Caso Brote

La compañía D`Pastry es una empresa que vende manzanas y peras listas para consumir. Un
empleado le recomendó un nuevo producto para lavar las manzanas y las peras. El dueño acepto
y empezó a usarlo con 60 segundo de contacto con las frutas. Un mes después, la empresa se
encuentra involucrada en un brote con más de 10 muertes y 200 personas hospitalizadas.
Síntomas descritos por los pacientes: diarrea, calambres estomacales, ocasionalmente fiebre y
en algunos pacientes el desarrollo del síndrome urémico hemolítico.

Seleccione el microorganismo sospechoso:

1. Bacillus cereus
2. Campylobacter jejuni
3. Clostridium botulinum
4. Clostridium perfringens
5. Esherichia coli 0157:H7
6. Listeria monocytogenes
7. Salmonella spp.
8. Shigella spp.
9. Staphylococccus aureus
10. Vibrio spp.
11. Yersinia enterocolitica
12. Hepatitis A
13. Noroviruses
14. Cyclospora cayetanensis
15. Toxoplasma gondii
16. Trichinella spiralis

Parte 2
1. Escriba detalladamente el proceso de muestreo para identificar el agente etiológico.
2. Realice un flujograma de proceso detalladamente para encontrar el microorganismo.
3. Principio de los medios de cultivos.
4. Resultados esperados del microorganismo seleccionado.
5. ¿Por qué pasó esta situación?
6. Recomendaciones para que esto no vuelva a pasar.
7. Literatura citada

Nota: [Link]
 1. MATERIALES A UTILIZAR PARA LA TOMA DE MUESTRA.

 Bolsas plásticas estériles

 Equipo de seguridad
Batas
Guantes
Gorros
Mascarilla
 Pinzas estériles
 Tijeras estériles
 Cuchillos estériles
 Cadena de custodia o registro
 Neveras portátiles
 Caja de plástico para muestra refrigeradas. Packs refrigerados.
 Liquido desinfectante, alcohol al 70 %
 Termómetro
 Gasas estériles
 Marcador permanente.

PROCEDIMIENTO.
Colocarnos bata
Colocarnos gorro
Colocarnos mascarilla, para evitar contaminar la muestra.
Procedemos a lavarnos las manos correctamente, luego podemos usar gel alcoholado.
Seguimos con rotular la bolsa plástica estéril con la información necesaria, Es decir
 Tipo de alimento
 Muestreador
 La actividad
 Lugar
 Fecha
 Hora
 Numero de ID
 Proveedor
Lavarnos las manos nuevamente, aplicamos gel alcoholado y colocarnos un par de guantes,
cabe resaltar que los guantes deben ser nuevos.
Si el alimento a muestrear se encuentra en una bolsa, procedemos a limpiar la bolsa con
gasas y alcohol.
Abrimos la bolsa y cortamos un trozo del alimento.
La cantidad de esta muestra no puede ser inferior a 100 gr por si hay que hacer una
repetición.
Luego de tomar nuestra muestra la colocamos en la bolsa estéril rotulada y bien sellada.
Podemos verificar la adecuada rotulación de la bolsa, y se introduce en la nevera portátil con
los packs refrigerantes, y se envía al laboratorio.
 3.

Caldo para E. coli:

Uso:
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales, y Escherichia
coli en agua, alimentos y otros materiales.

Fundamento:

En el medio de cultivo la tripteina es la fuente de péptidos, aminoácidos y nitrógeno. La

lactosa es el hidrato de carbono fermentables y favorece el desarrollo de bacterias
coliformes. Las sales biliares inhiben el crecimiento de la flora acompañante Gram
positiva, las sales fosfato constituyen un sistema buffer que impide que los productos
ácidos originados por la fermentación de lactosa afecten el crecimiento microbiano y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

PROCEDIMIENTO:

Siembra: Para recuento de coliformes totales, técnica del Número Mas Probable:

a) Para el análisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo
doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.
b) Para muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10-1,
10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración.

Incubación:

Para el recuento de coliformes totales: en aerobiosis, a 33-37 °C durante 24 - 48 horas. Para el

análisis de coliformes fecales y Escherichia coli: en aerobiosis, a 44,5 - 45,5 °C durante 24
horas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Se consideran resultado positivo el crecimiento bacteriano y la producción de gas.

 Caldo lauril:

USO:
Medio recomendado para detección y recuento de coliformes en aguas, aguas residuales y
alimentos.

FUNDAMENTO:

Medio rico en nutrientes que permite un rápido desarrollo de los microorganismos

fermentadores de la lactosa, aún de las bacterias fermentadoras lentos. La triptosa es la fuente de
nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable,
las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
Es un medio selectivo ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora
acompañante. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, éste último se evidencia
al utilizar las campanas Durham.

PROCEDIMIENTO
Siembra
Para recuento de coliformes totales, técnica del Número Mas Probable:
A) Para el análisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por
triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en
caldo simple concentración.

B) Para muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10-1,
10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración.

Incubación:

Incubar los tubos 18-48 horas a 33-37 °C.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Se consideran resultado positivo el crecimiento bacteriano y la producción de gas.

Bilis verde brillante:

USO

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del
número más probable.

FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo
bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato
de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con
producción de ácido y gas.

PROCEDIMIENTO

Siembra

A) Para el análisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en

caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.
B) Para el análisis de coliformes totales en muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos),
efectuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en
medio de cultivo simple concentración.

Incubación:

A. Para coliformes totales: en aerobiosis, a 33 - 37 °C durante 48 horas.

B, Para coliformes (fecales): en aerobiosis, a 44,5 - 45,5 °C durante 24 horas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

El crecimiento se evidencia por la presencia de turbidez en el medio de cultivo.

- Positivo: turbidez y presencia de gas. Puede existir viraje del color del medio de cultivo al
color amarronado o amarillo.
-Negativo: ausencia de turbidez y/o gas.
Agar MacConkey

USO

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios
y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las especies de
la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram
positiva. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH
alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la
absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

PROCEDIMIENTO
Siembra
En superficie: inocular directamente la muestra por estría. En profundidad: inocular una
alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen del medio de cultivo fundido
y enfriado a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vaivén y rotación. Dejar
solidificar. Incubación En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-48 horas.

INTERPRETACIÓN DE
LOS RESULTADOS

Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas rojizas. Puede observarse halo de

precipitación biliar. Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio,
incoloras.
E.A.M: EOSINA Y AZUL DE METILENO.

USO

Este medio (también denominado E.M.B.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de
todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

FUNDAMENTO

El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de
bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo
microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y
aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El
agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. También, pueden
crecer especies de Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en
profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en
este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras
bacterias oxidativas se observan como colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir,
aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la
incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene, además, un buen
desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

PROCEDIMIENTO
Siembra:

En superficie, por estriado directo a partir de la muestra. En profundidad, para favorecer el

desarrollo de clamidosporas.
Incubación:
En aerobiosis, a 33-37 °C durante 18-24 horas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o

amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. Microorganismos no fermentadores
de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras