina) se utilizan comúnmente para
inducir tasas de mutación elevadas en cepas de interés. Luego, las cepas mutadas se
someten a detección y selección para mejorar la producción de enzimas. Según sea
necesario, se pueden agregar ciclos adicionales, a veces usando mutágenos alternativos
(Wilson et al., 2020).

Ilustración 8. Desarrollo de cepas clásicas mediante evolución dirigida.

3.2.3. Ingeniería genética de cepas productoras

Aproximadamente el 90% de las enzimas industriales son versiones recombinantes.

• Escherichia coli se utiliza comúnmente como huésped de producción de enzimas

por varias razones:
a) Disponibilidad de sistemas de inducción fuertes y ajustados
b) Crecimiento rápido
c) Cultivo en concentraciones de biomasa baratas, medias a altas
d) Capacidad de reducir la degradación proteolítica no deseada.
• E. coli puede acumular proteínas heterólogas hasta el 50% de su masa celular seca.
Sin embargo, también existen inconvenientes:
a) Incapacidad para la glicosilación,
b) Los puentes disulfuro se pueden formar sólo en el periplasma
c) Los pirógenos tóxicos de la pared celular deben eliminarse
d) Algunas proteínas sobreproducidas no se pliegan adecuadamente.
3.3. Proceso de producción de enzimas bacterianas o fúngicas
Los cultivos a escala de producción se realizan en recipientes agitados de 10 a 1000 m3.
Se realizan procesos por lotes y por lotes. Como bacterias típicas como Bacilo. Las cepas
representan el mínimo en complejidad de la vida y las distancias de transporte son cortas,
por lo general tienen un crecimiento rápido (Wilson et al., 2020).
El transporte de vesículas a lo largo del citoesqueleto consume ATP. Por lo tanto, las tasas
de crecimiento están en el rango de 0,2 h.−1y el proceso de cultivo necesita alrededor de
una semana. Para obtener una dosis suficiente del gen diana, tanto en bacterias como en
hongos, son posibles múltiples integraciones genómicas. Una vez que los genes se
integran en el genoma, tienden a ser estables y no se requiere selección de genes
recombinantes durante el cultivo (Wilson et al., 2020).
3.4. Enzimas hidrolizantes de polisacáridos
La celulosa y el almidón son cuantitativamente los polisacáridos más importantes del
planeta. Las plantas producen 1010toneladas de celulosa para paredes celulares rígidas
por año. El almidón es producido para el rápido almacenamiento de carbono y energía,
así como para su rápida liberación de azúcares simples (por ejemplo, en cereales para el
desarrollo del embrión de la planta). La función principal de la celulosa es la estabilidad
mecánica y estructural. La degradación de ambos polisacáridos es un proceso que ocurre
naturalmente. Para utilizar las plantas como energía y nutrientes, los microorganismos
han desarrollado diversos conjuntos de enzimas eficientes, que podemos utilizar como
poderosos catalizadores en la industria (Wilson et al., 2020).
Secreción de enzimas en
hongos filamentosos como
Trichoderma reesei. La
célula terminal de las hifas
produce enzimas. Se secretan
en la luz del retículo
endoplásmico (RE), donde se
llevan a cabo modificaciones
postraduccionales, por ejemplo, glicosilación. A través de Golgi se producen vesículas
secretoras (VS), que se transportan hasta la punta y se fusionan a la membrana plasmática
para que se libere su contenido (Wilson et al., 2020).
3.4.1. Enzimas que escinden el almidón producidas porBaciloyAspergilo
Especies
El almidón es una macromolécula de glucosa. Se compone principalmente de moléculas
unidas glicosídicamente α-1,4 que forman dobles hélices. Las hélices fuertemente
enrolladas forman gránulos en el citosol de las células vegetales. El almidón de maíz
puede tener una masa de 10octavoAllá. Muchas de estas hélices pueden unirse mediante
ramas α-1,6-glucosídicas (Wilson et al., 2020).
Ilustración 9. Estructura molecular del almidón. (a) Superestructura formada por cadenas de amilosa y (b) tipos de
enlaces

Las α-amilasas y las glucoamilasas se producen comercialmente en cepas de Bacillus

recombinantes. Las α-amilasas para uso industrial (por ejemplo, en la industria textil y de
detergentes) se caracterizan por una alta actividad específica y estabilidad térmica.
Algunas de estas enzimas se han derivado de amilasas inherentemente estables al calor
de B. licheniformis y Bacilo estearothermophilus. El rendimiento y la estabilidad
mejoraron mediante mutagénesis aleatoria mediante mezcla de ADN y posterior
detección. El mecanismo molecular del aumento de la estabilidad aún no se comprende
completamente.

Ilustración 10. Aplicaciones industriales de las amilasas bacterianas.

El procesamiento posterior de las amilasas comienza con una separación de la biomasa

mediante separadores, filtros de tambor giratorio o filtración. Dependiendo de la
aplicación, los sobrenadantes libres de células se concentran mediante ultrafiltración y se
secan hasta obtener productos líquidos estables o se procesan hasta obtener partículas
sólidas. No es necesaria la purificación por cromatografía.
La Resistencia a la temperatura
de la α-amilasa de Bacilo
licheniforme después de
mutagénesis de reemplazo de
un solo aminoácido.
Dependiendo del tipo y
ubicación de las mutaciones, el
efecto puede ser
desestabilizador como en
D204K (Δ) o estabilizador
como en N265Y (○) en
comparación con el tipo Ilustración 11. La Resistencia a la temperatura de la α-amilasa de Bacilo
salvaje (•). licheniforme

3.4.2. Enzimas limpiadoras de celulosa: un dominio de Trichoderma reesei

La celulosa es, a diferencia del almidón, una macromolécula muy estable. Esto se refleja,
por ejemplo, en la resistencia a la tracción del algodón. Debido a que la celulosa es
resistente a la sacarificación enzimática, se considera recalcitrante. La celulosa existe en
forma de fibrillas, haces de polímeros de β-(1, 4)-d-glucano. Estas fibrillas tienen
características supramoleculares que dependen de la especie, como dimensiones laterales
y grado de polimerización (DP). A diferencia del almidón, las cadenas poliméricas de
celulosa no tienen ramificaciones, lo que les permite agruparse estrechamente en
estructuras cristalinas estabilizadas por extensos enlaces de hidrógeno entre cadenas. El
grado de cristalinidad puede diferir dentro de la fibrilla, de modo que las regiones
cercanas a la superficie y al extremo de la fibrilla suelen ser las menos restringidas.

• Exocelulasas
Inicia la hidrólisis desde los extremos de la cadena y luego libera posesivamente unidades
de celobiosa (la unidad repetida) de la cadena de celulosa y se clasifican en función de si
inician la hidrólisis a partir del o no reductor extremo de la cadena de celulosa.

• Endocelulasas
Inicia aleatoriamente la hidrólisis en cualquier lugar a lo largo de la cadena del polímero,
acortando su longitud. Cadenas de celulosa con DP ≤6 son solubles. Se considera que la
mayoría de las endocelulasas actúan sobre la celulosa con baja procesividad.

• Glucosidasas
Hidrolizan la celobiosa y otros celooligosacáridos solubles a glucosa, completando la
sacarificación enzimática de la celulosa.
Ilustración 12. Celulosa (a) estructura y recalcitrantica, (b) hidrólisis

Ilustración 13. (c) cuatro tipos de celulasas.

 3.4.3. Cepas de producción
La necesidad mundial de fuentes de combustible alternativas se convirtió en una cuestión
apremiante después de la crisis del petróleo en los años 1970. Como resultado, hubo un
aumento de la investigación sobre el potencial de la producción de etanol a partir de
biomasa rica en celulosa, centrándose en los hongos.

Ilustración 14. Principales celulasas producidas porTrichoderma reesei

Trichoderma reesei originalmente fue descrito como un aislado de Trichoderma virida

pero luego se reconoció que difiere significativamente de él. Luego pasó a llamarse en
honor al investigador del laboratorio Natick (Massachusetts, EE. UU.) Elwyn T. Reese.
3.5. Enzimas utilizadas como agentes de limpieza
Las enzimas han contribuido a la mejora de los detergentes para ropa y lavavajillas
domésticos e industriales modernos.
3.5.1. Proteasa similar a subtilisina
Las proteasas en la industria alimentaria mejoran el sabor de los productos lácteos,
cárnicos y pesqueros. En la industria del cuero se aplican durante el remojo y la
depilación. En tratamientos médicos se utilizan para la osteoartritis, la eliminación de
tejido necrótico y la cicatrización de heridas.
3.5.2. Bacilo sp. Cepas de producción y proceso de producción.
La subtilisina se produce utilizando cepas del género Bacilo. La especie puede ser
B.subtilis, B. licheniformis, bacilo lentus, u otras . Bacilos tienen una alta capacidad de
secreción de proteínas y, debido a que son grampositivos, pueden exportar proteínas
directamente al medio extracelular, a diferencia de E. coli.
3.6. Suplementos alimenticios – Fitasas
El objetivo de la aplicación de enzimas alimentarias es administrar la dosis

deseada de enzima activa al sitio de acción, es decir, el tracto gastrointestinal del

animal. Las fitasas y xilanasas permiten una mejor degradación directa de los

compuestos del pienso. Además, ambos tienen un efecto indirecto. En total, la tasa de

conversión alimenticia puede aumentar en un 25% con la adición de enzimas

suplementarias (David Wilson et al., 2020).

3.6.1. Campos de aplicaciones de la fitasa

El ácido fítico representa entre el 60% y el 80% del fósforo total en los alimentos
vegetales. Las fitasas son enzimas hidrolíticas que inician su desfosforilación gradual a
mioinositol. La mala digestión del fitato por parte de los animales monogástricos provoca
dos problemas: pérdida de cationes bivalentes complejados por los fitatos y
contaminación ambiental (David Wilson et al., 2020).
3.6.2. Fitasa en el intestino de los animales
Debido a la falta de una actividad significativa de degradación de fitato en el tracto
gastrointestinal, los animales con un solo estómago como los cerdos, las aves de corral y
los peces, requieren fitasa extrínseca para que el fitato fosfato esté disponible para su
crecimiento y desarrollo. En los animales rumiantes, como el intestino de ganado vacuno
y ovino, los microbios producen fitasas, que pueden digerir parcialmente el fitato (David
Wilson et al., 2020).
3.6.3. Producción de una fitasa bacteriana en Aspergillus niger
La producción de fitasa fue posible gracias a la aplicación de técnicas recombinantes. Los
hitos científicos fueron el aislamiento de cepas de hongos y bacterias productoras de
fitasa, la caracterización de las enzimas purificadas, la clonación de los genes
correspondientes y su sobreexpresión. Las fitasas de nueva generación han mejorado la
estabilidad necesaria para la actividad en el intestino animal (David Wilson et al., 2020).
3.7. Enzimas para la industria química y farmacéutica
3.7.1. Ejemplos de producción química enzimática
La acrilamida es un monómero necesario para la producción de materiales poliméricos.
La adición de agua al acrilonitrilo es un posible proceso de producción. El uso de
catalizadores reducidos de cobre o vitriolo da como resultado un rendimiento deficiente
y puede conducir a una polimerización y conversión no deseadas en ácido acrílico (David
Wilson et al., 2020).
3.7.2. Producción de (S)-Profens por lipasa fúngica
Un ejemplo de un producto elaborado con el uso de lipasas altamente selectivas es el
ibuprofeno. Esta sustancia es un fármaco analgésico y antiinflamatorio que puede
producirse químicamente como una mezcla racémica (David Wilson et al., 2020).
 3.8. Enzimas como herramientas altamente selectivas para investigación y
diagnóstico
El mercado de las enzimas utilizadas en los laboratorios se puede dividir en dos partes.
La mayor parte consiste en análisis e ingeniería de ácidos nucleicos. Este sector está
creciendo rápidamente, en parte debido a la práctica emergente de utilizar la llamada
medicina personalizada, en la que el perfil genético de un individuo se utiliza para guiar
el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de enfermedades. Por ejemplo, las enzimas
se utilizan en el análisis diferencial, la amplificación y la secuenciación del ADN aislado
del tumor de un paciente. Un sector menos importante incluye los sistemas de pruebas
analíticas para metabolitos, por ejemplo, el ácido cítrico en los alimentos y otras
sustancias (David Wilson et al., 2020).
3.8.1. Enzimas microbianas para análisis e ingeniería de ácidos nucleicos
Este campo es amplio y consta de más de 300 enzimas diferentes de la más alta calidad.
Expresión heteróloga de genes para tales enzimas es un problema menor. Más del 90%
del esfuerzo se destina al procesamiento posterior y a la gestión de calidad. En la mayoría
de los casos, no es posible eliminar productos secundarios no deseados, como el ADN del
huésped de una ADN polimerasa recombinante, en un solo paso de purificación. Lo más
frecuente es que se apliquen más de dos técnicas diferentes, por ejemplo, cromatografía
y precipitación (David Wilson et al., 2020).
3.8.2. Enzimas específicas para ensayos cuantitativos de metabolitos
En más de 30 kits de pruebas producidos por diferentes empresas para el análisis de
alimentos u otras sustancias complejas, se utilizan enzimas específicas para cuantificar,
azúcares u otros compuestos (David Wilson et al., 2020).
3.9. Perspectivas
3.9.1. l-DOPA por tirosina fenol liasa
La l-DOPA (3,4-dihidroxifenil-l-alanina) se encuentra en la primera línea de tratamiento
para la enfermedad de Parkinson, causada por la deficiencia del neurotransmisor
dopamina. Con el envejecimiento de la población, la demanda de l-DOPA está
aumentando. La extracción de plantas y la quimiocatálisis son las principales fuentes de
l-DOPA (David Wilson et al., 2020).
3.9.2. Activación de alcanos
La activación C-H de alcanos es un desafío en la química organometálica y también se ha
investigado para la catálisis enzimática (David Wilson et al., 2020).
3.9.3. Cascadas de enzimas
Para lograr la selectividad se necesita una cascada de tres enzimas, una cetona reductasa,
una glucosa deshidrogenasa y una halohidrina deshalogenasa. Las halohidrina
deshalogenasas son de interés debido a su actividad de apertura de anillos epóxido que
permite la formación de enlaces (David Wilson et al., 2020).
IV. CONCLUSIONES

