BIOMEDICINA MOLECULAR
Técnica:
MICROARRAY
DRA. LAURA CRISTINA BERUMEN
CAROLINA CENOBIO ARREOLA
ALMA DELIA MEDINA RESÉNDIZ
ALMA CRISTINA RESÉNDIZ PÉREZ
S A R A D I A N A T R UJ IL L O C H Á V E Z
Introducción
Los microarrays de ADN surgen de la necesidad
de analizar la cantidad de información
procedente de los grandes proyectos de
secuenciación de genomas.
Secuenciación o genotipado del ADN
Análisis de la expresión génica
L o s m i c r o a r r a y s s e h a n i n t r o d u c i d o c o m o h e r r a m ie n t a
fundamental de la biomedicina y del proceso de
desarrollo de fármacos.
D e t e r m i n a c i ó n d e p e r f i l e s d e e x p r e s i ó n g é n ic a
Selección de biomarcadores
Farmacogenómica
Toxicogenómica
I d e n t i f i c a c i ó n d e g e n e s m a r c a d o r e s p r o n ó s t ic o d e
enfermedades
La clasificación de tumores.
La determinación de la variación en las
secuencias de ADN humano mediante
microarrays permite identificar la huella genética
de la predisposición a padecer diferentes
enfermedades.
El empleo de microarrays de ADN en estudios de
la expresión génica está permitiendo la
identificación y validación de genes como
potenciales dianas terapéuticas.
Microarrays de ADN
Los microarrays de ADN, son una tecnología para estudiar la
expresión de muchos genes a la vez.
Cada mancha de ADN, llamada sonda, representa un solo
gen.
Soportes sólidos, generalmente de vidrio, plástico o silicio
(chip), sobre los cuales se une el ADN.
Sonda: ADN fijado al chip.
Muestra: ADN marcado. Microarray de ADN.
Diana: Cada uno de los componentes de la
muestra.
( Busquets y col.,2001)
El principio de los microarrays de Tipos de sondas empleadas en microarrays de ADN:
ADN radica en la hibridación entre
las cadenas de ácido nucleico. Microarrays basado en oligonucleótidos.
Oligonucleótidos de cadena sencilla.
Las muestras se etiquetan con pueden sintetizarse in situ.
tintes fluorescentes. cortos:15-25 nucleótidos.
Al menos dos muestras se hibridan Largos:50-120 nucleótidos.
en el chip.
Microarrays basados en ADNc.
Las secuencias diana marcadas El ARNm de baja estabilidad se transcribe a ADNc de
con fluorescencia que se unen a mayor estabilidad.
una secuencia de sonda que
generan una señal.
(Busquets y col.,2001)
Microarrays basados en ADNc
1. Recolección de la muestra.
2. Aislamiento de ARNm.
3. Creación de ADNc
marcado.
4. Hibridación.
5. Análisis.
(Chang y col.,2000)
Metodología básica de un microarreglo de ADN.
Microarray de Proteínas
Los microarrays de proteínas se desarrollaron como una
herramienta de alto rendimiento para superar las
Las proteínas
limitaciones de los microarrays de ADN y proporcionar sufren
una plataforma directa para los análisis de funciones de modificaciones
post-
proteínas. traduccionales:
Procesos
proteolíticos y
glicosilaciones
PROTEÓMICA
Estudia la expresión génica a nivel de las
proteínas.
MICROARRAY DE PROTEÍNAS
Se utilizan para identificar dianas de fármacos,
moléculas pequeñas y sustratos de enzimas
que pueden modificarse de diversas formas,
como por fosforilación o metilación, para
investigar interacciones (proteína-proteína) y
definir biomarcadores.
(Yuan y col.,2016)
Clasificación
MICROMATRICES
MICROMATRICES FUNCIONALES
ANALÍTICAS
MATRIZ DE FASE
INVERSA
Las proteínas se
detectan después de la
captura de anticuerpos Requieren proteínas o
utilizando marcaje péptidos nativos.
directo de proteínas.
Permiten el estudio
Se utilizan para la de varias
elaboración de propiedades de
perfiles de unión (proteína-
proteomas, la proteína, proteína-
monitorización del fármaco) y
patrón de expresión modificaciones
del proteoma y el postraduccionales.
diagnóstico clínico.
(Sutandy y col.,2013)
MATRIZ DE FASE INVERSA
Permite el análisis de muchas muestras obtenidas en
diferentes estados de la célula: directamente del tejido o
lisados celulares fraccionados.
Resultan relevantes a la
hora de generar mapas
funcionales de vías de
señalización celular de
interés en el desarrollo de
terapias personalizadas.
(Huang,2017)
¿Para qué se usan?
Identificación Comparación de los niveles de expresión de genes en tejidos enfermos y sanos
de dianas Permite la identificación de genes implicados en enfermedades de interés
terapéuticas Asociación con las proteínas que forman parte del proceso patológico
El proceso de descubrimiento y desarrollo
de fármacos se ha beneficiado del uso de
herramientas genómicas de alto Descubrimiento y
rendimiento como los microarrays de desarrollo de
ADN, que hacen posible el análisis de la fármacos
expresión génica en miles de muestras
simultáneamente.
(López, 2005)
Diagnóstico molecular de enfermedades
Diagnóstico Polimorfismos, mutaciones y tumores
clínico Microorganismos patógenos
Farmacogenómica
Farmacogenética: consiste en el estudio de las bases genéticas que y
influencian la respuesta individual a los fármacos farmacogenética
Farmacogenómica: suele referirse a las aplicaciones comerciales de
la tecnología genómica en el desarrollo de fármacos y terapia.
(López, 2005), (Sarma, 2021)
Estudios de regulación
Investigación
Datos de gran valor
básica Diferentes condiciones
(López, 2005)
Barreras
existentes para la
implantación de los
microarrays
La técnica de microarrays cuenta con una serie de barreras a su desarrollo que, si
bien durante los últimos años se está trabajando de manera activa en solventarlas, no
dejan de seguir siendo importantes.
Precio
Reproducibilidad
Estandarización
Cantidad de muestra
Perspectivas
de mercado de
los microarrays
en Biomedicina
Los microarrays de ADN continuarán siendo los principales
productos que generan la mayor demanda.
Los microarrays de alta sensibilidad y kits de procesamiento de
muestras proporcionarán un valor añadido y oportunidades de
crecimiento.
Referencias
Baharvand, H., Fathi, A., van Hoof, D., & Salekdeh, G. H. (2007). Concise Review: Trends in Stem Cell Proteomics. Stem Cells, 25(8), 1888–1903.
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Busquets X., Agustí A.G.N. (2001).Chip genético (ADN microarreglo de ADN):.Arch. Bronconeumol., pp:394-396.
Chang Y.E., Laimins L.A. (2000).Microarray analysis identifies interferoninducible genes and Stat-1 as major transcriptional targets of human papillomavirus. J. Virol.,
pp:74-82.
Howbrook, D. N., et al. (2003). Developments in microarray technologies. Drug Discovery Today. Vol. 8 (14):642-651.
Huang, Y., & Zhu, H. (2017). Protein Array-based Approaches for Biomarker Discovery in Cancer. Genomics, Proteomics & Bioinformatics, 15(2), 73–81.
doi:10.1016/[Link].2017.03.001
López, M., Mallorquín, P., & Vega, M. (2005). Aplicaciones de los Microarrays en Salud Humana. Aplicaciones de los Microarrays y Biochips en Salud Humana.
Madrid, España: Genoma España/CIBT-FGUAM, 46-50.
Sharma, B., Shahanshah, M. F., Gupta, S., & Gupta, V. (2021). Recent advances in the diagnosis of COVID-19: A bird’s eye view: Running Title: Recent trends in the
diagnosis of SARS CoV-2. Expert Review of Molecular Diagnostics.
Sutandy, F. X. R., Qian, J., Chen, C.-S., & Zhu, H. (2013). Overview of Protein Microarrays. Current Protocols in Protein Science, 72(1), 27.1.1–27.1.16.
doi:10.1002/0471140864.ps2701s72
Yuan, J., Wang, E., & Fox, B. A. (2016). Immune Monitoring Technology Primer: protein microarray (“seromics”). Journal for ImmunoTherapy of Cancer, 4(1).
doi:10.1186/s40425-016-0106-4