Por ello, las enzimas son esenciales para el funcionamiento de la vida, y su caracterización
a nivel molecular es crucial para comprender su función y cómo pueden manipularse para
aplicaciones biotecnológicas y terapéuticas. Se puede utilizar una variedad de técnicas
para caracterizar enzimas, que incluyen: purificación de proteínas; secuenciación de
proteína; cinética enzimática; mutagénesis dirigida al sitio. Estas técnicas se han utilizado
para caracterizar una amplia gama de enzimas, desde proteasas simples que escinden
proteínas hasta enzimas metabólicas complejas que catalizan múltiples reacciones.
La caracterización de las enzimas ha dado lugar a una serie de descubrimientos
importantes, Incluido: la identificación del sitio activo de las enzimas, que es la región de
la enzima donde se une la molécula de sustrato y se produce la reacción. La comprensión
de cómo las enzimas catalizan las reacciones al reducir la energía de activación de la
reacción. El desarrollo de inhibidores enzimáticos, que se pueden utilizar para bloquear
la actividad de las enzimas y tratar enfermedades. El desarrollo de biosensores basados
en enzimas, que se pueden utilizar para detectar y medir moléculas específicas.
La caracterización de las enzimas es un proceso continuo, y se están haciendo nuevos
descubrimientos todo el tiempo. Al comprender cómo funcionan las enzimas, podemos
desarrollar nuevas formas de usarlas para mejorar nuestras vidas.
Estos son algunos ejemplos específicos de cómo la caracterización enzimática ha dado
lugar a avances en biotecnología y terapéutica: el desarrollo de enzimas
recombinantes, que son producidas por células modificadas genéticamente, ha llevado a
la producción de enzimas de alta pureza para una variedad de aplicaciones industriales y
comerciales. La caracterización de enzimas implicadas en las vías metabólicas ha llevado
al desarrollo de nuevos fármacos para tratar enfermedades como el cáncer y la diabetes.
La caracterización de las enzimas implicadas en el sistema inmune ha llevado al
desarrollo de nuevas vacunas e inmunoterapias.
En general, la caracterización de enzimas es un área vital de investigación que ha dado
lugar a avances significativos en nuestra comprensión de la biología y la medicina, que
se usan en campos diversos de la biotecnología.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Wilson, D., Kostylev, M., Maurer, K.-H., & Schramm., M. (2020). Enzymes. © 2020
Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA.